專利名稱：一種治療膽道結(jié)石的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療膽道結(jié)石的藥物組合物，它是由中藥材為原料制備而成的藥物組合物，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
世界醫(yī)學(xué)代謝性疾病中，肝膽結(jié)石病呈逐年上升的趨勢，嚴(yán)重威脅著人類健康。肝膽結(jié)石病自然人口發(fā)病率迄止1990年我國為10％[1]、美國10％、日本17.3％、德國18％[2]，均呈上升趨勢，成為各國常見病、多發(fā)病。我國以膽紅素為主的結(jié)石占40％，而農(nóng)村以膽紅素為主的結(jié)石占68％，更嚴(yán)重地威脅著農(nóng)村人民的身體健康。[3]1971年Thistle及Schoenfield報(bào)告CDCA溶化膽固醇結(jié)石成功，從而奠定了口服溶石療法為近代內(nèi)科的一部分[4]，但是不久德國Dr.A.SCHROEDTER教授指出“CDCA溶石作用是肯定的，副作用也無可爭議腹瀉與轉(zhuǎn)氨酶增高”。因此，植物性溶膽石劑上升到被重視的地位，這就是愛活膽通。[5]愛活膽通現(xiàn)在已被全球普遍采用。美國DUKE大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Peter.B.Cotton教授指出“……除治療高膽固醇結(jié)石藥外，膽道化學(xué)家尚需發(fā)明綜合性藥物以針對含大量色素和鈣的結(jié)石?！盵6]英國Dundee大學(xué)醫(yī)學(xué)院著名膽道病學(xué)者Bouchier教授指出“需要尋求比CDCA及UDCA更有效更經(jīng)濟(jì)的溶石口服藥物。最后需要有能溶化含鈣結(jié)石與色素結(jié)石的藥物?！盵7]北京醫(yī)科大學(xué)張挽華教授強(qiáng)調(diào)“原發(fā)性膽管結(jié)石，尤其是肝內(nèi)膽管結(jié)石，預(yù)后不良。我院資料表明，術(shù)后膽管炎的復(fù)發(fā)率為38.2％，近期死亡率為18.2％，急性梗阻性化膿性膽管炎更為常見死亡原因。有的病人雖經(jīng)多次手術(shù)治療，仍未能獲得徹底解決，故尋求對溶解膽紅素結(jié)石有效藥物，以治療我國常見的膽管結(jié)石，實(shí)為當(dāng)務(wù)之急?！盵8]第三軍醫(yī)大學(xué)附院肝膽外科劉永雄教授也指出“……肝膽管結(jié)石病是這樣一個(gè)復(fù)雜、難治性疾病，在我國華東沿海、西南、中南等廣大地區(qū)有更大的普遍性，構(gòu)成我國膽石病的突出的特點(diǎn)和問題、……術(shù)后對殘留結(jié)石的處理或防止感染復(fù)發(fā)，結(jié)石再生，是一個(gè)重要課題。更需深入探索和臨床實(shí)踐突破肝內(nèi)膽管結(jié)石病的治療效果。”[9]總之，肝膽結(jié)石病我國有約1.2億，全球有5.5億患者，急迫需求口服植物溶石藥，能廣譜溶石、高效短程、簡便價(jià)廉、無毒副作用。
目前，已有關(guān)于“肝膽結(jié)石片”的相關(guān)報(bào)道，如肝膽結(jié)石片治療肝膽結(jié)石85例臨床觀察，浙江中醫(yī)雜志(1999，34(7)；肝膽結(jié)石片治療膽石病的研究，中醫(yī)雜志1997，38(3)；肝膽結(jié)石片對動(dòng)物炎癥和膽汁成分的影響，中醫(yī)雜志1998，9(5)；肝膽結(jié)石征的體外溶石、抑菌、解痙作用，中國藥房1998，9(2)，其中公開了肝膽結(jié)石片是由牛膽水、火硝、雞內(nèi)金、枳殼、香附、木香、延胡索、黃連、白術(shù)、吳茱萸等原料組成，但是沒有公開原料的用量及藥物的用法，根據(jù)中醫(yī)藥理論，不同的病因、病機(jī)，中醫(yī)用藥不同，在沒有公開原料用量的情況下，很難確知其針對的病癥，因此，原料的用法用量決定了針對的適應(yīng)癥，相同的原料用量不同，適應(yīng)癥可能不同。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是提供了一種治療膽道結(jié)石的藥物組合物，其發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該藥物組合物的制備方法和用途。
本發(fā)明提供了一種治療膽道結(jié)石的藥物組合物，它含有下述重量配比的原料制備而成的制劑牛膽水150-300份、火硝100-150份、雞內(nèi)金100-200份、枳殼30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黃連10-40份、白術(shù)40-120份、吳茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份。
進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑牛膽水173份、火硝115份、雞內(nèi)金133份、枳殼52份、香附68份、木香34份、延胡索34份、黃連21份、白術(shù)68份、吳茱萸27份、高良姜41份、山楂68份、建曲141份、青皮34份。
本發(fā)明藥物組合物是由牛膽水濃縮的清膏，火硝、雞內(nèi)金粉末，青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜的揮發(fā)油及提取揮發(fā)油后的水提取物，建曲粉末或水提取物，黃連、延胡索、山楂的水提取物為活性成分加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
其中，所述的制劑是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、口服液。
其中，所述的片劑每片含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于1.5mg，每片含火硝以硝酸鉀KNO3不少于100.0mg；膠囊劑每粒膠囊含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于2.25mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于150mg；顆粒劑每10g含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg；丸劑每10g含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg；口服液每10ml含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法，它包括如下步驟a、稱取下述重量配比的原料牛膽水150-300份、火硝100-150份、雞內(nèi)金100-200份、枳殼30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黃連10-40份、白術(shù)40-120份、吳茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份；b、取雞內(nèi)金、火硝粉碎成細(xì)粉，備用；c、取建曲粉碎或加熱水提取；d、牛膽水加熱至沸，濾過，濾液濃縮，得清膏；e、青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜提取揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精進(jìn)行包結(jié)，包結(jié)物干燥，粉碎后備用；e、將e步驟的藥渣與黃連、延胡索、山楂加水煎煮，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入牛膽水清膏與b步驟制備的細(xì)粉、c步驟的建曲細(xì)粉或水提取物，混勻加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療膽結(jié)石的藥物中的用途。
進(jìn)一步地，所述的藥物是治療氣滯型慢性膽囊泥砂性結(jié)石的藥物。
所述的藥物是治療肝內(nèi)膽管結(jié)石、手術(shù)后殘存結(jié)石的藥物。
本發(fā)明藥物原料中，牛膽水利膽、溶石、消炎，《中國藥學(xué)大辭典》載能用作解凝藥及作膽汁補(bǔ)償藥，主治谷疸食黃。李時(shí)珍按“同氣相求”之義，曰“牛之黃，牛之病也。故有黃之牛多病而死。諸獸皆有黃，人之病黃也然。因其病在肝膽之間，凝結(jié)成黃，故還能治肝膽之病?！泵鳌た娤Ｓ骸侗静萁?jīng)》論牛膽“寒以勝熱，苦以泄結(jié)，入肝泄熱?！薄杜R床藥物手冊》載牛膽浸膏片臨床用于肝膽疾病后膽汁分泌不足，膽道小結(jié)石及膽囊炎。牛膽酸納膠囊用于膽囊及膽道功能失調(diào)，膽囊切除術(shù)后綜合癥，慢性膽囊炎，膽石癥等。牛膽水含膽酸、脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸等，故為利膽消石要藥?；鹣酢侗静菥V目》載硝石能化七十二種石，破積散堅(jiān)，治腹脹，主治女勞黑疸。雞內(nèi)金《中藥臨床手冊》載主治消食積，脘腹脹滿，生用可治膽結(jié)石、尿路結(jié)石?！夺t(yī)學(xué)衷中參西錄》載雞內(nèi)金可健脾胃、消食積、化石溶石。再輔以枳殼破滯氣，寬腸胃用作祛痰燥濕消化藥?！洞竺鞅静荨份d本品具有健脾開胃，潤五臟，下氣，止嘔逆，消食。香附調(diào)氣解郁，除諸痛，用作消散藥?！侗静菥V目》謂香附散時(shí)氣寒疫，利三焦，解六郁，消飲食、積聚，止心腹痛。木香行氣導(dǎo)滯，止痛?！侗静萸笳妗份d木香下氣寬中，為三焦氣分散藥。然三焦則又以中焦為要，故凡脾胃虛寒凝滯，而見吐瀉停食，肝虛寒入，而見氣郁氣逆，服此則下氣而寬中矣，中寬則上下皆通。延胡索利氣止痛，活血散瘀。《本草求真》謂本品入足厥陰肝，手少陰心經(jīng)，能行血中氣滯，氣中血滯。積滯不散者，服此力能通達(dá)。原料組方佐以黃連清熱燥濕，消瘀、厚腸、止瀉，用作瀉火燥濕之健胃藥。《中草藥文獻(xiàn)匯編》載藥理作用對膽汁分泌的影響有利膽作用，增加膽汁形成，使膽汁變稀，對慢性膽囊炎患者口服有良好效果。白術(shù)補(bǔ)脾化濕，益氣生血，《中國藥學(xué)大辭典》載“枳術(shù)湯治心下堅(jiān)，大如盤，邊如旋，手足厥逆，陽氣不通”。高良姜暖胃散寒，止痛消食，用作芳香性健胃藥。吳茱萸溫中下氣，止痛?！侗静菥V目》主治飲食不消，心腹諸冷，絞痛中惡，心腹痛，胃冷吐瀉，腹痛，起陽健脾，潤肝脾，開郁化滯。與牛膽水等苦寒藥同用，一寒一熱，陰陽相制也。山楂消食化積，散瘀行滯，且能降低膽固醇。建曲消食和胃，化積消脹，用于消化不良。使藥青皮，據(jù)《中國藥學(xué)大辭典》載“青皮乃肝膽二經(jīng)氣分要藥，能疏通二經(jīng)，行其氣也?！敝髦纹茪狻⑸⒎e、疏肝、止痛。為氣滯下食，破積結(jié)及膈氣之要藥。《中藥臨床手冊》謂青皮歸經(jīng)入肝、膽經(jīng)，功效疏肝破氣，散積化滯。用于肝氣郁滯，脅肋脹痛，食積腹脹，噯氣脘悶等。
本發(fā)明藥物原料藥主、輔、佐、使，相輔為用，共奏舒肝利膽，消炎溶石，行氣止痛之功效。以牛膽水浸膏為君，舒肝利膽，消溶膽石，輔以硝石、雞內(nèi)金化石為臣，肝膽結(jié)石得化，氣機(jī)通暢則諸證悉減。又輔枳殼、香附、木香、青皮、延胡索行氣止痛，以黃連、白術(shù)為佐，燥濕利膽，又反佐溫肝胃之吳茱萸、高良姜以制它藥苦寒，以求相德益彰；再佐消食化滯之山楂、建曲，脾胃健運(yùn)則有利服藥，以滿療程；青皮為全方之使，引達(dá)諸藥于肝膽。
本發(fā)明藥物組方合理，符合中醫(yī)理論，具有消溶肝膽結(jié)石，具有理氣調(diào)肝，和胃止痛之功能，有顯著溶石作用，經(jīng)盲法臨床驗(yàn)證有效率為93％，全部消溶結(jié)石占39％，消溶結(jié)石1/2以上占41％，部分消溶結(jié)石占13％，尤以膽管結(jié)石與肝內(nèi)膽管結(jié)石療效為佳。動(dòng)物急性和長期毒性試驗(yàn)(90天)未發(fā)現(xiàn)明顯毒副反應(yīng)，臨床治療亦未發(fā)現(xiàn)明顯毒副反應(yīng)，且制劑工藝可行，質(zhì)量穩(wěn)定，可控，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 本發(fā)明藥物的制備1、處方
牛膽水173g、火硝115g、雞內(nèi)金(炒)133g、枳殼(麩炒)52g、香附(制)68g、木香34g、延胡索(醋制)34g、黃連21g、白術(shù)(麩炒)68g、吳茱萸(炒)27g、高良姜41g、山楂(炒焦)68g、建曲141g、青皮34g；輔料淀粉4％，硬脂酸鎂1％。
以上原輔料共制成膽石片1000片。
2.工藝與操作(1)取炒雞內(nèi)金、建曲和火硝混合，按《粉碎崗位技術(shù)安全操作法》進(jìn)行粉碎，過120目篩，細(xì)粉備用。
(2)取青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜、黃連、延胡索和山楂，置多功能提取罐中，加8倍量的水浸泡1h，按《多功能提取罐標(biāo)準(zhǔn)操作程序》規(guī)定的方法、參數(shù)進(jìn)行煎煮，從沸騰開始計(jì)時(shí)，并調(diào)節(jié)好油水分離器的液位，收集揮發(fā)油。揮發(fā)油的收得率為0.3-0.5％。
(2)煎煮1h后放出藥液，濾過(80目篩)，泵入粗濾液貯罐；(3)向提取罐中加入6倍量的水，如前通蒸汽煎煮1h，放出藥液濾過(80目篩)，泵入同一粗濾液貯罐。
(4)再向提取罐加入4倍量水，通蒸汽煮沸1h，放出藥液，濾過(80目篩)，泵入同一粗濾液罐，備用。
(5)將粗濾液貯罐中的藥液濾過(200目篩)，泵入精濾液貯罐。
(6)將精濾液貯罐中的藥液和另器貯存的牛膽水(經(jīng)檢驗(yàn)合格)分別泵入各自的三效濃縮器中，按《三效濃縮器標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)》規(guī)定的溫度壓力和方法進(jìn)行減壓濃縮。當(dāng)牛膽水濃縮至原體積的1/3～1/4，相對密度為1.04～1.06時(shí)，放入干燥潔凈桶內(nèi)，備用。
(7)當(dāng)藥液濃縮到相對密度為1.25-1.30(60℃測)時(shí)，放入潔凈容器備用。藥液的提取率應(yīng)為14.5-18.5％。
(8)粘合劑的制備按方取出淀粉，加適量熱水(60-70℃)攪拌成糊，通蒸汽繼續(xù)攪拌，直至熟透(呈半透明狀)。
(9)混合噴霧藥液取淀粉漿，牛膽水清膏和制得之藥液流膏置同一容器中，混合均勻，并分次注入噴液小車備用。
(10)將制備的細(xì)粉置沸騰式制粒機(jī)的流化床(底料鍋)內(nèi)，加熱，使底料預(yù)熱至65-70℃。
(11)按《制粒崗位技術(shù)安全操作法》和《FL-120型沸騰式制粒機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》規(guī)定的方法、程序和設(shè)定的參數(shù)進(jìn)行制粒。
(12)藥液噴霧完畢，應(yīng)升溫至80-90℃干燥機(jī)內(nèi)顆粒，待水份含量在2.5-3.5％時(shí)停止。顆粒的收得率為95-98％。
(13)揮發(fā)油包合取揮發(fā)油量∶β-環(huán)糊精＝1∶6稱取β-環(huán)糊精的量，加入3倍量去離子水，置膠體磨中攪成糊狀。將揮發(fā)油倒入膠體磨中，與β-環(huán)糊精糊狀物混合均勻后攪拌，1小時(shí)后傾出抽濾，除去水份，得黃白色包結(jié)物。將黃白色包結(jié)物置烘房中50℃干燥，粉碎后過80目篩，得揮發(fā)油包結(jié)物細(xì)粉備用。
(14)整粒與混合。按片重0.5g的規(guī)格配好上、下沖，調(diào)節(jié)好充填量，并從40KN至50KN的壓力試壓藥片。
實(shí)施例2 本發(fā)明藥物的制備a、稱取下述重量配比的原料牛膽水300g、火硝150g、雞內(nèi)金200g、枳殼90g、香附100g、木香50g、延胡索55g、黃連40g、白術(shù)120g、吳茱萸45g、高良姜80g、山楂120g、建曲200g、青皮60g；(原料可以使用其炮制品，也可以不使用炮制品)b、取雞內(nèi)金、火硝粉碎成細(xì)粉，備用；c、取建曲粉碎；d、牛膽水加熱至沸，濾過，濾液濃縮，得清膏；e、青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精進(jìn)行包結(jié)，包結(jié)物干燥，粉碎后備用；e、將e步驟的藥渣與黃連、延胡索、山楂加水煎煮，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入牛膽水清膏與b步驟制備的細(xì)粉、c步驟的建曲細(xì)粉或水提取物，加入淀粉，制粒，裝膠囊，即得本發(fā)明膠囊劑。
實(shí)施例3 本發(fā)明藥物的制備a、稱取下述重量配比的原料牛膽水150g、火硝100g、雞內(nèi)金100g、枳殼30g、香附30g、木香20g、延胡索20g、黃連10g、白術(shù)40g、吳茱萸10g、高良姜20g、山楂40g、建曲120g、青皮20g；b、取雞內(nèi)金、火硝粉碎成細(xì)粉，備用；c、取建曲加熱水提取，得熱水提取物；d、牛膽水加熱至沸，濾過，濾液濃縮，得清膏；e、青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜超臨界流提取揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精進(jìn)行包結(jié)，包結(jié)物干燥，粉碎后備用；e、將e步驟的藥渣與黃連、延胡索、山楂加水煎煮，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入牛膽水清膏與b步驟制備的細(xì)粉、c步驟的建曲細(xì)粉或水提取物，混勻加入矯味劑、制備成口服液。
實(shí)施例4 本發(fā)明藥物的制備a、稱取下述重量配比的原料牛膽水200g、火硝180g、雞內(nèi)金180g、枳殼60g、香附80g、木香40g、延胡索35g、黃連30g、白術(shù)100g、吳茱萸35g、高良姜60g、山楂80g、建曲180g、青皮50g；按實(shí)施例1的方法制備成片劑。
實(shí)施例5 本發(fā)明藥物的質(zhì)量控制取實(shí)施例1的制備的片劑進(jìn)行質(zhì)量控制1、定性鑒別(1)取本品2片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，加乙醇2ml攪拌，濾過，濾液作為供試品溶液。另取膽酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(5∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘約10分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2)取本品10片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用氯仿提取二次，每次15ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液，另取雞內(nèi)金對照藥材2g，加乙醇20ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙醇-甲酸(3∶3∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試的色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯3～4個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)。
(3)取本品10片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，加70％甲醇30ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用醋酸乙酯提取二次，每次15ml，合并醋酸乙酯提取液，加水50ml洗滌，棄去水液，取醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)颖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取青皮對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯(3∶7)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘約10分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取本品20片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，加氨試液適量，使?jié)櫇?，加氯?0ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)恿蛩?0.05mol/L)20ml使溶解，濾過，濾液加氨試液調(diào)節(jié)PH值至10，用氯仿提取二次，每次15ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml，作為供試品溶液。另取吳茱萸對照藥材、黃連對照藥材各0.5g，加氨試液適量，加氯仿20ml，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部 附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl，對照藥材溶液1μl、對照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒光斑點(diǎn)。
(5)取本品30片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，加甲醇50ml超聲處理30分鐘，濾過，取濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0ml微熱使之溶解，加氨試液調(diào)PH至堿性，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使之溶解，作為供試品溶液；另取延胡索藥材1g，加甲醇30ml同法制成對照藥材溶液；吸取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液、對照藥材溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一用1％NaOH溶液制備的硅膠G薄層板上，以正已烷-氯仿-甲醇(7.5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與延胡索乙素和延胡索對照藥材相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2、定量鑒別膽酸取本品20片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，再精密稱出約1g，加甲醇25ml，冷浸48小時(shí)，并時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾渣用甲醇少量洗滌，至洗液無色，合并洗液與濾液，濃縮至干，殘?jiān)蛹状既芙猓迫?ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取膽酸對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液4μl，對照品溶液2μl與4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(5∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約10分鐘，至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長λS＝385nm，λR＝700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品收度積分值，按兩點(diǎn)法計(jì)算，即得。
每片含牛膽水以膽酸(C24H40O5)應(yīng)不少于1.5mg。
硝酸鉀 取本品20片，薄膜衣片除去包衣后，研細(xì)，再精密稱取適量(約0.67-0.70g)置坩堝內(nèi)，先用小火炭化，再在700℃熾灼至完全灰化，放冷，殘?jiān)?0ml水分次洗入100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用中速濾紙自然濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液25ml，加酚酞指示液1滴，甲醛試液2ml，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)至溶液顯微紅色，加熱至40℃(繼續(xù)保持微紅色)，邊攪拌邊滴加四苯硼鈉乙醇飽和溶液15ml，繼續(xù)攪拌1分鐘，靜置10分鐘，用恒重的中速或慢速定量濾紙自然濾過，沉淀用四苯硼鉀乙醇飽和溶液(四苯硼鉀1g，乙醇50ml加水至1000ml，振搖使溶解，用前濾過)洗滌3-4次，每次10ml，濾過，用無水乙醇2ml沿濾紙壁洗滌1次，濾過，于120℃烘至恒重，精密稱定，計(jì)算，與0.2822相乘，扣除背景干擾值4.56％，即得供試品中含有硝酸鉀的重量。
每片含火硝以硝酸鉀(KNO3)應(yīng)不少于100.0mg。
按上述方法測定的膠囊劑每粒膠囊含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于2.25mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于150mg；顆粒劑每10g含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg；丸劑每10g含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg；口服液每10ml含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg。
以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
一、實(shí)驗(yàn)材料供試藥物本發(fā)明藥物清膏粉，由實(shí)施例1的方法制備，臨床制劑為淺棕黃色片劑、氣香、味苦。每片含清膏重0.3496g，片重0.5g，成人日服三次，每次服4-6片，日服量12-15片，以60公斤體重計(jì)算，人每日公斤體重用量為(0.0699g-0.105g)，平均為0.0875g，本實(shí)驗(yàn)采用未壓片的清膏粉，每克清膏粉相當(dāng)于原生藥1g，實(shí)驗(yàn)時(shí)將清膏粉用50℃恒溫24hr，研細(xì)經(jīng)60孔目過篩，以1％西黃蓍膠液混懸，藥液濃度為0.3g(清膏)/ml、藥物配制后存冰箱備用，實(shí)驗(yàn)分別采用1.5g(生藥)/(kg.d)、3g(生藥)/(kg.d)，分別為臨床的17.1、34.2倍。
對照藥物陽性對照藥1
膽石通膠囊中國廣東汕頭制藥廠生產(chǎn)，粵衛(wèi)藥準(zhǔn)字(85)第C1-195號。批號9110090，去膠囊取藥粉，以1％西黃蓍液配制成30％懸液，存冰箱備用，實(shí)驗(yàn)采用劑量3g/kg，約為臨床用量的32倍。
陽性對照藥2愛活膽通為明膠丸，每粒含溶石成份100mg，西德愛活大藥廠出品，中國進(jìn)口許可證號880209.REG.HK-22425，藥物批號NFD1291ch、B11742、EXP1295。藥物配制以1％西黃蓍膠液配成20mg/ml的乳劑，存冰箱備用。實(shí)驗(yàn)采用劑量為0.2g/kg為人體劑量33倍。
試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物對豚鼠膽紅素結(jié)石的防石作用1、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果分組豚鼠78只經(jīng)飼養(yǎng)一周適應(yīng)環(huán)境后，前72只，按體重均分為4組。第1組18只，為模型組(下稱成石組，每日每只喂致石飼料按20g/100gbw(bw為體重縮寫)，以下各組致石飼料均按此喂給)；第2組為ig本發(fā)明藥物清膏3g(生藥)/(kg.d)和致石飼料；第3組18只ig本發(fā)明藥物清膏1.5g(生藥)/kg.d)和致石飼料；第4組18只ig膽石通3g/(kg.d)和致石飼料，以上四組每只豚鼠均上午ig給對照液或藥液，下午分別每只喂給致石飼料，連續(xù)給藥及喂致石飼料98d，余下6只，體重、年齡相近，性別相同，每天每只喂給等量的基礎(chǔ)飼料，連續(xù)喂養(yǎng)98天，作為空白對照組。各組于末次給藥后24hr后斷頭處死，取血分離血清，迅速剖開胸腹，用止血鉗阻斷膽總管，取膽囊，肉眼觀察記錄成石鼠數(shù)，計(jì)算成石率(成石鼠數(shù)/實(shí)驗(yàn)數(shù))，結(jié)果見表1，并用注射器吸取全部膽汁，余下部份，用濾紙吸去水分(吸水時(shí)間為2hr)，用精密扭力天平稱膽囊壁重，結(jié)果見表2；膽汁、血清送檢，測定血清、膽汁中幾種膽色素(測定方法采用咖啡咽法利用中國科學(xué)院生物研究所上海榮盛試劑廠膽色素分析藥盒，分別測定總膽色素、結(jié)合膽色素，計(jì)算游離膽色素，結(jié)果見表1表1 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對豚鼠膽色素結(jié)石成石率的影響

與成石組比**P＜0.01*P＜0.05表2 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對成石豚鼠膽囊壁重量的影響

與成石組囊壁比*P＜0.05；**P＜0.01；與正常組囊壁重比△△P＜0.01表3 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對成石豚鼠血清、膽汁中膽色素含量的影響

與成石組比*P＜0.05；**P＜0.01；與對照組比△P＜0.05，△△P＜0.012、結(jié)果從剖后可是成石組豚鼠膽囊中多形成了不規(guī)則的結(jié)石，其結(jié)石外形多呈棕紅色或黑色，多數(shù)可見類似細(xì)小油菜籽粒，結(jié)構(gòu)疏松，也有少數(shù)可見長短不一的網(wǎng)狀纖維索狀物，與人類膽色素結(jié)石相似；而本發(fā)明藥物清膏3g(生藥)/(kg.d)組18只中僅2只豚鼠的膽囊中有上述典型結(jié)石，另外少數(shù)動(dòng)物可見膽汁混濁現(xiàn)象，其余16只動(dòng)物的膽囊透明與正常豚鼠膽囊相近。小劑量及膽石通的結(jié)果與上述相似，只是成石率比大劑量組高。從表1可見本發(fā)明藥物清膏大劑量組對豚鼠的成石鼠數(shù)減少14只，成石率比成石對照組低77.8％，小劑量與膽石通相似，其成石鼠數(shù)成石率均較成石對照組減少10只，低55.6％，差異非常顯著P均小于0.01；從表2可見吸去膽汁的囊壁重量，無論有結(jié)石囊壁或無石囊壁，均可見給藥組比不給藥成石組輕(P＜0.01)但均比正常組的囊壁重(P＜0.01)；陽性藥比實(shí)驗(yàn)藥物的囊壁重。但P＞0.05未見顯著差異。
表3可見本發(fā)明藥物清膏膽石通對成石飼料所引起的豚鼠血清、膽汁中的總膽色素、結(jié)合膽色素、游離膽色素的升高均有不同程度的降低作用。降低作用的強(qiáng)弱與藥物劑量有關(guān)，此種作用尤以膽汁較為明顯。
試驗(yàn)例2 對正常小鼠血清結(jié)合甘膽酸的影響1、試驗(yàn)方法
取體重24-30g♀小鼠40只，按體重隨機(jī)均分為4組，每組10只，第1、2組分別ig本發(fā)明藥物清膏3、1.5g/(kg.d)，第3組ig愛活膽通0.2g/(kg.d)；第4組ig等量1％西黃蓍膠液，各組每日ig給藥1次，連續(xù)給藥10d，于末次給藥后2hr撥眼取血，以4000r/min離心15min，分離血清，采用中國原子能科學(xué)研究院125 I甘膽酸放免分析藥盒測定血清中的甘膽酸含量，測試儀器采用LS3801液閃分析儀測定，閃爍液采用二氧氯圜系統(tǒng)即PPO 6g，POPOP 0.37g，萘150g加二氧氯圜1500ml，每個(gè)樣本加閃爍液5ml，結(jié)果見表4。
表4 本發(fā)明藥物清膏、愛活膽通對小鼠血清甘膽酸的影響

組間均無統(tǒng)計(jì)差別。P均＞0.052、結(jié)果從表4可見，本發(fā)明藥物無論大、小劑量對正常小鼠血清中的甘膽酸的含量無明顯影響，P＞0.05。
3、小結(jié)應(yīng)用豚鼠膽色素結(jié)石模型對本發(fā)明藥物進(jìn)行的防石試驗(yàn)及血清、膽汁中的成份分析表明本發(fā)明藥物對豚鼠膽色素結(jié)石的形成有顯著的防石效果，可使試驗(yàn)動(dòng)物的成石率由88.9％下降至11.1％、33.3％與成石組(或模型組)比P均＜0.01，表明本品有良好的防石效果，且能顯著預(yù)防成石動(dòng)物膽汁及血清中的游離膽色素的升高，從而起到良好的防石效果。但本品不影響正常動(dòng)物的血清，膽汁中的總膽色素，結(jié)合膽色素及游離膽色素含量，亦不影響其甘膽酸及總膽汁酸重量，總之，對正常動(dòng)物的膽汁成分影響不明顯。
試驗(yàn)例3 體外溶石試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料膽總管結(jié)石、肝內(nèi)外膽管結(jié)石、膽囊結(jié)石均由四川旭華制藥有限公司提供，經(jīng)醋酸酐法定性分析結(jié)石類型，分型后洗凈37℃恒溫保存?zhèn)溆谩?br> 2、方法與結(jié)果取清潔鏈霉素瓶45個(gè)，共分3組每組15個(gè)小瓶，第1組每瓶裝入膽色素結(jié)石100mg(體積平均為0.13ml)；第2組每瓶裝入膽固醇結(jié)石100mg(0.11ml)；第3組每瓶裝入混合結(jié)石100mg(0.12ml)。裝入結(jié)石后，每組前3瓶，每瓶加入2.5％本發(fā)明藥物清膏藥液；各組4-6號瓶每瓶加入5％本發(fā)明藥物清膏藥液；7-9號瓶，每瓶加入5％膽石通藥液；10-12號瓶每瓶加入0.5％愛活膽通。13-15號瓶每瓶加入0.1％西黃蓍膠液。45瓶每瓶內(nèi)加入藥液(或?qū)φ找?量均為10ml，藥液加完后，將所有小瓶放入37℃恒溫45d，兩天換藥一次，換藥方法用雙層紗布捆緊封閉瓶口，每次濾干藥液后再以6號針頭插入瓶內(nèi)加入新鮮藥液，換藥至10天、45天時(shí)，末次換藥后48hr，經(jīng)等重紗布過濾藥液，并將瓶放入50℃恒溫箱內(nèi)，恒溫48hr，取出余下結(jié)石用臺(tái)式扭力天平稱總重，分別減去瓶重及紗布重得出余下結(jié)石重量，結(jié)果見表5表5本發(fā)明藥物膏、膽石通、愛活膽通對三種結(jié)石的體外溶石作用(X±SD)

★體積難于測定，與1％西黃蓍膠液組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.注df4t0.05＝2.776，t0.01＝4.604表5可見分別以本發(fā)明藥物膏2.5％、5％、膽石通5％、愛活膽通0.5％.(每ml分別含藥重25、50、50、5mg)對三種人體結(jié)石均有不同程度的溶解作用，加藥十天，可見本發(fā)明藥物清膏對三種結(jié)石溶解作用顯著，P＜0.05或0.01，膽石通對膽色素和混合型結(jié)石亦有良好的溶石作用，而5％愛活膽通對膽固醇結(jié)石溶解較為明顯，P＜0.01。對混合型結(jié)石亦有一定的溶石作用，連續(xù)換藥至45天，兩種劑量的本發(fā)明藥物浸膏液對人體膽色素結(jié)石的溶石率分別可提高到57.4％、91％，余石部分多呈舒松感。
2、小結(jié)體外溶石實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物清膏對三種人類結(jié)石均有不同程度的溶石作用，對膽色素結(jié)石溶解較強(qiáng)。
試驗(yàn)例4 本發(fā)明藥物清膏的抗炎試驗(yàn)1、對二甲苯致小鼠耳廓炎癥的影響取體重18-22g健康小鼠40只，按體重隨機(jī)均分為4組，每組10只均為♂鼠。第1組為對照組，于致炎前0.5hr ig1％西黃蓍膠液0.1ml/10g；第2組致炎前0.5hr，ig膽石通膠囊3g/kg；第3、4組分別ig本發(fā)明藥物清膏3g、1.5g/kg，各組小鼠均用100％二甲苯液0.05ml滴小鼠左耳正反兩面耳廓致炎；致炎后0.5hr沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑6mm的打孔器打下左耳致炎部位與右耳非致炎相同部位的耳片，用精密扭力天平稱耳片重量，計(jì)算左右耳片重量差，結(jié)果如表6表6 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對二甲苯致小鼠耳廓腫重量的影響

與對照組比**P＜0.01另取48只小鼠同樣均分為4組，各組動(dòng)物于致炎后10min，分別ig1％西黃蓍膠、膽石通、本發(fā)明藥物清膏，于ig給藥后0.5hr，按上述操作，打下耳片稱重，結(jié)果如表7表7 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對二甲苯致炎小鼠耳廓腫的消炎作用

與西黃蓍膠組比*P＜0.05；**P＜0.01表6、7結(jié)果表明本發(fā)明藥物、膽石通，無論致炎前或致炎后給藥，均能降低二甲苯所致小鼠耳腫脹率(P＜0.05或0.01)。
2、對瓊脂肉芽腫的影響取體重80-120g健康雄性大鼠50只，隨機(jī)均分為5組，每組10只，在無菌下操作，于每只鼠背部中線皮下注射滅菌2％瓊脂溶液2ml，注瓊脂后，第1組每天ig1％西黃蓍膠液1ml/100g；第2組ig愛活膽通0.2g/(kg.d)；第3、4組ig本發(fā)明藥物清膏3、1.5g/(kg.d)，第5組ig醋酸可的松60mg/kg，連續(xù)給藥14d，末次給藥后2hr斷頭處死，剖取瓊脂肉芽，用扭力天平稱濕重。結(jié)果見表8表8 本發(fā)明藥物清膏、愛活膽通、醋酸可的松對瓊脂肉芽重的影響

與西黃蓍膠比*P＜0.05；**P＜0.01表8表明本發(fā)明藥物清膏3g、1.5g/(kg.d)連續(xù)ig給藥14天，對瓊脂肉芽腫有不同程度的抑制作用，大劑量組對瓊脂肉芽重與西黃蓍膠對照組比(P＜0.05)差異顯著；小劑量組對瓊脂肉芽重亦有不顯著的抑制(P＞0.05)而愛活膽通對瓊脂肉芽腫則未見抑制作用；本發(fā)明藥物大劑量對瓊脂肉芽的抑制與醋酸可的松比(P＞0.05)無顯著差異。
3、對角叉菜膠所致大鼠腳腫脹的影響取160-181g雄性健康大鼠40只，按體重均分4組，每組10只，第1組ig1％西黃蓍膠1ml/100g bw；第2組ig膽石通3g/kg；第3、4組ig本發(fā)明藥物清膏3、1.5g(生藥)/kg，給藥后30min，各組大鼠于每只右后肢足跖皮下注入0.1ml的1％角叉菜膠0.05ml致炎。分別于給藥前、給藥后4、6、20、24hr用窄尺帶測量足跖及踝關(guān)節(jié)周長，記錄每次測量結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表9表9 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對角叉菜膠所致大鼠腳腫脹的影響

與對照組比*P＜0.05；**P＜0.01從表9可見本發(fā)明藥物清膏3、1.5g(生藥)/kg、膽石通3g/kg均對角叉菜膠所致腳腫脹有良好的抑制作用，與膽石通比P＞0.05無顯著差異。
4、對小鼠毛細(xì)血管通透性的影響取小白鼠40只，按體重均分為4組，每組10只，♀♂各5只，第1組為對照組，每天ig西黃膠0.1ml/10g bw，第2組為陽性藥每天ig膽石通3g/kg，第3、4組ig本發(fā)明藥物清膏3、1.5g(生藥)/kg，連續(xù)給藥5天于末次給藥后45min，尾iv 1％伊文思蘭4mg/kg，立即在小鼠腹部正中滴100％二甲苯2滴，15min后斷頭處死，剖取腹部著色部分，以本次實(shí)驗(yàn)腹皮著色部分定為10個(gè)級別，以最深著色皮的深度定為10分，然后遞減共定10個(gè)級別進(jìn)行評分，評分后剪碎，用70％丙酮水液浸提36hr，用2500轉(zhuǎn)/min離心20min，取上清液，用721型、波長590nm比色，結(jié)果如表10表10 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對二甲苯所致小鼠毛細(xì)血管通透性的影響

與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01表10結(jié)果表明本發(fā)明藥物清膏，膽石通、連服5天對二甲苯所致小鼠血管通透性增加，均有顯著的降低(P＜0.05或0.01)，在相同劑量下本發(fā)明藥物對血管通透性的降低作用比膽石通強(qiáng)；本實(shí)驗(yàn)還表現(xiàn)出本發(fā)明藥物對血管通透性的降低，隨劑量增加而增加，表現(xiàn)出量效關(guān)系。
5、小結(jié)本發(fā)明藥物與膽石通、經(jīng)口服給藥，采用二甲苯致小鼠耳廓炎癥，瓊脂致大鼠的肉芽腫、角叉菜膠致大鼠腳腫脹及二甲苯致小鼠血管通透性增加均有良好的抑制作用，表明本發(fā)明藥物有良好的抗炎作用，且有明顯的量效關(guān)系。
試驗(yàn)例5 本發(fā)明藥物清膏的鎮(zhèn)痛試驗(yàn)1、對醋酸扭體反應(yīng)的影響取18-21.2g健康小鼠50只，按體重隨機(jī)均分5組，每組10只，♀♂各5只，第1組ig1％西黃蓍膠液；第2組ig氨基比林0.2g/kg；第3組ig膽石通3g/kg；第4、5組分別ig本發(fā)明藥物清膏3、1.5g/kg，各組小鼠均ip(腹腔注射)0.6％冰醋酸0.1ml/10gbw，ip前2、1hr各給藥1次，ip冰醋酸后立即測定10min內(nèi)每只小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，結(jié)果如表11表11 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對醋酸扭體反應(yīng)小鼠的影響

與1％西黃蓍膠組比*P＜0.05；**P＜0.01表11可見本發(fā)明藥物清膏與氨基比林一樣對醋酸所致小鼠的扭體反應(yīng)有顯著的抑制作用，但抑制強(qiáng)度不如氨基比林，膽石通對醋酸扭體的抑制作用不明顯。
2、對甲醛所致小鼠舔后足反應(yīng)的影響取小鼠50只，按體重隨機(jī)均分為5組，每組10只，♀♂各5只，第1組ig1％西黃蓍膠；第2組ig氨基比林0.2g/kg；第3組ig愛活膽通0.2g/kg；第4、5組分別ig本發(fā)明藥物清膏3、1.5g/kg，各組小鼠均于左后足背sc2.5％甲醛0.03ml/只，分別于sc前1、0.5hr各給藥1次，sc甲醛后立即測定小鼠15min內(nèi)的舔足次數(shù)，30min后再測定1次，觀察時(shí)間仍為15min，結(jié)果見表12。
表12 本發(fā)明藥物清膏、愛活膽通、氨基比林對2.5％甲醛所致小鼠舔足的影響

與1％西黃膠對比*P＜0.05；**P＜0.01表12可見本發(fā)明藥物清膏、愛活膽通對2.5％甲醛sc左后足背所致小鼠舔足次數(shù)有顯著的抑制(P＜0.01)其抑制強(qiáng)弱與本發(fā)明藥物的劑量有關(guān)。
3、小結(jié)上述兩種試驗(yàn)表明本發(fā)明藥物清膏對醋酸所致小鼠扭體及甲醛小鼠舔足次數(shù)均有顯著的抑制作用，提示該藥有一定的鎮(zhèn)痛效果，且有一定量效關(guān)系。
試驗(yàn)例6 本發(fā)明藥物的解熱試驗(yàn)取體重160-190g雄性健康大鼠40只，按體重均分為4組，并測量正常體溫后，第1組ig1％西黃蓍膠液；第2組ig膽石通3g/kg；第3、4組分別ig本發(fā)明藥物清膏3g、1.5g(生藥)/kg；以1％角叉菜膠0.05ml于大鼠一側(cè)后足跖皮下注射，各組均于足跖皮下注射角叉菜膠前2、1hr分別給藥1次。發(fā)熱后4、6、14、20、24hr分別測定各組每只大鼠的肛溫，結(jié)果如表13表13 本發(fā)明藥物清膏、膽石通對角叉菜膠所致大鼠體溫變化的影響

與對照組比*P＜0.05；**P＜0.01表13結(jié)果表明本發(fā)明藥物清膏，膽石通對角叉菜膠致熱后6小時(shí)大鼠發(fā)熱有明顯的抑制作用。
試驗(yàn)例6 本發(fā)明藥物清膏的抗菌試驗(yàn)1、本發(fā)明藥物清膏的抗菌試驗(yàn)1(試管法)1.1實(shí)驗(yàn)材料受試藥物本發(fā)明藥物清膏。
菌株金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、鏈球菌，均由第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床分離鑒定提供。
培養(yǎng)基常規(guī)肉湯管培養(yǎng)基。
1.2方法與結(jié)果方法采用試管法1.2.a常規(guī)肉湯培養(yǎng)基，每管2ml備用。
1.2.b將培養(yǎng)24hr的菌株，用生理鹽水稀釋至約3億/ml，細(xì)菌備用。
1.2.c加待測藥液，以原液1∶1(藥粉∶生理鹽水)為100％濃度，藥液與培養(yǎng)基進(jìn)行倍半稀釋，對照管不加藥液。
1.2.d取上述備用菌液，每管接種一接種環(huán)。
1.2.e置培養(yǎng)基于37℃孵箱孵化24hr觀察結(jié)果。
1.2.f觀察標(biāo)準(zhǔn)以無菌生長者為最小抑菌濃度。凡無菌生長者均再轉(zhuǎn)入普通肉湯管再培養(yǎng)，以無菌生長者為殺菌濃度，結(jié)果表14。
表14 本發(fā)明藥物清膏對三種臨床分離菌株的抑菌、殺菌作用

從表14可見，以本發(fā)明藥物1∶1為原濃度(100％)按對半稀釋為10個(gè)不同濃度，所進(jìn)行的試管抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的最小抑菌濃度為0.00781g(生藥)/ml。球菌為0.01562g(生藥)/ml。殺菌濃度均為0.03125g(生藥)/ml。
試驗(yàn)例7 本發(fā)明藥物清膏的抗菌試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料本發(fā)明藥物清膏，經(jīng)60COγ射線照射滅菌，臨用時(shí)用滅菌水稀釋至所需濃度共80ml。
采用Cowan I 3482金黃色葡萄球菌、2280大腸艾希氏菌、1447甲型溶血性鏈球菌、3156乙型溶血性鏈球菌、2519肺炎球菌、中檢51592宋內(nèi)氏痢疾桿菌、ATCC-27853綠膿桿菌、50096傷寒沙門氏菌8種菌株分別購自成都生物制品研究所、重慶市衛(wèi)生防疫站均屬標(biāo)準(zhǔn)菌株，保存于半固體狀培養(yǎng)基內(nèi)，臨用前分別接種于肉膏湯培養(yǎng)基或血肉膏湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)16小時(shí)，采用傾注平板法，藥物濃度以1∶1為原液，按對半稀釋，分別為1/32、1/64、1/128、1/256、1/512，每個(gè)濃度同時(shí)作兩個(gè)平板，并用等量無菌水作為對照，37℃培養(yǎng)24hr，觀察細(xì)菌生長情況。
2、試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物清膏對傷寒沙門氏菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌均有抑菌作用，其最低抑菌濃度分別為0.03125、0.0156、0.0156、0.0156、0.0078g(生藥)，其中以金黃色葡萄球菌較為敏感。
3、小結(jié)通過試管法和平板法試驗(yàn)表明本發(fā)明藥物清膏對沙門氏菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌5種細(xì)菌，均有抑菌和殺菌作用。
試驗(yàn)例8 本發(fā)明藥物清膏的利膽試驗(yàn)取體重230-410g雄性健康大鼠37只，按體重均分為4組，于實(shí)驗(yàn)前16hr禁食，用烏拉坦(1g/kg)ip麻醉，麻醉后捆扎4肢，開腹找胃幽門部，以幽門部為標(biāo)準(zhǔn)，尋找總膽管，用小鑷子將覆蓋在表面的被膜剝離暴露膽總管，結(jié)扎下端，小心剪一小口，向膽總管近肝端插入外徑1mm左右的塑料管引流膽汁，待膽汁流量穩(wěn)定后0.5hr計(jì)1次膽汁收集量，共2次后，于十二指腸給藥(或?qū)φ找?ml/100g.bw)后，測定5hr內(nèi)各區(qū)間的膽汁排泄量，結(jié)果如表15。從表15可看出消溶本發(fā)明藥物清膏、膽石通均有不同程度的促進(jìn)膽汁排量的作用，其中尤以本發(fā)明藥物清膏給藥后1-5hr膽汁均較對照組的膽汁流量明顯增加，P均＜0.01，差異非常顯著，說明本發(fā)明藥物清膏有利膽作用。
表15 本發(fā)明藥物、膽石通對膽汁分泌量的影響

與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01小結(jié)結(jié)果表明本發(fā)明藥物清膏對大鼠有明顯的利膽作用。
試驗(yàn)例9 本發(fā)明藥物清膏對豚鼠離體回腸試驗(yàn)取禁食24hr之雄性豚鼠3只，用木棒擊后腦致死，每只豚鼠取回腸3-4cm小段，放入DC-001型離體器官測定儀，通氣，臺(tái)氏液30ml，恒溫38℃，腸管一端系吊鉤上；另一端系于換能器鉤子上，調(diào)節(jié)腸肌張力，使其保持自然狀態(tài)，調(diào)節(jié)描筆于記錄紙的中部選擇0-10mm量程，紙速20mm/min，記錄一般正常收縮曲線后，依次向臺(tái)氏液瓶內(nèi)加入下列藥物，并記錄腸肌反應(yīng)，加入1∶10000乙酰膽堿0.05ml，1∶1000氯化鋇0.2ml；1∶100005-HT0.05ml，腸肌立即痙攣。當(dāng)收縮達(dá)峰值時(shí)，加入1‰本發(fā)明藥物清膏藥液，腸痙攣立即解除。本發(fā)明藥物對豚鼠離體正常腸管無痙攣?zhàn)饔媚懣擅黠@抑制Bacl、Ach、5-HT所致離體豚鼠的腸管痙攣。表明本發(fā)明藥物對平滑肌有松弛作用。
小結(jié)本發(fā)明藥物對氯化鋇、乙酰膽堿、5羥色胺所致豚鼠離體腸管痙攣有明顯的解痙作用，提示對平滑肌有松弛作用。
綜上所述本發(fā)明藥物清膏，對豚鼠膽色素結(jié)石有良好的防石效果，對人類三種結(jié)石有不同程度的溶解作用。且具有消炎、鎮(zhèn)痛、解熱、解痙、抑菌、利膽作用。
本發(fā)明藥物經(jīng)藥理藥效體外溶石試驗(yàn)和動(dòng)物膽囊植入人體結(jié)石試驗(yàn)證實(shí)，確有明顯溶解結(jié)石的作用。治愈的肝膽結(jié)石病患者，既有膽固醇結(jié)石，又有膽紅素結(jié)石和混合含鈣結(jié)石。而且，大量的病例表明，本品在治療肝膽結(jié)石病的同時(shí)，能恢復(fù)中等度肝功損害，對胖瘦不同體型的病人具有雙相調(diào)節(jié)作用，即在治愈結(jié)石的同時(shí)，使胖者體重減輕而健壯；使瘦者體重增加而康復(fù)。不僅如此，治愈的結(jié)石患者不再復(fù)發(fā)，又為本品一大特點(diǎn)，追蹤觀察132例十九年以上的治愈患者未見復(fù)發(fā)。通過實(shí)踐證明，符合中醫(yī)理、法、方、藥理論。
初步臨床試驗(yàn)435例肝膽結(jié)石患者，結(jié)果顯示膽石癥治療后三月影像學(xué)(B超)檢查，總有效率治療組、對照組和開放組分別為75.20％、47.27％、86.67％，P＜0.005。本發(fā)明藥物治療膽石癥臨床癥狀/證候、體征改善評價(jià)，治療組、對照組和開放組膽石癥患者，臨床癥狀/證狀、體征改善均優(yōu)于愛活膽通，總有效率治療組為89.20％，對照組為68.18％(P＜0.005)。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物無毒副作用，按中醫(yī)膽石癥證候改善，療效明顯，對結(jié)石患者顯著有效、安全。
《外科學(xué)》(高等教材)裘法祖編 北京 人民衛(wèi)生出版社，1990年第三版，P-563。
《膽道外科學(xué)》顧樹南、李清潭主編甘肅科技出版社，1994年10月第一版，P-141-142。
《臨床肝膽系病學(xué)》江紹基主編 上?？萍汲霭嫔?，1992年第一版，P-567。
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《膽石癥的非手術(shù)治療》西德Dr.A SCHROEDTER教授著。
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權(quán)利要求
1.一種治療膽道結(jié)石的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑牛膽水150-300份、火硝100-150份、雞內(nèi)金100-200份、枳殼30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黃連10-40份、白術(shù)40-120份、吳茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療膽道結(jié)石的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑牛膽水173份、火硝115份、雞內(nèi)金133份、枳殼52份、香附68份、木香34份、延胡索34份、黃連21份、白術(shù)68份、吳茱萸27份、高良姜41份、山楂68份、建曲141份、青皮34份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療膽道結(jié)石的藥物組合物，其特征在于它是由牛膽水濃縮的清膏，火硝、雞內(nèi)金粉末，青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜的揮發(fā)油及提取揮發(fā)油后的水提取物，建曲粉末或水提取物，黃連、延胡索、山楂的水提取物為活性成分加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療膽道結(jié)石的藥物組合物，其特征在于所述的制劑是片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、口服液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療膽道結(jié)石的藥物組合物，其特征在于所述的片劑每片含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于1.5mg，每片含火硝以硝酸鉀KNO3不少于100.0mg；膠囊劑每粒膠囊含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于2.25mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于150mg；顆粒劑每10g含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg；丸劑每10g含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg；口服液每10ml含牛膽水以膽酸C24H40O5不少于9mg，含火硝以硝酸鉀KNO3不少于600mg。
6.一種制備權(quán)利要求1所述的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、稱取下述重量配比的原料牛膽水150-300份、火硝100-150份、雞內(nèi)金100-200份、枳殼30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黃連10-40份、白術(shù)40-120份、吳茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份；b、取雞內(nèi)金、火硝粉碎成細(xì)粉，備用；c、取建曲粉碎或加熱水提取；d、牛膽水加熱至沸，濾過，濾液濃縮，得清膏；e、青皮、木香、白術(shù)、枳殼、香附、吳茱萸、高良姜提取揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精進(jìn)行包結(jié)，包結(jié)物干燥，粉碎后備用；e、將e步驟的藥渣與黃連、延胡索、山楂加水煎煮，濾過，濾液濃縮至稠膏，加入牛膽水清膏與b步驟制備的細(xì)粉、c步驟的建曲細(xì)粉或水提取物，混勻加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
7.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備治療膽結(jié)石的藥物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述的藥物是治療氣滯型慢性膽囊泥砂性結(jié)石的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述的藥物是治療肝內(nèi)膽管結(jié)石、手術(shù)后殘存結(jié)石的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療膽道結(jié)石的藥物組合物，它是由牛膽水、火硝、雞內(nèi)金、枳殼、香附、木香、延胡索、黃連、白術(shù)、吳茱萸、高良姜、山楂、建曲、青皮為原料制備制備而成的藥劑。本發(fā)明還提供了該藥物組合物制備方法。本發(fā)明藥物組方合理，符合中醫(yī)理論，具有消溶肝膽結(jié)石，具有理氣調(diào)肝，和胃止痛之功能，有顯著溶石作用，且制劑工藝可行，質(zhì)量穩(wěn)定，可控，為臨床提供了一種新的用藥選擇。
文檔編號A61K35/38GK1903343SQ20051002133
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月27日
發(fā)明者謝石方 申請人:四川旭華制藥有限公司