專利名稱：一種抗癌藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗癌藥物組合物，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
實體腫瘤的治療主要包括手術(shù)、放療及化療等方法。在所用的各種化療藥物中，亞硝脲類抗癌藥物的作用效果較為明顯，已廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤。然而，進一步研究發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤細胞內(nèi)的DNA修復(fù)功能在治療之后明顯增加。后者常導(dǎo)致腫瘤細胞對亞硝脲類抗癌藥物的耐受性的增強，其結(jié)果是治療失敗。
最近發(fā)現(xiàn)，滅活或抑制細胞內(nèi)的DNA修復(fù)蛋白能夠增強部分腫瘤細胞對化療的敏感性，參見多蘭等“06-芐基鳥嘌呤類似物對人腫瘤細胞對烷化劑的細胞毒敏感性的作用”《癌癥研究》51期3367-3372頁(1991年)(Dolan et al.，Cancer Res.，51，3367-3372，1991))。然而，腫瘤間質(zhì)中的血管、結(jié)締組織、基質(zhì)蛋白、纖微蛋白及膠原蛋白等不僅為腫瘤細胞的生長提供了支架及必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)，還影響了化療藥物在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴散，參見尼提等“細胞外間質(zhì)的狀況對實體腫瘤內(nèi)藥物運轉(zhuǎn)的影響”《癌癥研究》60期2497-503頁(2000年)(Netti PA，Cancer Res.2000，60(9)2497-503)。由于實體腫瘤過度膨脹性增生，其間質(zhì)壓力、組織彈性壓力、流體壓力及間質(zhì)的粘稠度均較其周圍正常組織為高，因此，常規(guī)化療，難于腫瘤局部形成有效藥物濃度，參見孔慶忠等“瘤內(nèi)放置順鉑加系統(tǒng)卡莫司汀治療大鼠腦腫瘤”《外科腫瘤雜志》69期76-82頁(1998年)(Kong Q et al.，J Surg Oncol.1998 Oct；69(2)76-82)，單純提高給藥劑量又受到全身反應(yīng)的限制。
因此，本發(fā)明的一個具體的主題是抗癌藥物組合物，所述抗癌藥物組合物含四嗪類藥物，后者可有效地抑制及破壞腫瘤細胞內(nèi)的DNA修復(fù)功能，進而增加亞硝脲類抗癌藥物的治療效果。由于決定治療效果的主要因素是腫瘤局部的藥物濃度以及腫瘤細胞對藥物的敏感程度。而腫瘤間質(zhì)中的血管、結(jié)締組織、基質(zhì)蛋白、纖微蛋白及膠原蛋白等不僅為腫瘤細胞的生長提供了支架及必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)，還影響了化療藥物在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴散。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種抗癌藥物組合物。
本發(fā)明抗癌藥物組合物，包括抗癌有效成分和藥用輔料，抗癌有效成分為A)四嗪類藥物 0.01-50％和B)亞硝脲類抗癌藥物0.00-40％以上均為重量百分比。
四嗪類藥物除能抑制腫瘤生長外，還能增加腫瘤細胞對亞硝脲類抗癌藥物的敏感性。
四嗪類藥物包括咪唑并四嗪(imidazotetrazine)、咪唑并哌嗪(imidazopyrazine)、1H-咪唑并[b]哌嗪(1H-imidazo[b]pyrazine)、咪唑并吡啶(imidazopyridine)、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶(1H-imidazo[1，2-a]pyridinum)、甲基芐肼(procarbazine，PCB)、拓撲替康(topotecan，Topo)、伊力替康(irinotecan)、米托唑胺(mitozolomide，MTZ)、氮烯唑胺(dacarbazine，DCB)、替莫唑胺(Temozolomideor 8-Carbamoyl-3-methylimidazo[5，1-d]-1，2，3，5-tetrazin-4(3H)-one or NSC362856))及其類似物或衍生物如4-羧基替莫唑胺[4--carbonyl]temozolomide、3-N-甲基替莫唑胺[3-N-methyl]temozolomide)、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺(Pyrrolo[2，1-d][1，2，3，5]tetrazine-4(3H)-ones)、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o(Pyrrolo[2，1-d][1，2，3，5]tetrazinones 10a-o)、替莫唑胺的去雜氮衍生物如5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺(MTIC，5-(3-N-methyltriazen-1-yl)-imidazole-4-carboxamide)、8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺(8-nitro-3-methyl-benzo-1，2，3，5-tetrazepin-4(3H)-one，NIME)、3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺(3，5-dimethyl-pyrido-1，2，3，5-tetrazepin-4-one，PYRZ)和3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺(3-(2-chloroethyl)-N，N-dimethyl-4-oxo-3，4-dihydroimidazo[5，1-d]-1，2，3，5-tetrazine-8-carboxamide，CDODTC)。
上述四嗪類藥物可單選或多選，但以咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺為優(yōu)選。
亞硝脲類藥物選自，但不限于，阿雌莫司汀(Alestramustine)、阿莫司汀(Atrimustine)、氨莫司汀(Ambamustine)、尼莫司汀(ACNU，Nimustine)、苯達莫司汀(Bendamustine)、二硫莫司汀(Ditiomustine)、波呋莫司汀(Bofumustine)、卡莫司汀(卡氮芥、BCNU、carmustine)、依莫司汀(Elmustine)、依考莫司汀(Ecomustine)、加莫司汀(Galamustine，GCNU)、福莫司汀(Fotemustine)、雌莫司汀(Estramustine)、合莫司汀(hemustine，heCNU)、奈莫司汀(Pentamustine，Neptamustine)、甘露莫司汀(Mannomustine，MCNU)、洛莫司汀(lomustine，CCNU，環(huán)己亞硝脲，羅氮芥)、甲基洛莫司汀(methyl-CCNU)、司莫司汀(Semustine、甲環(huán)亞硝脲、Me-CCNU)、雷莫司汀(Ranimustine)、潑尼莫司汀(Prednimustine)、烏拉莫司汀(Uramustine，UracilMustard)、薩莫司汀(Sarmustine)、牛磺莫司汀(Tauromustine)、他莫司汀(Tallimustine)、螺莫司汀(Spiromustine)和鏈佐星(streptozotocin，STZ)等。以上亞硝脲類藥物還包括它們的鹽，如，但不限于，硫酸鹽、磷酸鹽、鹽酸鹽、乳糖酸鹽、醋酸鹽、天冬酸鹽、硝酸鹽、枸櫞酸鹽、嘌呤或嘧啶鹽、琥珀酸鹽及馬來酸鹽等。
以上亞硝脲類藥物及其鹽可單選或多選。但以鏈佐星、尼莫司汀、卡莫司汀、雌莫司汀、洛莫司汀、薩莫司汀和甲基洛莫司汀為優(yōu)選。
亞硝脲類抗癌藥物在組合物中的含量可從0.01％-99.99％，以1％-50％為佳，以2％-30％為最佳，四嗪類化合物在組合物中所占的比例因具體情況而定，一般而言，可從0.01％-99.99％，以1％-50％為佳，以2％-30％為最佳。以上均為重量百分比。
藥用輔料包括下列之一或其組合
(1)生物相容性多聚物，包括生物可降解的或生物不可降解的多聚物及其混合物或共聚物，(2)水溶性低分子化合物，或/和(3)用于實現(xiàn)針劑和緩釋劑等藥物劑型的合適的添加劑及賦型劑。
上述生物可降解的多聚物包括天然的和/或合成的多聚物。合成的多聚物如，但不限于，聚酐類、聚羥基酸、聚酯(polyesters)、聚酰胺(polyamides)、聚原酸酯(polyorthoesters)、聚磷腈(polyphosphazenes)、對羧苯基丙烷(p-CPP)、葵二酸(sebacicacid)等；天然的多聚物如，但不限于，蛋白質(zhì)及多糖，包括透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠、白蛋白等。
上述聚酐類可選用，但不限于，芳香聚酐、脂肪族聚酐；其中芳香聚酐將解較慢，熔點高，有機溶劑中溶解度低，然而，芳香聚酐與脂肪族聚酐的共聚物卻較為理想(美國專利4757128)。其代表物是聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP)與葵二酸(SA)的共聚物)，而對羧苯基丙烷為芳香聚酐，葵二酸則是一個芳香二酸與一個脂肪二酸的共聚物。可選用的其它芳香或脂肪族聚酐的共聚物在其它美國專利中已有詳細描述(US 4857311；4888176；4789724)。
上述聚羥基酸可選用，但不限于，聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)與聚乙醇酸的混合物、乙醇酸和羥基羧酸的共聚物(PLGA)；當(dāng)PLA和PLGA混合時，其含量重量百分比分別為0.1-99.9％和99.9-0.1％。聚乳酸的分子量可為，但不限于，5000-100,000，但以10,000-50000為優(yōu)選，以10,000-20000為最優(yōu)選；聚乙醇酸的分子量可為，但不限于，5000-100,000，但以10,000-50000為優(yōu)選，以10,000-20000為最優(yōu)選；以上聚羥基酸可單選或多選。當(dāng)單選時，以聚乳酸(PLA)或羥基羧酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)為優(yōu)選，共聚物的分子量可為，但不限于，1000-100,000，但以10,000-50000為優(yōu)選；以10,000-20000為最優(yōu)選；當(dāng)多選時，以高分子多聚物或不同高分子多聚物組成的復(fù)合多聚物或共聚物為優(yōu)選，以含不同分子量聚乳酸或葵二酸的復(fù)合多聚物或共聚物為最優(yōu)選，如，但不限于，分子量為5000到10000的聚乳酸與分子量為20000到50000的聚乳酸混合、分子量為10000到20000的聚乳酸與分子量為30000到80000的PLGA混合、分子量為5000到10000的聚乳酸與葵二酸混合、分子量為30000到80000的PLGA與葵二酸混合。
上述生物不可降解的多聚物包括，但不限于有機硅聚合物、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(Ethelene-vinyl acetate copolymer，EVAc)、聚丙烯腈(polyacrylonitriles)，聚氨基甲酸酯(polyurethanes)及聚磷腈(polyphosphazenes)等。組合物可通過直接擴散的方式將有效成分釋放出來。
為調(diào)節(jié)藥物釋放速度或改變本發(fā)明抗癌組合物的其它特性，可以改變聚合物的單體成分或分子量、添加或調(diào)節(jié)藥用輔料的組成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各種糖和鹽等。其中糖可為，但不限于，木糖醇、低聚糖及甲殼素等，其中鹽可為但不限于，鉀鹽和鈉鹽等。
本發(fā)明抗癌組合物所用的藥用輔料可為上述藥用輔料中的任何一種或多種物質(zhì)，但以水溶性高分子聚合物為主選，在各種高分子聚合物中，以聚乳酸、葵二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物為首選，混合物和共聚物可選自，但不限于，PLGA、乙醇酸和羥基羧酸的混合物、葵二酸與芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羥基羧酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和羥基羧酸共聚時的含量分別為重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是對羧苯基丙烷(p-CPP)，對羧苯基丙烷(p-CPP)與葵二酸共聚時的含量分別為重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
藥用輔料在《藥用輔料大全》(第123頁，四川科學(xué)技術(shù)出版社1993年出版，羅明生和高天惠主編)中已有詳細描述。另外，中國專利(申請?zhí)?6115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美國發(fā)明專利(專利號5,651,986)也列舉了某些藥用輔料。包括充填劑、增溶劑、吸收促進劑、成膜劑、膠凝劑、制(或致)孔劑、賦型劑或阻止劑。以上藥用輔料有的具有多重作用，因此有的同種物質(zhì)被列為不同的類別。本發(fā)明抗癌藥物組合物可選用的支持物可為上述藥用輔料中的任何一種或多種物質(zhì)，并不完全根據(jù)其分類或定義來限制組合物的技術(shù)特征。
抗癌藥物組合物的有效成分可均勻地包裝于整個藥用輔料中，也可包裝于載體支持物中心或其表面；可通過直接擴散或經(jīng)多聚物降解的方式或如此兩種方式將有效成分釋放。除此之外，抗癌藥物組合物的有效成分也可均勻地包裝于脂質(zhì)體中，或以現(xiàn)有技術(shù)方法制成微球。
本發(fā)明的特點在于所用的藥用輔料除高分子聚合物外，還含有上述任意一種或多種其它藥用輔料。添加的藥用輔料統(tǒng)稱為添加劑。添加劑可根據(jù)其功能分為充填劑、致孔劑、賦型劑、分散劑、等滲劑、保存劑、阻止劑、增溶劑、吸收促進劑、成膜劑、膠凝劑等。
藥用輔料還可為流質(zhì)，如，但不限于芝麻油、混懸液、蒸餾水、生理沖液、以及半固態(tài)物質(zhì)，如(但不限于)果凍、糊劑、軟膏等，上述藥用輔料適用于含或不含添加劑的組合物。
本發(fā)明抗癌藥物組合物可制成多種劑型。如，但不限于，針劑、渾懸液、軟膏、膠囊及緩釋劑等；呈各種形狀，如，但不限于，顆粒樣、片狀、球形、塊狀、針狀、棒狀及模狀。在各種劑型中，以體內(nèi)緩慢釋放劑為主。上述劑型和形狀適用于含或不含添加劑的組合物。
由于本發(fā)明抗癌藥物組合物可使常規(guī)化療、免疫治療、高熱治療、光化學(xué)治療、電療、生物治療、激素治療、磁療、超聲治療、放療及基因治療等方法的作用效果加強。因此在局部緩慢釋放的同時可與上述非手術(shù)療法合用，從而使其抗癌效果進一步加強。
當(dāng)與上述非手術(shù)療法合用時，本發(fā)明抗癌藥物組合物可與非手術(shù)療法同時應(yīng)用，也可在非手術(shù)療法實施前幾天內(nèi)應(yīng)用，其目的在于盡可能增強腫瘤的敏感性。四嗪類藥物對亞硝脲類抗癌藥物有明顯的增效作用，從而為根治各種人體及動物原發(fā)和轉(zhuǎn)移實體腫瘤提供一種更有效的新的方法，具有非常高的臨床應(yīng)用價值及顯著的經(jīng)濟和社會效益。
給藥途徑本發(fā)明抗癌藥物組合物可經(jīng)各種途徑應(yīng)用，如經(jīng)脈、動脈、皮下、肌肉、皮內(nèi)、腔內(nèi)、瘤內(nèi)、瘤周等。給藥途徑取決于多種因素，如腫瘤所在部位、是否手術(shù)或轉(zhuǎn)移、腫瘤體積大小、腫瘤類別、病人年齡、身體狀況、生育狀況及要求等。為于腫瘤所在部位獲得有效藥物濃度，可選擇性地動脈灌注，腔內(nèi)灌注(intracavitary)，腹腔(intraperitoneal)或胸腔(intrapleural)及椎管內(nèi)(intraspinal)給藥，也可臟器內(nèi)放置，如腸腔內(nèi)、膀胱內(nèi)、宮腔內(nèi)、陰道內(nèi)、胃內(nèi)及食道內(nèi)等。在多種途徑中，以局部給藥，如以選擇性動脈、瘤內(nèi)、瘤周注射為主，以瘤內(nèi)、瘤周或瘤腔緩慢釋放的形式為優(yōu)選，如可選用可種緩釋泵及緩釋膠囊或體內(nèi)緩釋植入劑。
當(dāng)抗癌藥物組合物的有效成分為四嗪類藥物時，該組合物以局部給藥為主，如以選擇性動脈、瘤內(nèi)、瘤周注射為主，以瘤內(nèi)、瘤周或瘤腔緩慢釋放的形式為優(yōu)選，而亞硝脲類抗癌藥物可經(jīng)經(jīng)脈、動脈、腹腔或胸腔等途徑給藥。
給藥劑量抗癌藥物的用量取決于很多因素，如，但不限于，腫瘤體積、病人體重、給藥方式、病情進展情況及治療反應(yīng)。但其原則是能夠降低腫瘤細胞對DNA的修復(fù)能力，增加化療等療法的作用效果。四嗪類藥物的有效劑量為0.01-80毫克/公斤體重，以1-50毫克/公斤體重為理想，以2-10毫克/公斤體重為最理想。四嗪類藥物在組合物中所占的比例因具體情況而定，可從0.01％-99.99％，以1％-80％為佳，以2％-40％為最佳。以上均為重量百分比。
當(dāng)局部應(yīng)用時，其血中濃度維持在較低水平，而瘤內(nèi)濃度維持在較高水平。
當(dāng)四嗪類藥物與亞硝脲類抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用時，二者的比例可為1∶9到9∶1，四嗪類藥物的有效劑量為0.01-80毫克/公斤體重，以1-50毫克/公斤體重為理想，以2-10毫克/公斤體重為最理想。而亞硝脲類抗癌藥物的有效劑量為0.01-200毫克/公斤體重，以1-30毫克/公斤體重為理想，以2-20毫克/公斤體重為最理想。亞硝脲類抗癌藥物的在組合物中的含量為0.1％-40％，四嗪類藥物的含量為0.1％-30％，以上均為重量百分比。
本發(fā)明抗癌藥物組合物可以用于制備治療人、寵物及各種動物的各種癌、肉瘤或癌肉瘤等實體腫瘤的藥物，包括起源于大腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟、肝、膽囊、頭頸部、口腔、甲狀腺、皮膚、黏膜、腺體、血管、骨組織、淋巴結(jié)、肺臟、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻煙部、子宮、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮頸、前列腺、膀胱、結(jié)腸、直腸的原發(fā)或轉(zhuǎn)移的癌或肉瘤或癌肉瘤。
該抗癌藥物組合物中還可加入其它藥用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼藥、抗凝藥、止血藥等。以上藥用成分可單選或多選，可加入到含或不含添加劑的組合物，其含量因具體需要而定。
將上述有效成分包裝于藥用輔料中，然后局部應(yīng)用。該組合物可經(jīng)各種途徑給藥，以局部給藥，如選擇性動脈注射和直接瘤體內(nèi)注射為佳，其中又以局部緩慢釋放為最佳。當(dāng)局部應(yīng)用時，本發(fā)明抗癌藥物組合物可直接置于原發(fā)或轉(zhuǎn)移的實體腫瘤周圍或瘤體內(nèi)，也可直接置于原發(fā)或轉(zhuǎn)移的實體腫瘤全部或部分切除后所形成的腔內(nèi)。
本發(fā)明抗癌藥物組合物主要成份以生物可容性物質(zhì)為支持物，故不引起異物反應(yīng)。支持物體內(nèi)放置后可降解吸收，故不再手術(shù)取出。因在腫瘤局部釋放所含藥物，從而選擇性地提高并延長局部藥物濃度，同時可降低由常規(guī)途徑給藥所造成的全身毒性反應(yīng)。
抗癌藥物組合物可制成各種形狀，其中有效成份的含量因不同需要而定。可從0.1％-99.9％，以1％-80％為佳，以5％-40％為最佳。該抗癌藥物組合物可制成各種劑型，如，但不限于，針劑、渾懸液、軟膏、膠囊、及植入緩釋劑等；呈各種形狀，如，但不限于，顆粒樣、片狀、球形、塊狀、針狀、棒狀及模樣；可經(jīng)各種途徑給藥，以動脈途徑為佳，腫瘤體內(nèi)直接放置為最佳。本發(fā)明的最佳劑型為生物可容性、可降解吸收的植入緩釋劑，可因不同臨床需要而制成各種形狀。其主要成份的包裝方法和步驟在美國專利中(US5651986)已有詳細描述，包括若干種制備緩釋制劑的方法如，但不限于，(i)把載體支持物粉末與藥物混合然后壓制成植入劑，即所謂的混合法；(ii)把載體支持物熔化，與待包裝的藥物相混合，然后固體冷卻，即所謂的熔融法；(iii)把載體支持物溶解于溶劑中，把待包裝的藥物溶解或分散于聚合物溶液中，然后蒸發(fā)溶劑，乾燥，即所謂的溶解法。其中溶解法可用以微球的制造，其方法是任意的，抗癌藥物組合物也可包裝脂質(zhì)體中。
本發(fā)明抗癌藥物組合物制備技術(shù)的特點在于將亞硝脲類抗癌藥物增效劑和四嗪類藥物單獨或聯(lián)合包裝于藥用輔料中，按照一定比例將有效成份和藥用輔料溶解，待充份混勻之后乾燥。待乾燥后立即成形并消毒分裝。
以上四嗪類藥物能夠不同程度的抑制或降低腫瘤細胞DNA修復(fù)酶的活性，本發(fā)明的體內(nèi)外實驗發(fā)現(xiàn)其對亞硝脲類抗癌藥物的明顯增效作用。當(dāng)二者聯(lián)合局部應(yīng)用，尤其是局部放置，不僅能夠克服全身給藥帶來的毒性反應(yīng)，而且解決了腫瘤局部藥物濃度過低以及細胞對藥物的敏感性問題。
試驗一、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體外抑瘤作用。
所用的腫瘤細胞包括CNS-1、C6、胃腺上皮癌(SA)、骨腫瘤(BC)、乳腺癌(BA)、肺癌(LH)、甲狀腺乳頭狀腺癌(PAT)、肝癌等。將以下四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤生長抑制效果見表1所示。
表1瘤細胞 TMZ BCNU TMZACNUTMZ CCNUTMZGCNU TMZ+BCNUC +ACNU +CCNU +GCNUCNS68％64％ 90％ 66％98％64％90％66％98％C6 62％64％ 96％ 60％98％64％96％60％98％SA 58％60％ 86％ 56％92％60％86％60％92％BC 54％64％ 94％ 54％84％54％94％64％84％BA 54％62％ 98％ 62％82％52％98％62％82％LH 60％58％ 90％ 62％92％68％90％62％92％PAT54％56％ 94％ 66％98％66％94％56％98％注解TMZ替莫唑胺；BCNU、ACNU、CCNU、GCNU分別為卡莫司汀、尼莫司汀、洛莫司汀和加莫司汀。其中替莫唑胺為四嗪類藥物，屬亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而BCNU、ACNU、CCNU、GCNU均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗二、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體外抑瘤作用。
用試驗一中所用的腫瘤細胞，將以下四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤生長抑制效果見表2所示。
表2瘤細胞DITC Al DITC At DITCAm DITCBe DITC+Al +At+Am+BeCNS 67％ 64％ 92％ 67％ 96％65％ 94％64％ 96％
C6 62％66％96％ 60％98％64％96％60％94％SA 56％60％88％ 58％90％68％86％58％92％BC 54％56％94％ 54％84％64％90％64％86％BA 57％52％96％ 62％80％68％98％56％82％LH 62％66％90％ 68％90％50％92％60％90％PAT54％66％96％ 66％98％56％94％56％98％注解DITC5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺；Al阿雌莫司汀、At阿莫司汀、Am氨莫司汀、Be苯達莫司汀.其中DITC為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、苯達莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗三、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體外抑瘤作用。
用試驗一中所用的腫瘤細胞，將以下四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤生長抑制效果見表3所示。
表3瘤細胞IRTDi IRTBo IRT El IRT Ec IRT+Di +Bo+El +EcCNS 67％ 64％92％ 67％ 96％65％ 94％64％96％C662％ 66％96％ 60％ 98％64％ 89％60％94％SA56％ 60％88％ 58％ 90％68％ 88％58％92％BC54％ 56％94％ 54％ 84％64％ 90％64％86％BA57％ 52％96％ 62％ 80％68％ 88％66％82％LH62％ 66％90％ 68％ 90％50％ 92％60％90％PAT 54％ 66％96％ 66％ 98％56％ 89％66％98％注解IRT伊力替康；Di二硫莫司?。籅o波呋莫司汀；El依莫司汀；Ec依考莫司汀.其中IRT為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀及依考莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗四、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體外抑瘤作用。
用試驗一中所用的腫瘤細胞，將以下四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤生長抑制效果見表4所示。
表4瘤細胞 PCBFo PCBEs PCBHe PCBNe PCB+Fo +Es +He +NeCNS 57％ 68％ 98％ 68％ 98％ 68％ 88％ 59％ 94％C6 52％ 76％ 96％ 62％ 98％ 64％ 90％ 60％ 90％SA 46％ 60％ 88％ 58％ 90％ 68％ 90％ 88％ 95％BC 58％ 66％ 94％ 54％ 84％ 60％ 89％ 64％ 88％BA 57％ 58％ 96％ 68％ 88％ 68％ 88％ 56％ 82％
LH 60％ 68％ 98％ 68％ 90％ 50％ 89％ 60％ 92％PAT55％ 66％ 96％ 68％ 98％ 58％ 94％ 56％ 96％注解PCB甲基芐肼；Fo福莫司汀；Es雌莫司汀；He合莫司汀；Ne奈莫司汀。其中PCB為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀和奈莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗五、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體外抑瘤作用。
用試驗一中所用的腫瘤細胞，將以下四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤生長抑制效果見表5所示。
表5瘤細胞 Topo Ma Topo MetTopo Se Topo Ra Topo+Ma +Met +Se +RaCNS 67％ 64％ 92％ 67％ 96％ 65％ 94％ 64％ 96％C6 62％ 66％ 96％ 60％ 98％ 64％ 96％ 56％ 94％SA 56％ 60％ 88％ 58％ 90％ 68％ 86％ 58％ 92％BC 54％ 56％ 94％ 54％ 84％ 64％ 90％ 54％ 86％BA 57％ 52％ 96％ 62％ 80％ 68％ 98％ 66％ 82％LH 62％ 66％ 90％ 68％ 90％ 50％ 92％ 60％ 90％PAT 54％ 66％ 96％ 66％ 98％ 56％ 94％ 56％ 98％注解Topo拓撲替康；Ma甘露莫司??；Met甲基洛莫司汀；Se司莫司汀；Ra雷莫司汀。其中拓撲替康為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而甘露莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀及雷莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
結(jié)果表明，所用拓撲替康及各種亞硝脲類抗癌藥物在該濃度時對腫瘤細胞生長均有明顯的抑制作用，但二者合用時具有明顯的增效作用。
試驗六、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體外抑瘤作用。
用試驗一中所用的腫瘤細胞，將以下四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤生長抑制效果見表6所示。
表6瘤細胞 MTZPr MTZUr MTZTa MTZSp MTZ+Pr +Ur +Ta +SpCNS 67％ 64％ 92％ 67％ 96％ 65％ 94％ 64％ 96％C6 62％ 66％ 96％ 60％ 98％ 64％ 89％ 60％ 94％SA 56％ 60％ 88％ 58％ 90％ 68％ 86％ 58％ 92％BC 54％ 56％ 94％ 54％ 84％ 64％ 90％ 64％ 86％BA 57％ 52％ 96％ 62％ 80％ 68％ 88％ 66％ 82％LH 62％ 66％ 90％ 68％ 90％ 50％ 92％ 60％ 90％PAT 54％ 66％ 96％ 66％ 98％ 56％ 94％ 66％ 98％
注解MTZ米托唑胺；Pr潑尼莫司?。籙r烏拉莫司??；Ta他莫司?。籗p螺莫司汀。其中MTZ為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、他莫司汀及螺莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗一到六結(jié)果表明，所用四嗪類藥物及各種亞硝脲類抗癌藥物在該濃度時對腫瘤細胞生長均有明顯的抑制作用，但二者合用時具有明顯的增效作用。
試驗七、四嗪類藥物對06-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制作用如上所述，腫瘤細胞內(nèi)DNA修復(fù)酶如06-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶的增高是其對亞硝脲類抗癌藥物產(chǎn)生耐受性的主要原因，因此，檢測化合物對該酶活力的影響可以用來篩選亞硝脲類抗癌藥物增效劑。本實驗以肺癌細胞為試驗對象，用甲基轉(zhuǎn)移酶診斷藥盒對四嗪類藥物及其衍生物進行篩選。體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中加入濃度為5mM/ml的藥物，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后檢測對甲基轉(zhuǎn)移酶活力的抑制作用。抑制效果(％)見表7所示。
表7甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制率(％)甲基芐肼 88拓撲替康 80伊力替康 86米托唑胺 80氮烯唑胺 80替莫唑胺 84咪唑并四嗪 80咪唑并哌嗪 801H-咪唑并[b]哌嗪 88咪唑并吡啶 861H-咪唑并[1，2-a]吡啶 884-羧基替莫唑胺 883-N-甲基替莫唑胺 90吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-TMZ 68吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o 705-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺 808-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-TMZ 863，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺 803-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-86羧酰胺
5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺 823-氨基苯酰胺 806-氨基煙酰胺 86由上表可以看出，所試藥物對甲基轉(zhuǎn)移酶均有明顯抑制作用，其中甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺、8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺、3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺或3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺等的作用尤為明顯，均在80％以上。
以多種其它腫瘤細胞(包括腦腫瘤(CNS-1、C6、9L)、胃腺上皮癌(SA)、骨腫瘤(BC)、乳腺癌(BA)、甲狀腺乳頭狀腺癌(PAT)、肝癌、胰腺癌、腎癌及食管癌等)為試驗對象得出類似結(jié)果。由此說明四嗪類藥物，尤其是甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪和1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶等均為非常有效的甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑。其對腫瘤的治療作用在以下的動物試驗和實施例中將有更充分的描述。
試驗八、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
以大白鼠為試驗對象，將2×105個腫瘤細胞(肝癌)皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長14天后將其分為以下10組(見表8)。第一組為對照，第2到10組為治療組，其中，第2組為替莫唑胺(TMZ)，第3到6組分別為BCNU(卡莫司汀)、ACNU、CCNU及雌莫司汀。第7到10組分別為TMZ與BCNU、ACNU、CCNU及雌莫司汀的聯(lián)合。所有藥物均經(jīng)瘤內(nèi)注射，劑量為5mg/kg。治療后第30天測量腫瘤體積大小，比較治療效果(見表8)。
表8試驗組(n) 所受治療 腫瘤體積(cm3) P值1(6)對照 80±21cm32(6)TMZ 60±4.5cm3＜0.053(6)ACNU 50±2.5cm3＜0.014(6)BCNU 44±3.2cm3＜0.015(6)CCNU 48±3.6cm3＜0.016(6)雌莫司汀 40±3.8cm3＜0.017(6)TMZ+ACNU 30±3.2cm3＜0.0018(6)TMZ+BCNU 34±3.6cm3＜0.0019(6)TMZ+CCNU 22±3.2cm3＜0.00110(6) TMZ+雌莫司汀 20±3.4cm3＜0.001注解TMZ為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而BCNU、ACNU、CCNU及雌莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗九、四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
以大白鼠為試驗對象，將2×105個腫瘤細胞(乳腺癌)皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長14天后將其分為以下10組(見表9)。第1組為對照，第2到10組為治療組，其中，第2組為四嗪類藥物抗癌藥物；第3到6組分別為亞硝脲類抗癌藥物。第7到10組分別為四嗪類藥物及不同亞硝脲類抗癌藥物的聯(lián)合。所有藥物均經(jīng)瘤內(nèi)放置，劑量為5mg/kg。治療后第30天測量腫瘤體積大小，比較治療效果(見表9)。
表9試驗組(n) 所受治療 腫瘤體積(cm3)P值1(6) 對照 78.5±23cm32(6) DITC 54±5.3cm3＜0.053(6) 福莫司汀 41±2.3cm3＜0.014(6) 司莫司汀 42±3.6cm3＜0.015(6) ?；悄就?4±3.4cm3＜0.016(6) 螺莫司汀 44±3.8cm3＜0.017(6) DITC+福莫司汀 22±3.6cm3＜0.0018(6) DITC+司莫司汀 20±3.6cm3＜0.0019(6) DITC+?；悄就? 22±3.6cm3＜0.00110(6) DITC+螺莫司汀 28±3.6cm3＜0.001備注DITC咪唑-4-羧酰胺，為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而福莫司汀、司莫司汀、?；悄就〖奥菽就【鶠閬喯蹼孱惪拱┧幬铩?br> 試驗十、局部應(yīng)用四嗪類藥物對亞硝脲類抗癌藥物的增效作用。
以大白鼠為試驗對象，將2×105個肉瘤細胞(S180)皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長14天后將其分為以下10組(見表10)。第一組為對照，第2到10組為治療組，其中，第2組為甲基芐肼(PCB)，第3到6組分別為BCNU(卡莫司汀)、ACNU、CCNU及雌莫司汀。第7到10組分別為PCB與BCNU、ACNU、CCNU及雌莫司的聯(lián)合。BCNU(卡莫司汀)、ACNU、CCNU及雌莫司汀。亞硝脲類抗癌藥物增效劑經(jīng)瘤內(nèi)放置，而亞硝脲類抗癌藥物于一天后經(jīng)腹腔注射，所有藥物劑量均為5mg/kg。治療后第30天測量腫瘤體積大小，比較治療效果(見表10)。
表10試驗組(n)所受治療腫瘤體積(cm3) P值1(6) 對照89.5±23cm32(6) PCB 68±5.3cm3＜0.053(6) ACNU40±2.3cm3＜0.014(6) BCNU33±3.6cm3＜0.015(6) CCNU34±3.4cm3＜0.016(6) 雌莫司汀32±3.8cm3＜0.017(6) PCB+ACNU22±3.6cm3＜0.0018(6) PCB+BCNU20±3.6cm3＜0.0019(6) PCB+CCNU18±3.6cm3＜0.001
10(6)PCB+雌莫司汀16±3.6cm3＜0.001備注PCB甲基芐肼為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑；而BCNU、ACNU、CCNU及雌莫司汀均為亞硝脲類抗癌藥物。
試驗八到十的結(jié)果表明，與對照組相比，四嗪類抗癌藥物(第2組)及亞硝脲類抗癌藥物(第3到6組)單獨應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。類似增效作用還見于其它四嗪類藥物與其它亞硝脲類抗癌藥物的聯(lián)合。
試驗十一、局部應(yīng)用四嗪類藥物和亞硝脲類抗癌藥物對腫瘤的抑制作用。
按照試驗九所述的方法比較四嗪類藥物和亞硝脲類抗癌藥物對腸癌生長的抑瘤作用。第一組為對照，第2到10組為治療組，其中，第2組為BCNU(卡莫司汀)，第3到6組分別為拓撲替康(Topo)、伊力替康(IRT)、米托唑胺(MTZ)和氮烯唑胺(DCB)。第7到10組分別為BCNU與拓撲替康、伊利諾替康、米托唑胺和氮烯唑胺的聯(lián)合。所有藥物均經(jīng)瘤內(nèi)放置，緩釋制劑按照本發(fā)明所述工藝制作。緩釋制劑重量為30毫克，所有藥物的含量均為12％。治療后第30天測量腫瘤體積大小，比較治療效果(見表11)。
表11試驗組(n) 所受治療腫瘤體積(cm3) P值1(6) 對照67.5±23cm32(6) BCNU36±5.8cm3＜0.053(6) Topo35±2.3cm3＜0.014(6) IRT 30±3.6cm3＜0.015(6) MTZ 34±3.4cm3＜0.016(6) DCB 30±3.8cm3＜0.017(6) BCNU+Topo 10±3.6cm3＜0.0018(6) BCNU+IRT12±3.6cm3＜0.0019(6) BCNU+MTZ16±3.6cm3＜0.00110(6)BCNU+DCB12±3.6cm3＜0.001備注為拓撲替康(Topo)、伊力替康()、米托唑胺(MTZ)和氮烯唑胺(DCB)均為四嗪類藥物，亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而BCNU為亞硝脲類抗癌藥物。結(jié)果表明，與對照組相比，四嗪類藥物(第3到6組)及亞硝脲類抗癌藥物(第2組)單獨應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗十二、局部應(yīng)用四嗪類藥物和亞硝脲類抗癌藥物對腫瘤的抑制作用。
按照試驗九所述的方法比較四嗪類藥物和亞硝脲類抗癌藥物對腸癌生長的抑瘤作用。第一組為對照，第2到10組為治療組，其中，第2組為ACNU(尼莫司汀)，第3到6組分別為拓撲替康(Topo)、伊力替康(IRT)、米托唑胺(MTZ)和替莫唑胺(TMZ)。第7到10組分別為BCNU與拓撲替康、伊力替康、米托唑胺和氮烯唑胺的聯(lián)合。所有藥物均經(jīng)瘤內(nèi)放置，緩釋制劑按照本發(fā)明所述工藝制作。緩釋制劑重量為30毫克，所有藥物的含量均為12％。治療后第30天測量腫瘤體積大小，比較治療效果(見表12)。
表12試驗組(n) 所受治療 腫瘤體積(cm3) P值1(6) 對照 67.5±23cm32(6) ACNU 36±5.8cm3＜0.053(6) Topo 35±2.3cm3＜0.014(6) IRT 30±3.6cm3＜0.015(6) TMZ 34±3.4cm3＜0.016(6) DCB 30±3.8cm3＜0.017(6) ACNU+Topo10±3.6cm3＜0.0018(6) ACNU+IRT 12±3.6cm3＜0.0019(6) ACNU+MTZ 16±3.6cm3＜0.00110(6) ACNU+DCB 12±3.6cm3＜0.001備注為拓撲替康(Topo)、伊力替康(IRT)、米托唑胺(MTZ)和替莫唑胺(TMZ)均為四嗪類藥物，屬于亞硝脲類抗癌藥物增效劑，而ACNU為亞硝脲類抗癌藥物。結(jié)果表明，與對照組相比，四嗪類藥物(第3到6組)及亞硝脲類抗癌藥物(第2組)單獨應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。類似增效作用還見于其它四嗪類藥物與其它亞硝脲類抗癌藥物的聯(lián)合。
總之，上述所列的各種四嗪類藥物均能抑制甲基轉(zhuǎn)移酶的活性。實驗結(jié)果也表明本發(fā)明中的四嗪類藥物對所列亞硝脲類抗癌藥物及其類似物的增效作用。因此，本發(fā)明所述的抗癌復(fù)合物的有效成分為任意一種(或多種)四嗪類藥物和/或任意一種(或多種)亞硝脲類抗癌藥物及其類似物的聯(lián)合或單獨包裝。含有以上有效成分的抗癌藥物組合物可制成任意劑型或形狀，但以緩慢釋放劑型為優(yōu)選。
本發(fā)明抗癌藥物組合物的制備方法如下1.將稱重的藥用輔料放入容器中，加一定量的有機溶劑溶解均勻，有機溶劑的量不嚴格限定，以充分溶解為宜。
2.加入稱重之抗癌有效成份重新?lián)u勻。藥物與藥用輔料的用量比例因具體要求而定。
3.去除有機溶劑。真空干燥或低溫干燥法均可。
4.將干燥后的固體組合物根據(jù)需要制成各種形狀。
5.分裝后射線滅菌(射線劑量因體積而異)備用。也可用其它方法滅菌。
具體實施方式
本發(fā)明加工成抗癌藥物組合物通過以下實施例進一步加以說明，但不限于此。
實施例一將95mg分子量為20000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入5mg抗癌有效成份(替莫唑胺)，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到含5％的抗癌藥物組合物。將含藥復(fù)合物放于小白鼠皮下，定時取出測藥物含量，根據(jù)剩余藥物量，并計算累計釋放百分數(shù)(％)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥物在30天內(nèi)均勻釋放80-95％。以上均為重量百分比。
實施例二加工成抗癌藥物組合物的方法步驟與實施例一相同，但所含有效成分為列之一(a)2-25％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、或咪唑并吡啶；(b)2-30％的1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺或8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺；(c)2-35％的3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺或3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺或5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺；或(d)2-35％的甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺。
以上均為重量百分比。
實施例三加工成抗癌藥物組合物的方法步驟與實施例一相同，但所用藥用輔料分別為下列之一a)分子量為5000-15000、10000-20000、25000-35000或30000-50000的聚乳酸(PLA)；b)分子量為5000-15000、10000-20000、25000-35000或30000-50000的聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物(PLGA)；c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)；d)10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40的對羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)共聚物(聚苯丙生)，均為重量百分比。
實施例四將80mg分子量為10000的聚乳酸(PLGA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入5mg替莫唑胺和15mg卡莫司汀，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到抗癌藥物組合物含5％替莫唑胺和15％卡莫司汀。將含藥復(fù)合物防于小白鼠皮下，定時取出測藥物含量，根據(jù)剩余藥物量，并計算累計釋放百分數(shù)(％)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥物在30天內(nèi)均勻釋放90-95％。以上均為重量百分比。
實施例五加工成抗癌藥物組合物的方法步驟與實施例四相同，但所含有效成分為A)四嗪類藥物15％卡莫司汀與5％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺或8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺；和B)亞硝脲類藥物15％卡莫司汀與5％的3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺或3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺。
以上均為重量百分比。
實施例六加工成抗癌藥物組合物方法步驟與實施例四相同，但所含有效成分為(a)～(d)(a)15％尼莫司汀與5％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺或8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺；(b)15％尼莫司汀與5％的3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺、3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺。
(c)15％洛莫司汀與5％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺或8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺；(d)15％洛莫司汀與5％的3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺、3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺。
以上均為重量百分比。
實施例七加工成抗癌藥物組合物的方法步驟與實施例四相同，但所含有效成分為(a)～(d)(a)15％雌莫司汀與5％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺或8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺；(b)15％司莫司汀與5％的3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺、3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺。
(c)15％甲基洛莫司汀與5％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺或8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺；(d)15％甲基洛莫司汀與5％的3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺、3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺。
以上均為重量百分比。
實施例八將80mg乙烯乙酸乙烯酯共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入10mg四嗪類藥物和10mg亞硝脲類抗癌藥物，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到抗癌藥物組合物含10％四嗪類藥物和10％亞硝脲類抗癌藥物。將上述實施例中的抗癌藥物組合物放在室溫生理鹽水中浸泡，測不同時間藥物釋放量，并計算累計釋放百分數(shù)(％)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥物在30天內(nèi)均勻釋放90-97％。以上均為重量百分比。
實施例九加工成抗癌藥物組合物的方法步驟與實施例八相同，但所含抗癌有效成分為下列a)-1)之一a)1-40％咪唑并哌嗪；或b)5-30％替莫唑胺和5-20％卡莫司?。换騝)5-25％替莫唑胺和5-20％尼莫司?。换騞)2-35％替莫唑胺和5-20％洛莫司??；或e)2-40％替莫唑胺和5-20％司莫司?。换騠)1-35％替莫唑胺和5-20％薩莫司?。换騡)1-45％咪唑并吡啶；或h)1-45％米托唑胺和5-20％卡莫司汀；或i)5-25％米托唑胺和5-20％尼莫司?。换騤)2-35％米托唑胺和5-20％洛莫司??；或k)2-40％米托唑胺和5-20％司莫司??；或1)1-35％米托唑胺和5-20％薩莫司汀。
以上均為重量百分比。
實施例十加工成抗癌藥物組合物的方法步驟與實施例八相同，但所含有效成分為下列組合之一(1)甲基芐肼與鏈佐星、阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就?、他莫司汀或螺莫司汀的組合；(2)拓撲替康與鏈佐星、阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就?、他莫司汀或螺莫司汀的組合；(3)伊力替康與鏈佐星、阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就　⑺就』蚵菽就〉慕M合；(4)米托唑胺與鏈佐星、阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就　⑺就』蚵菽就〉慕M合；(5)氮烯唑胺與鏈佐星、阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、牛磺莫司汀、他莫司汀或螺莫司汀的組合；(6)替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺與鏈佐星、阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就?、他莫司汀或螺莫司汀的組合。
以上抗癌藥物組合物中的藥物重量百分比含量為0.01-50％，其中四嗪類藥物與亞硝脲類抗癌藥物的重量比為1∶9到9∶1。
實施例十一將80mg分子量為10000的聚乳酸(PLGA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入10mg替莫唑胺和10mg米托唑胺，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到抗癌藥物組合物含10％替莫唑胺和10％米托唑胺。均為重量百分比。
實施例十二將80mg分子量為10000的聚乳酸(PLGA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入5mg替莫唑胺、5mg米托唑胺和10mg卡莫司汀，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到抗癌藥物組合物含5％替莫唑胺和5％米托唑胺和10％卡莫司汀。均為重量百分比。
由于本發(fā)明抗癌藥物組合物所用的四嗪類藥物對亞硝脲類抗癌藥物增敏具有普遍意義，且體內(nèi)外釋放較為緩慢且平穩(wěn)，所以，本發(fā)明抗癌藥物組合物中四嗪類藥物的選擇十分廣泛，同樣四嗪類藥物及亞硝脲類抗癌藥物的聯(lián)合也可任選?？拱┧幬锝M合物可用現(xiàn)有的方法制成各種劑型及形狀，但以緩慢釋放劑為優(yōu)選。以上實施例僅用于說明，而并非局限本發(fā)明的應(yīng)用。
上述抗癌藥物組合物可放置在腫瘤局部用于人及動物各種實體腫瘤的治療，手術(shù)后局部放置應(yīng)用該組合物對根治實體腫瘤具有獨特的效果。某些腫瘤生長在人體的關(guān)鍵部位(如腦干等處)不能手術(shù)去除，局部藥物緩慢釋放該組合物可以取代手術(shù)切除。有些惡性腫瘤，手術(shù)操作可能促進腫瘤擴散，局部藥物緩慢釋放可能是更科學(xué)的選擇。該組合物除單獨應(yīng)用外，還可與許多治療措施聯(lián)合應(yīng)用如與放射治療、高熱治療、免疫治療、其它療法如光療、電療、激素治療及基因治療等聯(lián)合應(yīng)用，局部放置應(yīng)用該組合物作為增效劑具有獨特的優(yōu)點及很高的臨床應(yīng)用價值。當(dāng)該組合物與其它治療措施聯(lián)合應(yīng)用時，該組合物可同時或先于其它治療措施。
權(quán)利要求
1.一種抗癌藥物組合物，包括抗癌有效成分和藥用輔料，其特征在于，抗癌有效成分為A)四嗪類藥物0.01-50％和B)亞硝脲類抗癌藥物 0.00-40％，以上均為重量百分比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于，所述四嗪類藥物選自咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、1H-咪唑并[b]哌嗪、咪唑并吡啶、1H-咪唑并[1，2-a]吡啶、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪-4(3H)-替莫唑胺、吡咯[2，1-d][1，2，3，5]四嗪10a-o、5-(3-N-甲基三氮-1-基)-咪唑并-4-羧酰胺、8-硝基-3-甲基-苯并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺、3，5-二甲基-吡啶并-1，2，3，5-四氮雜卓-4-替莫唑胺或3-(2-氯乙烷)-N，N二甲基-4-氧-3，4-二氫咪唑[5，1-d]-1，2，3，5-四嗪-8-羧酰胺、5-(三氮烯基)咪唑-4-羧酰胺、甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康、米托唑胺、氮烯唑胺、替莫唑胺、3-氨基苯酰胺或6-氨基煙酰胺中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于，所述亞硝脲類抗癌藥物選自阿雌莫司汀、鏈佐星、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、卡莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就　⑺就』蚵菽就≈械囊环N或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于，該組合物含有甲基芐肼、拓撲替康、伊力替康或氮烯唑胺與阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、卡莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就?、他莫司汀或螺莫司汀的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于，該組合物含有替莫唑胺或米托唑胺與阿雌莫司汀、阿莫司汀、氨莫司汀、尼莫司汀、苯達莫司汀、二硫莫司汀、波呋莫司汀、卡莫司汀、依莫司汀、依考莫司汀、二硫氮芥、加莫司汀、福莫司汀、雌莫司汀、合莫司汀、奈莫司汀、甘露莫司汀、洛莫司汀、甲基洛莫司汀、司莫司汀、雷莫司汀、潑尼莫司汀、烏拉莫司汀、薩莫司汀、?；悄就?、他莫司汀或螺莫司汀的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于抗癌有效成分為a)1-40％咪唑并哌嗪；或b)5-30％替莫唑胺和5-20％卡莫司?。换騝)5-25％替莫唑胺和5-20％尼莫司?。换騞)2-35％替莫唑胺和5-20％洛莫司??；或e)2-40％替莫唑胺和5-20％司莫司汀；或f)1-35％替莫唑胺和5-20％薩莫司??；或g)1-45％咪唑并吡啶；或h)1-45％米托唑胺和5-20％卡莫司汀；或i)5-25％米托唑胺和5-20％尼莫司??；或j)2-35％米托唑胺和5-20％洛莫司??；或k)2-40％米托唑胺和5-20％司莫司??；或1)1-35％米托唑胺和5-20％薩莫司??；以上均為重量百分比。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于，藥用輔料選自生物可容性可降解吸收的高分子多聚物及其混合物或共聚物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物，其特征在于，藥用輔料選自聚乳酸、乳酸和乙醇酸的共聚物、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、對羧苯基丙烷葵二酸共聚物以及其混合物或共聚物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌組合物，其特征在于該抗癌組合物瘤內(nèi)或瘤周放置。
10.權(quán)利要求1所述之抗癌藥物組合物的應(yīng)用，用于制備治療起源于人及動物大腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟、肝、膽囊、頭頸部、口腔、甲狀腺、皮膚、粘膜、腺體、血管、骨組織、淋巴結(jié)、肺臟、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宮、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮頸、前列腺、膀胱、結(jié)腸或直腸的原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤的藥物。
全文摘要
一種抗癌藥物組合物，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。包括藥用輔料以及包于其中的四嗪類藥物。四嗪類藥物可抑制細胞內(nèi)的DNA修復(fù)功能，并能降低腫瘤細胞對亞硝脲類抗癌藥物的耐受性，而藥用輔料主要為生物可容性可降解吸收的高分子多聚物，在其降解吸收的過程中能將抗癌藥物緩慢釋放于腫瘤局部，因此在明顯降低其全身毒性反應(yīng)的同時還可于腫瘤局部維持有效藥物濃度。該抗癌藥物組合物還含有亞硝脲類抗癌藥物，腫瘤局部放置該組合物不僅能夠降低亞硝脲類抗癌藥物和或四嗪類藥物的全身毒性反應(yīng)，同時還能選擇性地提高腫瘤局部的藥物濃度，增強化療藥物及放射治療等非手術(shù)療法的治療效果。
文檔編號A61P35/00GK1616098SQ20041003592
公開日2005年5月18日 申請日期2004年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月14日
發(fā)明者孔慶忠 申請人:孔慶忠