專利名稱：抗腫瘤天然營養(yǎng)劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，尤其涉及一種從牛奶乳清中制備的具有抗腫瘤作用的生物活性物質的方法，可廣泛應用于防治多種惡性腫瘤。
發(fā)明技術背景惡性腫瘤是嚴重影響人類身體健康的疾病，盡管目前有很多化學藥物都具有抗腫瘤作用，但是，毒副作用通常也較大，因此，發(fā)現有效對抗腫瘤的天然物質，在應用于治療惡性腫瘤時，可以減少毒副作用對患者的傷害，長期應用安全可靠。
日本流行病學研究(R.K.Cameron，et al.Grann.，69679，1981)證實，經常喝牛奶的人群，胃癌發(fā)病率明顯降低。美國科學家報導，經常飲用牛奶的人群結腸癌發(fā)病率明顯降低。動物實驗證實，應用酸奶產品可以抑制腫瘤細胞的生長繁殖(G.W.Reddy，et al.，J.Natil，cancer Inst.，50815，1973)。
脫脂牛奶中含有兩種膽固醇合成抑制劑，一種是乳酸，另一種是羥基茂酸鹽復合物轉化為膽固醇的抑制劑(Inhibitor of Mevalonate Incorporation into Cholesterol，IMIC)，具有抑制內源性膽固醇合成的作用(A.A.Anmed，et al.，Atherosclerosis，32347，1979)，IMIC被發(fā)現具有抑制腫瘤細胞生長的作用，其機理可能是通過抑制內源性膽固醇合成，而阻止合成腫瘤細胞膜，從而抑制腫瘤細胞生長。IMIC存在于牛奶的乳清中，其分子量約165～230，通常并不單獨存在，而是粘附在牛奶的蛋白腙-蛋白胨等蛋白質上，在酸性環(huán)境下穩(wěn)定。
本發(fā)明所要解決的技術問題是，從牛奶的乳清中制備具有抗腫瘤作用的膽固醇合成抑制劑，并應用于防治多種惡性腫瘤。

發(fā)明內容
本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案，其特征是，以牛奶為原料，用酸劑調PH至4.6～4.8，加熱凝固酪蛋白，以離心或過濾方式去除已凝固的酪蛋白，加熱凝集乳清蛋白，采用離心方式去除，收集的上清液用超濾方式反復過濾濃縮，冷凍干燥制備富含具有抗腫瘤作用的膽固醇合成抑制劑，應用于防治多種惡性腫瘤。
本發(fā)明的技術特征是，牛奶以離心方式脫脂，用酸劑調PH至4.6～4.8，加熱35℃～50℃，持續(xù)20～40分鐘，使酪蛋白凝集，用離心方式或濾布過濾方式去除已凝集的酪蛋白，離心速度4,000～6,000rpm/分，離心時間為10～30分鐘。
本發(fā)明的技術特征是，收集已去除酪蛋白的乳清加熱至80℃～100℃，維持30～60分鐘，然后降溫至2℃～8℃，維持約10～12小時，沉淀乳清蛋白，用分子量為0.1～0.4mu.m的微濾膜濾除已凝集的乳清蛋白。
本發(fā)明的技術特征是，已去除乳清蛋白的上清液，用分子量為500～1,000D的超微濾膜，在交錯切面流體超濾設備上進行超濾分離濃縮，超濾濃縮物反復加雙蒸餾水稀釋后繼續(xù)超濾分離濃縮，重復4～6次，超濾分離時溫度在100～120°F。
本發(fā)明的技術特征是，超濾濃縮物可以貯存在冷凍環(huán)境下保存，進行進一步分離，或直接進行冷凍干燥制備冷凍干粉，內含豐富的具有抗腫瘤作用的膽固醇合成抑制劑。
本發(fā)明的技術特征是，為了獲得更高純度的制劑，可以采用層析柱進行進一步分離，將超濾濃縮物過柱，用硫磺酸溶液洗脫后，洗脫液冷凍干燥，獲得更高純度的產品。
本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的具有抑制惡性腫瘤細胞生長作用的天然營養(yǎng)成分，是羥基茂酸鹽轉化為膽固醇的抑制劑，通過抑制內源性膽固醇合成，阻礙腫瘤細胞膜生成，從而抑制腫瘤細胞生長，它存在于牛奶中，分子量約165～230，通常粘附在牛奶的蛋白腙-蛋白胨碎片上，不會被透析，屬于一種水溶性物質，在酸性環(huán)境下穩(wěn)定，具有抑制膽固醇合成的功能。
本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的具有抑制腫瘤細胞生長作用的天然營養(yǎng)成分，用紫外光譜儀測試時，在中性或酸性環(huán)境下，最大吸收波長為207nm和278nm，在基礎溶液中為223nm和290nm，在Biorad Aminex 87WX樹脂層析柱(30cm.times.7.9mm)上采用高效液相層析術，用0.05NH.Sub.2 So.sub.4作為流動相，以0.7ml/每分鐘的流速洗脫時，其生物活性高峰在洗脫儲留時間約7.0～8.0分鐘。
本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，發(fā)揮其有效作用的劑量為1～10mg/每公斤體重/每天，最好的劑量為2～4mg/每公斤體重/每天，對于一個體重70公斤的成年人來說，每天的劑量約70mg～700mg，施用的最好途徑是口服，可以單獨應用，或聯合其他抗腫瘤藥物聯合應用，長期應用無毒副作用。
本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，可以直接服用，制備成口服液服用，或與其他醫(yī)藥等級的輔料混合后，制備成片劑、膠囊劑、沖劑、丸劑、軟膠囊劑、乳劑、水劑、散劑、油劑應用，還可以作為食品添加劑制備強化型食品應用，包括但不限于奶粉、奶茶、速溶茶、速溶咖啡、餅干、糕點、果凍、布丁等。
本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，可以應用于預防和治療多種惡性腫瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、支氣管肺癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、黑色素瘤和乳腺癌等，既可以用來預防腫瘤的發(fā)生，也可以與化療、放療聯合治療各種腫瘤，尤其可以用來治療手術后的腫瘤病人，防止腫瘤細胞轉移和復發(fā)。
本發(fā)明的有益效果是，應用天然營養(yǎng)成份對抗腫瘤，在抑制惡性腫瘤細胞生長時，不傷害正常器官和組織，長期服用無毒副作用。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明實施例1從牛奶中制備抗腫瘤天然營養(yǎng)劑取120升脫脂牛奶，用1N HCL調PH至4.6，加熱45℃持續(xù)30分鐘，看到乳水分離，用離心機以5,000rpm/分速度離心20分鐘，去除酪蛋白，收集的上清液加熱到100℃持續(xù)60分鐘，然后降溫至4℃，靜置10小時，用0.4mu.m的微濾膜濾除凝集的乳清蛋白，應用交錯切面流體超濾裝置(TFF裝置，美國Pall公司生產制造)，用分子量為1,000D的超濾膜，入口壓力為50PSI，出口壓力為20PSI，溫度為100°F，收集超濾濃縮物加3倍量溫水重復超濾過程，共重復五次，濾除乳糖、礦物質和其他可溶性物質，收集超濾濃縮物，冷凍貯存。
取1克固定的冷凍干燥超濾濃縮物溶解在100ml溶液中，溶液內甲醇∶甲酸∶水＝70∶20∶10，溶液采用超聲波混合4小時，再冷凍4小時，然后以1000克的離心力，在4℃溫度下離心25分鐘，過濾上清液，用旋轉或蒸發(fā)干燥成干粉，內含豐富的抗腫瘤天然營養(yǎng)成份。
實施例2體外觀察抑制腫瘤細胞生長作用P388白血病細胞接種在15ml帶10％FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液內，在32℃溫度下培養(yǎng)48小時，48小時后，非接觸生長的細胞從培養(yǎng)瓶中移除，并加入新的培養(yǎng)液，培養(yǎng)瓶內細胞濃度為10.sup.6cells/ml，用RPMI稀釋到10.sup.5cells/ml，每48小時更換一次帶10％FBS的新鮮RPMI 1640培養(yǎng)液，在培養(yǎng)96小時后，在培養(yǎng)基內加入實施例1制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑2mg，繼續(xù)培養(yǎng)96小時，用倒置顯微鏡觀察，加入抗腫瘤天然營養(yǎng)劑的培養(yǎng)基內的98％～100％的P388白血病細胞被殺滅，而對照組P388白血病細胞則生長正常。
權利要求
1.本發(fā)明涉及-種抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，尤其涉及一種從牛奶乳清中制備的具有抗腫瘤作用的生物活性物質的方法，可廣泛應用于防治多種惡性腫瘤，其特征是，以牛奶為原料，用酸劑調PH至4.6～4.8，加熱凝固酪蛋白，以離心或過濾方式去除已凝固的酪蛋白，加熱凝集乳清蛋白，采用離心方式去除，收集的上清液用超濾方式反復過濾濃縮，冷凍干燥制備富含具有抗腫瘤作用的膽固醇合成抑制劑，應用于防治多種惡性腫瘤。
2.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，牛奶以離心方式脫脂，用酸劑調PH至4.6～4.8，加熱35℃～50℃，持續(xù)20～40分鐘，使酪蛋白凝集，用離心方式或濾布過濾方式去除已凝集的酪蛋白，離心速度4,000～6,000rpm/分，離心時間為10～30分鐘，收集已去除酪蛋白的乳清加熱至80℃～100℃，維持30～60分鐘，然后降溫至2℃～8℃，維持約10～12小時，沉淀乳清蛋白，用分子量為0.1～0.4mu.m的微濾膜濾除已凝集的乳清蛋白。
3.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，已去除乳清蛋白的上清液，用分子量為500～1,000D的超微濾膜，在交錯切面流體超濾設備上進行超濾分離濃縮，超濾濃縮物反復加雙蒸餾水稀釋后繼續(xù)超濾分離濃縮，重復4～6次，超濾分離時溫度在100～120°F，超濾濃縮物可以貯存在冷凍環(huán)境下保存，進行進一步分離，或直接進行冷凍干燥制備冷凍干粉，內含豐富的具有抗腫瘤作用的膽固醇合成抑制劑。
4.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，為了獲得更高純度的制劑，可以采用層析柱進行進一步分離，將超濾濃縮物過柱，用硫磺酸溶液洗脫后，洗脫液冷凍干燥，獲得更高純度的產品。
5.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的具有抑制惡性腫瘤細胞生長作用的天然營養(yǎng)成分，是羥基茂酸鹽轉化為膽固醇的抑制劑，通過抑制內源性膽固醇合成，阻礙腫瘤細胞膜生成，從而抑制腫瘤細胞生長，它存在于牛奶中，分子量約165～230，通常粘附在牛奶的蛋白腙-蛋白胨碎片上，不會被透析，屬于一種水溶性物質，在酸性環(huán)境下穩(wěn)定，具有抑制膽固醇合成的功能。
6.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的具有抑制腫瘤細胞生長作用的天然營養(yǎng)成分，用紫外光譜儀測試時，在中性或酸性環(huán)境下，最大吸收波長為207nm和278nm，在基礎溶液中為223nm和290nm，在Biorad Aminex 87 WX樹脂層析柱(30cm.times.7.9mm)上采用高效液相層析術，用0.05 NH.Sub.2 So.sub.4作為流動相，以0.7ml/每分鐘的流速洗脫時，其生物活性高峰在洗脫儲留時間約7.0～8.0分鐘。
7.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，發(fā)揮其有效作用的劑量為1～10mg/每公斤體重/每天，最好的劑量為2～4mg/每公斤體重/每天，對于一個體重70公斤的成年人來說，每天的劑量約70mg～700mg，施用的最好途徑是口服，可以單獨應用，或聯合其他抗腫瘤藥物聯合應用，長期應用無毒副作用。
8.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，可以直接服用，制備成口服液服用，或與其他醫(yī)藥等級的輔料混合后，制備成片劑、膠囊劑、沖劑、丸劑、軟膠囊劑、乳劑、水劑、散劑、油劑應用，還可以作為食品添加劑制備強化型食品應用，包括但不限于奶粉、奶茶、速溶茶、速溶咖啡、餅干、糕點、果凍、布丁等。
9.按照權利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術特征是，本發(fā)明方法制備的抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，可以應用于預防和治療多種惡性腫瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、支氣管肺癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、黑色素瘤和乳腺癌等，既可以用來預防腫瘤的發(fā)生，也可以與化療、放療聯合治療各種腫瘤，尤其可以用來治療手術后的腫瘤病人，防止腫瘤細胞轉移和復發(fā)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤天然營養(yǎng)劑，尤其涉及一種從牛奶乳清中制備的具有抗腫瘤作用的生物活性物質的方法，可廣泛應用于防治多種惡性腫瘤，其特征是，以牛奶為原料，用酸劑調pH至4.6～4.8，加熱凝固酪蛋白，以離心或過濾方式去除已凝固的酪蛋白，加熱凝集乳清蛋白，采用離心方式去除，收集的上清液用超濾方式反復過濾濃縮，冷凍干燥制備富含具有抗腫瘤作用的膽固醇合成抑制劑，應用于防治多種惡性腫瘤。
文檔編號A61K9/00GK1557472SQ200410016110
公開日2004年12月29日 申請日期2004年2月4日 優(yōu)先權日2004年2月4日
發(fā)明者高春平 申請人:高春平