專利名稱：化學(xué)方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及嘧啶衍生物，它們的鹽和溶劑化物以及它們的制備方法。本發(fā)明尤其涉及二氨基取代的嘧啶、它們的無水、水合和鹽形式以及它們的制備方法。
血管生成過程是由預(yù)先存在的脈管系統(tǒng)發(fā)育新血管，正常的血管生成在由胚胎發(fā)育至成熟的組織生長時期是活躍的，在成人期則進(jìn)入相對靜止的時期。同樣，正常血管生成在創(chuàng)傷康復(fù)期和在女性生殖周期的某些階段被活化。不適當(dāng)或病態(tài)血管生成與若干疾病癥狀，包括各種視網(wǎng)膜病、局部缺血疾病、動脈硬化、慢性炎性疾病和癌癥有關(guān)。在疾病癥狀中血管生成的作用在例如Fan等，Trends in PharmacolSci.1654-66；Shawver等DDT Vol.2，No.2 February 1997；Folkmann，1995，Naturemedicine 127-31中討論。
血管生成過程的中樞是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和其受體，稱為血管內(nèi)皮生成因子受體(VEGFR)。VEGF和VEGFR在固體腫瘤的血管形成、造血癌癥的進(jìn)展和血管滲透性的調(diào)節(jié)中所起的作用在科學(xué)界引起了很大興趣。VEGF是多肽，它與不適當(dāng)或病態(tài)的血管生成相關(guān)聯(lián)(Pinedo，H.M.等The Oncologist，Vol.5，No.90001，1-2，April2000)。VEGFR是蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)，它催化包含在細(xì)胞生長、區(qū)分和生存調(diào)節(jié)中的蛋白質(zhì)中特定酪氨酸殘基的磷酸化過程。(A.F.Wilks，Progress ingrowth Factor Research，1990，2，97-111；S.A.Courtneidge，Dev.Supp.1，1993，57-64；J.A.Cooper，Semin.Cell Biol.，1994，5(6)，377-387； R.F.Paulson，Semin.Immunol.，1995，7(4)，267-277；A.C.Chan，Curr.Opin.Immunol.，1996，8(3)，394-401)。
尤其感興趣的是VEGFR2，它是首次在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的橫跨膜受體PTK，VEGF-2被VEGF的活化是引發(fā)腫瘤血管生成的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)鍵步驟。VEGF表達(dá)將構(gòu)成腫瘤細(xì)胞，也能向上調(diào)節(jié)對某些刺激的響應(yīng)。一種該刺激物是缺氧癥，其中在腫瘤和相關(guān)的宿主組織中VEGF表達(dá)向上調(diào)節(jié)。VEGF配體通過結(jié)合于其細(xì)胞外VEGF細(xì)胞結(jié)合位活化VEGFR2，這導(dǎo)致VEGFR的受體二聚和在VEGFR2的細(xì)胞內(nèi)激酶域中酪氨酸殘基的自磷酸化。激酶域操作將磷酸鹽由ATP轉(zhuǎn)移到酪氨酸殘基，從而提供用于VEGFR-2信號蛋白質(zhì)下游的結(jié)合位，最終導(dǎo)致血管生成。(Ferrara and Davis-Smyth，Endocrine Reviews，18(1)4-25，1997；mcMahon，g.，The Oncologist，Vol.5，No.90001，3-10，April 2000.)。
因此，VEGFR2激酶域的對抗作用將阻斷酪氨酸殘基的磷酸化，用于中斷血管生成的引發(fā)。在VEGFR2激酶域的ATP結(jié)合位的抑制尤其將防止ATP結(jié)合，避免酪氨酸殘基的磷酸化。因而這種與VEGFR2有關(guān)的前血管生成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的中斷將抑制腫瘤血管生成，從而提供癌癥和其它與不適當(dāng)血管生成有關(guān)的疾病的有效治療。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了二氨基取代的嘧啶、它們的鹽和溶劑化物以及它們的制備方法。該嘧啶衍生物是VEGFR2活性抗氧劑，用于治療疾病，包括與不適當(dāng)血管生成有關(guān)的癌癥。

發(fā)明內(nèi)容
在一個方面，本發(fā)明提供制備式(R)化合物的方法 其包括步驟使式(Q)化合物
與烷基化劑反應(yīng)，其中X1是氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或C1-C4羥基烷基；X2是C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或芳烷基；和X3是氫或鹵素。
在第二方面，本發(fā)明提供制備式(I)化合物的方法 其包括步驟使式(Q’)化合物 與烷基化劑反應(yīng)以制備式(R’)化合物，
其中X1是氫或C1-C4烷基；X2是C1-C4烷基或芐基；X4是氫或C1-C4烷基；Q1是A1或A2；當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、C1-C4烷氧基，和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
在第三方面，本發(fā)明提供制備式(I)化合物的方法 其包括步驟(i)使式(Q’)化合物
與烷基化劑反應(yīng)以制備式(R’)化合物， ；和(ii)將式(R’)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)化合物，所述轉(zhuǎn)化步驟包括與式(A’)化合物縮合和隨后與式(A”)化合物縮合 其中X1是氫或C1-C4烷基；X2是C1-C4烷基或芐基；X4是氫或C1-C4烷基；Q1是A1或A2；當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、C1-C4烷氧基，和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中
Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
發(fā)明詳述用于本文的術(shù)語“有效量”是指藥物或藥物制劑的數(shù)量，它將引起被例如研究者或臨床醫(yī)生察覺的組織、系統(tǒng)、動物或人體的生理學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)。此外，術(shù)語“治療有效量”是指任何數(shù)量，它與未接受該數(shù)量的相應(yīng)患者相比，產(chǎn)生疾病、癥狀或副作用的改善治療、康復(fù)、預(yù)防或減輕，或降低疾病或癥狀的進(jìn)展速率。在其范圍數(shù)量內(nèi)該術(shù)語還包括有效提高正常生理機(jī)能。
用于本文的術(shù)語“低級”是指含有1-6個碳的基團(tuán)。
用于本文的術(shù)語“烷基”是指含有1-12個碳原子，任選被取代基取代的直鏈或支鏈烴基，取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫基(sulfan基)、低級烷基亞磺酰基、低級烷基磺酰基、氧代、巰基、被烷基任選取代的氨基、羧基、被烷基任選取代的氨基甲?；?、被烷基任選取代的氨基磺?；?、硝基或低級全氟烷基，多程度的取代是允許的。用于本文的“烷基”的實例包括，但不限于，正丁基、正戊基、異丁基和異丙基等。
用于本文的術(shù)語“C1-C4烷基”是指如上定義的烷基，它含有至少1個，至多4個碳原子，用于本發(fā)明的“C1-C4烷基”的實例包括，但不限于，甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基和正丁基。同樣，術(shù)語“C1-C3烷基”是指如上定義的烷基，它分別含有至少1個，至多3個碳原子，用于本發(fā)明的“C1-C3烷基”的實例包括甲基、乙基、正丙基和異丙基。
用于本文的術(shù)語“亞烷基”是指含有1-10個碳原子，任選被取代基取代的直鏈或支鏈烴基，取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫基、低級烷基亞磺?；⒌图壨榛酋；?、氧代、羥基、巰基、被烷基任選取代的氨基、羧基、被烷基任選取代的氨基甲酰基、被烷基任選取代的氨基磺酰基、硝基、氰基、鹵素和低級全氟烷基，多程度的取代是允許的。用于本文的“亞烷基”的實例包括，但不限于，亞甲基、亞乙基、亞正丙基、亞正丁基等。
用于本文的術(shù)語“C1-C4亞烷基”是指如上定義的亞烷基，它分別含有至少1個，至多4個碳原子，用于本發(fā)明的“C1-C4亞烷基”的實例包括，但不限于，亞甲基、亞乙基、亞正丙基和亞正丁基。
用于本文的術(shù)語“鹵素”或“鹵代”是指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)或碘(-I)。
用于本文的術(shù)語“C1-C4鹵代烷基”是指含有至少1個，至多4個碳原子被至少一個鹵素取代的直鏈或支鏈烴基，鹵素是如上定義的。用于本發(fā)明的直鏈或支鏈“C1-C4鹵代烷基”的實例包括，但不限于，分別被一個或多個鹵素，例如氟、氯、溴和碘取代的甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基和正丁基。
同樣，術(shù)語“C1-C3鹵代烷基”是指分別含有至少1個，至多3個碳原子被至少一個鹵素取代的直鏈或支鏈烴基，鹵素是如上定義的。用于本發(fā)明的直鏈或支鏈“C1-C3鹵代烷基”的實例包括，但不限于，分別被一個或多個鹵素，例如氟、氯、溴和碘取代的甲基、乙基、正丙基和異丙基。
用于本文的術(shù)語“羥基”是指基團(tuán)-OH。
用于本文的術(shù)語“C1-C4羥基烷基”是指含有至少1個，至多4個碳原子被至少一個羥基取代的直鏈或支鏈烴基，羥基是如上定義的。用于本發(fā)明的直鏈或支鏈“C1-C4羥基烷基”的實例包括，但不限于，分別被一個或多個羥基取代的甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基和正丁基。
用于本文的術(shù)語“C3-C7環(huán)烷基”是指含有3-7個碳原子的非芳環(huán)烴基，它任選包括通過其連接的C1-C4烷基亞烷基。舉例性的“C3-C7環(huán)烷基”包括，但不限于，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
用于本文的術(shù)語“雜環(huán)”或術(shù)語“雜環(huán)基”是指飽和的或帶有一個或多個不飽和度，含有一個或多個選自S、SO、SO2、O或N的雜原子取代的，任選被取代基取代的3-12元非芳香環(huán)，取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫基、低級烷基亞磺?；?、低級烷基磺酰基、氧代、羥基、巰基、被烷基任選取代的氨基、羧基、被烷基任選取代的氨基甲?；?、被烷基任選取代的氨基磺?；?、硝基、氰基、鹵素或低級全氟烷基，多程度的取代是允許的。該環(huán)可以任選稠合于一個或多個其它“雜環(huán)”環(huán)或環(huán)烷基環(huán)?！半s環(huán)”的實例包括，但不限于，四氫呋喃、吡喃、1，4-二氧雜環(huán)己烷、1，3-二氧雜環(huán)己烷、哌啶、吡咯烷、嗎啉、四氫硫代吡喃、四氫噻吩等。
用于本文的術(shù)語“芳基”是指任選取代的苯環(huán)或稠合于一個或多個任選取代苯環(huán)以形成例如蒽、菲或萘環(huán)系的任選取代的苯環(huán)系。舉例性的任選取代基包括低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫基、低級烷基亞磺?；?、低級烷基磺?；⒀醮?、羥基、巰基、被烷基任選取代的氨基、羧基、四唑基、被烷基任選取代的氨基甲?；?、被烷基任選取代的氨基磺?；?、?；?、芳酰基、雜芳?；?、酰氧基、芳酰氧基、雜芳酰氧基、烷氧基羰基、硝基、氰基、鹵素、低級全氟烷基、雜芳基或芳基，多程度的取代是允許的?！胺蓟钡膶嵗?，但不限于，苯基、2-萘基、1-萘基、聯(lián)苯基以及它們的取代衍生物。
用于本文的術(shù)語“芳烷基”是指通過低級亞烷基鏈連接的本文定義的芳基或雜芳基，包括未取代和取代的物質(zhì)，其中低級亞烷基是如本文定義的。用于本文的術(shù)語“雜芳烷基”包括在術(shù)語“芳烷基”的范圍內(nèi)。術(shù)語雜芳烷基定義為通過低級亞烷基鏈連接的本文定義的雜芳基，低級亞烷基如本文定義。包括“雜芳烷基”的“芳烷基”的實例包括，但不限于，未取代和取代的芐基、苯基丙基、2-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基、3-異噁唑基甲基、5-甲基-3-異噁唑基甲基、2-咪唑基己基。取代的物質(zhì)，例如取代的芐基被在上述芳基和雜芳基定義中提到的任選取代基的至少一個基團(tuán)取代。
用于本文的術(shù)語“芳基氨基”是指通過氨基-NR2-連接的本文定義的芳基或雜芳基，其中R2是如本文定義的。
用于本文的術(shù)語“雜芳基”是指單環(huán)5-7元芳環(huán)，或指含有兩個這種單環(huán)5-7元芳環(huán)的稠合雙環(huán)芳香環(huán)系。這些雜芳基環(huán)含有一個或多個氮、硫和/或氧雜原子，其中N-氧化物和硫氧化物和二氧化物是可允許的雜原子取代，可被至多3個取代基任選取代，取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基硫基、低級烷基亞磺酰基、低級烷基磺?；?、氧代、羥基、巰基、被烷基任選取代的氨基、羧基、四唑基、被烷基任選取代的氨基甲?；?、被烷基任選取代的氨基磺酰基、?；?、芳酰基、雜芳?；?、酰氧基、芳酰氧基、雜芳酰氧基、烷氧基羰基、硝基、氰基、鹵素、低級全氟烷基、雜芳基或芳基，多程度的取代是允許的。用于本文的“雜芳基”的實例包括呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、吡唑、三唑、四唑、噻唑、噁唑、異噁唑、噁二唑、噻二唑、異噻唑、吡啶、噠嗪、吡嗪、嘧啶、喹啉、異喹啉、苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、吲唑和其取代的物質(zhì)。
用于本文的術(shù)語“烷氧基”是指基團(tuán)RaO-，其中Ra是如上定義的烷基，和術(shù)語“C1-C2烷氧基”是指基團(tuán)RaO-，其中Ra是如上定義的C1-C2烷基。
用于本文的術(shù)語“鹵代烷氧基”是指基團(tuán)RaO-，其中Ra是如上定義的鹵代烷基，和術(shù)語“C1-C2鹵代烷氧基”是指基團(tuán)RaO-，其中Ra是如上定義的C1-C2鹵代烷基。
用于本文的術(shù)語“芳烷氧基”是指基團(tuán)RbRaO-，其中Ra是亞烷基，Rb是芳基，均如上定義。
用于本文的術(shù)語“烷基硫基”是指基團(tuán)RaS-，其中Ra是如上定義的烷基。
用于本文的術(shù)語“烷基亞磺酰基”是指基團(tuán)RaS(O)-，其中Ra是如上定義的烷基。
用于本文的術(shù)語“烷基磺?；笔侵富鶊F(tuán)RaSO2-，其中Ra是如上定義的烷基。
用于本文的術(shù)語“氧代”是指基團(tuán)＝O。
用于本文的術(shù)語“巰基”是指基團(tuán)-SH。
用于本文的術(shù)語“羧基”是指基團(tuán)-COOH。
用于本文的術(shù)語“氰基”是指基團(tuán)-CN。
用于本文的術(shù)語“氰基烷基”是指基團(tuán)-RaCN，其中Ra是如上定義的C1-C3亞烷基。用于本發(fā)明的舉例性“氰基烷基”包括，但不限于，氰基甲基、氰基乙基和氰基丙基。
用于本文的術(shù)語“氨基磺?；笔侵富鶊F(tuán)-SO2NH2。
用于本文的術(shù)語“氨基甲?；笔侵富鶊F(tuán)-C(O)NH2。
用于本文的術(shù)語“硫基”是指基團(tuán)-S-。
用于本文的術(shù)語“亞磺酰基”是指基團(tuán)-S(O)-。
用于本文的術(shù)語“磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O)2-或-SO2-或-S(O2)。
用于本文的術(shù)語“酰基”是指基團(tuán)RaC(O)-，其中Ra是本文定義的烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
用于本文的術(shù)語“芳?；笔侵富鶊F(tuán)RaC(O)-，其中Ra是本文定義的芳基。
用于本文的術(shù)語“雜芳?；笔侵富鶊F(tuán)RaC(O)-，其中Ra是本文定義的雜芳基。
用于本文的術(shù)語“烷氧基羰基”是指基團(tuán)RaOC(O)-，其中Ra是本文定義的烷基。
用于本文的術(shù)語“酰氧基”是指基團(tuán)RaC(O)O-，其中Ra是本文定義的烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
用于本文的術(shù)語“芳酰氧基”是指基團(tuán)RaC(O)O-，其中Ra是本文定義的芳基。
用于本文的術(shù)語“雜芳酰氧基”是指基團(tuán)RaC(O)O-，其中Ra是本文定義的雜芳基。
用于本文的術(shù)語“任選”是指隨后描述的事件可或可不發(fā)生，包括發(fā)生事件和不發(fā)生事件。
用于本文的術(shù)語“生理學(xué)官能衍生物”是指本發(fā)明化合物的任何可藥用的衍生物，例如酯或酰胺，在向哺乳動物給藥時，能夠提供(直接或間接)本發(fā)明的化合物或其活性代謝物。該衍生物對本領(lǐng)域技術(shù)人員是清楚的，無需不適當(dāng)?shù)膶嶒?，參考Burger′smedicinal ChemistryAnd Drug Discovery，第5t版，Vol 1Principles and Practice的教導(dǎo)，列為本文作為參考其教導(dǎo)生理學(xué)官能衍生物的范圍。
用于本文的術(shù)語“溶劑化物”是指通過溶質(zhì)(在本發(fā)明中式(I)化合物或其鹽或生理學(xué)官能衍生物)和溶劑形成的各種化學(xué)計算配合物。用于本發(fā)明的溶劑不會干擾溶質(zhì)的生物活性。合適溶劑的實例包括，但不限于，水、甲醇、乙醇和乙酸。優(yōu)選使用的溶劑是可藥用的溶劑，合適可藥用的溶劑的實例包括水、乙醇和乙酸。最優(yōu)選使用的溶劑是水。
式(I)化合物具有結(jié)晶成超過一種形式的能力，一種稱為多晶現(xiàn)象的特性，應(yīng)理解該多晶型物在式(I)的范圍內(nèi)。多晶現(xiàn)象通?？勺鳛轫憫?yīng)于溫度或壓力或兩者的變化而發(fā)生，還可由于結(jié)晶過程的變化而產(chǎn)生。多晶型物可通過各種現(xiàn)有技術(shù)中已知的物理特征，例如X-射線衍射圖、溶解性和熔點區(qū)別。
用于本文的術(shù)語“取代的”是指被指定的取代基或指定的多個取代基取代，多程度的取代是允許的，除非另有說明。
本文描述的某些化合物可含有一個或多個手性原子，或另外能夠存在兩種對映體。因此，本發(fā)明的化合物包括對映體混合物以及純對映體或?qū)τ丑w富集的混合物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)同樣包括如上式(I)表示的化合物的單個異構(gòu)體以及其任何全部或部分平衡的混合物。本發(fā)明還包括上述通式表示的化合物的單個異構(gòu)體，作為與其一個或多個手性中心被轉(zhuǎn)化的異構(gòu)體的混合物。
還應(yīng)注意式(I)化合物可形成互變異構(gòu)體，應(yīng)理解式(I)化合物的所有互變異構(gòu)體和化合物互變異構(gòu)體的混合物包括在本發(fā)明的范圍中。
本發(fā)明包括制備式(R)化合物的方法 通常X1是氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或C1-C4羥基烷基；優(yōu)選X1是C1-C4烷基；更優(yōu)選X1是甲基；X2是C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或芳烷基；優(yōu)選X2是C1-C4烷基或芳烷基。在一優(yōu)選實施方案中，X2是芐基。在另一優(yōu)選實施方案中，X2是甲基或己基，優(yōu)選甲基。
X3是氫或鹵素，優(yōu)選氫。
在一實施方案中，式(R)是
式R化合物通過使式(Q)化合物 與烷基化劑反應(yīng)制備。
式(Q)的X1和X2是如上述式(R)中所述。
用于式(Q)化合物的N-2烷基化條件通常是適合于進(jìn)行該N-2烷基化的任何條件。合適的烷基化劑例如在Encyclopedia of Reagentsfor Organic Synthesis；Paquette，L.A.，Ed.；John Wiley Et Sons，1995中描述。實例包括，但不限于，(1)使式(Q)化合物與三烷基氧鎓鹽，例如三甲基氧鎓或三乙基氧鎓鹽在有機(jī)溶劑，例如丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯和硝基甲烷中反應(yīng)，尤其三甲基氧鎓鹽，例如三甲基氧鎓四氟硼酸鹽和三乙基氧鎓鹽，例如三乙基氧鎓四氟硼酸鹽(Meerwein鹽)可用作合適的烷基化劑(該三烷基氧鎓鹽是本領(lǐng)域已知的)；(2)使式(Q)化合物與硫酸和硫酸二甲酯在有機(jī)溶劑，例如DMSO和二氯甲烷中反應(yīng)；和(3)使式(Q)化合物與三甲基原甲酸酯和三氟化硼醚(就地形成的Borsch試劑)在有機(jī)溶劑，例如二氯甲烷中反應(yīng)。
本發(fā)明還包括制備式(I)化合物的方法
X1是氫或C1-C4烷基；優(yōu)選C1-C4烷基；更優(yōu)選甲基。
X2是C1-C4烷基或芐基；優(yōu)選甲基、乙基或芐基；更優(yōu)選甲基。
X4是氫或C1-C4烷基；優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選甲基。
Q1是A1或A2；其中當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；優(yōu)選當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、-O(C1-C4烷基)，優(yōu)選A1是C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基或-O(C1-C4烷基)，更優(yōu)選A1是C1-C3烷基，最優(yōu)選甲基和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
在一實施方案中，Q1是A2和Q2是A1；A1是H，m是1和A2是-(Z)m-(Z1)-(Z2)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別是氫；Z1是S(O)2和Z2是C1-C4烷基，優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選甲基。
在一實施方案中，Q1是A1時，Q2是A2，A1是C1-C4烷基，優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選甲基，m是0，和A2是由-(Z1)-(Z2)；其中Z1是S(O)2和Z2是NR1R2，其中R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；其中R3是如上定義的；優(yōu)選R1和R2分別選自氫或甲基；優(yōu)選每個R1和R2是氫。
在另一實施方案中，制備式(I)化合物的方法包括步驟(i)使式(Q’)化合物 與烷基化劑反應(yīng)以制備式(R’)化合物， X1、X2和烷基化劑是如上定義的。
該方法還可含有步驟(ii)，其中通過與式(A’)化合物縮合和隨后與式(A”)化合物縮合，式(R’)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)化合物 Q1和Q2是如上定義的。
在另一實施方案中，方法包括另一步驟(ii’)還原式(R’)化合物成式(R”)化合物
該步驟(ii’)通常在步驟(ii)之前或與步驟(ii)同時進(jìn)行。
在另一實施方案中，方法包括另一步驟(iii’)烷基化式(S)化合物成式(T)化合物 如方案1中所示，該步驟(ii’)通常在第二縮合步驟之前或與第二縮合步驟同時進(jìn)行。烷基化采用本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行，參見Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis；Paquette，L.A.，Ed.；John Wiley Et Sons，1995，在方案1和如下實施例中進(jìn)一步描述。
在另一實施方案中，方法包括另一步驟(iii)將式(I)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)化合物的鹽和/或溶劑化物形式。
方案1描述制備式(I)化合物的方法。取代的6-硝基吲唑Q’用合適的烷基化劑(參見如上)進(jìn)行烷基化反應(yīng)得到N2-烷基化的硝基吲唑R’，使用標(biāo)準(zhǔn)條件(例如SnCl2，含水酸或10％Pd/C、甲醇、甲酸銨)還原硝基，隨后與2，4-二氯嘧啶縮合得到氯嘧啶S。在合適烷基化條件下(例如Mel，Cs2CO3或NaH，DMF)烷基化雙芳基胺的氮得到中間體T，它隨后與合適取代的苯胺(A”)進(jìn)行隨后的縮合得到式(I)化合物，X1、X2、X4、Q1和Q2是如上定義的。
方案1 在另一方面，本發(fā)明提供式(I)化合物 或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物
其中X1是氫、C1-C4烷基、C1-C4羥基烷基；X2是C1-C4烷基或芐基；X4是氫或C1-C4烷基；Q1是A1或A2；當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、-O(C1-C4烷基)，和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
在一實施方案中，X1是氫或C1-C4烷基；優(yōu)選C1-C4烷基；更優(yōu)選甲基。
在一實施方案中，X2是C1-C4烷基或芐基；優(yōu)選甲基、乙基或芐基；更優(yōu)選甲基。
在一實施方案中，X4是氫或C1-C4烷基；優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選甲基。
在一實施方案中，Q1是A1或A2；其中當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；優(yōu)選當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、-O(C1-C4烷基)，優(yōu)選A1是C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基或-O(C1-C4烷基)，更優(yōu)選A1是C1-C3烷基，最優(yōu)選甲基和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；
Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
在一實施方案中，Q1是A2和Q2是A1；A1是H，m是1和A2是-(Z)m-(Z1)-(Z2)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別是氫；Z1是S(O)2和Z2是C1-C4烷基，優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選甲基。
在另一實施方案中，Q1是A1時，Q2是A2，A1是C1-C4烷基，優(yōu)選甲基或乙基，更優(yōu)選甲基，m是0，和A2是由-(Z1)-(Z2)；其中Z1是S(O)2和Z2是NR1R2，其中R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；其中R3是如上定義的；優(yōu)選R1和R2分別選自氫或甲基；優(yōu)選每個R1和R2是氫。
在另一實施方案中，其提供用于制備式(I)化合物的中間體的化合物2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑 2，3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑 N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺
和N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺 盡管用于治療時治療有效量的式(I)化合物及其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物可能作為原化學(xué)物質(zhì)給藥，但它可以是藥物組合物中存在的活性成分。因此，本發(fā)明還提供藥物組合物，其包括治療有效量的式(I)化合物和其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物，和一種或多種可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑。式(I)化合物和其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物是如上所述的，載體、稀釋劑或賦形劑從與配方中的其它成分相容考慮必須是可接受的，對患者是無害的。根據(jù)另一方面，本發(fā)明還提供了制備藥物組合物的方法，其包括混合式(I)化合物和其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物與一種或多種可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑。
藥物制劑可以每單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式存在，根據(jù)所治療的癥狀、給藥途徑和患者的年齡、體重和癥狀，該單位可含有，例如0.5mg-1g，優(yōu)選1mg-700mg式(I)化合物。優(yōu)選的單位劑量制劑可以是含有本文所述的或其合適部分的活性成分的日劑量或亞劑量。此外，該藥物制劑可通過制藥領(lǐng)域已知的任何方法制備。
藥物制劑可適合于通過合適途徑，例如通過口服(包括頰或舌下)、直腸、鼻、局部(包括頰、舌下或經(jīng)皮)、鞘內(nèi)或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))途徑給藥。該制備可通過制藥領(lǐng)域的任何已知方法制備，例如使活性成分與載體或賦形劑混合。
適合于口服給藥的藥物制劑可作為分散的單位，例如膠囊或片劑；粉劑或顆粒；在含水或非水液體中的溶液或懸浮液；食用泡沫或whips；或油包水乳液或水包油乳液存在。
例如，對于口服給藥的片劑或膠囊形式，活性藥物組分可與口服、無毒可藥用的惰性載體，例如乙醇、甘油、水等混合。粉末通過粉碎化合物至合適的細(xì)尺寸，并與類似粉碎的藥物載體，例如食用碳水化合物，例如淀粉或甘露糖醇混合制備，還可存在矯味劑、防腐劑、分散劑或色素。
膠囊通過制備如上所述的粉末混合物，填充入成型的明膠外殼制備。增滑和潤滑劑，例如膠體氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇可在填充操作前加入粉末混合物中。也可加入崩解劑或增溶劑，例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉以改善膠囊消化藥物的可利用度。
此外，如果需要或必需，合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和色素也可加入混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖類，例如葡萄糖或β-乳糖、玉米增甜劑、天然和合成橡膠，例如阿拉伯樹膠、黃著膠或藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。用于該單位劑量的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括，但不限于，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。片劑通過例如制備粉末混合物，造?；蜃矒?、加入潤滑劑和崩解劑和壓制成片配制。粉末混合物通過混合合適粉碎的化合物與如上所述的稀釋劑或基質(zhì)，和任選的粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠或聚乙烯基吡咯烷酮、溶液抑制劑，例如石蠟、再吸收加速劑，例如季鹽和/或吸收劑，例如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣制備。粉末混合物可通過用粘合劑，例如糖漿、淀粉漿、acadia膠水或纖維素或聚合物溶液增濕，壓制通過篩子造粒。作為另一種造粒方法，粉末混合物可通過壓片機(jī)，結(jié)果未完全成形的小塊破碎成顆粒。通過加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油，可潤滑顆粒以避免粘附于壓片模子中，潤滑的混合物隨后壓制成片。本發(fā)明的化合物還可與自由流動的惰性載體混合，無需經(jīng)過造?；蜃矒舨襟E直接壓制成片?？商峁┯上x漆的密封涂層、糖類或聚合物涂層和石蠟光澤涂層組成的透明或遮光保護(hù)涂層，在這些涂層中可加入染料以區(qū)分不同的單位劑量。
口服溶液，例如溶液、糖漿和酏劑可以單位劑量形式制備，從而一定的數(shù)量含有預(yù)定數(shù)量的化合物。糖漿可通過將化合物溶解在合適的加入調(diào)味劑的水溶液中制備，而酏劑通過使用無毒醇載體制備。懸浮液可通過將化合物分散在無毒載體中配制，還可加入增溶劑和乳化劑，例如乙氧基化異硬脂基醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚，防腐劑、香料添加劑，例如薄荷油或天然增甜劑或糖精或其它人造增甜劑等。
如果需要，用于口服給藥的單位劑量制劑可以是微膠囊的，制劑還可制備成延長或延遲釋放，例如通過涂覆或?qū)⑽⒘Ｎ镔|(zhì)埋藏在聚合物、石蠟等中。
式(I)化合物和其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物還可配制成脂質(zhì)體供給體系，例如小單層囊、大單層囊和多層囊。脂質(zhì)體可由各種磷脂，例如膽固醇、硬脂基胺或卵磷脂形成。
式(I)化合物和其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物還可通過使用偶合化合物分子的單克隆抗體作為單獨的載體供給?；衔镞€可與用作靶向給藥載體的溶解性聚合物偶合，該聚合物可包括聚乙烯基吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥基乙基天冬酰胺苯酚或被棕櫚酰殘基取代的聚氧乙烯多熔素。此外，化合物可與一種可生物降解的聚合物偶合以獲得可控的藥物釋放，例如聚乳糖、polepsilon己內(nèi)酯、多羥基丁酸、聚原酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或兩性分子嵌段共聚物。
適用于皮內(nèi)給藥的藥物制劑可作為分散片存在，它用于保持與患者的表皮緊密接觸延長的時間。例如活性成分可如PharmaceuticalResearch，3(6)，318(1986)中一般描述的那樣，通過離子電滲療法由片供給。
適用于局部給藥的藥物制劑還配制成軟膏、乳油、懸浮液、洗液、粉劑、溶液、漿狀物、凝膠、噴霧劑、氣溶膠或油。
用于治療眼睛或其它外部組織，例如嘴和皮膚時，制劑優(yōu)選作為局部軟膏或乳液施用。當(dāng)配制成軟膏時，活性成分可與鏈烷烴或水混溶的軟膏基質(zhì)一起使用。此外，活性成分可用水包油乳液基質(zhì)或油包水乳液基質(zhì)配制成乳液。
用于向眼睛局部給藥的藥物制劑包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮在合適載體，尤其是含水溶劑中。
適用于在嘴內(nèi)局部給藥的藥物制劑包括糖錠、錠劑和漱口液。
適用于直腸給藥的藥物制劑可作為栓劑或灌腸劑存在。
適用于鼻內(nèi)給藥其中載體是固體的藥物制劑包括粒度在例如20-500微米范圍的粗粉末，它通過用鼻子吸的方式給藥，即通過由持有靠近鼻子的粉末容器迅速吸入通過鼻道。其中載體是液體的合適制劑是包括活性成分的含水或油溶液的液體，作為鼻噴霧或滴鼻劑給藥。
適用于通過吸入給藥的藥物制劑包括細(xì)微粒粉末或薄霧，它可通過各種類型的計量、劑量加壓氣溶膠、噴霧器或吹入器產(chǎn)物。
適用于鞘內(nèi)給藥的藥物制劑可作為陰道栓劑、棉塞、乳液、凝膠、漿料、泡沫或噴霧制劑存在。
適用于腸胃外給藥的藥物制劑包括含水或非水無菌注射液，它可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使制劑與所需患者的血液等滲的溶質(zhì)；和含水和非水無菌懸浮液，它可包括懸浮劑和增稠劑。制劑可在單位劑量或多劑量容器，例如密封的安瓿和小瓶中存在，可以凍干狀態(tài)存在，它在使用前僅需要即時加入用于注射的無菌液體載體，例如水。臨時的溶液和懸浮液可由無菌粉末、顆粒和片劑制備。
應(yīng)理解，除上述具體成分外，制劑可包括針對所需制劑本領(lǐng)域常規(guī)的其它成分，例如適用于口服給藥的其它成分可包括調(diào)味劑。
本發(fā)明的治療有效量將取決于許多因素，包括，例如動物的年齡和體重、所需治療的確切癥狀和其嚴(yán)重程度、制劑的性質(zhì)和給藥途徑，最終由在場的醫(yī)師和獸醫(yī)判斷。然而，用于治療腫瘤生長，例如結(jié)腸或乳腺腫瘤的式(I)化合物的有效量通常在每天0.1-100mg/kg患者(哺乳動物)體重范圍，更常用在1-50mg/kg體重范圍內(nèi)。因此，對于70kg成年哺乳動物，每天的實際數(shù)量通常是約70-700mg，該數(shù)量可以每天單一劑量或更常見的是以每天多次(例如2、3、4、5或6)亞劑量給藥使得總?cè)談┝肯嗤?。它們的鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物的有效量可作為式(I)化合物本身的有效量比例確定，可以想象類似劑量將適用于治療上述其它癥狀。
本發(fā)明的化合物和其鹽和溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物可單獨施用或與用于治療上述癥狀的其它治療藥物結(jié)合使用。尤其是，在癌癥治療中，與其它化學(xué)療法、激素或抗體藥物的結(jié)合可以預(yù)料，以及與手術(shù)治療和放射治療的結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明，結(jié)合治療包括給藥至少一種式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，或生理學(xué)官能衍生物，和采用至少一種其它癌癥治療方法。根據(jù)本發(fā)明，結(jié)合治療優(yōu)選包括給藥至少一種式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物，或生理學(xué)官能衍生物，和至少一種其它藥物活性物質(zhì)，優(yōu)選抗腫瘤藥。式(I)化合物和其它藥物活性物質(zhì)可一起或單獨給藥，當(dāng)單獨給藥時，它可同時或以任何順序的先后進(jìn)行。選擇式(I)化合物和其它藥物活性成分的數(shù)量和給藥的相對時間以獲得所需的結(jié)合治療效果。
式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物和至少一種附加癌癥治療可以與該其它抗癌治療任何治療合適結(jié)合同時或依次結(jié)合采用。在一實施方案中，其它抗癌治療是至少一種附加化學(xué)治療，包括給藥至少一種抗腫瘤藥物。根據(jù)本發(fā)明，式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物的結(jié)合給藥可用于(1)包括兩種化合物的單一藥物組合物或(2)分別包括一種化合物的單獨的藥物組合物的同時給藥的組合。此外，結(jié)合可以是以依次的方式單獨給藥，其中首先給藥一種抗腫瘤藥，其次是第二種，反之亦然，該順序給藥可時間較短或時間較長。
抗腫瘤藥可以細(xì)胞周期特異方式引起抗腫瘤效果，即階段特異的，在細(xì)胞周期的特異階段發(fā)生作用，或結(jié)合DNA，以非細(xì)胞周期特異方式發(fā)生作用，即是非細(xì)胞周期特異的，以其它機(jī)理操作。
用于與式I化合物和其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物的抗腫瘤藥包括如下(1)細(xì)胞周期特異抗腫瘤藥包括，但不限于，diterpenoids，例如紫衫醇和其類似的docetaxel；長春花生物堿，例如長春堿、長春新堿、長春地辛和維諾利賓；表鬼臼毒素，例如依托泊苷和表臼噻吩苷；氟嘧啶，例如5-氟尿嘧啶和氟脫氧尿苷；抗代謝物，例如別嘌呤醇、fludurabine、甲氨喋呤、cladrabine、阿糖胞苷、巰基嘌呤和硫鳥嘌呤；和喜樹堿，例如9-氨基喜樹堿、irinotecan、CPT-11和7-(4-甲基哌啶子基-亞甲基)-10，11-亞乙二氧基-20-喜樹堿的各種旋光形式；(2)細(xì)胞毒素化學(xué)治療藥，包括，但不限于，烷基化劑、美法侖、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、二氯甲基二乙胺、六甲基三聚氰胺、白消安、亞硝脲氮芥、羅氮芥和達(dá)卡巴嗪；抗腫瘤抑制劑，例如阿霉素、道諾霉素、表阿霉素、去甲氧柔紅霉素、絲裂霉素-C、更生霉素和光神霉素；和鉑配位化合物，例如順鉑、卡鉑和奧沙利鉑；和(3)其它化學(xué)治療藥，包括，但不限于，抗雌激素藥，例如它莫西芬、托米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene；progestrogens，例如乙酸甲地孕酮；aromatase抑制劑，例如anastrozole、letrazole、伏羅唑和依西美坦；抗雄激素藥，例如氟利坦、尼魯米特、bicalutamide和乙酸環(huán)丙孕酮；LHRH激動劑和拮抗劑，例如乙酸性瑞林和luprolide、睪丸激素5α-二氫還原酶抑制劑，例如非那甾胺；金屬蛋白酶抑制劑，例如marimastat；抗孕激素藥；尿激酶血漿酶原活化劑受體功能抑制劑；環(huán)氧合酶2型(COX-2)抑制劑，例如celecoxib；其它血管生成抑制劑，例如除本文所述的其它VEGFR抑制劑和TIE-2抑制劑；生長因子功能抑制劑，例如肝細(xì)胞生長因子功能抑制劑；erb-B2、erb-B4、表皮生長因子受體(EGFr)、血小板生產(chǎn)的生長因子受體(PDGFr)、纖維原細(xì)胞生長因子受體(FGFr)、除本發(fā)明描述之外的血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)和TIE-2；和其它酪氨酸激酶抑制劑，例如細(xì)胞周期蛋白依賴抑制劑，例如CDK2和CDK4抑制劑。
由于蛋白質(zhì)激酶VEGFR2和它對生長依賴于VEGFR2蛋白質(zhì)激酶活性的選擇細(xì)胞系的效果，式(I)化合物和其鹽、溶劑化物和生理學(xué)官能衍生物被認(rèn)為具有抗癌活性。
因此，本發(fā)明還提供用于醫(yī)學(xué)治療，尤其用于治療由不適當(dāng)VEGFR2活性傳遞的疾病的式(I)化合物和其可藥用的鹽或溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物。
本文所提到的不適當(dāng)VEGFR2活性是偏離具體哺乳動物宿主預(yù)期的正常VEGFR2活性的任何VEGFR2活性，不適當(dāng)?shù)腣EGFR2活性可采取如下形式，例如活性異常增加或VEGFR2活性的定時和/或控制的失常。因此，該不適當(dāng)活性會由例如蛋白質(zhì)激酶或配體的過度表達(dá)或突變而導(dǎo)致受體不適當(dāng)或失控活化而引起。此外，還應(yīng)理解，有害的VEGFR2活性會存在于不正常的來源中，例如癌，即，VEGFR2活性的水平不一定是不正常至所考慮的不適當(dāng)，而是由不正常來源產(chǎn)生的活性。同樣，本文所提到的不適當(dāng)血管生成是偏離具體哺乳動物宿主預(yù)期的正常血管生成活性的任何血管生成活性，不適當(dāng)血管生成可采取如下形式，例如活性異常增加或血管生成活性的定時和/或控制的失常。因此，該不適當(dāng)活性會由例如蛋白質(zhì)激酶或配體的過度表達(dá)或突變而導(dǎo)致血管生成不適當(dāng)或失控活化而引起。此外，還應(yīng)理解，有害的血管生成活性會存在于不正常的來源中，例如癌，即，血管生成活性的水平不一定是不正常至所考慮的不適當(dāng)，而是由不正常來源產(chǎn)生的活性。
本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)、調(diào)整或抑制VEGFR2以避免和/或治療與失調(diào)的VEGFR2活性有關(guān)的疾病的方法。具體地說，本發(fā)明的化合物還可用于治療某些形式的癌癥，此外，本發(fā)明的化合物可用于提供對某些現(xiàn)有癌癥化學(xué)治療和放射治療的附加或協(xié)同效果，和/或用于恢復(fù)某些現(xiàn)有癌癥化學(xué)治療和放射治療的效果。
本發(fā)明的化合物還用于治療在與血管再生和/或血管滲透性相關(guān)的疾病方面以細(xì)胞增殖為特征的一種或多種患病哺乳動物，所述疾病包括血管增生疾病，包括關(guān)節(jié)炎和再狹窄；纖維變性疾病，包括肝硬化和動脈硬化癥；腎小球系膜細(xì)胞增殖疾病，包括血管球性腎炎、糖尿病腎炎、惡性腎硬化、血栓形成微血管綜合癥、增生視網(wǎng)膜病、器官移植排異和腎小球??；和代謝疾病，包括牛皮癬、糖尿病、慢性創(chuàng)傷康復(fù)、炎性和神經(jīng)變性疾病。
本發(fā)明的另一方面提供治療患有由不適當(dāng)VEGFR2活性傳遞的疾病，包括惡性腫瘤的方法，其包括向所述患者給藥有效量的式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物。在優(yōu)選實施方案中，疾病是癌癥。
本發(fā)明的另一方面提供治療患有癌癥的哺乳動物的方法，其包括向所述患者給藥有效量的式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物。
本發(fā)明的另一方面提供式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物在制備用于治療以不適當(dāng)VEGFR2活性為特征的疾病的藥物中的用途。在優(yōu)選實施方案中，疾病是癌癥。
本發(fā)明的另一方面提供式(I)化合物或其可藥用的鹽或溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物在制備用于治療癌癥和惡性腫瘤的藥物中的用途。
需要用本發(fā)明化合物治療的哺乳動物通常是人體。
在另一實施方案中，治療有效量的式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)衍生的衍生物和抑制生長因子受體功能的藥物可同時向哺乳動物給藥以治療由不適當(dāng)VEGFR2活性傳遞的疾病，例如用于治療癌癥。該生長因子受體包括，例如EGFR、FGFR、PDGFR、erbB2、erbB4、VEGFR和/或TIE-2。生長因子受體和抑制生長因子受體功能的藥物在例如Kath，John C.，Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(6)803-818和在Shawver等DDT Vol 2，No.2 February 1997中描述。
式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物和用于抑制生長因子受體功能的藥物可同時或以任何適當(dāng)組合的治療順序結(jié)合使用。根據(jù)本發(fā)明，結(jié)合可用于(1)包括兩種化合物的單一藥物組合物或(2)分別包括一種化合物的單獨的藥物組合物的同時給藥的組合。此外，結(jié)合可以是以依次的方式單獨給藥，其中首先給藥第一種，其次是第二種，反之亦然，該順序給藥可時間較短或時間較長。
在本發(fā)明的另一方面，其提供治療哺乳動物疾病的方法，所述疾病由不適當(dāng)血管生成傳遞，其包括向所述哺乳動物給藥有效量的式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物。在一實施方案中，不適當(dāng)血管生長活性是由于不適當(dāng)VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3或TIE-2活性的至少一種。在另一實施方案中，不適當(dāng)血管生成活性是由于不適當(dāng)VEGFR2和TIE-2活性。在另一實施方案中，方法還包括與本發(fā)明的式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物一起給藥治療有效量的TIE-2抑制劑，優(yōu)選疾病是癌癥。
在本發(fā)明的另一方面，其提供式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物在制備用于治療哺乳動物疾病的藥物中的用途，所述疾病以不適當(dāng)血管生成為特征。在一實施方案中，不適當(dāng)血管生長活性是由于不適當(dāng)VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3或TIE-2活性的至少一種。在另一實施方案中，不適當(dāng)血管生成活性是由于不適當(dāng)VEGFR2和TIE-2活性。在另一方面，用途還包括使用TIE-2抑制劑以制備所述藥物。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)官能衍生物和TIE-2抑制劑的結(jié)合可用于(1)包括兩種化合物的單一藥物組合物或(2)分別包括一種化合物的單獨的藥物組合物的同時給藥的組合。此外，結(jié)合可以是以依次的方式單獨給藥，其中首先給藥第一種，其次是第二種，反之亦然，該順序給藥可時間較短或時間較長。
本發(fā)明的化合物可通過各種方法制備，包括標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)。任何先前定義的變量繼續(xù)具有先前定義的含義，除非另有說明。如下給出說明性一般合成方法，隨后在工作實施例中制備本發(fā)明的具體化合物。
如以下合成方案部分說明，通式(I)化合物可用有機(jī)合成領(lǐng)域的已知方法制備。通常，如下方案使用通式(I)化合物說明，但應(yīng)理解該方案容易地被熟練技術(shù)人員適用于制備式(I)化合物，包括式(I’)和(I”)化合物。還應(yīng)認(rèn)識到在所有如下描述的方案中，應(yīng)理解根據(jù)化學(xué)一般原理，如果需要，采用敏感或活性基團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)根據(jù)有機(jī)合成的標(biāo)準(zhǔn)方法使用(T.W.Green andP.G.M.Wuts(1991)Protectinggroups in Organic Synthesis，JohnWiley Et Sons)。這些基團(tuán)在化合物合成的方便階段采用本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解的方法除去。方法的選擇以及反應(yīng)條件和其完成順序應(yīng)與式(I)化合物的制備一致。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在式(I)化合物中是否存在立體中心。因此，本發(fā)明同時包括可能的立體異構(gòu)體，不僅包括外消旋化合物，而且包括單個的對映體。當(dāng)需要化合物是單一對映體時，它可通過立體特異合成方法得到或通過最終產(chǎn)物或任何方便的中間體拆分得到。最終產(chǎn)物、中間體或原料的拆分可通過本領(lǐng)域已知的合適方法進(jìn)行，參見例如Stereochemistry of OrganicCompoundsby E.L.Eliel，S.H.Wilen，and L.N.Mander(Wiley-Interscience，1994)。
現(xiàn)有僅用實施例的方式說明本發(fā)明的某些實施方案，所舉例化合物的給出的物理數(shù)據(jù)與這些化合物所確定的結(jié)構(gòu)一致。
實施例用于本文中，用于這些方法、方案和實施例的符號和習(xí)慣與當(dāng)代科學(xué)文獻(xiàn)，例如American Chemical Society or theJournal ofBiological Chemistry中使用的一致。標(biāo)準(zhǔn)單字母或三字母縮寫通常用于指示氨基酸殘基，它被假定為L構(gòu)型，除非另有說明。除非另有說明，所有原料由商業(yè)來源獲得，無需進(jìn)一步純化而使用。具體地說，如下縮寫用于實施例和整個說明書
g(克) mg(毫克)L(升) mL(毫升)μL(微升) psi(每平方英尺磅)M(摩爾)mM(毫摩爾)i.v.(靜脈內(nèi)) Hz(赫茲)MHz(兆赫) mol(摩爾)mmol(毫摩爾) RT(室溫)分(分鐘) h(小時)mp(熔點) TLC(薄層色譜法)Tr(滯留時間) RP(可逆相)MeOH(甲醇) i-PrOH(異丙醇)TEA(三乙胺)TFA(三氟乙酸)TFAA(三氟乙酸酐) THF(四氫呋喃)DMSO(二甲基亞砜) EtOAc(乙酸乙酯)DME(1，2-二甲氧基乙烷) DCM(二氯甲烷)DCE(二氯乙烷) DMF(N，N-二甲基甲酰胺)DMPU(N，N′-二甲基亞丙基脲)(CDI(1，1-羰基聯(lián)咪唑)IBCF(氯甲酸異丁基酯) HOAc(乙酸)HOSu(N-羥基琥珀酰亞胺) HOBT(1-羥基苯并三唑)mCPBA(m-氯過苯甲酸)EDC(乙基碳化二亞胺鹽酸鹽)BOC(叔丁氧基羰基) FMOC(9-芴基甲氧基羰基)DCC(二環(huán)己基碳化二亞胺)CBZ(芐氧基羰基)Ac(乙?；? atm(大氣)TMSE(2-(三甲基甲硅烷基)乙基) TMS(三甲基甲硅烷基)TIPS(三異丙基甲硅烷基) TBS(t-丁基二甲基甲硅烷基)DMAP(4-二甲基氨基吡啶) Me(甲基)OMe(甲氧基)Et(乙基)HPLC(高壓液相色譜) BOP(二(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯TBAF(四正丁基氟化銨) Et(乙基)tBu(叔丁基)
所有提及的醚是乙醚，鹽水是指氯化鈉的飽和水溶液。除非另有說明，所有溫度以℃(攝氏度)表示，所有反應(yīng)在惰性氣氛下在室溫進(jìn)行，除非另有說明。
1H NMR光譜用Varian VXR-300、Varian Unity-300、VarianUnity-400裝置或General Electric QE-300記錄，化學(xué)位移用每百萬份數(shù)(ppm，δ單位)表示，偶合常數(shù)以赫茲(Hz)為單位。分裂類型描述明顯的峰裂數(shù)，指定為s(單峰)，d(雙重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br(寬峰)。
低分辨質(zhì)譜(MS)用JOELJMS-AX505HA、JOEL SX-102或SCIEX-Apliii分光計記錄，高分辨MS用JOEL SX-102A分光計記錄。所有質(zhì)譜和電噴霧離子化(ESI)、化學(xué)離子化(CI)、電子碰撞(EI)或快速原子轟擊(FAB)方法得到，紅外(IR)光譜用Nicolet 510 FT-IR分光計采用1-mmNaCl管得到。所有反應(yīng)用0.25mm E.Merck硅膠板(60F-254)的薄層色譜法監(jiān)測，用VU光，5％乙醇磷鉬酸或?qū)钕闳┤芤猴@示。快速柱色譜法用硅膠(230-400目，Merck)進(jìn)行，旋光性用PerkinElmermodel 241偏光計得到，熔點用Mel-Temp II設(shè)備測定，未校準(zhǔn)。
如下實施例描述具體用于合成本發(fā)明的式(I)化合物的中間體的合成中間體實施例12，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑的制備 方法1向18.5g(0.11mol)3-甲基-6-硝基-1H-吲唑在350ml丙酮中的攪拌溶液中在室溫下加入20g(0.14mol)三甲基氧鎓四氟硼酸鹽。在溶液在氬氣下攪拌3小時后，減壓除去溶劑。向得到的固體中加入含水NaHCO3(600mL)和氯仿-異丙醇的4∶1混合物(200ml)，攪拌混合物，分層。水相用附加的氯仿∶異丙醇(4×200mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相。過濾和除去溶劑得到褐色固體。固體用乙醚(200mL)洗滌得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑黃色固體(15.85g，73％)。1HNMR(300mHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，4.14(s，3H)，2.67(s，3H)。MS(ES+，m/z)192(M+H)。
方法2將原甲酸三甲酯(11mmol，1.17g)在2分鐘內(nèi)加入冷卻到-30℃的三氟化硼醚合物(12.5mmol，1.77g)在二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中，混合物溫?zé)岬?℃15分鐘，隨后冷卻到-70℃。將硝基吲唑(10mmol，1.77g)在二氯甲烷(30mL)中成漿狀物，一次加入冷卻的混合物中?；旌衔镌?70℃攪拌15分鐘，在室溫攪拌17小時。在17小時后，混合物是紅色和多相的，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)驟冷，分離有機(jī)層。水層用二氯甲烷(30mL)提取，合并二氯甲烷氫，用水(30mL)提取。減壓蒸餾二氯甲烷層直至保留約10mL。加入丙醇(10mL)，減壓除去殘留的二氯甲烷，得到黃色漿狀物。經(jīng)過濾分離產(chǎn)物得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑淺黃色粉末。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，4.14(s，3H)，2.67(s，3H)。MS(ES+，m/z)192(M+H)。
方法3在250mL圓底燒瓶中將3-甲基-6-硝基吲唑(7.27mmol，1.28g)在攪拌下溶解在DMSO(4.0mL)中，用濃硫酸(7.27mmol，0.73g)處理得到粘稠漿狀物。將漿狀物用硫酸二甲酯(21.1mmol，2.66g)處理，混合物在氮氣下在50℃加熱72小時。72小時后，得到粘稠黃色漿狀物。將漿狀物冷卻，緩慢地用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)處理?；旌衔镉枚燃淄?2×20mL)提取，合并二氯甲烷層，用水(20mL)反提取。二氯甲烷層用丙醇(10mL)處理，減壓蒸餾除去二氯甲烷。過濾分離固體，黃色固體用庚烷(5mL)洗滌，空氣干燥。得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑產(chǎn)物(70％，0.97g)淺黃色固體。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，4.14(s，3H)，2.67(s，3H)。MS(ES+，m/z)192(M+H)。
方法4在250mL 3頸圓底燒瓶中加入3-甲基-6-硝基-1H-吲唑硫酸鹽(5.0g，18.2mmol)和二氯甲烷(25mL)，混合物在25℃攪拌，用DMSO(5mL)處理。經(jīng)注射器加入硫酸二甲酯(6.7g，5.0mL，53.0mmol)，反應(yīng)物在70℃浴中回流加熱。7小時后，HPLC分析顯示9％原料。此時停止加熱，開始處理。在室溫下向反應(yīng)混合物加入飽和碳酸氫鈉溶液(35mL)，分層，水層用二氯甲烷(25mL)提取，合并二氯甲烷層，用水(2×25mL)洗滌。減壓蒸餾二氯甲烷層直至除去一半體積。加入丙醇(25mL)，持續(xù)減壓蒸餾直至除去所有二氯甲烷。這得到黃色漿狀物，使其在25℃下攪拌1小時。經(jīng)過濾除去產(chǎn)物，得到的黃色固體用庚烷(10mL)洗滌，得到2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(70％，2.43g)黃色固體。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，4.14(s，3H)，2.67(s，3H)。MS(ES+，m/z)192(M+H)。
中間體實施例22，3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑的制備 方法1向2，3-二甲基-6-硝基-2H-吲唑(1.13g)在2-甲氧基乙基醚(12ml)的攪拌溶液中在0℃下在5分鐘內(nèi)滴加4.48g氯化錫(II)在8.9ml濃鹽酸中的溶液。在加完后，除去冰浴，使溶液攪拌30分鐘。向反應(yīng)物中加入約40ml乙醚，導(dǎo)致形成沉淀。過濾分離得到的沉淀，用乙醚洗滌，得到黃色固體(1.1g，95％)，2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺鹽酸鹽1HNMR(300mHz，DMSO-d6)δ7.77(d，J＝8.9Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.88(m，1H)，4.04(s，3H)，2.61(s，3H)。MS(ES+，m/z)162(M+H)。
方法22L的3頸圓底燒瓶裝備氮氣入口和出口及機(jī)械攪拌器。輸入中等氮氣流，在反應(yīng)器中加入10％Pd/C(50％含水，6.0g)，開始攪拌，在反應(yīng)器中加入甲醇(750mL)和中間體實施例1的產(chǎn)物(50g)。將甲酸銨(82.54g)溶解在水(120mL)中，將甲酸銨水溶液以一加入速率加入反應(yīng)溶液中，保護(hù)反應(yīng)溫度在或處于25-30℃之間，使反應(yīng)在25℃進(jìn)行。6小時后，基于HPLC分析判斷反應(yīng)結(jié)束，過濾混合物，用甲醇(50mL)洗去催化劑。甲醇層合并，減壓除去溶劑。殘余物溶解在水(200mL)中，用二氯甲烷(3×250mL)提取。合并二氯甲烷層，減壓除去溶劑至除去約一半溶劑。加入庚烷(400mL)，持續(xù)真空蒸餾直至保留約300mL反應(yīng)產(chǎn)物漿狀物。過濾分離產(chǎn)物，在5℃真空干燥4小時得到2，3-二甲基-6-氨基-2 H-吲唑游離堿(40.76g，96.7％)。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ7.31(d，J＝8.9Hz，1H)，6.45(d，J＝8.9Hz，1H)，6.38(s，1H)，4.95 (s，br，2H)，3.85(s，3H)，2.44(s，3H)。MS(ES+，m/z)162(M+H)。
中間體實施例3N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺的制備 方法1在室溫下向中間體實施例2的產(chǎn)物(2.97g，.015mol)和NaHCO3(5.05g，.06mol)在THF(15mL)和乙醇(60mL)中的攪拌溶液中加入2，4-二氯嘧啶(6.70g，.045mol)，在反應(yīng)物在85℃攪拌4小時后，將懸浮液冷卻到室溫，過濾和用乙酸乙酯充分洗滌。減壓濃縮濾液，得到的固體用乙酸乙酯研制得到N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺(89％，3.84g)。1H NMR(400mHz，DMSO-d6)δ7.28(d，J＝9.0Hz，1H)，6.42(d，J＝8.8Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.18(brs，1H)，3.84(s，3H)，2.43(s，3H)。MS(ES+，m/z)274(M+H)。
方法2向配備空氣驅(qū)動的機(jī)械攪拌器、溫度計和氮氣入口/出口的1L3頸燒瓶中加入中間體實施例2的產(chǎn)物(32.89g，0.204mol，1.0當(dāng)量)在425mL(13體積)EtOH/THF(4/1)中的溶液、碳酸氫鈉(51.42g，0.612mol，3.0當(dāng)量)和2，4-二氯嘧啶(45.59g，0.306mol，1.5當(dāng)量)。燒瓶加熱到75℃，在74-76℃保持6-7小時。反應(yīng)進(jìn)程用HPLC檢測(中間體實施例2的產(chǎn)物＜2％)。將反應(yīng)物在30分鐘內(nèi)冷卻到20-25℃，在20-25℃保持30分鐘。隨后將反應(yīng)物在30分鐘內(nèi)再冷卻到10-12℃，在該溫度下保持10分鐘。過濾反應(yīng)物，濾餅用EtOAc(2×100mL，3.0體積)和軟化水(514mL，15.6體積)洗滌。隨后在真空烘箱中在35℃干燥濾餅過夜得到所需產(chǎn)物白色固體44.75g(80.1％)。1HNMR(400mHz，DMSO-d6)δ7.28(d，J＝9.0Hz，1H)，6.42(d，J＝8.8Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.18(brs，1H)，3.84(s，3H)，2.43(s，3H)。MS(ES+，m/z)274(M+H)。
中間體實施例4N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺的制備 方法1向中間體實施例3的產(chǎn)物(7.37g)在DMF(50ml)中的攪拌溶液中在室溫下加入Cs2CO3(7.44g，2當(dāng)量)和碘甲烷(1.84ml，1.1當(dāng)量)，混合物在室溫下攪拌過夜。隨后將反應(yīng)混合物傾倒至冰水浴中，經(jīng)過濾收集沉淀，用水洗滌。沉淀物經(jīng)空氣干燥得到N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺灰白色固體(6.43g，83％)。1HNMR(400mHz，DMSO-d6)δ7.94(d，J＝6.0Hz，1H)，7.80(d，J＝7.0Hz，1H)，7.50(d，J＝1.0Hz，1H)，6.88(m，1H)，6.24(d，J＝6.2Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.42(s，3H)，2.62(62，3H)。MS(ES+，m/z)288(M+H)。
方法2在配備空氣驅(qū)動的機(jī)械攪拌器、溫度計、添加漏斗和氮氣入口/出口的3L3頸燒瓶中在攪拌下加入DMF(272mL，5體積)和中間體實施例3的產(chǎn)物(54.4g，0.20mol，1.0當(dāng)量)。在反應(yīng)混合物中加入碳酸銫(194.5g，0.60mol，3.0當(dāng)量)，期間保持反應(yīng)溫度在20-25℃。反應(yīng)混合物在20-25℃攪拌10分鐘，在10分鐘內(nèi)加入碘甲烷(45.1g，0.32mol，1.6當(dāng)量)，期間保持溫度在20-30℃。反應(yīng)混合物在20-30℃攪拌(通常反應(yīng)在1-2小時內(nèi)完成)。在30分鐘內(nèi)加入軟化水(925mL，17體積)，期間保持溫度在25-40℃，反應(yīng)混合物在20-25℃攪拌40分鐘。經(jīng)過濾分離產(chǎn)物，隨后濾餅用H2O/DMF(6∶1，252mL，4.6體積)洗滌。濕濾餅在40-45℃下真空干燥，分離N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺(51.7g，90.4％)黃色固體。1H NMR(400mHz，DMSO-d6)δ7.94 (d，J＝6.0Hz，1H)，7.80(d，J＝7.0Hz，1H)，7.50(d，J＝1.0Hz，1H)，6.88(m，1H)，6.24(d，J＝6.2Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.42(s，3H)，2.62(s，3H)。MS(ES+，m/z)288(M+H)。
中間體實施例55-氨基-2-甲基苯磺酰胺的制備 方法1向2-甲基-5-硝基苯磺酰胺(4.6g，0.021mol)在2-甲氧基乙基醚(43mL)的攪拌溶液中在0℃在15分鐘內(nèi)滴加16.1g氯化錫(II)在32mL濃鹽酸中的溶液。在加完后，移去冰浴，溶液再攪拌30分鐘。向反應(yīng)物中加入約130mL的乙醚，混合物劇烈攪拌1小時?；旌衔镉肗aOH和NaHCO3溶液堿化，用乙酸乙酯(x3)提取。合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，過濾和濃縮得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物用甲醇研制得到2.4g純5-氨基-2-甲基苯磺酰胺淺棕色固體。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ7.11-7.10(m，3H)，6.95(d，J＝8.1Hz，1H)，6.60(dd，J＝8.1&2.4Hz，1H)，5.24(s，2H)，2.36(s，3H)。MS(ES+，m/z)187(M+H)。
中間體實施例64-[(甲基磺?；?甲基]苯胺的制備 方法1在乙醇(460mL，約0.4M)中混合4-硝基芐基溴(40g，0.185mol)和亞磺酸鈉(19.5g，1當(dāng)量)，混合物在80℃回流加熱，3小時后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾收集灰白色固體。固體用乙醇洗滌兩次，空氣干燥得到甲基4-硝基芐基砜。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ8.27(d，J＝8.6Hz，2H)，7.69(d，J＝8.6Hz，2H)，4.71(s，2H)，2.96(s，3H)。MS(ES+，m/z)216(M+H)。
在乙酸乙酯(220mL，約0.2M)中混合甲基4-硝基芐基砜(9.5g，0.044mol)和10％Pd/C(0.95g，0.1w/w)，混合物放置在40psi氫氣的Parr搖動器中。在約3小時后，將反應(yīng)混合物傾倒入50％meOH/EtOAc(400mL)中，劇烈攪拌30分鐘?；旌衔锿ㄟ^C鹽和硅膠墊過濾。取出在墊上的黑色物質(zhì)，放置在80％meOH/EtOAc(200mL)中，劇烈攪拌30分鐘。重復(fù)過程幾次，合并所有濾液，蒸發(fā)和干燥。用乙酸乙酯研制得到純4-[(甲基磺?；?甲基]苯胺。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ7.03(d，J＝8.4Hz，2H)，6.54(d，J＝8.6Hz，2H)，5.20(s，2H)，4.20(s，2H)，2.79(s，3H)。MS(ES+，m/z)186(M+H)。
方法2向配備磁性攪拌器和回流冷凝器的圓底燒瓶(1.0L)中加入4-硝基芐基溴(40g，0.185mol，1.0當(dāng)量)、亞磺酸鈉(21.7g，0.213mol，1.15當(dāng)量)和乙醇(400mL，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度，10體積)。在80℃回流加熱混合物2小時。用快速HPLC檢測反應(yīng)進(jìn)程(當(dāng)HPLC顯示4-硝基芐基溴＜0.5％時，認(rèn)為反應(yīng)完成)。冷卻反應(yīng)混合物至室溫，過濾并用乙醇(40mL)洗滌濾餅，濕濾餅(15g，46.2mmol)用于下一氫化步驟，無需純化。
向500mL氫化燒瓶中加入上述濾餅甲基4-硝基芐基溴砜(15g，46.2mmol，直接使用)、10％Pd/C(0.1g，1％w/w)和乙醇(120mL，200標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)度)和水(40mL)。用氫氣交換反應(yīng)器氣氛(3次)，在下，在室溫下?lián)u動反應(yīng)器30分鐘，在50℃下2小時。用HPLC檢測反應(yīng)進(jìn)程(當(dāng)HPLC顯示甲基4-硝基芐基溴砜＜0.2％時，認(rèn)為反應(yīng)完成)。加熱混合物至80℃，通過C鹽(2.0g)墊過濾熱溶液，用EtOH(10mL)漂洗墊。將濾液轉(zhuǎn)移到結(jié)晶圓底燒瓶(500mL)中，在普通(house)真空下在60℃蒸餾漿狀物直至留下60mL體積。經(jīng)真空過濾分離結(jié)晶，用乙醇(10mL)洗滌容器和結(jié)晶。在普通真空下在50℃干燥至恒重，得到灰白色固體(7.3g)。對于HPLC測定的99％純度的產(chǎn)物，合并兩步的收率是85％。
中間體實施例74-[(異丙基磺酰基)甲基]苯基胺的制備 向1-(溴甲基)-4-硝基苯(3.0g，17.4mmol)在乙醇(50mL)中的溶液中加入2-硫代丙酸鈉(2.7g，17.4mmol)，12小時后，減壓除去溶劑，殘留的殘余物用EtOAc稀釋，過濾除去殘留的鹽。溶劑在MgSO4上干燥，減壓除去，產(chǎn)物用于下一步驟無需進(jìn)一步純化。隨后，硫化物用二氯甲烷(50mL)稀釋，分批加入間氯過氧苯甲酸(約70％)(6.6g，38.4mmol)。反應(yīng)用TLC判斷已完成，減壓除去溶劑。殘留的殘余物用EtOAc稀釋，用1MNaOH(2×100mL)洗滌。溶劑在MgSO4上干燥，減壓除去，產(chǎn)物用于下一步驟無需進(jìn)一步純化。隨后，殘余物用甘醇二甲醚(8.0mL)稀釋，滴加SnCl2(13.8g，69mmol)在HCl(8.0mL)中的溶液。使溶液攪拌2小時，用TLC判斷反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物用Et2O稀釋，產(chǎn)生產(chǎn)物鹽酸鹽的沉淀。收集固體，用Et2O(2×100mL)洗滌得到純苯胺(約2.4g，65％)。1H NMR(300mHz，d6DMSO+NaHCO3)δ7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.21(d，J＝8.4Hz，2H)，4.41(s，2H)，3.18-3.09(m，1H)，1.21(d，J＝6.9Hz，6H)。
中間體實施例84-[2-(甲基磺酰基)乙基]苯胺的制備 向1-(溴乙基)-4-硝基苯(3.0g，13.0mmol)在乙醇(70mL)中的溶液中加入硫代甲醇鈉(1.0g，14.0mmol)，12小時后，減壓除去溶劑，殘留的殘余物用EtOAc稀釋，過濾除去殘留的鹽。溶劑在MgSO4上干燥，減壓除去，產(chǎn)物用于下一步驟無需進(jìn)一步純化。隨后，硫化物用二氯甲烷(100mL)稀釋，分批加入間氯過氧苯甲酸(約70％)(8.2g，38.8mmol)。反應(yīng)用TLC判斷已完成，減壓除去溶劑。殘留的殘余物用EtOAc稀釋，用1MNaOH(2×100mL)洗滌。溶劑在MgSO4上干燥，減壓除去，產(chǎn)物用于下一步驟無需進(jìn)一步純化。隨后，將殘余物加入在Parr搖動容器中的鈀/碳(10mol％)在EtOAc(50mL)中的漿狀物中，反應(yīng)處于40atm的氫氣下。使溶液振蕩2小時，用TLC判斷反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物用C鹽墊過濾，用EtOAc洗滌，減壓除去溶劑得到粗固體?；旌衔镌跓酔tOAc中重結(jié)晶得到純苯胺(約1.8g，69％)。1H NMR(300mHz，d6DMSO+NaHCO3)δ6.93(d，J＝8.2Hz，2H)，6.87(d，J＝8.2Hz，2H)，5.09(bs，2H)，3.31-3.26(m，2H)，2.92(s，3H)，2.84-2.79(m，2H)。
中間體實施例9制備4-[1-(甲基磺?；?乙基]苯胺 向4-硝基苯基carbonol(3.0g，17.9mmol)和三乙胺(3.5mL，21.0mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中滴加甲磺酰氯(1.7mL，21.0mmol)。1小時后用TLC判斷反應(yīng)完成，用飽和含水NaHCO3驟冷。反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，分離有機(jī)層，用MgSO4干燥，減壓除去溶劑。得到的殘余物溶解在乙醇(100mL)中，分批加入硫代甲醇鈉(15g，21.0mmol)，12小時后，減壓除去溶劑，殘留的殘余物用EtOAc稀釋，過濾除去殘留的鹽。溶劑在MgSO4上干燥，減壓除去，產(chǎn)物用于下一步驟無需進(jìn)一步純化。隨后，硫化物用二氯甲烷(100mL)稀釋，分批加入間氯過氧苯甲酸(約70％)(10.8g，62mmol)。反應(yīng)用TLC判斷已完成，減壓除去溶劑。殘留的殘余物用EtOAc稀釋，用1MNaOH(2×100mL)洗滌。溶劑在MgSO4上干燥，減壓除去，產(chǎn)物用于下一步驟無需進(jìn)一步純化。隨后，將殘余物加入在Parr搖動容器中的鈀/碳(10mol％)在EtOAc(50mL)中的漿狀物中，反應(yīng)處于40atm的氫氣下。使溶液振蕩2小時，用TLC判斷反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物用C鹽墊過濾，用EtOAc洗滌，減壓除去溶劑得到粗固體?；旌衔镌跓酔tOAc中重結(jié)晶得到純苯胺(約2.0g，57％)。1H NMR(300MHz，d6DMSO+NaHCO3)δ7.06(d，J＝8.5Hz，2H)，6.53(d，J＝8.5Hz，2H)，5.21(s，2H)，4.23(q，J＝7.1Hz，1H)，2.70(s，3H)，1.21(d，J＝7.1Hz，3H)。
中間體實施例10制備4-[1-甲基-1-(甲基磺?；?乙基]苯胺
向叔丁醇鹽(5.76g，0.051mol)在THF中的攪拌溶液中加入甲基4-硝基芐基砜(5g，0.023mol)，隨后加入碘甲烷(2.89ml，0.046mol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，加入附加的叔丁醇鹽(2.9g)和碘甲烷(0.5ml)?；旌衔镌谑覝叵略贁嚢?小時，混合物用EtOAc稀釋，用6NHCl酸化?；旌衔镉靡宜嵋阴?x3)提取，合并的乙酸乙酯層用無水MgSO4干燥，過濾和蒸發(fā)。用乙醇研制固體得到純1-[1-甲基-1-(甲基磺?；?乙基]-4-硝基苯。
向1-[1-甲基-1-(甲基磺?；?乙基]-4-硝基苯(3.32g，0.014mol)在2-甲氧基乙基醚(70mL)的攪拌溶液中在0℃在15分鐘內(nèi)滴加10.35g氯化錫(II)在20.5mL濃鹽酸中的溶液。在加完后，移去冰浴，溶液再攪拌30分鐘。向反應(yīng)物中加入約70mL乙醚，混合物劇烈攪拌1小時。形成沉淀，經(jīng)過濾收集。將固體溶解在二氯甲烷中，用1NNaOH洗滌?；旌衔镉枚燃淄?x3)提取，合并的二氯甲烷層用無水硫酸鎂干燥，過濾和蒸發(fā)得到4-[1-甲基-1-(甲基磺?；?乙基]苯胺灰白色固體。1H NMR(300mHz，DMSO-d6)δ7.21(d，J＝8.6Hz，2H)，6.55(d，J＝8.6Hz，2H)，5.23(s，2H)，2.58(s，3H)，1.64(s，6H)。
實施例15-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}-氨基)-2-甲基苯磺酰胺
方法1向中間體實施例4(200mg，0.695mmol)和5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(129.4mg，0.695mmol)在異丙醇(6ml)中的溶液中加入4滴濃鹽酸。混合物回流加熱過夜，將混合物冷卻到室溫，用乙醚(6ml)稀釋。經(jīng)過濾收集沉淀，用乙醚洗滌。分離5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺鹽酸鹽灰白色固體。1H NMR(400mHz，d6DMSO+NaHCO3)δ9.50(brs，1H)，8.55(brs，1H)，7.81(d，J＝6.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.7Hz，1H)，7.69(m，1H)7.43(s，1H)，7.23(s，2H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，6.86(m，1H)，5.74(d，J＝6.1Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.48(s，3H)，2.61(s，3H)，2.48(s，3H)。MS(ES+，m/z)438(M+H)。
方法2在配備磁性攪拌器、溫度計、回流冷凝器和氮氣入口/出口的250-mL3頸燒瓶中在攪拌下加入乙醇(60mL，10體積)、中間體實施例4的產(chǎn)物(6.00g，20.85mmol，1.0當(dāng)量)和5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(4.00g，21.48mmol，1.03當(dāng)量)。反應(yīng)混合物加熱到70℃，在68-72℃攪拌反應(yīng)混合物3小時后，在約2分鐘內(nèi)加入在二噁烷中的4MHCl(0.11mL，0.44mmol，0.02當(dāng)量)，反應(yīng)混合物在68-72℃攪拌直至經(jīng)HPLC分析殘留的中間體實施例4的起始產(chǎn)物的面積＜1.5％(通常該反應(yīng)在超過8小時后完成)。將反應(yīng)混合物在30分鐘內(nèi)冷卻到20℃，在20-22℃攪拌40分鐘。經(jīng)過濾分離產(chǎn)物，濾餅用乙醇(20mL，3.3體積)洗滌，濕濾餅在真空下45-50℃干燥，分離5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺(9.52g，96.4％)單鹽酸鹽灰白色固體。1H NMR(400mHz，d6DMSO+NaHCO3)δ9.50(br s，1H)，8.55(br s，1H)，7.81(d，J＝6.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.7Hz，1H)，7.69(m，1H)，7.43(s，1H)，7.23(s，2H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，6.86(m，1H)，5.74(d，J＝6.1Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.48(s，3H)，2.61(s，3H)，2.48(s，3H)。MS(ES+，m/z)438(M+H)。
方法3
向中間體實施例4的產(chǎn)物(1.1g，3.8mmol)在14mL MeOH的攪拌懸浮液中在室溫下加入5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.78g，4.2mmol，1.1當(dāng)量)。反應(yīng)混合物回流加熱3小時，隨后分批加入1，4-二噁烷中的4M鹽酸(19μL，0.076mmol)。在4小時后，冷卻懸浮液至室溫，過濾。得到的固體用10mL MeOH洗滌，真空干燥得到1.3g(72％)5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺單鹽酸鹽白色固體。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.95(s，1H)，8.36(s，1H)，7.86(d，J＝8.8Hz，2H)，7.64-7.59(m，2H)，7.40(m，3H)，6.93(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，5.92(s，1H)，4.08(s，3H)，3.57(s，3H)，2.65(s，3H)，2.56(s，3H)。
方法4向中間體實施例4的產(chǎn)物(1.1g，3.7mmol)在10mL THF中的攪拌懸浮液中在室溫下加入5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.70g，3.8mmol，1.0當(dāng)量)，反應(yīng)混合物回流加熱3小時，隨后分批加入在1，4-二噁烷中的4M鹽酸(18μl，0.072mmol)。5小時后，將懸浮液冷卻到室溫，過濾。得到的固體用16mL of THF洗滌，空氣干燥得到1.6g(92％)5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺單鹽酸鹽淺黃色固體。
方法5向中間體實施例4的產(chǎn)物(1.0g，3.6mmol)在10mL CH3CN中的攪拌懸浮液中在室溫下加入5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(0.70g，3.8mmol，1.0當(dāng)量)。反應(yīng)混合物回流加熱3小時，隨后分批加入在1，4-二噁烷中的4M鹽酸(18μL，0.076mmol)。在20小時后，將懸浮液冷卻到室溫并過濾。得到的固體用10mL CH3CN洗滌，空氣干燥得到1.3g(73％)5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺單鹽酸鹽灰白色固體。
方法6制備5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺甲磺酸鹽在250mL燒瓶中，實施例1，方法1的產(chǎn)物(1.0g，2.29mmol)在水(19mL)中成漿，一次加入甲磺酸(0.231g，2.4mmol)，混合物回流加熱5分鐘。將混合物在1小時內(nèi)冷卻到0℃，隨后過濾分離，空氣干燥。得到5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺甲磺酸鹽(1.03g，84％)白色固體，mp＝247-248℃。
方法7制備5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺甲磺酸鹽在圓底燒瓶中加入2.6g實施例1，方法1的任何形式的單鹽酸鹽，隨后加入39mL異丙醇(15體積)，混合物在油浴中在75℃加熱，隨后加入14mL 0.05N含水HCl(5.4體積)。冷卻透明溶液至65℃，隨后用實施例1，方法的單鹽酸鹽的單水合物(0.05-0.1wt％)接種?；鞚岬娜芤涸?5℃下攪拌60分鐘，隨后以約0.25-0.5℃/分鐘冷卻到0℃。過濾得到的白色固體，在室溫真空干燥至恒重得到88％收率的5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺單鹽酸鹽單水合物。
如下實施例根據(jù)實施例1中所述的一般方法使用中間體實施例4和合成苯胺制備。合適苯胺使用類似于中間體實施例5-10中所述的方法制備。
實施例2N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-{4-[(甲基磺?；?甲基]苯基}嘧啶-2，4-二胺
1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.37(bs，1H)，7.88(d，J＝6.1Hz，1H)，7.78(m，3H)，7.47(s，1H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，6.91(dd，J＝8.8 & 1.5Hz，1H)，5.84(d，J＝6.1Hz，1H)，4.37(s，2H)，4.09(s，3H)，3.51(s，3H)，2.88(s，3H)，2.65(s，3H)。MS(ES+，m/z)437(M+H)，435(M-H)。
實施例33-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)苯磺酰胺 1H NMR(400MHz，DMSO-d6+NaHCO3)δ9.58(brs，1H)，8.55(brs，1H)，7.83(d，J＝6.2Hz，1H)，7.74-7.79(m，2H)，7.43(s，1H)，7.34-7.37(m，2H)，7.2 (s，2H)，6.86(m，1H)，5.77(d，J＝6.1Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.48(s，3H)，2.61(s，3H)。MS(ES+，m/z)424(M+H)。
實施例42-[4-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]乙磺酰胺 1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.10(brs，1H)，7.83(d，J＝6.0Hz，1H)，7.75(d，J＝8.7Hz，1H)，7.67(d，J＝8.5Hz，2H)，7.43(d，J＝1.1Hz，1H)，7.06(d，J＝8.5Hz，2H)，6.86-6.89(m，3H)，5.76(d，J＝6.0Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.46(s，3H)，3.21(m，2H)，2.91(m，2H)，2.62(s，3H)。MS(ES+，m/z)452(M+H)。
實施例52-[4-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-2-嘧啶基}氨基)苯基]-N-甲基乙磺酰胺 1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.09(s，1H)，7.82(d，J＝6.0Hz，1H)，7.75(d，J＝8.8Hz，1H)，7.67(d，J＝8.5Hz，2H)，7.43(d，J＝1.0Hz，1H)，7.08(d，J＝8.5Hz，2H)，6.94(q，J＝5.0Hz，1H)，6.87(dd，J＝8.8 & 1.6Hz，1H)，5.76(d，J＝6.0Hz，1H)，4.05(s，3H)，3.46(s，3H)，3.22(m，2H)，2.84(m，2H)，2.62(s，3H)，2.59(d，J＝5.0Hz，3H)。MS(ESI)m/z＝466[M+H]+。
實施例62-[3-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-2-嘧啶基}氨基)苯基]乙磺酰胺 1H NMR(300MNHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.13(s，1H)，7.84(d，J＝5.9Hz，1H)，7.77-7.72(m，2H)，7.58(d，J＝8.2Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.12(m，1H)，6.89-6.86(m，3H)，6.77(d，J＝7.5Hz，1H)，5.77(d，J＝6.0Hz，1H)，4.05(s，3H)，3.47(s，3H)，3.20(m，2H)，2.92(m，2H)，2.62(s，3H)。MS(ESI)m/z＝452[M+H]+。
實施例72-氯-5-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-2-嘧啶基}氨基)苯磺酰胺 1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.63(s，1H)，8.76(s，1H)，7.86-7.82(m，2H)，7.77(d，J＝8.8Hz，1H)，7.46-7.45(m，3H)，7.39(d，J＝8.8Hz，1H)，6.88(d，J＝8.8Hz，1H)，5.79(d，J＝6.0Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.49(s，3H)，2.62(s，3H)。MS(ESI)m/z＝458[M+H]+。
實施例8N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-{3-[1-(甲基磺?；?乙基]苯基}-2，4-嘧啶二胺 1H NMR(300mHz，d6-DMSO)δ9.24(s，1H)，7.92(3，1H)，7.86(d，J＝5.8Hz，1H)，7.75(d，J＝9.7Hz，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.19(dd，J＝7.9和7.6Hz，1H)，6.95(d，J＝7.6Hz，1H)，6.88(d，J＝8.4Hz，1H)，5.82(d，J＝5.9Hz，1H)，4.17(q，J＝7.0Hz，1H)4.05(s，3H)，3.47(s，3H)，2.75(s，3H)，2.62(s，3H)，1.57(d，J＝5.7 Hz，3H)ppm。MS(ESI)m/z＝451[M+H]+。
實施例9N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-{4-[1-(甲基磺?；?乙基]苯基}-2，4-嘧啶二胺 1H NMR(300mHz，d6-DMSO)δ9.25(s，1H)，7.86(d，J＝5.8，1H)，7.75(d，J＝8.5Hz，1H)，7.73(d，J＝6.9Hz，2H)，7.44(s，1H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，6.88(d，J＝8.8Hz，1H)，5.81(d，J＝5.8Hz，1H)，4.39(q，J＝7.2，Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.47(m，3H)，2.76(s，3H)，2.63(s，3H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)ppm。MS(ESI)m/z＝451[M+H]+。
實施例10N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-{4-[1-甲基-1-(甲基磺?；?乙基]苯基}-2，4-嘧啶二胺 1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.26(s，1H)，7.86(d，J＝5.8Hz，1H)，7.77-7.72(m，3H)，7.44(s，1H)，7.36(d，J＝8.8Hz，2H)，6.88(dd，J＝8.8 Et 1.5Hz，1H)，5.83(d，J＝6.0Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.47(s，3H)，2.63(s，6H)，1.69(s，6H)。MS(ESI)m/z＝465[M+H]+。
實施例11N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-(4-{[(4-甲基苯基)磺酰基]甲基}苯基)-2，4-嘧啶二胺 1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.19(s，1H)，7.84(d，J＝6.0Hz，1H)，7.74(d，J＝8.7Hz，1H)，7.63(d，J＝8.5Hz，2H)，7.57(d，J＝8.2Hz，2H)，7.43-7.37(m，3H)，6.93-6.86(m，3H)，5.79(d，J＝6.0Hz，1H)，4.48(s，2H)，4.06(s，3H)，3.45(s，3H)，2.63(s，3H)，2.39(s，3H)。MS(ESI)m/z＝513[M+H]+。
實施例12N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-(4-{[(4-甲基苯基)磺?；鵠甲基}苯基)-2，4-嘧啶二胺 1H NMR(300mHz，Na2CO3+DMSO-d6)δ9.04(s，1H)，7.81(d，J＝5.8Hz，1H)，7.76-7.73(m，2H)，7.64(dd，J＝9.0 & 2.7Hz，1H)，7.42(s，1H)，6.92(d，J＝9.0Hz，1H)，6.87(dd，J＝8.8 & 1.6Hz，1H)，5.76(d，J＝5.9Hz，1H)，4.23(s，2H)，4.05(s，3H)，3.76(s，3H)，3.45(s，3H)，2.84(s，3H)，2.62(s，3H)。MS(ESI)m/z＝467[M+H]+。
實施例13N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-(4-{[(1-甲基乙基)磺酰基]甲基}苯基)-2，4-嘧啶二胺 1H NMR(300mHz，d6DMSO+TFA)δ10.7(bs，1H)，7.86(d，J＝8.7Hz，1H)，7.60(m，3H)，7.49(d，J＝8.5Hz，2H)，7.35(d，J＝8.4Hz，2H)，6.94(dd，J＝8.8 & 1.8Hz，1H)，4.50(s，1H)，4.43(bs，1H)，4.08(s，3H)，3.56(s，3H)，3.20(m，1H)，2.65(s，3H)，1.27(m，6H)。MS(ES+，m/z)465(M+H)。
實施例141-[3-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-2-嘧啶基}氨基)苯基]甲磺酰胺 1H NMR(300mHz，d6DMSO+TFA)δ10.64(bs，1H)，7.87(d，J＝8.6Hz，1H)，7.60(bs，1H)，7.50(t，J＝7.6Hz，1H)，7.36(m，3H)，7.19(bs，1H)，6.94(dd，J＝8.8&1.6Hz，1H)，6.90(bs，1H)，4.34(s，1H)，4.30(bs，1H)，4.08(s，3H)，3.56(s，3H)，2.65(s，3H)。MS(ES+， m/z)438(M+H)。
實施例151-[4-({4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基]-2-嘧啶基}氨基)苯基]甲磺酰胺 1H NMR(300mHz，d6DMSO+TFA)δ10.63(bs，1H)，7.85(m，2H)，7.60(m，2H)，7.46(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(d，J＝8.4Hz，2H)，6.94(dd，J＝8.8 & 1.8Hz，1H)，6.86(bs，1H)，4.30(s，1H)，4.25(bs，1H)，4.08(s，3H)，3.56(s，3H)，2.65(s，3H)。MS(ES+，m/z)438(M+H)。
實施例16N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-{4-[2-(甲基磺?；?乙基]苯基}嘧啶-2，4-二胺 1H NMR(300mHz，d6DMSO+NaHCO3)δ9.11(s，1H)，7.83(d，J＝6.1Hz，1H)，7.769d，J＝7.2Hz，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，2H)，7.43(s，1H)，7.10(d，J＝8.5Hz，2H)，6.88(dd，J＝8.7 & 1.5Hz，1H)，5.76(d，J＝6.0Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.46(s，3H)，3.41-3.26(m，2H)，2.95(s，3H)，2.94-2.89(m，2H)，2.63(s，3H)。MS(ES+，m/z)450.9(M+H)。
實施例17N4-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N4-甲基-N2-{3-[2-(甲基磺?；?乙]苯基}嘧啶-2，4-二胺 1H NMR(300mHz，d6DMSO+NaHCO3)δ9.54(bs，1H)，7.84(d，J＝6.5Hz，1H)，7.79(d，J＝8.6Hz，1H)，7.53(bs，1H)，7.49(bs，2H)，7.19(bs，1H)，6.90(d，J＝7.6Hz，2H)，5.76(d，J＝6.0Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.46(s，3H)，3.41-3.26(m，2H)，2.95(s，3H)，2.94-2.89(m，2H)，2.63(s，3H)。MS(ES+，m/z)451(M+H)。
生物學(xué)數(shù)據(jù)本發(fā)明顯示重要和可測量的藥理學(xué)響應(yīng)，如以下VEGFR2 HTRF試驗所述，在實施例部分描述的每個化合物以高親合力(IC50＜1μM)結(jié)合于VEGFR2受體的激酶域。除結(jié)合于VEGFR2的激酶域外，本發(fā)明舉例的化合物還可測量和明顯地抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，該細(xì)胞由VEGF活化刺激生長。抑制細(xì)胞增生的數(shù)據(jù)在如下表1中給出。
VEGFR2 HTRF試驗該試驗在96-孔黑板中進(jìn)行，在75μM ATP，5mMMgCl2，0.3mM DTT，0.1mg/ml BSA和0.1mHEPES(pH7.5)存在下用10nM hVEGFR2磷酸化0.36μM肽(Biotin-Ahx-EEEEYFELVAKKKK)，在反應(yīng)中加入10μl 0.5mEDTA作為負(fù)對照。沒有或有在5％DMSO中的抑制劑的50μl激酶反應(yīng)在室溫下進(jìn)行45分鐘，隨后用40μl 125mM EDTA停止。在0.1mg/ml BSA，0.1M HEPES(pH7.5)存在下加入2.4μg/ml Streptavidin-APC和0.15μg/ml Eu-α-pγ至140μl的最終體積。板在室溫(22℃)下培養(yǎng)10分鐘，用時間分辨熒光模式的Victor，通過在340nm激發(fā)測量，讀出在665nm的發(fā)射。
試劑來源肽來自Synpep(Dublin，CA)ATP、MgCl2、DTT、BSA、HEPES、EDTA、DMSO來自SigmaStreptavidin-APC來自Molecular Probes(Eugene，Oregon)Eu-α-pY來自EG&G Wallac(Gaithersburg，MD)縮寫

人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖試驗(BrdU結(jié)合)材料HUVEC細(xì)胞和EGM-MV(內(nèi)皮細(xì)胞生長介質(zhì)-微血管)由Clonetics(San Diego，CA)購買，VEGF和bFGF由R&DSystems(Minneapolis，MN)購買，抗BrdU抗體由ChemiconInternational(Temecula，CA)得到。
方法將HUVEC按慣例保持在EGM-MV培養(yǎng)基中，在傳代7內(nèi)使用。HUVEC在含有5％FBS(Hyclone)的M199培養(yǎng)基中以2500細(xì)胞/孔的密度放置在I型膠原質(zhì)涂覆的板(Becton Dickinson)上，板在37℃培養(yǎng)過夜。經(jīng)抽吸除去培養(yǎng)基，在每個孔中以0.1ml/孔的體積加入在無M199培養(yǎng)基的血清中的試驗化合物?；衔餄舛葟?.5nM-30微摩爾，板在37℃培養(yǎng)30分鐘。另加入0.1ml無M199培養(yǎng)基的含有BSA和VFGF(或bFGF)的血清以得到0.1％BSA和10ng/ml VEGF(0.3ng/ml bFGF)的最終濃度。板在37℃下培養(yǎng)72小時，在最初的48小時后，在每個孔中加入BrdU得到10微摩爾的濃度。根據(jù)制造商(Roche molecularSciences)的說明進(jìn)行比色ELISA試驗，檢測在450nm的吸光率讀數(shù)。結(jié)果以試驗化合物濃度相對吸光率畫曲線得到抑制BrdU結(jié)合的IC50值。
表1＝HUVEC增殖的抑制(IC50，nM1-200nM＝++++；201-500nM＝+++；501-100nM＝++；＞1000＝+)表1

本說明書和權(quán)利要求書構(gòu)成部分的申請用作任何隨后申請的優(yōu)先權(quán)的基礎(chǔ)，該隨后的申請的權(quán)利要求可涉及本文描述的任何特征或特征組合。它們可以是產(chǎn)物、組合物、方法或用途權(quán)利要求形式，包括，借助于實施例和非限制的，一個或多個如下
權(quán)利要求
權(quán)利要求
1.制備式(R)化合物的方法 其包括步驟使式(Q)化合物 與烷基化劑反應(yīng)，其中X1是氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或C1-C4羥基烷基；X2是C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或芳烷基；和X3是氫或鹵素。
2.制備式(I)化合物的方法 其包括步驟使式(Q’)化合物 與烷基化劑反應(yīng)以制備式(R’)化合物， 其中X1是氫或C1-C4烷基；X2是C1-C4烷基或芐基；X4是氫或C1-C4烷基；Q1是A1或A2；當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、C1-C4烷氧基，和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
3.制備式(I)化合物的方法 其包括步驟(i)使式(Q’)化合物 與烷基化劑反應(yīng)以制備式(R’)化合物， ；和(ii)將式(R’)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)化合物，所述轉(zhuǎn)化步驟包括先與式(A’)化合物縮合和隨后與式(A”)化合物連續(xù)縮合 其中X1是氫或C1-C4烷基；X2是C1-C4烷基或芐基；X4是氫或C1-C4烷基；Q1是A1或A2；當(dāng)Q1是A2時，Q2是A1，當(dāng)Q1是A1時，Q2是A2；其中A1是H、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3鹵代烷基、C1-C4烷氧基，和A2是由-(Z)m-(Z1)-(Z2)定義的基團(tuán)，其中Z是C(R’)(R”)，其中R’和R”分別選自-H或C1-C4烷基，或R’和R”和與它們相連的碳一起形成C3-C7環(huán)烷基，和m是0、1、2或3；Z1是S(O)2、S(O)或C(O)；和Z2是C1-C4烷基、NR1R2、芳基、芳基氨基、芳烷基、芳烷氧基或雜芳基，R1和R2分別選自氫、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基、-S(O)2R3和-C(O)R3；和R3是C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
全文摘要
本發(fā)明描述了用作VEGFR2抑制劑的嘧啶衍生物的制備方法，本發(fā)明還包括嘧啶衍生物以及其在治療高增生疾病中的使用方法。
文檔編號A61P35/00GK1688553SQ03814169
公開日2005年10月26日 申請日期2003年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月17日
發(fā)明者A·波羅爾, M·鐘, 杰弗里·艾倫·斯塔福德 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司