專利名稱：一種清熱化痰的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種清熱化痰的藥物組合物，具體地，是以植物提取物為原料制備而成的藥物組合物，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鮮竹瀝，又名竹汁、淡竹瀝、竹油等。本品為禾本科植物淡竹或粉綠竹的鮮稈用火燒烤灼而流出的汁液，是一味清熱化痰的常用中藥。味甘性寒，歸心、肺、胃經(jīng)、性極滑利。功能清熱解火、潤(rùn)肺滑痰、養(yǎng)陰滋補(bǔ)、利竅明目，常用于肺熱痰壅、痰迷火熱、痰熱驚癇、中風(fēng)口噤、煩悶消渴、血虛自汗諸癥。根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道(鄭占虎等，《中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用》，藥苑出版社)，竹瀝中主要含有多種氨基酸，此外還含有葡萄糖、果糖、蔗糖以及微量的愈創(chuàng)木酚。門冬氨酸有輔助增強(qiáng)免疫作用，有利于減輕炎癥程度，故相應(yīng)地分泌物減少。胱氨酸化學(xué)結(jié)構(gòu)與乙酰半胱氨酸(又名痰易凈)及半胱氨酸四甲酯等祛痰藥物相似。當(dāng)胱氨酸加入還原型谷胱甘肽，二硫鍵又還原為巰鍵(-SH)，可使痰液粘蛋白多肽鍵中心二硫鍵(-S-S-)短列，從而使痰變稀，粘度下降而易于咳出，另外，蛋氨酸可變?yōu)榘腚装彼峒半装彼?，起協(xié)同作用。
傳統(tǒng)竹瀝的制備方法為烤制，不適合現(xiàn)代化大生產(chǎn)。并且生產(chǎn)量很小，經(jīng)高溫烤制的竹瀝，有效成分的破壞很多，不符合藥品有效的要求。針對(duì)傳統(tǒng)竹瀝制備方法的缺陷，現(xiàn)有報(bào)道的竹瀝生產(chǎn)方法，比如申請(qǐng)?zhí)?8102280“鮮竹瀝的生產(chǎn)方法”，該方法是將鮮竹粉碎、浸漬、二次滲漉、滲漉液處理灌裝而成，該方法制備的是液體狀態(tài)下的竹瀝制劑。申請(qǐng)?zhí)?0105836“一種中藥鮮竹瀝的制備方法”，該方法是將竹稈經(jīng)水或醇(甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇中的任何一種)浸泡，熱提取、回收乙醇，得液態(tài)竹瀝制劑。上述幾種制備方法都是在高溫狀態(tài)下提取，不利于有效成分的保存，并且處理時(shí)間長(zhǎng)，容易導(dǎo)致有效成分的流失和破壞。且目前市售竹瀝產(chǎn)品由傳統(tǒng)竹瀝方法制備，為口服液，其用法臨床用量為30ml/次，Bid，則每日量為60ml/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為1.0ml/kg/日，臨床用量大，且口服液攜帶不便，服用量不易掌握，液體制劑保存不易，容易在使用時(shí)易造成二次污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種清熱化痰的藥物組合物，它是以竹的鮮稈提取物為活性成分制備而成的藥物組合物，本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。
本發(fā)明提供了一種清熱化痰的藥物組合物，它是由禾本科植物淡竹Phyllostachys nigra(Lodd.)Munro var.henonis(Miff.)Stapfex Rendle或粉綠竹Phyllostachys glanca McClure或凈竹Phyllostanchys nuda McClure的鮮稈的水提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
其中，所述的水提取物中每100g含天門冬氨酸80.23mg～110.56mg、胱氨酸3.54mg～4.98mg、蛋氨酸1.81mg～4.36mg、谷氨酸53.28mg～85.47mg、絲氨酸8.94mg～11.59mg、纈氨酸5.60mg～7.09mg、異亮氨酸2.94mg～3.66mg、酪氨酸6.95mg～8.83mg、苯丙氨酸3.94mg～5.50mg、賴氨酸4.83mg～6.59mg、脯氨酸4.13mg～6.15mg、蘇氨酸7.01mg～7.98mg、甘氨酸10.00mg～12.98mg、丙氨酸20.16mg～25.90mg、亮氨酸4.85mg～7.16mg、組氨酸4.15mg～7.11mg、精氨酸3.05mg～4.11mg、氨基酸總量224.41mg～318.02mg；每1g提取物中含愈創(chuàng)木酚2～10ug。
其中，所述的制劑為固體制劑、液體制劑。
進(jìn)一步地，所述的固體制劑為普通片劑、分散片、膠囊劑、顆粒劑、口含片、緩釋制劑。所述的顆粒劑為無(wú)糖型顆粒劑。
其中，所述的緩釋制劑包括緩釋部分和速釋部分，其中緩釋部分是由下述重量配比的原料制備而成竹提取物80～120份、乙基纖維素10～15份、淀粉40～60份、丙稀酸樹(shù)脂II號(hào)10～15份。
進(jìn)一步地，所述的緩釋制劑包括緩釋部分和速釋部分，其中緩釋部分是由下述重量配比的原料制備而成竹提取物100份、乙基纖維素15份、淀粉50份、丙稀酸樹(shù)脂II號(hào)10份。
其中，所述的分散片是含有下述重量配比的原料制備而成竹提取物120～180份、低取代羥丙基纖維素6～12份、微晶纖維素8～15份。
進(jìn)一步地，分散片是由下述重量配比的原料制備而成竹提取物150份、低取代羥丙基纖維素9份、微晶纖維素12份。
具體地，它是含有下述重量配比的原料制備而成竹提取物120～180份、低取代羥丙基纖維素6～12份、微晶纖維素8～15份、乳糖4～10份、甘露醇4～10份、甜菊糖6～12份、硬脂酸鎂6～15份、淀粉60～150份。
進(jìn)一步地，所述的分散片是含有下述重量配比的原料制備而成竹提取物150份、低取代羥丙基纖維素9份、微晶纖維素12份、乳糖9份、甘露醇9份、甜菊糖9份。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物制備方法，它包括如下步驟a、取禾本科植物淡竹Phyllostachys nigra(Lodd.)Munro var.henonis(Miff.)Stapfex Rendle或粉綠竹Phyllostachys glanca McClure或凈竹Phyllostanchysnuda McClure的鮮稈，加入4～8倍量的水煎煮，過(guò)濾，低溫濃縮，得竹提取物；b、將a步驟制備的竹提取物加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的固體制劑或液體制劑。
其中，步驟a所述的低溫濃縮的溫度為55～85℃，真空壓力0.020～0.080MPa。
本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備解熱、止咳、祛痰、平喘、抗炎的藥物中的用途。
進(jìn)一步地，所述的藥物是口含藥物，所述的藥物是口服藥物。
本發(fā)明藥物原料竹提取物與傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝相比，原料提取物采用低溫提取濃縮，可以避免有效成分的破壞，同時(shí)還能最大限度的將有效成分保留，不僅可以掩蓋藥物不適的味道，而且活性增強(qiáng)，生物利用度提高，其中，所含的門冬氨酸、胱氨酸、蛋氨酸以及氨基酸總量均高于傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝。通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)說(shuō)明，本發(fā)明藥物具有竹瀝解熱、止咳、祛痰、平喘、抗炎的功效，且解熱作用明顯高于傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝；將本發(fā)明藥物原料提取物制備成各種固液體制劑，包括普通口服制劑、口含制劑、分散片、緩釋制劑，吸收途徑多，生物利用度高，且質(zhì)量穩(wěn)定，可控性強(qiáng)，使用攜帶，利于服用和保管，為臨床提供了新的用藥選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 本發(fā)明藥物原料提取物浸膏的制備a、將粉綠竹鮮竹稈100g切斷成2～5cm，置1000ml燒杯中，加入6倍量的水，溫度控制在100℃，煮提1.5小時(shí)煎煮，煎煮液過(guò)濾，濾渣分別加入4倍量水，溫度100℃，煎煮1.0小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次濾液，加蒸餾水至1000ml定容(每1ml相當(dāng)于鮮淡竹0.1g)。
b、將a步驟的竹提取物(溫度80℃以下，比重＞1.01)進(jìn)行三效濃縮，得竹瀝濃縮液。工藝參數(shù)蒸汽壓≤0.10Mpa；溫度一效75--85℃；二效65--75℃；三效55--65℃；真空度一效0.020-0.040Mpa；二效0.040-0.060Mpa；三效0.060-0.080Mpa；收膏比重1.10-1.35(40--80℃)。
c、干燥方法沸騰干燥。
其中，b步驟將竹提取物加入減壓濃縮罐中，將溫度控制在60℃，真空壓力控制在0.08Pa，濃縮6小時(shí)即得竹提取物濃縮液。
表1 將實(shí)施例1制備的本發(fā)明原料竹提取物與傳統(tǒng)烤制竹瀝對(duì)比

所含有門冬氨酸、胱氨酸、蛋氨酸以及氨基酸總量均高于傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝。
實(shí)施例2 本發(fā)明藥物竹提取物浸膏的制備a、將淡竹鮮竹稈100g切斷成2～5cm，置1000ml燒杯中，加入6倍量的水，溫度控制在100℃，煮提1.5小時(shí)煎煮，煎煮液過(guò)濾，濾渣分別加入4倍量水，溫度100℃，煎煮1.0小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次濾液，加蒸餾水至1000ml定容(每1ml相當(dāng)于鮮淡竹0.1g)。
b、將竹提取物加入減壓濃縮罐中，將溫度控制在60℃，真空壓力控制在0.08Pa，濃縮6小時(shí)即得竹提取物濃縮液；c、干燥方法沸騰干燥。
通過(guò)上述對(duì)比實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，本發(fā)明藥物原料提取物與傳統(tǒng)烤制而得的鮮竹瀝是不等同的，本發(fā)明原料提取物明顯優(yōu)于傳統(tǒng)竹瀝，且提取工藝簡(jiǎn)單、成本低。
實(shí)施例3 本發(fā)明藥物片劑的制備取適量的淀粉和糊精混勻，噴入實(shí)施例1步驟b制備的清膏一步制粒，噴霧頻率4HZ，壓力0.12MPa，物料溫度40～50℃，進(jìn)風(fēng)溫度75～85℃，出風(fēng)溫度70～75℃。顆粒加0.5％的硬酯酸鎂混勻，壓成1000片，包薄膜衣、分裝、即得。
實(shí)施例4 本發(fā)明藥物顆粒劑(無(wú)糖)的制備取適量的淀粉和糊精混勻，噴入實(shí)施例1步驟b制備的清膏一步制粒、整粒，分裝，即得。
實(shí)施例5 本發(fā)明藥物分散片的制備原輔料的用量竹瀝浸膏150g、低取代羥丙基纖維素9g、微晶纖維素12g、乳糖9g、甘露醇9g、甜菊糖9g、硬脂酸鎂12g、淀粉90g、1％PVP水溶液適量，共制1000片，0.3g/片，每片含竹瀝浸膏150mg。
制備方法a、竹瀝浸膏、乳糖及甘露醇混合均勻，共同研磨過(guò)100目篩，再稱取低取代羥丙基纖維素、淀粉及微晶纖維素分別過(guò)100目，與竹瀝干浸膏混合物混合均勻，過(guò)80目篩，即得；b、將a步驟中粉末加1％PVP溶液制成軟材，過(guò)20目篩制粒，將濕粒置干燥箱中于50℃--60℃干燥至含水量小于9％。過(guò)20目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混勻；c、取顆粒適量進(jìn)行半成品檢查，半成品檢查合格后壓片，檢查片重差異，符合規(guī)定，制得本發(fā)明藥物分散片；d、分裝、包裝，檢驗(yàn)合格后得成品。
該制備工藝可靠、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，能符合生產(chǎn)條件。
以下是根據(jù)以上各種敷料的種類和特點(diǎn)，參考其他分散片的處方，綜合各個(gè)處方的優(yōu)點(diǎn)擬訂以下幾個(gè)處方進(jìn)行篩選。見(jiàn)表2表2 本發(fā)明藥物分散片處方篩選

分散片一般采用濕法制粒工藝，藥物溶出度與顆粒粒徑大小有關(guān)，粒徑微小，藥物溶出越快。分散片的濕粒要求在1mm(約18目)以下，干顆粒整粒要求在0.6mm(30目)以下。
按各處方分別將浸膏粉碎和輔料過(guò)100目篩，置容器中混合均勻，加1％PVP水溶液制成軟材，過(guò)20目篩制成濕粒，將濕粒置干燥箱中于50℃---60℃干燥至含水量小于9％，過(guò)20目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混合均勻，即得。
將以上顆?？疾祛w粒流動(dòng)性，考察片劑外觀、崩解時(shí)限、分散均勻性等指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表3。
表7 配方3藥物對(duì)角義菜膠引起大鼠足腫脹的影響 *p＜0.001

c，對(duì)甲醛性(慢性)關(guān)節(jié)炎的作用大鼠15只，隨機(jī)分3組，每組5只，于每天分別給NS、配方3藥物15mg/kg和ASP 100mg/kg灌胃，并測(cè)量左踝關(guān)節(jié)度1次，共7天。結(jié)果如表7，配方3藥物15mg/kg與ASP100mg/kg對(duì)甲醛性關(guān)節(jié)炎有相似的抗炎效果。
表8 配方3藥物對(duì)甲醛性(慢性)關(guān)節(jié)炎的作用

*p＜0.001d，對(duì)家兔的系膜微循環(huán)的影響采用顯微鏡電視法及半定量法觀察微薄循環(huán)血管管徑和血流速度，結(jié)果表明，配方3藥物可加強(qiáng)甲腎上腺素收縮血管作用，15分鐘后未見(jiàn)血流恢復(fù)，而對(duì)照組60％在4-8分鐘可恢復(fù)血流，此外配方3藥物使微血管血流停止時(shí)間平均在30秒左右，而對(duì)照組為35-225秒，配方3藥物觀察不到微循環(huán)變流時(shí)間，在非常短的時(shí)間可使微血管完全閉鎖，可見(jiàn)香薷精粉具有止血作用。
實(shí)施例7 本發(fā)明緩釋片劑的制備處方

共制1000片，0.3g/片，每片含竹瀝浸膏150mg制備工藝1、緩釋部分 取乙基纖維素和丙稀酸樹(shù)脂II號(hào)的細(xì)粉混合均勻，用60％的乙醇溶解后，噴入淀粉中，用沸騰床制備成細(xì)顆粒，然后將竹瀝浸膏藥液漿噴入，制粒，干燥，整粒，作為緩釋部分顆粒備用。
2、速釋部分將竹瀝浸膏藥液漿與淀粉經(jīng)沸騰床制備成細(xì)顆粒，干燥，整粒，作為速釋部分顆粒備用。
3、制粒本制劑擬采用沸騰床制備細(xì)顆粒，然后進(jìn)行壓片。
在用沸騰床制粒的過(guò)程中，竹瀝浸膏藥液漿的濃度，噴液速度，沸騰床溫度范圍是影響顆粒質(zhì)量的主要因素，因此我們對(duì)以上因素進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明乙基纖維素和丙稀酸樹(shù)脂II號(hào)用60％乙醇溶解后噴液速度為12～15，藥液漿濃度為50mg/ml，噴液速度為15～18，沸騰床溫度范圍為25～40℃時(shí)，制備的顆粒質(zhì)量最好。故在生產(chǎn)過(guò)程中選擇以上生產(chǎn)工藝。
實(shí)施例8 本發(fā)明藥物中氨基酸的質(zhì)量控制谷氨酸對(duì)照品中檢所 批號(hào)11576-200201，絲氨酸對(duì)照品中檢所 批號(hào)624-200104取本品0.5g，加水20ml，超聲處理10分鐘，濾過(guò)，濾液加于已處理好的732型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1cm，長(zhǎng)10cm)上，用水洗至洗脫液無(wú)糖反應(yīng)(取洗脫液1ml，加a-萘酚試液3滴，沿管壁加硫酸5滴，兩液界面處應(yīng)無(wú)紅色環(huán)產(chǎn)生)，再用2mol/L氨溶液40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)诱既芤?1→10)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取谷氨酸、絲氨酸對(duì)照品，加正丙醇溶液(1→10)制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述二種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一用0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液制備的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(8∶3∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茚三酮試液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的兩個(gè)紅色斑點(diǎn)。
研究表明，竹瀝中含有多種氨基酸，其中谷氨酸和絲氨酸含量較高，見(jiàn)表4。故參照竹瀝膠囊藥品標(biāo)準(zhǔn)的方法，采用薄層色譜法鑒別，選用含量較高的谷氨酸、絲氨酸對(duì)照品作為對(duì)照，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，選用的樣品處理方法，能去掉干擾成份，使薄層斑點(diǎn)分離好。
表4 竹瀝液氨基酸含量分析表

同時(shí)又按處方做了竹瀝的陰性樣品，結(jié)果陰性樣品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置處無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)，不產(chǎn)生干擾。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的谷氨酸對(duì)照品10mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取15ml置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含谷氨酸60μg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分別置10ml具塞試管中，加水使成1.0ml，加0.2mol/L枸椽酸鹽緩沖液(PH5.0)1.0ml，加1％抗壞血酸溶液0.1ml及2％茚三酮乙二醇甲醚溶液3.0ml，搖勻，用一大小合適的潔凈紗布覆蓋于具塞試管頂部，用線系緊(避免沖塞)，置水浴中加熱15分鐘取出，置冷水中冷至室溫，加60％乙醇3.0ml，搖勻，以第一份為空白，照分光光度法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VB)試驗(yàn)，在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品裝量差異下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水50ml，超聲處理10分鐘，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液3ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加枸椽酸鹽緩沖液(PH5.0)1.0ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中谷氨酸的重量(μg)，計(jì)算，即得。
本品每粒含總氨基酸以谷氨酸(C5H9NO4)計(jì)，不得少于3.0mg。
實(shí)施例9 本發(fā)明藥物提取物愈創(chuàng)木酚的質(zhì)量控制方法儀器和試劑 島津SPD-10A紫外檢測(cè)器；島津SPD-10A高效液相泵；Sartorious CP225-D型電子天平(十萬(wàn)分之一，德國(guó)Satoris公司)；KQ-100DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。甲醇、乙腈為色譜純，重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VID)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)迪瑪C18(15*4.5)柱；十八烷基鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm；乙腈-水(體積比20∶80)作為流動(dòng)相；理論塔板數(shù)愈創(chuàng)木酚峰計(jì)算應(yīng)不得低于3000。
對(duì)照品溶液的制備 取愈創(chuàng)木酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含約5ug的溶液。
供試品溶液的制備 取膠囊內(nèi)容物約10g置250ml燒杯中，加水約100攪拌，超聲處理15分鐘，抽濾，將濾紙和殘?jiān)?用少量的水洗入燒杯中)一并轉(zhuǎn)移到燒杯中，再向燒杯中加入約100ml水?dāng)嚢璩曁幚?5分鐘，反復(fù)處理4次。收集抽濾液置1000ml的燒瓶中按揮發(fā)油測(cè)定法(附錄XD，側(cè)管中加乙酸乙酯1.5ml)測(cè)定，提取5次，每次加乙酸乙酯1.5ml，每次提取1小時(shí)，待乙酸乙酯層澄清后，將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移至同一10ml量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，采用雙泵高壓梯度洗脫方法，于愈創(chuàng)木酚對(duì)照品出峰時(shí)間時(shí)，改用純乙腈洗脫10分鐘后，恢復(fù)流動(dòng)相，平衡基線，測(cè)定，即得。
每1g提取物中含愈創(chuàng)木酚2～10ug。
本發(fā)明藥物質(zhì)量控制同時(shí)采用氨基酸和愈創(chuàng)木酚為指標(biāo)性成分，其中氨基酸是本發(fā)明藥物原料提取物中含量較多的成分，但是氨基酸為常規(guī)指標(biāo)，僅以氨基酸為質(zhì)控指標(biāo)，針對(duì)性不強(qiáng)；愈創(chuàng)木酚雖然含量極少，但本身為有效成分，因此，將兩類成分同時(shí)測(cè)定，達(dá)到質(zhì)量控制的目的，可控性強(qiáng)。
以下通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
試驗(yàn)例1 本發(fā)明藥物解熱試驗(yàn)1、受試藥物本發(fā)明藥物 實(shí)施例1制備。
鮮竹瀝批號(hào)021201 由四川濟(jì)生制藥有限公司生產(chǎn)，臨床用量為30ml/次，Bid，則每日量為60ml/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為1.0ml/kg/日。
復(fù)方乙酰水楊酸片批號(hào)021103，每片含乙酰水楊酸0.22g，非那西丁0.15g，咖啡因0.035g，由成都制藥一廠生產(chǎn)，研磨成細(xì)粉，用蒸餾水配制成每1ml含乙酰水楊酸0.0075g的混懸液備用。
2、主要試劑細(xì)菌內(nèi)毒素 批號(hào)962，7200EU/安瓿，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。臨用時(shí)用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成120EU/ml溶液。
3、動(dòng)物家兔，體重2.45±0.5kg，健康，雌雄兼用，雌者無(wú)孕，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)控中心提供。
4、方法與結(jié)果取家兔，給藥前連續(xù)兩日做適應(yīng)性體溫測(cè)試，選取體溫在38.4-39.5℃范圍內(nèi)，且在兩天預(yù)測(cè)試中體溫波動(dòng)不超過(guò)0.4℃的家兔使用。給藥當(dāng)日。再測(cè)試正常體溫，選最末兩次體溫不超過(guò)0.2℃家兔隨機(jī)分成5組，每組6只家兔。灌胃給藥一組給復(fù)方乙酰水楊酸混懸液0.15g(乙酰水楊酸)/kg(相當(dāng)于臨床成人一次用量的20倍)；二組給鮮竹瀝20ml/kg(相當(dāng)于臨床成人一日用量的20倍)；三組給本發(fā)明藥物高濃度混懸液12.4g原生藥/kg(相當(dāng)于臨床成人一日用量的20倍)；四組給本發(fā)明藥物低濃度混懸液6.2g原生藥/kg，(相當(dāng)于臨床成人一日用量的10倍)；五組給蒸餾水作空白對(duì)照，各組給藥體積均為20ml/kg，給藥后，立即給每只家兔耳靜脈注射細(xì)菌內(nèi)毒素溶液，1ml/kg。測(cè)定注射后0.5、1、2、3、4、5、6、小時(shí)各家兔體溫，以各時(shí)間點(diǎn)的實(shí)測(cè)體溫減去給藥前測(cè)得的正常體溫得各時(shí)間點(diǎn)家兔的升溫值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，考察各給藥組家兔體溫升高與空白對(duì)照組相比，有無(wú)顯著性差異。
表5 本發(fā)明藥物對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱的影響

*p＜0.05**p＜0.01結(jié)果表明本發(fā)明藥物在抑制家兔體溫上升與空白對(duì)照組和鮮竹瀝陽(yáng)性對(duì)照組有顯著性差異。
試驗(yàn)例2 本發(fā)明藥物對(duì)小鼠的止咳試驗(yàn)1、受試藥物本發(fā)明藥物 實(shí)施例1制備(臨床人用量為以體重60kg計(jì)，則臨床人用量為0.62g原生藥/kg/日)鮮竹瀝批號(hào)021201 由四川濟(jì)生制藥有限公司生產(chǎn)，臨床用量為30ml/次，Bjd，則每日量為60ml/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為1.0ml/kg/日。
克咳批號(hào)020914，0.3g/粒，由貴州妙靈制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，用蒸餾水配制成0.0015g/ml濃度的混懸液備用。臨床人用量為0.9g/次，Bid，則每日量為1.8g/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為0.03g/kg/日。
2、主要試劑氨水 批號(hào)990505-1，重慶東方試劑廠生產(chǎn)。
3、動(dòng)物昆明種小白鼠，體重19-22g，健康，雌雄各半，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)控中心提供。
4、方法取小白鼠60只，隨機(jī)分成6組，一二組作為陽(yáng)性藥對(duì)照組，分別灌胃給藥給予克咳0.3g/kg(相當(dāng)于臨床人用量的10倍)，鮮竹瀝10ml/kg(相當(dāng)于臨床人用量的10倍)；三、四、五組分別作為本發(fā)明藥物高、中、低劑量組，分別灌胃給予本發(fā)明藥物9.3g\4.65g\2.32g原生藥/kg；六組作為空白對(duì)照，灌胃給予相同體積的鹽水；各組每日灌胃0.4ml/只，連續(xù)2天，于末次給藥1小時(shí)后，將小鼠放入容器內(nèi)，在一定時(shí)間噴入定量的濃氨水氣霧，觀察小鼠的咳嗽反應(yīng)，記錄咳嗽潛伏期及1分鐘內(nèi)咳嗽的次數(shù)。
5、結(jié)果表6 本發(fā)明藥物對(duì)小鼠的止咳作用

表中*p＜0.01 -p＞0.05 +p＜0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)顯著性t檢驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物高、中、低劑量均能非常顯著延長(zhǎng)小鼠咳嗽潛伏時(shí)間及減少咳嗽次數(shù)；效果與克咳、鮮竹瀝相同。
試驗(yàn)例3 祛痰實(shí)驗(yàn)1、受試藥物本發(fā)明藥物 由實(shí)施例1制備(臨床人用量為以體重60kg計(jì)，則臨床人用量為0.62g原生藥/kg/日)鮮竹瀝批號(hào)021201 由四川濟(jì)生制藥有限公司生產(chǎn)，臨床用量為30ml/次，Bid，則每日量為60ml/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為1.0ml/kg/日。
氯化銨批號(hào)020931，成都臨江化工廠生產(chǎn)，臨床人用量為0.6g/次，Bid，則每日量為1.8g/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為0.03g/kg/日。
2、主要試劑酚紅 批號(hào)020716，軍事醫(yī)科院生產(chǎn)，用生理鹽水配成5％的酚紅溶液。
3、動(dòng)物昆明種小白鼠，體重19-22g，健康，雌雄各半，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)控中心提供。
4、方法取小白鼠60只，隨機(jī)分成6組，一二組作為陽(yáng)性藥對(duì)照組，分別灌胃給藥給予氯化銨0.3g/kg(相當(dāng)于臨床人用量的10倍)，鮮竹瀝10ml/kg(相當(dāng)于臨床人用量的10倍)；三、四、五組分別作為本發(fā)明藥物高、中、低劑量組，分別灌胃給予本發(fā)明藥物9.3g\4.65g\2.32g原生藥/kg；六組作為空白對(duì)照，灌胃給予相同體積的鹽水；各組每日灌胃0.4ml/只。連續(xù)3天，于末次給藥30分鐘后，腹腔注射0.2ml/20g酚紅溶液，注射酚紅后30分鐘，處死動(dòng)物，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2ml生理鹽水的試管中，再加入0.1ml的1mol/L氫氧化鈉，用島津UV-2102 PCS型紫外分光光度計(jì)，在波長(zhǎng)546nm處測(cè)定吸收度。
5、結(jié)果表7 本發(fā)明藥物對(duì)小鼠的祛痰作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)顯著性t檢驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物高、中、低劑量均能非常顯著增加小鼠氣管粘膜酚紅的分泌量，即具有一定的祛痰作用。效果與氯化銨、鮮竹瀝相同。
試驗(yàn)例4 平喘試驗(yàn)1、受試藥物本發(fā)明藥物由實(shí)施例1制備(臨床人用量為以體重60kg計(jì)，則臨床人用量方0.62g原生藥/kg/日)鮮竹瀝批號(hào)021201 由四川濟(jì)生制藥有限公司生產(chǎn)，臨床用量為30ml/次，Bid，則每日量為60ml/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為1.0ml/kg/日。
克咳批號(hào)020914，0.3g/粒，由貴州妙靈制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，用蒸餾水配制成0.012g/ml濃度的混懸液備用。臨床人用量為0.9g/次，Bid，則每日量為1.8g/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為0.03g/kg/日。
2、主要試劑磷酸組織銨 批號(hào)0210291中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所生產(chǎn)，用蒸餾水配制成2mg/ml供試用。
3、動(dòng)物豚鼠，體重150--200g，健康，雌雄均有，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)控中心提供。
4、方法取豚鼠60只，隨機(jī)分成6組，一二組作為陽(yáng)性藥對(duì)照組，分別灌胃給予克咳0.3g/kg(相當(dāng)于臨床人用量的10倍)，鮮竹瀝6ml/kg(相當(dāng)于臨床人用量的6倍)；三、四、五組分別作為本發(fā)明藥物高、中、低劑量組，分別灌胃給予本發(fā)明藥物5.6g、2.8g、1.4g原生藥/kg；六組作為空白對(duì)照，灌胃給予相同體積的鹽水；各組每日灌胃1.5ml/100g。連續(xù)4天，于末次給藥1小時(shí)后，將豚鼠放入容器內(nèi)，在一定時(shí)間噴入定量的磷酸組胺氣霧，觀察豚鼠的哮喘反應(yīng)，記錄噴霧開(kāi)始至癥狀出現(xiàn)時(shí)間作為潛伏時(shí)間，“哮喘”反應(yīng)按程序分為四級(jí)I級(jí)呼吸加速，II級(jí)呼吸困難，III級(jí)抽搐，IV級(jí)跌倒。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用等級(jí)序值法(改良Kiss級(jí)法)進(jìn)行處理，5、結(jié)果表8 本發(fā)明藥物對(duì)豚鼠的平喘作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物高劑量組能顯著抵制磷酸組所致的豚鼠哮喘，效果與克咳、鮮竹瀝相同。
試驗(yàn)例5 抗炎試驗(yàn)1、受試藥物本發(fā)明藥物 由實(shí)施例1制備，用時(shí)用蒸餾水配制成高、中、低三濃度混懸液供試驗(yàn)。(臨床人用量為以體重60kg計(jì)，則臨床人用量為0.62g原生藥/kg/日)。
鮮竹瀝批號(hào)021201 由四川濟(jì)生制藥有限公司生產(chǎn)，臨床用量為30ml/次，Bid，則每日量為60ml/人；若人的體重以60kg計(jì)，則臨床人用量為1.0ml/kg/日。
表1復(fù)方注射液對(duì)ST段變化絕對(duì)值和心肌缺血范圍的影響

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
與血栓通模型組比較，△p＜0.05。
由上表可知，結(jié)扎2h后復(fù)方注射液對(duì)心電圖ST段抬高有顯著改善，6h時(shí)復(fù)方注射液、血栓通組也顯著改善其變化，而且復(fù)方組在各項(xiàng)指標(biāo)的改善上優(yōu)于血栓通治療組(P＜0.05)。而且復(fù)方注射液在減輕心肌缺血范圍方面也優(yōu)于血栓通組(P＜0.05)。
表2復(fù)方注射液對(duì)心肌缺血大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化的影響

注與模型組比較，**p＜0.01，與血栓通組比較，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由上表可見(jiàn)，復(fù)方注射液能明顯提高大鼠心肌組織SOD活性，降低心肌MDA的水平，提示復(fù)方注射劑具有一定程度的抗心肌缺血大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化作用，而且其作用優(yōu)于血栓通注射液組。
綜上所述，復(fù)方注射液對(duì)對(duì)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈導(dǎo)致的大鼠急性心肌缺血有著保護(hù)鼠毛細(xì)血管的通透性，具有抗炎作用。
綜上結(jié)果表明竹瀝浸膏具有解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎等作用，且在解熱功效比顯優(yōu)于傳統(tǒng)的烘烤竹瀝。
試驗(yàn)例6 本發(fā)明藥物分散片藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)1、材料與試藥1.1儀器UV-2102 PCS型紫外分光光度計(jì)1.2試藥本發(fā)明藥物分散片(實(shí)施例4制備，批號(hào)0030101，0.3g/片)1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜種犬，8只，體重12～20kg，雌雄不限，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心提供，。
1.4樣品的采集與處理分別于0時(shí)間和給藥后0.17、0.25、0.33、0.42、0.50、0.67、1.00、1.50、2.00、3.50、5.50、7.00h抽取靜脈血3.5ml，采集的血樣經(jīng)肝素抗凝，離心，置冰箱存放備測(cè)。
1.5血藥濃度的測(cè)定血樣的預(yù)處理 精密吸取血漿0.5ml于10ml尖底試管中，精密加入內(nèi)標(biāo)液(谷氨酸對(duì)照液202ng/ml)100ul，2.0mol/L的氫氧化鈉100ul。混勻后用含3.5％異戊醇的正己烷3.5ml旋渦混合萃取6min，離心5min，取上層液于尖底試管中，置50℃水浴上空氣吹干，殘?jiān)苡?00ul流動(dòng)相。混勻，80ul進(jìn)樣。
2、方法與結(jié)果2.1檢測(cè)方法谷氨酸 對(duì)照品溶液的制備 精密量取經(jīng)105℃干燥至恒重的谷氨酸對(duì)照品0.2g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取20ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含谷氨酸40μg。
供試品的制備 精密量取本品適量，加水制成每1ml中含40μg的溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置10ml具塞試管中，加水至1.0ml，加0.2mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH5.0)1.0ml，加1％抗壞血酸溶液0.1ml及2％印三酮乙二醇甲醚溶液3.0ml，搖勻，用一大小合適的潔凈紗布覆蓋于具塞試管頂部，用線系緊(避免沖塞)，置水浴中加熱15分鐘取出，置冷水中冷至室溫，加60％乙醇3.0ml，搖勻，以第一份為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VB)試驗(yàn)，在570nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品裝量差異下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水50ml，超聲處理10分鐘，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液3ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加枸椽酸鹽緩沖液(pH5.0)1.0ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中谷氨酸的重量(μg)，計(jì)算，即得。
本品每粒含氨基酸以谷氨酸(C5H9NO4)計(jì)，不得少于3.0mg。
2.2輔料的干擾測(cè)定精密稱取相當(dāng)于片劑處方中本發(fā)明藥物分散片10mg的輔料，用適量的水?dāng)嚢枞芙獠⒍ㄈ葜?0ml，取續(xù)濾液在上述條件下直接進(jìn)樣，并與本發(fā)明藥物分散片標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖相對(duì)照，可見(jiàn)輔料在該HPLC條件下對(duì)本發(fā)明藥物分散片的含量沒(méi)有干擾。
2.3專屬性 空白及血漿樣品色譜可見(jiàn)，血漿樣品中待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間分別為4.56min和7.81min。峰形良好，分離完全，且無(wú)雜質(zhì)峰干擾。
2.4回收率取空白血漿0.5mL置不同試管內(nèi)，分別加入不同量的本發(fā)明藥物分散片標(biāo)準(zhǔn)溶液，并以相同濃度的本發(fā)明藥物分散片標(biāo)準(zhǔn)溶液作對(duì)照，按血漿樣方法處理并測(cè)定，計(jì)算回收率，見(jiàn)表10。
表10 回收率試驗(yàn)

2.4精密度取不同濃度的本發(fā)明藥物分散片血漿樣品，按上述方法處理后，于同日不同時(shí)間，分別重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差；于不同日期，對(duì)相同濃度血漿樣品用同法處理并測(cè)定，重復(fù)5日，計(jì)算日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表11。
表11 精密度試驗(yàn)

2.5加樣回收率取已知濃度的犬血漿0.5mL，分別加入濃度為20ug/mL的適量本發(fā)明藥物分散片標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別相當(dāng)于6，12，20ug的本發(fā)明藥物分散片，按上述血樣預(yù)處理方法處理，并用HPLC法測(cè)定，加樣回收率見(jiàn)表12。
表12 加樣回收率試驗(yàn)

2.6本發(fā)明藥物分散片及普通片動(dòng)物(犬)體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)2.6.1受試動(dòng)物選擇消化系統(tǒng)與人較接近的犬作為受試對(duì)象。
2.6.2給藥方法采用自身交叉單劑量口服給藥，直接將藥片送入犬喉部，同時(shí)給水50mL；給藥量3.75克/只，分別于給藥前及給藥后定時(shí)從后肢靜脈采血約2.5mL，立即分離血漿備用；給藥前禁食12h，并禁食至采樣結(jié)束；給藥間隔1周；血漿樣品用同法處理并測(cè)定。
采用3P87程序計(jì)算的兩種制劑的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)及統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表13。
表13 兩種制劑的主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果

從藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可以看出，分散片比普通片有顯著差異。
表14 本發(fā)明藥物分散片與普通片相對(duì)生物利用度比較

生物利用度也符合要求(80％---120％)。
結(jié)論與討論藥動(dòng)學(xué)參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明兩種制劑的達(dá)峰時(shí)間存在非常顯著性差異，本發(fā)明藥物分散片達(dá)峰時(shí)間顯著提高，預(yù)示本發(fā)明藥物分散片能夠很快地發(fā)揮藥效；兩種制劑的峰值血藥濃度的差異沒(méi)有顯著性，但二者的藥時(shí)曲線下面積(AUC)存在顯著性差異，說(shuō)明本發(fā)明藥物分散片較普通片能夠更長(zhǎng)時(shí)間地維持較高的血液濃度，這對(duì)藥效的發(fā)揮和藥效的維持很重要；以普通片的AUC為參比，本發(fā)明藥物分散片的相對(duì)生物利用度為143％，說(shuō)明本發(fā)明藥物分散片較普通片吸收完全。
試驗(yàn)例7 本發(fā)明藥物緩釋制劑藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)1、材料與試藥1.1儀器UV-2102 PCS型紫外分光光度計(jì)1.2試藥本發(fā)明藥物緩釋片(由實(shí)施例6制備，0.4g/片)1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜種犬，6只，體重8～12kg，雌雄不限，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心提供。
2、方法與結(jié)果2.1檢測(cè)方法谷氨酸 對(duì)照品溶液的制備 精密量取經(jīng)105℃干燥至恒重的谷氨酸對(duì)照品0.2g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取20ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含谷氨酸40μg。
供試品的制備 精密量取本品適量，加水制成每1ml中含40μg的溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置10ml具塞試管中，加水至1.0ml，加0.2mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH5.0)1.0ml，加1％抗壞血酸溶液0.1ml及2％印三酮乙二醇甲醚溶液3.0ml，搖勻，用一大小合適的潔凈紗布覆蓋于具塞試管頂部，用線系緊(避免沖塞)，置水浴中加熱15分鐘取出，置冷水中冷至室溫，加60％乙醇3.0ml，搖勻，以第一份為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VB)試驗(yàn)，在570nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品裝量差異下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水50ml，超聲處理10分鐘，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液3ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置10ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加枸椽酸鹽緩沖液(pH5.0)1.0ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中谷氨酸的重量(μg)，計(jì)算，即得。
本品每粒含氨基酸以谷氨酸(C5H9NO4)計(jì)，不得少于3.0mg。
2.2輔料的干擾測(cè)定精密稱取相當(dāng)于片劑處方中本發(fā)明藥物緩釋片10mg的輔料，用適量的水?dāng)嚢枞芙獠⒍ㄈ葜?0ml，取續(xù)濾液在上述條件下直接進(jìn)樣，并與本發(fā)明藥物緩釋片標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖相對(duì)照，可見(jiàn)輔料在該HPLC條件下對(duì)本發(fā)明藥物緩釋片的含量沒(méi)有干擾。
2.3提取回收率取空白血漿0.5mL置不同試管內(nèi)，分別加入不同量的本發(fā)明藥物緩釋片標(biāo)準(zhǔn)溶液，并以相同濃度的本發(fā)明藥物緩釋片標(biāo)準(zhǔn)溶液作對(duì)照，按血漿樣方法處理并測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表15。
表15 提取回收率

2.4精密度取不同濃度的本發(fā)明藥物緩釋片血漿樣品，按上述方法處理后，于同日不同時(shí)間，分別重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差；于不同日期，對(duì)相同濃度血漿樣品用同法處理并測(cè)定，重復(fù)5日，計(jì)算日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表16。
表16 精密度

2.5加樣回收率取已知濃度的犬血漿0.5mL，分別加入濃度為20ug/mL的適量本發(fā)明藥物緩釋片標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別相當(dāng)于6，12，20ug的本發(fā)明藥物緩釋片，按上述血樣預(yù)處理方法處理，并用HPLC法測(cè)定，加樣回收率見(jiàn)表17。
表17 加樣回收率試驗(yàn)

2.6本發(fā)明藥物緩釋片及普通片動(dòng)物(犬)體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)2.6.1受試動(dòng)物選擇消化系統(tǒng)與人較接近的犬作為受試對(duì)象。
2.6.2給藥方法采用自身交叉單劑量口服給藥，直接將藥片送入犬喉部，同時(shí)給水50mL；給藥量3.75克/只，分別于給藥前及給藥后定時(shí)從后肢靜脈采血約2.5mL，立即分離血漿備用；給藥前禁食12h，并禁食至采樣結(jié)束；給藥間隔1周；血漿樣品用同法處理并測(cè)定。
采用3P87程序計(jì)算的兩種制劑的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)及統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表18。
表18 兩種制劑的主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3、結(jié)論與討論藥動(dòng)學(xué)參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明兩種制劑的達(dá)峰時(shí)間存在非常顯著性差異，緩釋片達(dá)峰時(shí)間顯著提高，預(yù)示緩釋片能夠很快地發(fā)揮藥效；兩種制劑的峰值血藥濃度的差異沒(méi)有顯著性，但二者的藥時(shí)曲線下面積(AUC)存在顯著性差異，說(shuō)明緩釋片較普通片能夠更長(zhǎng)時(shí)間地維持較高的血液濃度，這對(duì)藥效的發(fā)揮和藥效的維持很重要；以普通片的AUC為參比，緩釋片的相對(duì)生物利用度為152％，說(shuō)明緩釋片較普通片吸收完全。
以下通過(guò)臨床試驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。
根據(jù)370例臨床驗(yàn)證結(jié)果如下治療結(jié)果一、痰熱證[痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)]
1、治療組竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)的總顯效率為55％，有效率為31％，總有效率為86％。對(duì)痰熱咳嗽的主證咳嗽、咯痰、氣緊胸悶的改善與治療前比較，有顯著性差異，P＜0.05。
對(duì)照組1鮮竹瀝水治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)的總顯效率為51.67％，有效率為35％，總有效率為86.67％。對(duì)痰熱咳嗽的主證咳嗽、咯痰、氣緊胸悶的改善與治療前比較，有顯著性差異，P＜0.05。
對(duì)照組11 先鋒1V膠囊治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)的總顯效率為23.33％，有效率為51.67％，總有效率為75％。對(duì)痰熱咳嗽的主證咳嗽、咯痰、氣緊胸悶的改善與治療前比較，有顯著性差異，P＜0.05。
說(shuō)明痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)各組治療后與治療前的主證咳嗽、咯痰、氣緊胸悶比較均有顯著性差異，P＜0.05。
總療效比較RiditX＝12.9997 P＜0.01，有顯著性差異。
2、治療組竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)與對(duì)照組1鮮竹瀝水治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)后的主證咳嗽、咯痰、氣緊胸悶的比較，差異無(wú)顯著，P＞0.05。
治療組竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)與對(duì)照組11先鋒1V膠囊治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)后的主證咳嗽、咯痰的比較，有顯著性差異，P＜0.05；氣緊胸悶的比較差異無(wú)顯著，P＞0.05。
對(duì)照組1鮮竹瀝水與對(duì)照組11先鋒1V膠囊治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)后的主證咳嗽、咯痰的比較，有顯著性差異，P＜0.05；氣緊胸悶的比較差異無(wú)顯著，P＞0.05。
說(shuō)明竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)與鮮竹瀝水治療痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)對(duì)主證咳嗽、咯痰、氣緊胸悶的改善，療效無(wú)顯著性差異，具有同樣的清熱化痰的功效。
3、三組治痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)對(duì)肺部體征治療后與治療前比較，均無(wú)顯著性差異，P＞0.05。
三組治痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)與年齡及療效比較，RiditX依次為30.44、13.06、25.66，P均＜0.05，有顯著性差異，說(shuō)明年青者療效相對(duì)好。
三組治痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)的病程與療法效比較，RiditX依次為81.20、29.34、26.17，P均＜0.05，有顯著性差異，說(shuō)明發(fā)病時(shí)間短，療效相對(duì)好。
4、220例病人均作了治療前后的血、尿、大便常規(guī)檢查，其中有140例病人作了肝功ALT、A/G、腎功BUN、Cr無(wú)一例異常。
5、未發(fā)現(xiàn)藥物不良反應(yīng)。
二、痰熱證[中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)痰熱腑實(shí)、風(fēng)痰上擾證(腦梗塞急性期)]1、鮮竹瀝水主要功效清熱化痰。竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)系鮮竹瀝水的劑型改制。對(duì)痰熱腑實(shí)、風(fēng)痰上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的病人只作痰涎壅盛、舌強(qiáng)兩個(gè)癥狀的觀察。
2、治療組竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)治療痰熱腑實(shí)、風(fēng)痰上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的病人只作痰涎壅盛、舌強(qiáng)后與治療前比較，顯效率為46.67％、有效率為48.33％，總有效率為85％。痰涎壅盛，t＝2.63、P＜0.05、有顯著性差異；舌強(qiáng)，t＝0.89、P＞0.05、差異無(wú)顯著性。
對(duì)照組1鮮竹瀝水治療痰熱腑實(shí)、風(fēng)痰上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的病人痰涎壅盛、舌強(qiáng)后與治療前比較，顯效率為43.33％、有效率為50％，總有效率為93.33％。痰涎壅盛，t＝2.25、P＜0.05、有顯著性差異；舌強(qiáng)，t＝0.63、P＞0.05、差異無(wú)顯著性。
對(duì)照組11常規(guī)治療痰熱腑實(shí)、風(fēng)痰上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的病人痰涎壅盛、舌強(qiáng)后與治療前比較，顯效率為26.67％、有效率為36.67％，總有效率為63.34％。痰涎壅盛，t＝1.49、P＜0.05、有顯著性差異；舌強(qiáng)，t＝1.13、P＞0.05、差異無(wú)顯著性。
說(shuō)明各組治療痰熱腑實(shí)、風(fēng)熱上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的患者痰涎壅盛均有效，舌強(qiáng)改善不明顯。
總療效比較，RiditX＝6.455 P＜0.05，有顯著性差異。
3、治療組竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)與對(duì)照組1鮮竹瀝水痰熱腑實(shí)、風(fēng)熱上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的患者痰涎壅盛的比較，差異無(wú)顯著性，P＞0.05。
治療組竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)與對(duì)照組11鮮竹瀝水痰熱腑實(shí)、風(fēng)熱上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的患者痰涎壅盛的比較，有顯著性差異，P＜0.05。對(duì)照組1鮮竹瀝水與對(duì)照組11常規(guī)治療痰熱腑實(shí)、風(fēng)熱上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的患者痰涎壅盛的比較，有顯著性差異，P＜0.05。
說(shuō)明竹瀝膠囊(竹瀝顆粒、竹瀝片、本發(fā)明藥物分散片、竹瀝口含片、本發(fā)明藥物緩釋片)與鮮竹瀝水治療痰熱腑實(shí)、風(fēng)熱上擾證(腦梗塞急性期)的中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)的患者痰涎壅盛的比較，療效無(wú)顯著性差異，P＞0.05，兩組具有同樣的清熱化痰的功效。
通過(guò)對(duì)370例痰熱證[痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)][中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)痰熱腑實(shí)、風(fēng)熱上擾(腦梗塞急性期)]比較本發(fā)明藥物治療法痰熱證[痰熱咳嗽(慢性支氣管炎急性發(fā)作)]，其總療效與對(duì)照組比較(X＝12.99997 P＜0.01)有顯著性差異。治療痰熱證[中風(fēng)—中經(jīng)絡(luò)痰熱腑實(shí)、風(fēng)痰上擾證(腦梗塞急性期)]的痰涎壅盛、舌強(qiáng)癥狀其總療效與對(duì)照組比較(X＝6.455 P＜0.05)有顯著性差異。與鮮竹瀝水治療痰熱咳嗽同樣具有清熱化痰功效。
通過(guò)上述的藥效學(xué)試驗(yàn)，采用傳統(tǒng)烤制鮮竹瀝對(duì)比，原料提取物采用低溫提取濃縮，能最大限度的將有效成分保留，且活性增強(qiáng)，生物利用度提高，具有解熱、止咳、祛痰、平喘、抗炎的功效，且解熱作用明顯高于傳統(tǒng)傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝；將本發(fā)明藥物原料提取物制備成各種固液體制劑，包括普通口服制劑、口含制劑、分散片、緩釋制劑，吸收途徑多，生物利用度高，且質(zhì)量穩(wěn)定，可控性強(qiáng)，使用攜帶，利于服用和保管，為臨床提供了新的用藥選擇。
權(quán)利要求
1.一種清熱化痰的藥物組合物，其特征在于它是由禾本科植物淡竹Phyllostachys nigra(Lodd.)Munro var.henonis(Miff.)Stapfex Rendle或粉綠竹Phyllostachys glanca McClure或凈竹Phyllostanchys nuda McClure的鮮稈的水提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清熱化痰的藥物組合物，其特征在于它是由禾本科植物淡竹Phyllostachys nigra(Lodd.)Munro var.henonis(Miff.)Stapfex Rendle或粉綠竹Phyllostachys glanca McClure或凈竹Phyllostanchys nuda McClure的鮮稈，經(jīng)過(guò)水煎煮，過(guò)濾，低溫濃縮，得竹提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的清熱化痰的藥物組合物，其特征在于所述的水提取物中每100g含氨基酸總量224.41mg～318.02mg；每1g提取物中含愈創(chuàng)木酚2～10ug。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的清熱化痰的藥物組合物，其特征在于所述的水提取物中氨基酸含量為每100g含天門冬氨酸80.23mg～110.56mg、胱氨酸3.54mg～4.98mg、蛋氨酸1.81mg～4.36mg、谷氨酸53.28mg～85.47mg、絲氨酸8.94mg～11.59mg、纈氨酸5.60mg～7.09mg、異亮氨酸2.94mg～3.66mg、酪氨酸6.95mg～8.83mg、苯丙氨酸3.94mg～5.50mg、賴氨酸4.83mg～6.59mg、脯氨酸4.13mg～6.15mg、蘇氨酸7.01mg～7.98mg、甘氨酸10.00mg～12.98mg、丙氨酸20.16mg～25.90mg、亮氨酸4.85mg～7.16mg、組氨酸4.15mg～7.11mg、精氨酸3.05mg～4.11mg、氨基酸總量224.41mg～318.02mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的清熱化痰的藥物組合物，其特征在于所述的固體制劑為普通片劑、分散片、膠囊劑、顆粒劑、口含片、緩釋制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的清熱化痰的藥物組合物，其特征在于所述的緩釋制劑包括緩釋部分和速釋部分，其中緩釋部分是由下述重量配比的原料制備而成竹提取物80～120份、乙基纖維素10～15份、淀粉40～60份、丙稀酸樹(shù)脂II號(hào)10～15份。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的清熱化痰的藥物組合物，其特征在于所述的分散片是含有下述重量配比的原料制備而成竹提取物120～180份、低取代羥丙基纖維素6～12份、微晶纖維素8～15份。
8.一種制備權(quán)利要求1所述的清熱化痰的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取禾本科植物淡竹Phyllostachys nigra(Lodd.)Munro var.henonis(Miff.)Stapfex Rendle或粉綠竹Phyllostachys glanca McClure或凈竹Phyllostanchysnuda McClure的鮮稈，加入4～8倍量的水煎煮，過(guò)濾，低溫濃縮，得竹提取物；b、將a步驟制備的竹提取物加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的固體制劑或液體制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的清熱化痰的藥物組合物的制備方法，其特征在于步驟a所述的低溫濃縮的溫度為55～85℃，真空壓力0.020～0.080MPa。
10.權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備解熱、止咳、祛痰、平喘、抗炎的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種清熱化痰的藥物組合物，它是禾本科植物淡竹P.glauca McClure或粉綠竹Phyllostachys glanca McClure或凈竹Phyllostanchys nuda McClure的鮮稈的水提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。本發(fā)明藥物原料竹提取物與傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝相比，所含的門冬氨酸、胱氨酸、蛋氨酸以及氨基酸總量均高于傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝。通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)說(shuō)明，解熱作用明顯高于傳統(tǒng)烤制的鮮竹瀝，本發(fā)明藥物各種固液體制劑，吸收途徑多，生物利用度高，且質(zhì)量穩(wěn)定，可控性強(qiáng)，使用攜帶方便，利于服用和保管，為臨床提供了新的用藥選擇。
文檔編號(hào)A61K9/52GK1679760SQ20051002022
公開(kāi)日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2005年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月21日
發(fā)明者劉波, 魏嵐, 向光才, 代德芬, 鮑文娟, 葉犁 申請(qǐng)人:四川奧邦藥業(yè)有限公司