專利名稱：作為內(nèi)酰胺酶抑制劑的二環(huán)6－亞烷基－表霉烯的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某種二環(huán)6-亞烷基表霉烯，其作為廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑使用。β-內(nèi)酰胺酶水解為β-內(nèi)酰胺抗生素，因而是細(xì)菌抗藥性的主要原因。當(dāng)本發(fā)明的化合物與β-內(nèi)酰胺抗生素結(jié)合在一起時(shí)，將對(duì)危急生命的細(xì)菌感染提供一種有效的治療。
背景技術(shù)：
在診所中，青霉素和頭孢菌素是最常見(jiàn)和廣泛使用的β-內(nèi)酰胺抗生素。然而，各種病原體對(duì)β-內(nèi)酰胺抗生素抗藥性的形成已經(jīng)對(duì)保持細(xì)菌感染的有效治療產(chǎn)生破壞作用。(Coleman，K.Expert Opin.Invest.Drugs 1995，4，693；Sutherland，R.Infection 1995，23(4)191；Bush，K，Cur.Pharm.Design 1999，5，839-845)。與對(duì)β-內(nèi)酰胺抗生素形成細(xì)菌抗藥性有關(guān)的、最重要的已知機(jī)理是類型-A、類型-B和類型-C絲氨酸β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生。這些酶降解β-內(nèi)酰胺抗生素，導(dǎo)致抗菌活性損失。類型-A的酶優(yōu)選水解青霉素，而類型-C的內(nèi)酰胺酶具有一種有助于頭孢菌素水解的底物分布。(Bush，K.；Jacoby，G.A.；Medeiros，A.A.Antimicrob.Agents Chemother.1995，39，1211)。到目前為止，已經(jīng)報(bào)道了超過(guò)250種不同的內(nèi)酰胺酶(Payne，D.J，Du，W andBateson，J.H.Exp.Opin.Invest.Drugs 2000，247.)并需要新一代的廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑。通過(guò)β-內(nèi)酰胺抗生素與一種抑制這些酶的化合物一起給藥，可以大大減少對(duì)這些抗生素的細(xì)菌抗藥性。
市場(chǎng)上可買到的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑例如克拉布蘭酸、舒巴坦和他巴克坦都可以有效的抵抗類型-A產(chǎn)生的病原體?？死继m酸在臨床上與阿莫西林和替卡西林一起使用；類似地，舒巴坦與氨芐青霉素以及他巴克坦與哌拉西林一起使用。然而，這些化合物不能有效的對(duì)抗由類型C產(chǎn)生的有機(jī)體。已經(jīng)闡明了類型-A的β-內(nèi)酰胺酶(例如PCI和TEM-1)的失活機(jī)理。(Bush，K.；Antimicrob.Agents Chemother.1993，37，851；Yang，Y.；Janota，K.；Tabei，K.；Huang，N.；Seigal，M.M.；Lin，Y.I.；Rasmussen，B.A.and Shlaes，D.M.J.Biol.Chem.2000，35，26674-26682)。
在1981年，Beecham集團(tuán)公開(kāi)了作為β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的通式1的6-亞烷基表霉烯.[N.F.Osborne，U.S.patent 4,485,110(1984)；N.F.Osborne，Eur.Pat.Appl.81 301683.9，1981] R1和R2獨(dú)立地是氫或C1-10烴基或單雜環(huán)的，R3表示氫或有機(jī)基團(tuán)。隨后，Beecham集團(tuán)還公開(kāi)了通式1的化合物，其中R1包含1，2，3-三唑部分。[N.F.Osborne，Eur.Pat.Appl.84301255.0]。在第二年，Beeckam集團(tuán)申請(qǐng)了3個(gè)結(jié)構(gòu)1的專利，其中R1是一個(gè)任選取代的六元或五元單芳香族環(huán)體系。[N.F.Osborne，Eur.Pat.Appl.85100520.7；Eur.Pat.Appl.85100521.5；Eur.Pat.Appl.85300456-2]。歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?6305585.1公開(kāi)了作為類型-A和類型-C的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的(Z)-6-(1-甲基-1，2，3-三唑-4-基亞甲基)-表霉烯-3-羧酸酯2的合成和應(yīng)用。
Eur.Pat.Appl.86305584.4公開(kāi)了通式1的化合物的制備，其中R1＝非芳香族雜環(huán)基團(tuán)，PCT申請(qǐng)[N.J.Broom；P.D.Edwards，N.F.Osborne and S.Coulton PCT WO 87/00525]公開(kāi)了R1＝稠合雙環(huán)雜芳香族基團(tuán).類似的專利申請(qǐng)[N.J.Broom；G.Brooks；S.Coulton，Eur.Pat.Appl.88311786.3；N.J.Broom；G.Brooks；B.P.Clarke，Eur.Pat.Appl.88311787.1)描述了通式1化合物的制備和使用，其中R1是取代的五元雜芳族環(huán).Coulton等人描述了一種通式1化合物的制備方法[S.Coulton；J.B.Harbridge；N.F.Osborne and G.Walker Eur.Pat.Appl.No 87300193.7]。
在1993年，Beecham公開(kāi)了[A.V.Stachulski and R.walker，PCTWO 93/03042]了通式1化合物的制備和用途，其中R1＝(C1-6)烷基以及R2＝CH2X或COY其中X＝鹵素或CONR2。
在最近十年期間，Beecham申請(qǐng)了三個(gè)用通式3表示的化合物的專利。[N.J.Broom；F.P.Harrington，PCT WO 94/10178；K.Coleman；J.E.Neale PCT WO 95/28935；K.Coleman；J.E.Neale PCT WO95/17184]其中R1＝氫或有機(jī)基團(tuán)，以及R4和R5可以兩個(gè)都是氫或者是如下所示的在環(huán)體系中代替氫原子的一個(gè)或多個(gè)取代基。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明涉及新的、低分子量的廣譜β-內(nèi)酰胺化合物，特別是涉及一類具有β-內(nèi)酰胺酶抑制和抗菌性質(zhì)的二環(huán)雜芳基取代的6-亞烷基表霉烯。因此，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)或與其它抗生素一起用于治療人或動(dòng)物的抗菌感染。
本發(fā)明提供通式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或體內(nèi)可水解的酯R5 ，優(yōu)選下式的化合物
其中A和B之一表示氫，另一個(gè)表示任選取代的稠合二環(huán)雜芳基。在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中使用的措辭′稠合二環(huán)雜芳基′是指包含兩個(gè)稠環(huán)的基團(tuán)，其中一個(gè)環(huán)具有芳香性[即休克爾規(guī)則(4n+2)]，另一個(gè)環(huán)是非芳香族的；稠合二環(huán)雜芳基含有1-6個(gè)選自O(shè)、S、N的雜原子以及N-R1；如式I所示，稠合二環(huán)雜芳基通過(guò)芳環(huán)中的一個(gè)碳原子與分子的其余部分相連；稠合二環(huán)雜芳基的芳環(huán)含有5個(gè)或6個(gè)選自CR2、N、O、S或N-R1的環(huán)原子(包括橋頭原子)。稠合二環(huán)雜芳基的芳環(huán)含有0-3個(gè)選自O(shè)、S、N的雜原子以及N-R1；稠合二環(huán)雜芳基的非芳環(huán)含有5-8個(gè)(包括橋頭原子)選自CR4R4、N、N-R1、O、S(O)n，其中n＝0-2的環(huán)原子。稠合二環(huán)雜芳基的非芳環(huán)含有0-4個(gè)選自N、N-R1、O或S(O)n，其中n＝0-2的雜原子。
X是O或S，優(yōu)選是S；R5是H、體內(nèi)可水解的酯例如C1-C6烷基、C5-C6環(huán)烷基、CHR3OCOC1-C6或鹽例如Na、K、Ca；R5優(yōu)選是H或鹽；R1是H、任選取代的-C1-C6烷基、任選取代的-芳基、任選取代的-雜芳基或單或二環(huán)飽和雜環(huán)、任選取代的-C3-C7環(huán)烷基、任選取代的-C3-C6鏈烯基、任選取代的-C3-C6炔基條件是兩個(gè)雙鍵和三鍵不應(yīng)該存在于直接與N連接的碳原子上；任選取代的-C1-C6全氟代烷基、-S(O)p任選取代的烷基或芳基其中p是2、任選取代的-C＝O雜芳基、任選取代的-C＝O芳基、任選取代的-C＝O(C1-C6)烷基、任選取代的-C＝O(C3-C6)環(huán)烷基、任選取代的-C＝O單或二環(huán)飽和雜環(huán)、任選取代的C1-C6烷基芳基、任選取代的C1-C6烷基雜芳基、任選取代的芳基-C1-C6烷基、任選取代的雜芳基-C1-C6烷基、任選取代的C1-C6烷基單或二環(huán)飽和雜環(huán)、任選取代的8-16個(gè)碳原子的芳基鏈烯基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、任選取代的芳基烷氧基烷基、任選取代的-烷基-O-烷基-芳基、任選取代的-烷基-O-烷基-雜芳基、任選取代的芳氧基烷基、任選取代的雜芳氧基烷基、任選取代的芳氧基芳基、任選取代的芳氧基雜芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基雜芳基、任選取代的烷基芳氧基烷基胺、任選取代的烷氧基羰基、任選取代的芳氧基羰基、任選取代的雜芳氧基羰基。優(yōu)選的R1基團(tuán)是H、任選取代的烷基、任選取代的芳基、-C＝O(C1-C6)烷基、-C3-C6鏈烯基、-C3-C6炔基、任選取代的環(huán)烷基、SO2烷基、SO2芳基、任選取代的雜環(huán)、-CONR6R7和任選取代的雜芳基。
R2是氫、任選取代的C1-C6烷基、具有1-2個(gè)雙鍵的任選取代的C2-C6鏈烯基、具有1-2個(gè)三鍵的任選取代的C2-C6炔基、鹵素、氰基、N-R6R7、任選取代的C1-C6烷氧基、羥基；任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、COOR6、任選取代的烷基芳氧基烷基胺、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、任選取代的C3-C6鏈烯氧基、任選取代的C3-C6炔氧基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷氧基、亞烷基二氧基、任選取代的芳氧基-C1-C6烷基胺、C1-C6全氟代烷基、S(O)q-任選取代的C1-C6烷基、S(O)q-任選取代的芳基其中q是0、1或2、CONR6R7、胍基或環(huán)狀胍基、任選取代的C1-C6烷芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的C1-C6烷基雜芳基、任選取代的雜芳基-C1-C6烷基、任選取代的C1-C6烷基單環(huán)或二環(huán)飽和雜環(huán)、8-16個(gè)碳原子的任選取代的芳基鏈烯基、SO2NR6R7、任選取代的芳基烷氧基烷基、任選取代的芳氧基烷基、任選取代的雜芳氧基烷基、任選取代的芳氧基芳基、任選取代的芳氧基雜芳基、任選取代的雜芳氧基芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基雜芳基、任選取代的芳氧基烷基、任選取代的雜芳氧基烷基、任選取代的烷基芳氧基烷基胺。優(yōu)選的R2基團(tuán)是H、任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、任選取代的雜芳基、鹵素、CN、羥基、任選取代的雜環(huán)、CONR6R7、COOR6、任選取代的芳基、S(O)q-烷基和S(O)q-芳基。
R3是氫、C1-C6烷基、C5-C6環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基；優(yōu)選的R3基團(tuán)是H或C1-C6烷基；R4是H、任選取代的C1-C6烷基、R4中的一個(gè)是OH、C1-C6烷氧基、-S-C1-C6烷基、COOR6、-NR6R7、-CONR6R7；或者R4R4可以一起是＝O，或者R4R4可以與它們相連的碳一起形成5-8元的、任選存在選自N、O、S＝(O)n(其中n＝0-2)、N-R1的雜原子的螺環(huán)體系；優(yōu)選的R4基團(tuán)是H、C1-C6烷基、NR6R7，或者R4R4可以與它們相連的碳一起形成5-8元的、任選存在雜原子例如一個(gè)或兩個(gè)氧、氮和硫的螺環(huán)體系；R6和R7獨(dú)立地是H、任選取代的C1-C6烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的C1-C6烷基芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的C1-C6烷基雜芳基，R6和R7可以一起形成一個(gè)3-7元的、任選具有一個(gè)或兩個(gè)雜原子例如N-R1、O、S＝(O)nn＝0-2的飽和環(huán)體系。優(yōu)選的R6和R7基團(tuán)是H、C1-C6烷基、芳烷基、雜芳基烷基，或者R6和R7一起形成一個(gè)3-7元的、任選具有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的飽和環(huán)體系。
化學(xué)定義術(shù)語(yǔ)烷基是指1-12個(gè)碳原子，優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈的烷基部分。
術(shù)語(yǔ)鏈烯基是指2-8個(gè)碳原子的、含有至少一個(gè)雙鍵并且沒(méi)有三鍵的、直鏈和分枝的鏈烯基部分，鏈烯基部分優(yōu)選具有一個(gè)或兩個(gè)雙鍵。這樣的鏈烯基部分可以以E或Z構(gòu)象存在；本發(fā)明的化合物包括這兩種構(gòu)象。在鏈烯基情況中，與雙鍵相連的碳上不應(yīng)該存在雜原子例如O、S或N-R1；術(shù)語(yǔ)炔基包括含有2-6個(gè)碳原子、含有至少一個(gè)三鍵、直鏈和分枝的炔基部分，炔基部分優(yōu)選具有一個(gè)或兩個(gè)三鍵。在炔基情況中，與雙鍵或三鍵相連的碳上不應(yīng)該存在雜原子例如O、S或N-R1；術(shù)語(yǔ)環(huán)烷基是指具有3-7個(gè)碳原子的脂環(huán)族烴基。在此使用的術(shù)語(yǔ)全氟烷基是指具有最小一個(gè)碳原子和兩個(gè)或多個(gè)氟原子的、直鏈和支鏈飽和脂肪族烴基。例子包括CF3、CH2CF3、CF2CF3和CH(CF3)2。術(shù)語(yǔ)鹵素定義為Cl、Br、F和I。
如果烷基、鏈烯基、炔基或環(huán)烷基是″任選取代的″，下列的一個(gè)或兩個(gè)是可能的取代基硝基、-芳基、-雜芳基、烷氧羰基-、-烷氧基、-烷氧基-烷基、烷基-O-C2-C4烷基-O-、-氰基、-鹵素、-羥基、-N-R6R7、-COOH、-COO-烷基、三氟甲基、-三氟甲氧基、芳烷基、烷芳基、R6R7N-烷基-、HO-C1-C6-烷基-、烷氧基烷基-、烷基-S-、-SO2N-R6R7、-SO2NHR6、-CO2H、CONR6R7、芳基-O-、雜芳基-O-、-S(O)s-芳基(其中s＝0-2)、-烷基-O-烷基-NR6R7、-烷基-芳基-O-烷基N-R6R7、C1-C6烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、烷氧基-烷基-O-、R6R7N-烷基-和-S(O)s-雜芳基(其中s＝0-2)；烷基、鏈烯基、炔基和環(huán)烷基的優(yōu)選取代基包括鹵素、硝基、芳基、雜芳基、-COOH、-COO-烷基、烷氧羰基-、烷氧基、-烷氧基-烷基、-氰基、羥基和-N-R6R7。
芳基定義為芳香族烴部分，選自苯基、α-萘基、β-萘基、聯(lián)苯基、蒽基、四氫萘基、芴基、茚滿基、亞聯(lián)苯基、苊基。優(yōu)選的芳基是苯基和聯(lián)苯基。
雜芳基定義為一種芳香族雜環(huán)體系(單環(huán)或二環(huán))其中雜芳基部分選自(1)呋喃、噻吩、吲哚、氮雜吲哚、噁唑、噻唑、異噁唑、異噻唑、咪唑、N-甲基咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、吡咯、N-甲基吡咯、吡唑、N-甲基吡唑、1，3，4-噁二唑、1，2，4-三唑、1-甲基-1，2，4-三唑、1H-四唑、1-甲基四唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并呋喃、苯并異噁唑、苯并咪唑、N-甲基苯并咪唑、氮雜苯并咪唑、吲唑、喹唑啉、喹啉和異喹啉；(2)二環(huán)芳香族雜環(huán)其中苯基、吡啶、嘧啶或pyridizine環(huán)是(a)與具有一個(gè)氮原子的6-元芳香族(不飽和)雜環(huán)稠合；(b)與具有兩個(gè)氮原子的5或6-元芳香族(不飽和)雜環(huán)稠合；(c)與具有一個(gè)氮原子以及一個(gè)氧原子或一個(gè)硫原子的5-元芳香族(不飽和)雜環(huán)稠合；或者(d)與具有一個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5-元芳香族(不飽和)雜環(huán)稠合。優(yōu)選的雜芳基是呋喃、噁唑、噻唑、異噁唑、異噻唑、咪唑、N-甲基咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、吡咯、N-甲基吡咯、吡唑、N-甲基吡唑、1，3，4-噁二唑、1，2，4-三唑、1-甲基-1，2，4-三唑、1H-四唑、1-甲基四唑、喹啉、異喹啉和萘啶。
如果芳基或雜芳基是′任選取代的′，下列的一個(gè)或兩個(gè)是可能的取代基硝基、-芳基、-雜芳基、烷氧羰基-、-烷氧基、-烷氧基-烷基、烷基-O-C2-C4烷基-O-、-氰基、-鹵素、-羥基、-N-R6R7、-三氟甲基、-三氟甲氧基、芳烷基、烷芳基、R6R7N-烷基-、HO-C1-C6-烷基-、烷氧基烷基-、烷基-S-、-SO2N-R6R7、-SO2NHR6、-CO2H、CONR6R7、芳基-O-、雜芳基-O-、-S(O)s-芳基(其中s＝0-2)、-烷基-O-烷基-NR6R7、-烷基-芳基-O-烷基N-R6R7、C1-C6烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、烷氧基-烷基-O-、R6R7N-烷基-和-S(O)s-雜芳基(其中s＝0-2)；芳基和雜芳基的優(yōu)選取代基包括烷基、鹵素、-N-R6R7、三氟甲基、-三氟甲氧基、芳烷基和烷芳基。
芳烷基定義為芳基-C1-C6烷基-；芳烷基部分包括芐基、1-苯乙基、2-苯乙基、3-苯丙基、2-苯丙基等等。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的在烷基或芳基部分上的取代基取代。
烷芳基定義為C1-C6烷基-芳基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的在芳基或烷基部分上的取代基取代。
雜芳基-C1-C6-烷基定義為雜芳基取代的烷基部分其中烷基鏈為1-6個(gè)碳原子(直鏈或分枝)。烷基雜芳基部分包括雜芳基-(CH2)1-6-等等。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的在烷基或雜芳基部分上的取代基取代。
C1-C6烷基雜芳基定義為附著一個(gè)1-6個(gè)碳原子的烷基鏈(直鏈或分枝)的雜芳基部分，其通過(guò)雜芳基部分與分子的其余部分相連。例如C1-C6-烷基-雜芳基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的在烷基或雜芳基部分上的取代基取代。
飽和或部分飽和的雜環(huán)基團(tuán)定義為選自下面部分的雜環(huán)；氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二噁烷基、六氫氮雜基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異噁唑基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基、二氫噁唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、二氫-1，4-二噁烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫喹啉基和四氫異喹啉基。優(yōu)選的飽和或部分飽和雜環(huán)是氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二噁烷基、六氫氮雜基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、二氫咪唑基和二氫異噁唑基。
C1-C6烷基單環(huán)或二環(huán)飽和或部分飽和雜環(huán)定義為通過(guò)碳原子或氮原子將C1-C6烷基(直鏈或分枝)與雜環(huán)(同前定義)連接在一起，烷基鏈的另一端與分子的其余部分相連。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在分子的烷基或雜環(huán)部分上的取代基取代。
芳基烷氧基烷基定義為芳基-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烷基和/或芳基部分上的取代基取代。
烷氧基烷基定義為C1-C6烷基-O-C1-C6烷基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烷基上的取代基取代。
芳氧基烷基定義為芳基-O-C1-C6烷基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烷基或芳基部分上的取代基取代。
雜芳基烷氧基烷基定義為雜芳基-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烷基和/或雜芳基部分上的取代基取代。
芳氧基芳基定義為芳基-O-芳基-。術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在芳基部分上的取代基取代。
芳氧基雜芳基定義為芳基-O-雜芳基-或芳基-O-雜芳基；在此定義中，芳基部分或雜芳基部分可以與分子的其余部分相連；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在芳基部分或雜芳基部分上的取代基取代。
烷基芳氧基芳基定義為芳基-O-芳基-C1-C6烷基-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在芳基上的取代基取代。
烷基芳氧基雜芳基定義為雜芳基-O-芳基-C1-C6烷基-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在芳基部分或雜芳基部分上的取代基取代。
烷基芳氧基烷基胺定義為R6R7N-C1-C6烷基-O-芳基-C1-C6烷基-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烷基或芳基部分上的取代基取代。R6和R7如前所定義；烷氧羰基定義為C1-C6烷基-O-C＝O-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在烷氧基部分的烷基部分上的取代基取代。
芳氧羰基定義為芳基-O-C＝O-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在芳基部分上的取代基取代。
雜芳氧基羰基定義為雜芳基-O-C＝O-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在雜芳基部分上的取代基取代。
烷氧基定義為C1-C6烷基-O-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烷基部分上的取代基取代。
芳氧基定義為芳基-O-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在芳基部分上的取代基取代。
雜芳氧基定義為雜芳基-O-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在雜芳基部分上的取代基取代。
鏈烯氧基定義為C3-C6烯-O-；例子烯丙基-O-、丁-2-烯-O部分；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如上所定義的存在烯烴部分上的取代基取代，條件是與雙鍵相連的碳原子上沒(méi)有存在雜原子例如O、S或N-R1；炔氧基定義為C3-C6炔-O-；例如CH三鍵C-CH2-O-部分；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在炔烴部分上的取代基取代，條件是與雙鍵或三鍵相連的碳原子上沒(méi)有存在雜原子例如O、S或N-R1；烷基氨基烷氧基定義為R6R7N-C1-C6-烷基-O-C1-C6-烷基-，其中與氧相連的末端烷基與分子的其余部分相連；術(shù)語(yǔ)R6和R7如上所定義；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在烷基部分上的取代基取代。
亞烷基二氧基定義為-O-CH2-O-或-O-(CH2)2-O-；芳氧基烷基胺定義為R6R7N-C1-C6-烷基-O-芳基-，其中芳基與分子的其余部分相連；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在烷基或芳基部分上的取代基取代。
芳基鏈烯基定義為芳基-C2-C8烯-，條件是與雙鍵相連的碳原子上沒(méi)有存在雜原子例如O、S或N-R1；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存對(duì)烯烴或芳基部分上的取代基取代。
雜芳氧基烷基定義為雜芳基-O-C1-C6烷基-；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在雜芳基部分上的取代基取代。
雜芳氧基芳基定義為雜芳基-O-芳基-，其中芳基部分與分子的其余部分相連；術(shù)語(yǔ)′任選取代的′是指未取代的或被1個(gè)或2個(gè)如前所定義的存在雜芳基部分或芳基部分上的取代基取代。
烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基和烷硫基烷氧基是這樣的部分，其中烷基鏈為1-6個(gè)碳原子(直鏈或分枝)。芳氧基、雜芳氧基、芳硫基和雜芳硫基是這樣的部分，其中芳基和雜芳基如前所定義。芳基烷氧基、雜芳基烷氧基、芳基烷硫基和雜芳基烷硫基是這樣的部分，其中芳基和雜芳基如前所定義，以及其中烷基鏈為1-6個(gè)碳原子(直鏈或分枝)。芳氧基烷基、雜芳氧基烷基、芳氧基烷氧基和雜芳氧基烷氧基是這樣的取代基，其中烷基鏈為1-6個(gè)碳原子(直鏈或分枝)。單烷基氨基和二烷基氨基是指具有一個(gè)或兩個(gè)烷基的部分，其中烷基鏈為1-6個(gè)碳原子，以及烷基可以相同或不同。術(shù)語(yǔ)單烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基是指具有一個(gè)或兩個(gè)與氮原子相連的烷基(相同或不同)的單烷基氨基和二烷基氨基部分，其中氮原子與1-3個(gè)碳原子的烷基相連。
稠合二環(huán)雜芳基的例子是任選取代的環(huán)體系，例如下列之一4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶，任選例如被芳烷基例如芐基；被烷氧基芳基烷基例如4-甲氧苯甲基；被C1-C6烷基例如甲基；被雜芳基烷基例如吡啶-3-基甲基；被芳基烷基CO-例如苯乙酰基；或雜芳基CO-例如吡啶-3-基羰基；被烷基CO-例如乙?；〈?，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，任選例如被C1-C6烷基例如甲基取代；5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪；6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪，任選例如被C1-C6烷基例如甲基取代；6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪；4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯；7H-咪唑并[1，2-c]噻唑；4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪；6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-C]吡喃；6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]噻喃；
6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶，任選被C2-C7烷氧羰基取代；6，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氮雜；5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，任選被芳烷基例如芐基取代；5，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪；4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪；5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃；4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚；5，6-二氫-8-H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪；4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯；2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑；2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噁唑；6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪；6，7-5H-二氫吡唑并[5，1-b]噁嗪；和4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪，任選例如被烷氧基烷基CO-例如2-甲氧基乙?；?；或者被烷氧基烷基CO-例如甲氧基乙?；〈?。
二環(huán)雜芳基的其它例子如下 在式1-A中，Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2、N、O、S或N-R1，Z1-Z3中的一個(gè)是碳并且與式I中所示的分子的其余部分相連。當(dāng)其中的一個(gè)Z是CR2時(shí)，在不破壞芳香性的情況下，另兩個(gè)Z可以是兩個(gè)N，或者可以是一個(gè)N與O、S、N-R1的任何組合；當(dāng)兩個(gè)Z＝CR2時(shí)，在不破壞芳香性的情況下，另一個(gè)Z可以以任何組合任選選自N、O、S或N-R1；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O、N-R1、C＝O；條件是沒(méi)有形成S-S或O-O或S-O鍵，以形成飽和的環(huán)體系；t＝1-4。
在式1-B中，Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2、N、O、S或N-R1，Z1-Z3中的一個(gè)是碳并且與式I中所示的分子的其余部分相連。當(dāng)一個(gè)Z＝CR2時(shí)，在不破壞芳香性的情況下，另兩個(gè)Z可以獨(dú)立地是任何組合的CR2、N、O、S或N-R1；當(dāng)兩個(gè)Z＝N，那么環(huán)中的另一個(gè)碳與式I中所示的分子的表霉烯部分相連。
W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O、N-R1、t＝1-4；Y1和Y2＝N或C；條件是當(dāng)芳香族雜環(huán)是咪唑時(shí)，該飽和的環(huán)不能含有與橋頭碳鄰接的S。
在式1-C中，Z1、Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2或N，Z1-Z4中的一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連。
W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1；條件是沒(méi)有形成S-S或O-O或S-O鍵，以形成飽和的環(huán)體系；t＝1-4。
Y1和Y2獨(dú)立地是C或N。
式1-A的更優(yōu)選的實(shí)施方案1.t＝1-3。
2.在式1-A中，Z1是N、S、N-R1或O，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是碳并且與式I中所示的分子的其余部分相連。
3.在式1-A中，Z3是N、S、N-R1或O，Z2或Z1中的一個(gè)是CR2，Z2或Z1中的另一個(gè)是碳并且與式I中所示的分子的其余部分相連。
4.在式1-A中，Z2是N、S、N-R1或O，Z1或Z3中的一個(gè)是CR2，Z1或Z3中的另一個(gè)是碳并且與式I中所示的分子的其余部分相連。
5.在式1-A中，Z1是N、N-R1、O或S，Z2是N、O或S，Z3是與式I中所示的分子的表霉烯部分相連的碳。
6.在式1-A中，Z3是N、N-R1、O或S，Z2是N、O或S，Z1是與式I中所示的分子的表霉烯部分相連的碳。
7.在式1-A中，Z1是N、N-R1、O或S，Z3是N、O或S，Z2是與式I中所示的分子的表霉烯部分相連的碳。
8.在式1-A中，Z1是N、S、N-R1或O，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4。
9.在式1-A中，Z3是N、S、N-R1或O，Z2或Z1中的一個(gè)是CR2，Z2或Z1中的另一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4。
10.在式1-A中，Z2是N、S、N-R1或O，Z1或Z3中的一個(gè)是CR2，Z1或Z3中的另一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4。
11.在式1-A中，Z1是N、N-R1、O或S，Z2是N、O或S，Z3是與分子的表霉烯部分相連的碳；W1、W2、W3獨(dú)立地是CR4R4。
12.在式1-A中，Z3是N、N-R1、O或S，Z2是N、O或S，Z1是與分子的表霉烯部分相連的碳；W1、W2、W3獨(dú)立地是CR4R4。
13.在式1-A中，Z1是N、N-R1、O或S；Z3是N、O或S；Z2是與分子的表霉烯部分相連的碳；W1、W2、W3獨(dú)立地是CR4R4。
14.在式1-A中，Z3是N、N-R1、O或S；Z1是N、O或S；Z2是與分子的表霉烯部分相連的碳；W1、W2、W3獨(dú)立地是CR4R4。
15.在式1-A中，Z1是N、S、N-R1或O，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連；t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2是CR4R4。
16.在式1-A中，Z3是N、S、N-R1或O，Z2或Z1中的一個(gè)是CR2，Z2或Z1中的另一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連；t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
17.在式1-A中，Z2是N、S、N-R1或O；Z1或Z3中的一個(gè)是CR2，Z1或Z3中的另一個(gè)是碳并且與分子的其余部分相連；t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2是CR4R4。
18.在式1-A中，當(dāng)Z1＝N、N-R1、O或S，Z2＝N、O或S，Z3＝與分子的表霉烯部分相連的碳時(shí)，其中t＝1-3，那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
19.在式1-A中，當(dāng)Z3＝N、N-R1、O或S，Z2＝N、O或S，Z1＝與分子的表霉烯部分相連的碳時(shí)，其中t＝1-3，那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
20.在式1-A中，當(dāng)Z1＝N、N-R1、O或S，Z3＝N、O或S，Z2＝與分子的表霉烯部分相連的碳時(shí)，其中t＝1-3，那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
21.在式1-A中，Z1＝N、S、N-R1或O，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；那么W1和W3＝CH2或者亞甲基鍵上的兩個(gè)氫可以被替換以形成螺環(huán)系，在任選存在選自O(shè)、S＝(O)n(n＝0-2)、N-R1的雜原子的情況下形成5-8元環(huán)體系；t＝1-3；一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
22.在式1-A中，Z3＝N、S、N-R1或O，Z2或Z1中的一個(gè)＝CR2，Z2或Z1中的另一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；那么W1和W3＝CR4R4；其中t＝1-3，那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
23.在式1-A中，Z2＝N、S、N-R1或O，Z1或Z3中的一個(gè)＝CR2，Z1或Z3中的另一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；那么W1和W3＝CR4R4；其中t＝1-3，那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
24.在式1-A中，當(dāng)Z1＝N、N-R1、O或S，Z2＝N、O或S時(shí)，那么Z3＝與分子的表霉烯部分相連的碳；那么W1和W3＝CR4R4，其中t＝1-3那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
25.在式1-A中，當(dāng)Z3＝N、N-R1、O或S，Z2＝N、O或S時(shí)，那么Z1＝與分子的表霉烯部分相連的碳；那么W1和W3＝CR4R4，其中t＝1-3那么一個(gè)W2＝N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2＝CR4R4。
26.在式1-A中，當(dāng)Z1＝N、N-R1、O或S，Z3＝N、O或S時(shí)；那么Z2＝與分子的表霉烯部分相連的碳；那么W1和W3＝CR4R4，其中t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1、O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2是CR4R4。
27.在式1-A中，Z3是N、N-R1、O或S；Z1是N、O或S；Z2是與分子的其余相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1，O或S(O)nn＝0-2，另一個(gè)W2是CR4R4。
式1-B的更優(yōu)選的實(shí)施方案28.在式1-B中，t＝3。
29.在式1-B中，Z1和Z3是N；Y1是N；Y2是C，Z2是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
30.在式1-B中，Z2和Z3是N；Y1是N；Y2是C，Z1是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
31.在式1-B中，Z1是N，Y1是N，Y2是C，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
32.在式1-B中，Z1是N，Y1是C，Y2是N，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
33.在式1-B中，Z1是N，Y1是N，Y2是C，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳，W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1、O、S＝(O)n(n＝0-2)，另一個(gè)W2是CR4R4。
34.在式1-B中，Z1是N，Y1是C，Y2是N，Z2或Z3中的一個(gè)是CR2，Z2或Z3中的另一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳，W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；t＝1-3；一個(gè)W2是N-R1、O、S＝(O)n(n＝0-2)，另一個(gè)W2是CR4R4。
35.在式1-B中；Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1或Z2中的一個(gè)是CR2；Z1或Z2中的另一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
36.在式1-B中；Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z1或Z3中的一個(gè)是CR2；Z1或Z3中的另一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
37.在式1-B中，Z1和Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z3是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
38.在式1-B中，Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；除Z1-Z3中的一個(gè)是與式I中所示分子的其余部分相連的碳。
39.在式1-B中，Z1和Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z2是與式I中所示分子的其余部分相連的碳；t＝1-3。
40.在式1-B中，Z2和Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1是與分子的其余部分相連的碳，t＝1-3。
41.在式1-B中，Z2和Z3是N，Y1是C，Y2＝N，Z1是與分子的其余部分相連的碳，t＝1-3。
42.在式1-B中，Z2和Z3是N，Y1是N；Y2是C；Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CH2或者亞甲基鍵上的兩個(gè)氫可以被替換以形成螺環(huán)系，在任選存在選自O(shè)、S＝(O)n(n＝0-2)、N-R1的雜原子的情況下形成5-8元環(huán)體系；t＝1-3；W2＝CH2、N-R1、O或S(O)nn＝0-2。
43.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2，Z2是與分子的其余部分相連的碳。
44.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4；t＝1-3。
45.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝1-3。
46.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1和W2獨(dú)立地是CR4R4；W3是N-R1、O或S(O)n，t＝2。
47.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
48.在式1-B中，Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z3是CR2，Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W2是CH2或者亞甲基鍵上的兩個(gè)氫可以被替換以形成螺環(huán)系，在任選存在選自O(shè)、S＝(O)n(n＝0-2)、N-R1的雜原子的情況下形成5-8元環(huán)體系；W3是N-R1、O或S(O)n；t＝3。
49.在式1-B中，Z2是N；Y1是N；Y2是C，Z3是CR2；Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CH2或者亞甲基鍵上的兩個(gè)氫可以被替換以形成螺環(huán)系，在任選存在選自O(shè)、S＝(O)n(n＝0-2)、N-R1的雜原子的情況下形成5-8元環(huán)體系；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝2。
50.在式1-B中，Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z3是CR2；Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CH2或者亞甲基鍵上的兩個(gè)氫可以被替換以形成螺環(huán)系，在任選存在選自O(shè)、S＝(O)n(n＝0-2)、N-R1的雜原子的情況下形成5-8元環(huán)體系；W2是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
51.在式1-B中，Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝3。
52.在式1-B中，Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝2。
53.在式1-B中，Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z1是CR2；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
54.在式1-B中，Z1和Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝3。
55.在式1-B中，Z1和Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝2。
56.在式1-B中，Z1和Z2是N；Y1是N；Y2是C；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
57.在式1-B中，Z1和Z2獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝3。
58.在式1-B中，Z1和Z2獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝2。
59.在式1-B中，Z1和Z2獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z3是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
60.在式1-B中，Z1和Z3獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝3。
61.在式1-B中，Z1和Z3獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝2。
62.在式1-B中，Z1和Z3獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z2是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
63.在式1-B中，Z3和Z2獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W2獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝3。
64.在式1-B中，Z3和Z2獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2中的一個(gè)是N-R1、O或S(O)n，W2中的另一個(gè)是CR4R4；t＝2。
65.在式1-B中，Z3和Z2獨(dú)立地是CR2；Y1是C；Y2是N；Z1是與分子的其余部分相連的碳；W1和W3獨(dú)立地是CR4R4；W2是N-R1、O或S(O)n；t＝1。
66.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1和Z2中的一個(gè)是CR2，Z1和Z2中的另一個(gè)是C；W1是CR4R4；W2是CR4R4；W3是CH2、N-R1或O；t＝1。
67.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1和Z2中的一個(gè)是CR2，Z1和Z2中的另一個(gè)是C；W1是CR4R4；W2是C＝O；W3是N-R1；t＝1。
68.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1和Z2中的一個(gè)是CR2，Z1和Z2中的另一個(gè)是C；W1是N-R1；W2是C＝O；W3是CR4R4；t＝1。
69.在式1-B中，Z3是N；Y1是N；Y2是C；Z1和Z2中的一個(gè)是CR2，Z1和Z2中的另一個(gè)是C；W1是C＝O；W2是N-R1；W3是CH2；t＝1。
式1-C的更優(yōu)選的實(shí)施方案是70.在式1-C中，Z1、Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
71.在式1-C中，Z1、Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C或N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
72.在式1-C中，Z1、Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Y1和Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
73.在式1-C中，Z1是N，Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
74.在式1-C中，Z1是N，Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是C；Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
75.在式1-C中，Z2＝N，Z1、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
76.在式1-C中，Z2是N，Z1、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是C；Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
77.在式1-C中，Z3是N；Z1、Z2和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
78.在式1-C中，Z3是N，Z1、Z2和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是C；Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
79.在式1-C中，Z4是N，Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
80.在式1-C中，Z4是N，Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是N；Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
81.在式1-C中，Z1是N，Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
82.在式1-C中，Z1和Z2是N，Z3或Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是C；Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
83.在式1-C中，Z1和Z3是N，Z2或Z4獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是C；Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
84.在式1-C中，Z1和Z4是N，Z2或Z3獨(dú)立地是CR2；Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；Y1是N；Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
85.在式1-C中，Z1、Z2、Z3是N，Z4是與分子的其余部分相連的碳；Y1是C；Y2是N；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
86.在式1-C中，Z1、Z3和Z4是N，Z2是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
87.在式1-C中，Z1、Z2和Z4是N，Z3是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
88.在式1-C中，Z2、Z3、Z4是N，Z1是與分子的其余部分相連的碳；Y1和Y2是C；t＝1-3；W1、W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是1.(5R，6Z)-6-[(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
2.(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
3.(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
4.(5R，6Z)-6-{[5-(4-甲氧苯甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
5.(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
6.(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
7.(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
8.(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
9.(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
10.(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
11.(5R)(6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
12.(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
13.(5R)(6Z)-6-(7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。
14.(5R，6Z)-7-氧代-6-[(4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)亞甲基]-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
15.6-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
16.6-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]噻喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
17.6-(5-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
18.2-(2-羧基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-亞甲基)-6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-羧酸乙酯。
19.7-氧代-6-(6，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氮雜_-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
20.(5R)，(6Z)-6-(7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
21-(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
22.(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
23.(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(苯乙?；?-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸。
本發(fā)明的化合物具有β-內(nèi)酰胺酶抑制和抗菌性質(zhì)，可以用于治療人和動(dòng)物的感染。人們注意到當(dāng)本發(fā)明的化合物與β-內(nèi)酰胺抗生素聯(lián)合用藥時(shí)，對(duì)類型-A和類型-C產(chǎn)生的生物體的抗菌活性增加(協(xié)同作用)。β-內(nèi)酰胺抗生素包括青霉素抗生素例如哌拉西林、羥氨芐青霉素、替卡西林、青霉素G、氨必西林、磺芐西林，其它已知的青霉素和頭孢菌素例如頭孢三嗪、頭孢利定、噻孢霉素、頭孢唑啉、頭孢菌素Ⅳ、頭孢雷定，其它已知的頭孢菌素，氨曲南和拉氧頭孢(艾內(nèi)酰胺)。本發(fā)明最優(yōu)選的化合物與哌拉西林或阿莫西林一起用藥，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性病原體具有廣譜活性。
可以在給予β-內(nèi)酰胺抗生素之前、給予β-內(nèi)酰胺抗生素的同時(shí)，或者在給予β-內(nèi)酰胺抗生素之后提供本發(fā)明的化合物(″同時(shí)服用″)?！逄峁灏ㄔ隗w內(nèi)直接給予化合物或者例如，直接給予其前體藥物。當(dāng)本發(fā)明的化合物與β-內(nèi)酰胺抗生素同時(shí)服用時(shí)，本發(fā)明的化合物與β-內(nèi)酰胺抗生素的數(shù)量比例可以在很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行變化。β-內(nèi)酰胺抗生素與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的比例可以在1∶1-100∶1之間變化。β-內(nèi)酰胺抗生素與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的比例優(yōu)選小于10∶1。本發(fā)明的組合物可以以適合口服(PO)、靜脈注射(IV)或局部給藥的形式存在。本發(fā)明的組合物可以以片劑、膠囊、乳劑、糖漿劑、懸浮液、適合注射或輸液的無(wú)菌溶液的形式存在。優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物與哌拉西林靜脈內(nèi)一起給予或者與阿莫西林通過(guò)靜脈內(nèi)或口服一起給予。
化合物的結(jié)構(gòu)式包括任何互變異構(gòu)體、任何立體異構(gòu)體(立體化學(xué)清楚注明的除外)和任何晶形。
表霉烯抑制劑的IC50的測(cè)定表霉烯抑制劑的β-內(nèi)酰胺酶抑制活性由Bush等人所述的分光光度法測(cè)定[Bush，K.，Macalintal，C.，Rasmussen，B.A.，Lee，V.and Yang，Y.Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1993，37，851]。在測(cè)定中使用從陰溝腸桿菌的大腸桿菌和Imi-1中均勻提純的類型Aβ-內(nèi)酰胺酶TEM-1、從脆弱擬桿菌中均勻提純的類型B酶CcrA以及從陰溝腸桿菌中均勻提純的類型C酶AmpC。TEM-1、Imi-1、CcrA和AmpC的酶濃度分別是4.3、7.1、1.2和2.1nM.在50mM PO4中制備pH7.0的各種范圍的抵制劑濃度，以包括可能的IC50值。用于引發(fā)酶反應(yīng)的底物是頭孢硝噻吩，作為抑制劑以50μg/ml的濃度存在于相同的緩沖劑中。開(kāi)始時(shí)，在加入160μL體積的頭孢硝噻吩前，將酶和抑制劑(各20μl)在25℃下預(yù)培養(yǎng)10分鐘。使用Molecular Devices SpectrAMax250，用kinetic protocol of SoftMax程序，在495nm處對(duì)水解的初速度監(jiān)測(cè)5分鐘。將從SpectrAMax 250中輸出的讀數(shù)轉(zhuǎn)入到微軟的數(shù)據(jù)庫(kù)中。根據(jù)控制酶的活性，計(jì)算每個(gè)抵制劑濃度的抑制百分比。使用圖解法測(cè)定導(dǎo)致酶活性減少50％的抵制劑濃度(IC50)。
表1
抗菌敏感試驗(yàn)?？股氐捏w外活性通過(guò)the National Committee forClinical Laboratory Standards(NCCLS)推薦的microbroth稀釋法進(jìn)行測(cè)定。(NCCLS.2000.Methods for Dilution AntimicrobialSusceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically；ApprovedStandardsM7-A5，vol.19.National Committee for ClinicalLaboratory Standards，Villanova，PA)。在試驗(yàn)方法中使用Mueller-Hinton II肉湯(MHBII)(BBL Cockeysville，MD)。微孔板用50μL的接種物進(jìn)行接種，其中微孔板的每個(gè)孔中含有50μL的哌拉西林與恒定量(4ug/mL)的B-內(nèi)酰胺酶抑制劑的兩倍系列稀釋，在100·1的最終體積中得到適宜的密度(105CFU/ml)。在環(huán)境空氣中，在35℃下，將板培養(yǎng)18-22小時(shí)。將所有分離菌的最小抑菌濃度(MIC)定義為通過(guò)肉眼測(cè)定有機(jī)體生長(zhǎng)被徹底抑制時(shí)所需的抗菌劑的最低濃度。通過(guò)上述方法獲得的MIC數(shù)據(jù)列于表2中。
表2最小抑菌濃度(μg/ml)數(shù)據(jù)Inc35℃，18小時(shí)
體內(nèi)抗菌保護(hù)材料動(dòng)物雌性小鼠品系CD-1，約18-22克，來(lái)源于Charles River實(shí)驗(yàn)室，使用前隔離7天。此外，可以使用環(huán)磷酰胺，讓小鼠變得嗜中性白細(xì)胞減少。
感染在實(shí)驗(yàn)中使用已經(jīng)引起小鼠感染的臨床分離物，包括菌株大腸肝菌、K.pneumoniae、M.morganii、E.cloacae、S.marcescens、C.freundii、葡萄球菌、鏈球菌、P.aeruginosa和N.gonorrhoeae造成的感染。
準(zhǔn)備工作根據(jù)NIH指南，將動(dòng)物按每籠5只進(jìn)行喂養(yǎng)，讓它們自由攝取食物和水。
實(shí)驗(yàn)方案給小鼠通過(guò)腹膜內(nèi)注射0.5ml或通過(guò)鼻內(nèi)注射0.05ml預(yù)先確定的懸浮在肉湯、鹽水或豬胃粘蛋白中的細(xì)菌接種物(對(duì)于N.gonorrhoeae，補(bǔ)充干的牛血紅蛋白)。細(xì)菌接種物相當(dāng)于10-100 LD50s的特定感染菌株，并且在7天內(nèi)引起沒(méi)有治療的對(duì)照動(dòng)物的死亡″小鼠中的細(xì)菌毒力″。溶解或懸浮在0.2％含水瓊脂或甲基纖維素、磷酸鹽緩沖鹽水或助劑中的抗菌劑量(通過(guò)抗生素雙倍系列稀釋制得的劑量濃度a)口服或皮下感染后1/2小時(shí)，給予0.5ml的劑量體積。感染后3小時(shí)，可以給予第二次劑量，用于治療由更加毒性的有機(jī)體所引起的感染。
b)靜脈內(nèi)感染后1/2小時(shí)，給予0.2ml的劑量體積。直至48小時(shí)，可以給予更多的劑量，用于治療由更惡性的有機(jī)體引起的感染。(靜脈注射劑量不超過(guò)3劑量/24小時(shí)。)c)口服預(yù)治療在特殊情況下，為了增加抗生素在胃中的穩(wěn)定性，需要調(diào)節(jié)胃的pH。為此，感染后1/2小時(shí)，口服給予0.5ml的磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.8，0.06M)(或特殊批準(zhǔn)的助劑)，5分鐘后，接著口服給予0.5ml含在磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.8，0.06M)中的抗生素。
動(dòng)物物種下面將詳細(xì)說(shuō)明用于體內(nèi)效果測(cè)定所需的動(dòng)物的數(shù)目A)新的抗生素在5個(gè)不同的劑量水平下進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)劑量水平使用5只小鼠，每個(gè)劑量水平分別使用三種給藥途徑(口服、皮下注射和靜脈注射)。最初，應(yīng)該研究三個(gè)給藥途徑以便測(cè)定藥物是否口服吸收和/或確定哪種給藥途徑是最有效地途徑。每個(gè)途徑需要25只小鼠，對(duì)于每個(gè)新的測(cè)試化合物，3種給藥途徑總共需要75只小鼠。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，將測(cè)試一個(gè)至兩個(gè)新的抗生素(75-150只小鼠)。
B)新化合物的效果必須與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，或者與已知效果的抗生素進(jìn)行比較。已知的或預(yù)先測(cè)試的抗生素在5個(gè)劑量水平下通過(guò)一種給藥途徑進(jìn)行測(cè)試，總共為25只小鼠/抗生素。通常，在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，將測(cè)試3-6個(gè)抗生素(75-150只小鼠)。
C)未經(jīng)治療的對(duì)照組-在上述測(cè)試的每一個(gè)中，未經(jīng)治療的動(dòng)物用3種不同濃度的細(xì)菌接種物進(jìn)行感染，每種濃度10只小鼠(每個(gè)測(cè)試中總共需要30只小鼠)。根據(jù)測(cè)試的需要，這些未經(jīng)治療的對(duì)照組用來(lái)測(cè)定和保持感染水平在10-100 LD50s之間，以測(cè)試比較和有效性。
抗菌劑保護(hù)作用的測(cè)定通過(guò)比較受感染的未經(jīng)治療的動(dòng)物和受感染的接受治療的動(dòng)物的存活率，來(lái)測(cè)定抗菌劑的保護(hù)作用。為了進(jìn)行此測(cè)定，動(dòng)物在治療后觀察7天。每天兩次統(tǒng)計(jì)存活者，在統(tǒng)計(jì)的時(shí)候，除去已經(jīng)死亡的以及垂死的動(dòng)物。將三個(gè)單獨(dú)測(cè)試中的7天存活率進(jìn)行合并，通過(guò)電腦化程序進(jìn)行概率分析，以評(píng)價(jià)半數(shù)有效劑量(ED50)(Cleeland，R.and E.Squires.1991.Evaluation of New Antimicrobials in Vitro and inExperimental Animal Infections.In Antibiotics in Lab oratoryMedicine″，3rd.ed.，edited by Victor Lorian.Willams and WilkinsBaltimore，Maryland.pp.752-783)。在單獨(dú)的天數(shù)中進(jìn)行三次測(cè)試，以提供統(tǒng)計(jì)學(xué)上的動(dòng)物有效數(shù)目和在每天和每次測(cè)試的基礎(chǔ)上使測(cè)試結(jié)果中的變化達(dá)到最小值。
表3
發(fā)明方法本發(fā)明還提供一種制備式I化合物的方法，包括將式II的化合物進(jìn)行還原性消除反應(yīng)
其中A′是如上所定義的A或B，X是O或S，P是一個(gè)酯離去基團(tuán)，例如乙酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，R是保護(hù)基，如果必要，接著除去保護(hù)基，得到式I的化合物其中R5是氫；如果需要，轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽或酯其中R5是XC-C6烷基、C5-C6環(huán)烷基或CHR3OCOC1-C6烷基。
優(yōu)選在-20℃至-40℃下，在無(wú)水MgBr2或MgBr2醚合物以及一種堿例如三乙胺或DBU或DMAP存在下，通過(guò)一種溫和的和容易的新方法，將合適取代的醛4與結(jié)構(gòu)1的6-溴-表霉烯衍生物進(jìn)行縮合(流程1)，可以方便地制備通式I的化合物。中間體羥醛產(chǎn)物5可以用?；然蛩狒M(jìn)行官能化反應(yīng)，得到乙酸酯、三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯6。使用一種金屬例如活性鋅以及磷酸鹽緩沖液，在20℃至35℃下，在6.5至8.0的pH范圍內(nèi)，通過(guò)還原消除方法，可以順利地將化合物6轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物。如果羧酸酯氧上的保護(hù)基是對(duì)硝基芐基取代基，那么一步就可以實(shí)現(xiàn)還原消除和脫保護(hù)。但是，如果保護(hù)基不是對(duì)硝基芐基取代基，取決于保護(hù)基的性質(zhì)，可以采取兩步法。可以以游離酸或堿金屬鹽的形式分離產(chǎn)物。在整個(gè)方法中通過(guò)不分離中間體6，可以將上述的兩步法在一步中進(jìn)行。從收率和經(jīng)濟(jì)可行性角度考慮，這是一種非常普遍的、相對(duì)簡(jiǎn)單的和有效的方法。這種方法可以在大規(guī)模合成中采用并且能夠適應(yīng)各種各樣的醛?；蛘撸衔?可以在40psi的壓力下，在Pd/C(10％)存在下，在THF和6.5磷酸鹽緩沖液中，進(jìn)行氫化，得到最終產(chǎn)物。
上述羥醛縮合反應(yīng)是非常普遍的，它可以被應(yīng)用于任何的溴代表霉烯衍生物，其中羧基被除4-硝基芐基部分外的保護(hù)基所保護(hù)。其它保護(hù)基的例子包括芐基、對(duì)甲氧基芐基衍生物、benzyhydrol、三苯甲基、烷基和烯丙基衍生物。但是，當(dāng)保護(hù)基是除4-硝基芐基外的基團(tuán)時(shí)，還原消除步驟后，需要進(jìn)行單獨(dú)的脫保護(hù)步驟。涉及脫保護(hù)步驟的化學(xué)知識(shí)是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所公知的。
流程

圖1 P＝-OMs(甲磺酸酯)，-OTf(三氟甲磺酸酯)；-OTs(甲苯磺酸鹽酯)上述轉(zhuǎn)化所需的醛4可以從它們各自的醇衍生物通過(guò)MnO2氧化或通過(guò)Swern氧化制備。在一些情況中，可以通過(guò)VilsmierHaack反應(yīng)，使用DMF/POCl3，在雜環(huán)部分中直接引入所需醛的官能度。本研究中所需的醛可以如流程圖2至5中所述那樣進(jìn)行制備。將N-(叔丁氧羰基)-(即)t-Boc保護(hù)的-4-哌啶酮用DMF/POCl3處理，得到4-氯-3-甲酰衍生物。(流程圖2)。該反應(yīng)可以在四氫-4H-吡喃-4-酮和相應(yīng)的四氫-4H-噻喃-4-酮衍生物中進(jìn)行，得到相應(yīng)的氧和硫衍生物。該反應(yīng)還可以在5-8元環(huán)酮衍生物中進(jìn)行。氯代甲酰中間體可以與2-巰基乙酸乙酯反應(yīng)，得到噻吩并衍生物。酯可以轉(zhuǎn)化為醇，醇可以轉(zhuǎn)化為初始醛的官能度。流程圖3說(shuō)明咪唑并-四氫化吡啶衍生物和咪唑并吡嗪衍生物的制備。2-氨基吡啶或2-氨基吡嗪可以與溴代丙酮酸乙酯在沸騰的乙醇中反應(yīng)，得到環(huán)化衍生物(流程圖3)?？梢詫?shí)現(xiàn)一個(gè)環(huán)的原因。
流程圖2 上述工序可以從四氫-4H-吡喃-4-酮和相應(yīng)的四氫-4H-噻喃-4-酮開(kāi)始。在5-8元環(huán)酮上可以進(jìn)行Vilsmier反應(yīng)。
流程圖3 在帕爾(par)裝置中，在Pd/C催化劑存在下，在40psi壓力下，對(duì)它進(jìn)行氫化。隨后，可以將酯基還原成醇，然后將醇轉(zhuǎn)化為醛。在X＝N的情況中，可以使用一種合適的R1Q(其中Q是一種離去基團(tuán)或一種縮合基團(tuán))對(duì)中間體氨基酯進(jìn)行衍生化。在流程圖3的情況中，其中R1＝H，可以通過(guò)流程圖4中列出的方法進(jìn)行合成。
流程圖4 其它的醛可以如流程圖5-7中所列出的那樣進(jìn)行合成。
流程圖5 實(shí)施例24-32和34、35所需的醛通過(guò)流程圖8-18所示的路徑制備。
流程圖6 流程圖7
流程圖8
流程圖9 流程圖10
流程圖11 流程圖12 流程圖13
流程圖14 流程圖15 流程圖16
流程圖17 流程圖18 實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1(5R，6Z)-6-[(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟15-苯甲?；?4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-羧酸乙酯在0℃-5℃之間，向攪拌下的干燥DMF(7.3g，100mmol)中緩慢地加入POCl3(12.25g，80mmol)。加畢后，將固化的物質(zhì)溶于CH2Cl2(20ml)中，并在室溫下攪拌2小時(shí)。再次將溫度冷卻至0℃，緩慢地加入在CH2Cl2中的1-苯甲?；?4-哌啶酮。加畢后，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，并倒在碎冰和醋酸鈉上。它在室溫下攪拌30分鐘。用CH2Cl2萃取，用水充分洗滌，在無(wú)水MgSO4中干燥，濃縮。將粗產(chǎn)物溶于CH2Cl2中，在室溫下，向其中緩慢地加入巰基乙酸乙酯(9.6g，80mmol)/Et3N(10.1g，100mmol)。反應(yīng)混合物回流2小時(shí)，然后用水熄滅。CH2Cl2層用水充分洗滌；在無(wú)水MgSO4中干燥；過(guò)濾，濃縮。產(chǎn)物用二氧化硅柱色譜(用50％的乙酸乙酯∶己烷洗脫)進(jìn)行提純。黃色油；收率6.4g(25％)；M+H316。
步驟2(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲醇在0℃下，向攪拌下的LAH(2.0g)的懸浮液中緩慢加入5-苯甲?；?4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(6.0g，19mmol)在THF中的溶液。加畢后，將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后用飽和的NH4Cl熄滅。用CHCl3稀釋并過(guò)濾。濾液用飽和鹽水溶液進(jìn)行洗滌，然后在無(wú)水MgSO4中干燥。將它過(guò)濾，無(wú)需進(jìn)一步提純，就直接用于下一步反應(yīng)中。收率4.5g 91％。黃色液體。
步驟32-甲?；?5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶向攪拌下的(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲醇(4.0g，15.4mmol)在CH2Cl2(300ml)中的溶液中加入活性MnO2(20g，過(guò)量)，然后在室溫下攪拌18小時(shí)。最后，用硅藻土濾過(guò)反應(yīng)混合物，然后用CHCl3洗滌。反應(yīng)混合物用水充分洗滌；干燥，濃縮。發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物是純凈的，無(wú)需進(jìn)一步提純，就直接用于下一步反應(yīng)中。收率3.0g(76％)；(M+H257)。
步驟44-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，向無(wú)水MgBr2:O(Et)2(390mg，1.5mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中依次加入2-甲?；?5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶(565mg，2.2mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(772mg，2.0mmol)的干燥THF溶液(20mL)。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉以及鹽水洗滌。將有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。該襯墊用乙酸乙酯洗滌。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)進(jìn)行洗脫。收集組分，并在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率550mg，40％；M+H 687。
步驟5(5R，6Z)-6-[(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸將4-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(450mg，0.65mmol)溶于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。剛剛活化的鋅粉(5.2g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入0.1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮，得到黃色沉淀。產(chǎn)物用HP21樹(shù)脂反相柱層析進(jìn)行提純。開(kāi)始時(shí)，柱子用去離子水(2升)進(jìn)行洗脫，然后再用10％的乙腈∶水進(jìn)行洗脫。收集含產(chǎn)物的組分，并在室溫下減壓濃縮。黃色固體用丙酮洗滌，過(guò)濾，干燥。收率50mg，18％；黃色晶體；mp.198℃；(M+H)411。
1H NMR(DMSO-d6)δd 2.7(m，2H)，2.8(bm，2H)，3.4(m，2H)，3.8(s，2H)，6.3(s，1H)，6.5(s，1H)，7.1(s，1H)，7.28(s，1H)，7.4(s，5H).
實(shí)施例2(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟1咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯在室溫下，將溴代丙酮酸乙酯(62.9g)加入到2-氨基吡嗪(24.8g)的DME(258mL)溶液中，然后攪拌2.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并攪拌30分鐘，得到一種淺褐色的沉淀。將沉淀過(guò)濾，用Et2O洗滌，得到淺褐色的晶體。將該沉淀(66.1g)在EtOH(1.29L)中的懸浮液在回流溫度下加熱，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌吻迦芤??；亓?小時(shí)后，反應(yīng)混合物在減壓下進(jìn)行濃縮，然后與CHCl3和飽和NaHCO3水溶液混合?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，分離的有機(jī)層在MgSO4中干燥，然后過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物用于硅膠柱層析，然后柱子用CHCl3-MeOH(99/1-97/3)進(jìn)行洗脫，收集的組分在減壓下進(jìn)行濃縮，接著用CHCl3-Et2O進(jìn)行重結(jié)晶。得到淺桃紅色晶體形式的標(biāo)題化合物。收率10.9g，22％)。
1H NMR(CDCl3)δd 1.46(t，3H，J＝7.2Hz)，4.49(q，2H，J＝7.2Hz)，7.96(d，1H，J＝4.7Hz)，8.08(dd，1H，J＝1.2，4.7Hz)，8.26(s，1H)，9.21(d，1H，J＝1.2Hz).
步驟25，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯，鹽酸鹽將0.46 MHcl-EtOH(169mL)和10％的Pd-C(50％濕度)(1.37g)加入到咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(13.7g)的EtOH(546mL)溶液中。在H2下，在40psi下，在室溫下，將混合物氫化15小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，用EtOH洗滌Pd-C。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物應(yīng)用硅膠柱層析，然后柱子用CHCl3-MeOH(9/1-2/1)進(jìn)行洗脫。得到褐色晶體形式的標(biāo)題化合物，收率10.4g，63％。
1H NMR(CDCl3)δd 1.38(t，3H，J＝7.1Hz)，3.90(t，2H，J＝5.7Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)， 4.59(t，2H，J＝5.7Hz)，4.80(s，2H)，8.20(s，1H).
步驟37-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯在室溫下，在氮?dú)夥障?，將Et3N(3.44mL)、37％的HCHO水溶液(2.02mL)和NaBH3CN(1.78g)依次加入到5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯鹽酸鹽(5.2g)的MeOH(75mL)溶液，并攪拌3.5小時(shí)。混合物用CH2Cl2稀釋，并用50％的K2CO3水溶液進(jìn)行洗滌。有機(jī)層在K2CO3中干燥，過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用CHCl3-丙酮(1/1-1/2)進(jìn)行洗脫。得到橙色油形式的標(biāo)題化合物。收率2.68g，57％)。
1H NMR(CDCl3)δd 1.37(t，3H，J＝7.1Hz)，2.50(s，3H)，2.85(t，2H，J＝5.5Hz)，3.69(s，2H)，4.06(t，2H，J＝5.5Hz)，4.36(t，2H，J ＝ 7.1Hz)，7.52(s，1H).
步驟47-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛在-78℃下，在氮?dú)夥罩?，?.01M的DIBAL在甲苯中的溶液(13.6mL)加入到7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(1.8g)的干燥CH2Cl2溶液(86mL)中，接著攪拌2小時(shí)。混合物用1M的HCl熄滅。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用50％的K2CO3水溶液進(jìn)行洗滌。水層用CH2Cl2萃取三次。合并的有機(jī)層在K2CO3中干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用CHCl3-MeOH(19/1-9/1)進(jìn)行洗脫。得到無(wú)色晶體形式的標(biāo)題化合物5。收率591，mg，42％)。
1H NMR(CDCl3)δd 2.51(s，3H)，2.87(t，2H，J＝5.5Hz)，3.70(s，2H)，4.10(t，2H，J＝5.5Hz)，7.53(s，1H)，9.82(d，1H，J＝1.4Hz).
步驟5(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(非對(duì)映混合物)在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢?-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(1.19g)加入到無(wú)水MgBr2(4.05g)的干燥乙腈(97mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(3.32g)的干燥THF溶液(97mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(3.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌4.5小時(shí)，然后一次性用乙酸酐(1.36mL)處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌17小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉以及鹽水洗滌。將有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用CHCl3-丙酮(9/1-2/1)進(jìn)行洗脫。得到兩個(gè)非對(duì)映混合物形式的標(biāo)題化合物。紅色油，收率1.13g。
1H NMR(CDCl3)δd 1.20(s，0.81×3H)，2.24(s，0.19×3H)，2.48(s，3H)，2.80～2.84(m，2H)，3.57～3.67(m，2H)，3.97～4.02(m，2H)，5.27(d，1H，J＝13.6Hz)，5.42(d，0.19×1H，J＝13.6Hz)，5.45(d，0.81×1H，J＝13.6Hz)，6.07(s，0.19×1H)，6.30(s，0.81×2H)，6.79(s，0.19×1H)，6.80(s，0.19×1H)，7.02(s，0.81×1H)，7.44(s，0.19×1H)，7.47(s，0.81×1H)，7.60(d，0.19×2H，J＝8.2Hz)，7.62(d，0.81×2H，J＝8.8Hz)，8.22～8.26(m，2H).
步驟6(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽將(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(1.11g)溶于THF(32mL)和乙腈(32mL)中。剛剛活化的鋅粉(4.46g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，48mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至7.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮。將濃縮物用DiaionHP-21(20mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析，吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-95/5)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物。收率417mg，65％mp 200℃(分解)；1H NMR(D2O)δd 2.32(s，3H)，2.79～2.81(m，2H)，3.54(s，2H)，3.95(t，2H，J＝5.6Hz)，8.39(s，1H)，6.85(s，1H)，6.87(s，1H)，7.26(s，1H).
實(shí)施例3(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備2-哌嗪酮2-哌嗪酮可以根據(jù)USP 5,629,322中描述的方法進(jìn)行制備。
步驟14-p-硝基芐氧基羰基-2-哌嗪酮在0℃下，將48.7％的p-硝基芐氧基羰基氯在1，4-二噁烷(10.7mL)中的溶液加入到2-哌嗪酮(2.21g)和二異丙基乙胺(4.6mL)的二氯甲烷(110mL)溶液中，接著在0℃下攪拌0.5小時(shí)。將水(300mL)加入到反應(yīng)混合物中，用二氯甲烷(3×100mL)進(jìn)行萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-甲醇(30∶1)洗脫，獲得標(biāo)題化合物，是白色固體(7.1g，定量)。
1H NMR(d，CDCl3)δ3.42-3.45(m，2H)，3.74(t，2H，J＝5.4Hz)，4.19(s，2H)，5.26(s，2H)，6.39(brs，1H)；7.52(d，2H，J＝8.6Hz)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz).
步驟25-甲氧基-4-p-硝基芐氧基羰基-1，2，3，6-四氫哌嗪在室溫下，將三甲基氧鎓四氟硼酸鹽(97％，3.7g)加入到4-p-硝基芐氧基羰基-2-哌嗪酮(6.7g)的干燥二氯甲烷(120mL)溶液中，接著攪拌17小時(shí)。反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液處理，分離有機(jī)層。水層用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，然后合并的有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得標(biāo)題化合物，是一種淺褐色固體。收率5.7g，80.6。
1H NMR(d，CDCl3)δ3.48(m，2H)，3.57(m，2H)，3.70(s，3H)，3.97(s，2H)，5.26(s，2H)，7.52(d，2H，J＝8.7Hz)，8.23(d，2H，J＝8.7Hz).
步驟32-亞氨基-4-p-硝基芐氧基羰基哌嗪將5-甲氧基-4-p-硝基芐氧基羰基-1，2，3，6-四氫哌嗪(5.7g)和氯化銨(1.6g)在無(wú)水乙醇(100mL)中的混合物加熱回流4小時(shí)。然后，反應(yīng)混合物在減壓下進(jìn)行濃縮。將二氯甲烷(100mL)加入到殘余物中，并用水(3×50mL)萃取，然后，合并的水層用二氯甲烷洗滌。水層用10％的碳酸鉀水溶液進(jìn)行中和，然后用二氯甲烷(8×50mL)萃取。合并的有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得標(biāo)題化合物，是一種白色固體。收率4.9g，91.2％。
1H NMR(d，CDCl3)δ3.49(brs，4H)，3.98(brs，2H)，5.26(s，2H)，7，52(d，2H，J＝8.6Hz)，8.23(d，2H，J＝8.6Hz).
步驟47-p-硝基芐氧基羰基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(9)和7-p-硝基芐氧基羰基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛將2-溴-3-羥基丙烯醛(2.8g)、對(duì)甲苯磺酸一水合物(33mg)和2-丙醇(3.5mL)在環(huán)己烷(28mL)中的混合物進(jìn)行共沸蒸餾，直到蒸汽溫度升高至80℃。反應(yīng)混合物在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物溶解在干燥乙腈(30mL)中。在室溫下，加入2-亞氨基-4-p-硝基芐氧基羰基哌嗪(4.7g)的無(wú)水乙腈(310ml)溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后在真空中除去反應(yīng)溶液。將殘余物溶于乙酸乙酯(170mL)中，加入三乙胺(2.4mL)，然后反應(yīng)混合物加熱回流1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后向反應(yīng)混合物中加入水(170mL)，接著進(jìn)行分離。水層用二氯甲烷(2×100mL)萃取。合并的有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-甲醇(50∶1)洗脫，獲得褐色固體形式的標(biāo)題化合物，(收率2.9g，51.6％)和它的區(qū)域異構(gòu)體(橙色的無(wú)定形固體，收率0.8g，14.9％)
1H NMR(d，CDCl3)3.99(t，2H，J＝5.4Hz)，4.14(t，2H，J＝5.4Hz)，4.85(s，2H)，5.29(s，2H)，7.54(d，2H，J＝8.6Hz)，7.57(s，1H)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)，9.85(s，1H).
區(qū)域異構(gòu)體，1H NMR(d，CDCl3)δ3.95(t，2H，J＝5.4Hz)，4.44(t，2H，J＝5.4Hz)，4.87(s，2H)，5.29(s，2H)，7.54(d，2H，J＝8.7Hz)，7.78(s，1H)，8.24(d，2H，J＝8.7Hz)，9.71(s，1H).
步驟5(5R)-6-[乙酰氧基-(7-p-硝基芐氧基羰基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?-p-硝基芐氧基羰基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(1.6g)的干燥乙腈(25mL)溶液加入到MgBr2(2.2g)的干燥乙腈(55mL)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(1.8g)的干燥THF(80mL)溶液，混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(1.6mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后一次性用4，4-二甲氨基吡啶(58.3mg)和乙酸酐(0.89mL)處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)。將10％的檸檬酸水溶液(320mL)加入到反應(yīng)混合物中，水層用乙酸乙酯(3×160mL)進(jìn)行萃取。機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CH2Cl2-丙酮(20∶1)洗脫，獲得標(biāo)題化合物，是兩個(gè)非對(duì)映混合物(81∶19，褐色泡沫狀的無(wú)定形固體)。收率2.1g，59.9％。
1H NMR(d，CDCl3)δ2.01(s，2.43H)，2.24(s，0.57H)，3.93-，3.96(m，2H)，4.02-4.05(m，2H)，4.74-4.76(m，2H)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.28(s，2H)，5.45(d，1H，J＝13.5Hz)，8.07(s，0.19H)，6.29(s，0.81H)，6.31(s，0.81H)，6.80(s，0.19H)，6.83(s，0.19H)，7.08(s，0.81H)，7.43(s，0.19H)，7.46(s，0.81H)，7.54(d，2H，J＝8.6Hz)，7.61(d，2H，J＝8.8Hz)，8.24(d，4H，J＝8.3Hz).
步驟6(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽將(5R)-6-[乙酰氧基-(7-p-硝基芐氧基羰基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯(2.0g)溶于THF(63mL)中。一起快速加入剛剛活化的鋅粉(7.9g)和0.5mol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.5，63mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。反應(yīng)溶液通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，用水(150mL)和正丁醇(150mL)洗滌襯墊。分離水層，有機(jī)層用水(2×50mL)萃取。將合并的水層濃縮至61g，使用DiaionHP-21(80mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析，吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用5％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物。收率172mg，20。1％mp 150℃(分解)；1H NMR(d，D2O)δ3.02(t，2H，J＝5.6Hz)，3.82(s，2H)，3.89(d，2H，J＝5.6Hz)，6.38(s，1H)，6.84(s，1H)，6.87(s，1H)，7.24(s，1H)；IR(KBr)實(shí)施例4(5R，6Z)-6-{[5-(4-甲氧苯甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟15-叔丁基2-乙基6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5(4H)-二羧酸酯根據(jù)實(shí)施例1、(步驟1)中所列方法，由叔丁基-1-哌啶甲酸酯(9.9g，50mmol)，POCl3(6.3g，40mmol)和DMF(3.8g，50mmol)制備5-叔丁基2-乙基6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5(4H)-二羧酸酯。氯甲酰中間體與巰基乙酸乙酯(6.0g，50mmol)和Et3N反應(yīng)。產(chǎn)物用二氧化硅柱層析(用3∶1的己烷∶乙酸乙酯洗脫)進(jìn)行提純。收率8.7g，56％；白色液體。(M+H)312。
步驟22-(羥甲基)-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯根據(jù)實(shí)施例1、(步驟2)中所列的方法，由5-叔丁基2-乙基6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5(4H)-二羧酸酯(1.0g，3.21mmol)和LiAlH4(500mg，過(guò)量)，制備叔丁基2-(羥甲基)-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯。分離得到807mg(92％的收率)醇衍生物，為白色液體。(M+H)270。
步驟32-(甲酰基)-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯根據(jù)實(shí)施例1、(步驟3)中所列的方法，由在二氯甲烷(100ml)中的叔丁基2-(羥甲基)-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(1.0g，3.7mmol)和活性MnO2(5g，過(guò)量)，制備叔丁基2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯。分離得到800g(81％的收率)醛衍生物，為褐色固體。(M+H)268。
步驟42-(甲酰基)-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]-5(4H)-吡啶將叔丁基2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(1.0g，3.7mmol)溶于CH2Cl2(20ml)、MeOH(90％20ml)和在二噁烷(10ml)中的1N的HCl中，制得2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-吡啶。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。最后，將反應(yīng)混合物濃縮至干，無(wú)需進(jìn)一步提純，就直接用于下一步反應(yīng)中。收率750mg(HCl鹽，定量)；M+H 168。
步驟52-甲酰基[5-(4-甲氧基芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶在室溫下，向攪拌下的2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]-5(4H)-吡啶(1.4g，5.2mmol)在DMF(20ml)中的溶液中加入4-甲氧基芐基氯(0.94g，6.2mmol)和N，N-二異丙基乙胺(10ml，過(guò)量)。反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)并用水熄滅。反應(yīng)混合物用氯仿萃??；用水充分洗滌，并在無(wú)水MgSO4中進(jìn)行干燥。過(guò)濾，濃縮。產(chǎn)物通過(guò)SiO2柱層析(乙酸乙酯洗脫)提純。淺黃色油。收率470mg，35％；M+H 288。
步驟64-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5-(4-甲氧基芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，將2-甲?；鵞5-(4-甲氧基芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶(574mg，2.0mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(772mg，2.0mmol)的干燥THF溶液(20mL)依次加入到無(wú)水MgBr2:O(Et)2(390mg，1.5mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌2小時(shí)，然后一次性用乙酸酐(1.04mL)處理。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂尣⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)，通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯進(jìn)行洗滌。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫，收集的組分在減壓下進(jìn)行濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體，收率550mg，40％；M+H 714和716。
步驟7(5R，6Z)-6-{[5-(4-甲氧基芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸將4-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(4-甲氧基芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(300mg，0.42mmol)溶于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。剛剛活化好的鋅粉(5.2g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入0.1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮，得到黃色沉淀。產(chǎn)物用HP21樹(shù)脂反相柱層析進(jìn)行提純。開(kāi)始時(shí)，柱子用去離子水(2升)進(jìn)行洗脫，然后再用10％的CAN∶水進(jìn)行洗脫。收集含產(chǎn)物的組分，并在室溫下減壓濃縮。黃色固體用丙酮洗滌，然后過(guò)濾。干燥。收率50mg，18％；黃色晶體；mp.127℃；(M+H)441。
1H NMR(DMSO-d6)δd 2.7(m，2H)，2.8(bm，2H)，3.4(m，2H)，3.74(s，3H)3.8(s，2H)，6.6(s，1H)，6.88(dd，2H)，7.14(s，1H)，7.24(dd，2H)，7.4(s，1H)，7.59(s，1H).
實(shí)施例5(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟15-甲硫基-3，6-二氫-2H-[1，4]噻嗪氫碘酸鹽5-甲硫基-3，6-二氫-2H-[1，4]噻嗪氫碘酸鹽通過(guò)如USP 5,629,322中所列的方法進(jìn)行制備。
步驟23-亞氨基硫代嗎啉鹽酸鹽用10％的K2CO3水溶液(150mL)溶解5-甲硫基-3，6-二氫-2H-[1，4]噻嗪氫碘酸鹽(7.1g)，水層用CH2Cl2(5×70mL)萃取。合并的有機(jī)層在MgSO4中干燥，過(guò)濾，然后在減壓下濃縮。加入氯化銨(1.7g)，得到在干燥乙醇(128mL)中的殘余物，接著加熱回流1小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫。在真空中除去反應(yīng)溶液，得到亞氨基硫代嗎啉鹽酸鹽，為褐色固體(4.3g，定量)。
1H NMR(d，DMSO-d6)δ3.15(t，2H，J＝5.9Hz)，3.74(t，2H，J＝5.9Hz)，3.83(s，2H)，8.97(brs，1H)，9.38(brs，1H)，9.99(brs，1H).
步驟35，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛和5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛將2-溴-3-羥基丙烯醛(7，4.3g)、對(duì)甲苯磺酸一水合物(52mg)和2-丙醇(5.3mL)在環(huán)己烷(43mL)中的混合物進(jìn)行共沸蒸餾，直到蒸氣溫度達(dá)到80℃為止。反應(yīng)混合物在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物溶于無(wú)水乙醇(28ml)中。在室溫下，加入3-亞氨基硫代嗎啉鹽酸鹽(4.3g)的無(wú)水乙醇(143mL)溶液和28％的甲醇鈉(5.0mL)的甲醇溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后在真空中除去反應(yīng)溶液。殘余物溶于氯仿(128mL)中，加入三乙胺(3.6mL)，然后反應(yīng)混合物加熱回流2.5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用二氯甲烷(300mL)溶解，并用50％的K2CO3水溶液(2×100mL)洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-丙酮(10∶1)洗脫，得到5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(褐色固體，445mg，10.3％)和5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛(褐色固體，872mg，20.2％)。5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛1H NMR(d，CDCl3)δ3.07(t，2H，J＝5.7Hz)，3.95(s，2H)，4.33(t，2H，J＝5.7Hz)，7.55(s，1H)，9.83(s，1H).
5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛
1H NMR(d，CDCl3)δ3.05(t，2H，J＝5.7Hz)，3.98(s，2H)，4.61(t，2H，J＝5.7Hz)，7.73(s，1H)，9.69(s，1H).
步驟4(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(392mg)的干燥乙腈(20mL)溶液加入到MgBr2(1.1g)的干燥乙腈(20mL)溶液中，所得混合物攪拌10分鐘。加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(1.0g)的干燥THF(40mL)溶液中，將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(0.8mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3.5小時(shí)，然后用4-二甲氨基吡啶(30mg)和乙酸酐(0.44mL)一次性處理。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌14小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入10％的檸檬酸水溶液(240mL)，水層用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物粗略地進(jìn)行硅膠柱層析，用CH2Cl2-丙酮(50∶1)洗脫，得到固體形式的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯。
上面得到的固體用SiO2柱層析提純，用50∶5的乙酸乙酯∶己烷進(jìn)行洗脫。將得到的淺黃色固體溶于THF(17ml)中。剛剛活化好的鋅粉(2.2g)和0.5mol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.5，17mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。反應(yīng)溶液通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，用水(40mL)和正丁醇(40mL)洗滌襯墊。水層分離，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×10mL)萃取。將合并的水層濃縮至23g，加入1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.25，然后使用DiaionHP-21樹(shù)脂(30mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)進(jìn)行柱層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用10％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，將合并的活性組分在高真空下濃縮，得到(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽，為黃色無(wú)定形固體(168mg，20.9％)。
mp 135℃(分解)；1H NMR(d，D2O)δ3.00(t，2H，J＝5.7Hz)，3.80(AB，2H，J＝16.7，18.1Hz)，4.19(t，2H，J＝5.7Hz)，6.44(d，1H，J＝0.8Hz)，6.89(s，1H)，6.93(s，1H)，7.29(s，1H)；M+H＝322.
實(shí)施例6(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟16，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-甲醛在室溫下，將28％的甲醇鈉(5.26g)加入到4，5-二氫-3H-吡咯-2-基胺鹽酸鹽(3.27g)的EtOH(250mL)溶液中。在室溫下攪拌5分鐘后，在室溫下將2-溴-3-丙氧基-丙烯醛(5.79g)加入到該混合物中，然后在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物溶于CHCl3(300mL)中，向其中加入三乙胺(3.8mL)?；旌衔锛訜嶂粱亓?小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用50％的K2CO3洗滌，在無(wú)水K2CO3中干燥，過(guò)濾，并在減壓下蒸發(fā)。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-丙酮(2∶1)洗脫，得到淺黃色固體形式的6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-甲醛(41％，1.51g)。
1H NMR(d，CDCl3)δ2.62-2.7(m，2H)，2.90-2.94(m，2H)，4.07(t，2H，J＝7.2Hz)，7.59(s，1H)，9.80(s，1H).
步驟2(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-甲醛(1.36g)加入到無(wú)水MgBr2(5.64g)的干燥乙腈(155mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(3.86g)的干燥THF溶液(155mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(4.18mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用乙酸酐(1.89mL)和DMAP(370mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌14.5小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用1M的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。該襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物溶于THF(166mL)和乙腈(77mL)中。剛剛活化好的鋅粉(23.2g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，243mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。加入1M的NaOH，再次將水層的pH調(diào)節(jié)至8。在35℃下，在高真空中，濃縮所得混合物。濃縮物用DiaionHP-21(20mL，MitsubishiKasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)洗脫，得到提純了的活性組分(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(681mg，24％，pH7.8)。
mp 190℃(分解)；1H NMR(d，D2O)δ2.48-2.56(m，2H)，2.74-2.79(m，2H)，3.94-3.99(m，2H)，6.47(d，1H，J＝0.7Hz)，6.94(s，1H)，6.95(s，1H)，7.36(s，1H)；(M+H)291.
實(shí)施例7(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟1嗎啉-3-酮根據(jù)USP 5,349,045中的方法制備嗎啉-3-酮。
步驟2嗎啉-3-硫酮將嗎啉-3-酮(4.7g)和拉韋松(Lawesson)試劑(10.3g)在干燥THF(94mL)中的混合物加熱回流1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在真空中除去反應(yīng)溶劑。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-甲醇(50∶1)洗脫，得到一種黃色固體。用己烷-乙酸乙酯對(duì)粗產(chǎn)物進(jìn)行重結(jié)晶，得到黃色粉末形式的標(biāo)題化合物(4.0g，72.2％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.45(t，2H，J＝5.1Hz)，3.91(t，2H，J＝5.1Hz)，4.55(s，2H).
步驟35-甲硫基-3，6-二氫-2H-[1，4]噁嗪在室溫下，將嗎啉-3-硫酮(4.7g)和甲基碘(13mL)在干燥CH2Cl2(140mL)中的混合物攪拌15小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)混合物，用CH2Cl2洗滌固體。所得固體用50％的K2CO3水溶液(150mL)溶解，水層用CH2Cl2(8×100mL)萃取。合并的CH2Cl2層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得標(biāo)題化合物，是一種淺黃色油(3.6g，67.8％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.32(s，3H)，3.71-3.74(m，4H)，4.14-4.15(m，2H).
步驟43-亞氨基嗎啉鹽酸鹽將5-甲硫基-3，6-二氫-2H-[1，4]噁嗪(3.6g)和氯化銨(1.5g)在無(wú)水乙醇(136mL)中的混合物加熱回流1小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫。在真空中除去反應(yīng)溶劑，得到標(biāo)題，為淺褐色固體(3.6g，97.7％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.34(m，2H)，3.86(t，2H，J＝5.2Hz)，4.47(s，2H).
步驟55，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛(9)和5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-3-甲醛將2-溴-3-羥基丙烯醛(4.1g)、對(duì)甲苯磺酸一水合物(52mg)和2-丙醇(5.2mL)在環(huán)己烷(42mL)中的混合物進(jìn)行共沸蒸餾，直到蒸汽溫度達(dá)到80℃為止。反應(yīng)混合物在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物溶于無(wú)水乙醇(50ml)中。在室溫下，加入3-亞氨基嗎啉鹽酸鹽(3.4g)的無(wú)水乙醇(200mL)溶液和28％的甲醇鈉(4.8g)的甲醇溶液的混合物。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后在真空中除去反應(yīng)溶劑。殘余物溶于氯仿(125mL)中，加入三乙胺(3.5mL)，然后反應(yīng)混合物加熱回流2小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用二氯甲烷(300mL)溶解，并用50％的K2CO3水溶液(2×100mL)洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-丙酮(4∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(淺橙色固體，1.4g，36.3％)，另一個(gè)是區(qū)域異構(gòu)體(淺橙色固體，609mg，16.1％)。
所需產(chǎn)物1H NMR(CDCl3)δ4.08-4.15(m，4H)，4.88(s，2H)，7.58(s，1H)，9.85(s，1H).不需要的區(qū)域異構(gòu)體1H NMR(CDCl3)δ4.06(t，2H，J＝5.2Hz)，4.40(t，2H，J＝5.2Hz)，4.90(s，2H)，7.75(s，1H)，9.72(s，1H).
步驟6(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢?，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛(1.2g)的干燥乙腈(66mL)溶液加入到MgBr2(3.6g)的干燥乙腈(66mL)溶液中，然后將混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(3.4g)的干燥THF(132mL)溶液，接著將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(2.8mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌4小時(shí)，然后用4-二甲氨基吡啶(100mg)和乙酸酐(1.5mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌18小時(shí)。將10％的檸檬酸水溶液(1L)加入到反應(yīng)混合物中，水層用乙酸乙酯(3×500mL)進(jìn)行萃取。合并的有機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(14g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，72mL)一起快速地加入到(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的THF(72mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2.5小時(shí)。反應(yīng)溶液通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，用水(170mL)和正丁醇(170mL)洗滌襯墊。水層分離，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×50mL)萃取。將合并的水層濃縮至90g，加入1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.5，然后使用DiaionHP-21樹(shù)脂(120mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)進(jìn)行柱層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用5％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(756mg，29.1％)。
Mp 130℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.98-4.01(m，2H)，4.04-4.07(m，2H)，4.74(AB，2H，J＝15.3，22.9Hz)，6.40(d，1H，J＝0.8Hz)，6.55(s，1H)，6.95(d，1H，J＝0.6Hz)，7.54(s，1H)；IR(KBr)3412，1741，1672，1592，1549cm-1；λmax(H2O)304nm.
實(shí)施例8(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟15，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-羧酸乙酯以與Ranganathan等人(Indian J.Chem.1991，30 B，169-175)相同的方法制備標(biāo)題化合物。
步驟2(5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基)甲醇在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢eOH(2.73mL)加入到LiBH4(1.63g)的THF(180mL)溶液中，然后將5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-羧酸乙酯(8.11g)加入到該懸浮液中并在40℃下攪拌2小時(shí)?；旌衔镉胮H為1的1mol/L的HCl熄滅，接著在室溫下攪拌1小時(shí)。向該溶液中加入固體K2CO3，調(diào)節(jié)pH至8，混合物用AcOEt萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得標(biāo)題化合物，是一種褐色晶體(4.87g，78％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.44(t，1H，J＝5.8Hz)，2.54-2.62(m，2H)，2.87(t，2H，J＝7.4Hz)，4.10(t，2H，J＝7.2Hz)，4.63(d，2H，J＝5.8Hz)，5.96(s，1H).
步驟35，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲醛在氮?dú)夥罩校瑢nO2(活化過(guò))(24.4g)加入到(5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基)甲醇(4.87g)的CHCl3(350mL)溶液中并回流1小時(shí)反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。在減壓下減少濾液的體積。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用正己烷-AcOEt(1/1-1/2)進(jìn)行洗脫。得到黃色油形式的標(biāo)題化合物(4.35g，91％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.63-2.71(m，2H)，2.95(t，2H，J＝7.4Hz)，4.22(t，2H，J＝7.4Hz)，6.52(s，1H)，9.89(s，1H).
步驟4(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲醛(1.36g)加入到無(wú)水MgBr2(5.52g)的干燥乙腈(148mL)的溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(97％的濃度)(3.97g)的干燥THF溶液(148mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(4.18mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌4小時(shí)，然后用乙酸酐(1.89mL)和DMAP(123mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌14小時(shí)。混合物用乙酸乙酯稀釋，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。
將殘余物溶于THF(106mL)和乙腈(49mL)中。剛剛活化好的鋅粉(22.5g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，155mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(79mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(848mg，29％，pH7.1)。
Mp 190℃(分解)；1H NMR(D2O)δ2.49(m，2H)，2.78(t，2H，J＝7.4Hz)，4.02(t，2H，J＝7.4Hz)，6.01(s，1H)，6.29(s，1H)，6.90(s，2H).
實(shí)施例9(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟1四氫吡啶并[1，2-c][1，2，3]噁二唑酮在0℃下，在氮?dú)夥罩?，將濃HCl(1.96mL)和NaNO2(2.2g)加入到DL-哌可酸(3.04g)的H2O(21mL)的溶液中并攪拌1小時(shí)。溶液用CH2Cl2萃取，并用鹽水洗滌有機(jī)層?；旌衔镌贜a2SO4中干燥，減壓下濃縮，得到粗的淺黃色晶體形式的(2RS)-1-亞硝基哌啶-2-羧酸。在0℃下，在氮?dú)夥罩校瑢⑷佐?1.93g)加入到粗的(2RS)-1-亞硝基哌啶-2-羧酸的THF(92mL)的溶液中，并在0℃攪拌5小時(shí)，接著在室溫下攪拌2小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用正己烷-AcOEt(1/1-0/1)進(jìn)行洗脫。得到無(wú)色晶體形式的標(biāo)題化合物(1.10g，33％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.93-1.99(m，2H)，2.08-2.15(m，2H)，2.65(t，2H，J＝6.5Hz)，4.26(t，2H，J＝6.1Hz).
步驟24，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯在氮?dú)夥罩?，將丙炔酸乙?804mg)加入到四氫吡啶并[1，2-c][1，2，3]噁二唑酮(1.04g)的鄰二甲苯(15mL)的溶液中并回流16小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(2/1-1/1)進(jìn)行洗脫。得到黃色油形式的標(biāo)題化合物(871mg，65％)，和黃色油形式的4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(345mg，26％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，3H，J＝7.1Hz)，1.84-1.91(m，2H)，2.02-2.09(m，2H)，2.82(t，2H，J＝6.4Hz)，4.22(t，2H，J＝6.2Hz)，4.39(q，2H，J＝7.1Hz)，6.53(s，1H).
步驟3(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基)甲醇在室溫下，在氮?dú)夥罩?，將MeOH(0.29mL)加入到LiBH4(90％的濃度)(174mg)的THF(19mL)的溶液中，然后將4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯(862mg)加入到該懸浮液中并在室溫下攪拌1小時(shí)，接著在40℃下攪拌1.5小時(shí)?；旌衔镉胮H為1的1mol/L的HCl熄滅，接著在室溫下攪拌1小時(shí)。向該溶液中加入固體K2CO3，調(diào)節(jié)pH至8，混合物用AcOEt萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得標(biāo)題化合物，是一種淺黃色油(691mg，95％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.80-1.87(m，2H)，1.98-2.05(m，2H)，2.77(t，2H，J＝6.4Hz)，2.81-2.84(br，1H)，4.09(t，2H，J＝6.1Hz)，4.62(d，2H，J＝5.3Hz)，5.96(s，1H).
步驟44，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲醛在氮?dú)夥罩?，將MnO2(活化過(guò))(3.36g)加入到(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基)甲醇(673mg)的CHCl3(44mL)溶液中并回流1小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。在減壓下減少濾液的體積。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(2/1-1/2)洗脫。得到淺黃色油形式的標(biāo)題化合物(510mg，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.90(m，2H)，2.10(m，2H)，2.84(t，2H，J＝6.4Hz)，4.23(t，2H，J＝6.2Hz)，6.52(s，1H)，9.92(s，1H).
步驟5(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲醛(483mg)加入到無(wú)水MgBr2(1.81g)的干燥乙腈(48mL)的溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(97％的濃度)(1.28g)的干燥THF溶液(48mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(1.35mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(0.61mL)和DMAP(40mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌16小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。
將殘余物溶于THF(35mL)和乙腈(16mL)中。剛剛活化好的鋅粉(7.43g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，51mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(105mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-85/15)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(427mg，41％，pH7.7)。
Mp 190℃(分解)；1H NMR(D2O)δ1.67-1.71(m，2H)，1.85-1.89(m，2H)，2.64(t，2H，J＝6.3Hz)，3.97(t，2H，J＝6.1Hz)，5.97(s，1H)，6.25(s，1H)，6.85(s，1H)，6.88(s，1H).
實(shí)施例10(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽的制備步驟15-甲氧基-1-甲基-3，6-二氫-1H-吡嗪-2-酮以與S.Rajappa和B.G.Advani(Tetrahedron.1973，29，1299-1302)相同的方法制備標(biāo)題化合物。
步驟25-氨基-1-甲基-3，6-二氫-1H-吡嗪-2-酮在室溫下，將5-甲氧基-1-甲基-3，6-二氫-1H-吡嗪-2-酮(2.3g)和氯化銨(936mg)在無(wú)水乙醇(32mL)中的混合物攪拌1小時(shí)，然后回流2小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。在室溫下，將殘余物與氯仿一同研磨30分鐘。過(guò)濾沉淀，并在真空中干燥。得到淺褐色粉末形式的5-氨基-1-甲基-3，6-二氫-1H-吡嗪-2-酮鹽酸鹽(1.7g，66％)。
在0℃下，將10％的碳酸鉀水溶液加入到5-氨基-1-甲基-3，6-二氫-1H-吡嗪-2-酮鹽酸鹽(662mg)在甲醇(10mL)中的溶液中，然后在0℃下攪拌40分鐘?；旌衔镌跍p壓下進(jìn)行濃縮。在室溫下，將殘余物與氯仿(18mL)和甲醇(2mL)一同研磨30分鐘。過(guò)濾沉淀，并在真空中干燥。得到淺褐色粉末形式的標(biāo)題化合物(515mg，定量)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.88(s，3H)，3.94(s，2H)，4.42(s，2H).
步驟37-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛和7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛在室溫下，將2-溴-3-異丙氧基-丙烯醛(1.3g)在干燥乙腈(60mL)中的溶液加入到5-氨基-1-甲基-3，6-二氫-1H-吡嗪-2-酮(782mg)在干燥乙腈(60mL)中的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，加入三乙胺(0.95mL)，然后回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后在減壓下進(jìn)行蒸發(fā)。殘余物用氯仿(10mL)溶解，并用50％的K2CO3水溶液(10mL)洗滌。水層用氯仿萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行蒸發(fā)。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH(95∶5)洗脫，得到標(biāo)題化合物7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛，為淺黃色固體(541mg，49.1％)和它的區(qū)域異構(gòu)體7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛，為淺黃色固體(128mg，11.6％)。
7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛1H NMR(CDCl3)δ3.17(s，3H)，4.68(s，2H)，4.78(s，2H)，7.66(s，1H)，9.83(s，1H).
7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛1H NMR(CDCl3)δ3.16(s，3H)，4.70(s，2H)，5.03(s，2H)，7.82(s，1H)，9.73(s，1H).
步驟4(5R，6RS)-6-[乙酰氧基-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(319mg)加入到無(wú)水MgBr2(786mg)的干燥乙腈(32mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(687mg)的干燥THF溶液(32mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入三乙胺(0.60mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲基氨基吡啶(44mg)和乙酸酐(0.35mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌20小時(shí)。混合物用乙酸乙酯和H2O稀釋。將有機(jī)層分離后，水層用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層合并，并用5％的檸檬酸水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后用氯仿洗脫。得到非對(duì)映混合物形式的標(biāo)題化合物(黃色無(wú)定形固體；410mg，38％)。
1H NMR(δ，CDCl3)2.03(s，0.7×3H)，2.09(s，0.3×3H)，3.15(s，3H)，4.59-4.62(m，2H)，4.66(s，0.3×2H)，4.67(s，0.7×2H)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.43(d，0.3×1H，J＝13.5Hz)，5.45(d，0.7×1H，J＝13.5Hz)，6.07(s，0.3×1H)，6.28(s，0.7×1H)，6.32(s，0.7×1H)，6.83(s，0.3×1H)，6.86(s，0.3×1H)，7.10(s，0.7×1H)，7.44(s，0.3×1H)，7.47(s，0.7×1H)，7.60(d，0.7×2H，J＝8.6Hz)，7.61(d，0.3×2H，J＝8.6Hz)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)，步驟5(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽和(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽將(5R，6RS)-6-[乙酰氧基-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(481mg)溶于THF(6.7mL)和乙腈(3.1mL)中。剛剛活化好的鋅粉(1.92g)與0.5M的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，9.9mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。反應(yīng)溶液與乙酸乙酯混合，通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。襯墊用水洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物，接著進(jìn)行冷凍干燥。殘余物通過(guò)制備HPLC(Inertsil ODS-2，GL Science Inc.，10×250mm，0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH7.1)∶CH3CN＝93∶7，4.0mL/分鐘)進(jìn)行分離。將分離的組分(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽和(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH分別調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮每個(gè)溶液。每個(gè)濃縮物用DiaionHP-21(60mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用5％的乙腈-水進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，分別得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽(125mg，44.4％，mp 115-117℃(分解))和化合物(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽(19mg，6.7％)。
化合物(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽；1H NMR(δ，D2O)2.99(s，3H)，4.54(s，2H)，4.66(s，2H)，6.38(s，1H)，6.85(s，1H)，6.90(s 1H)，7.30(s，1H).
化合物(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽；1H NMR(δ，D2O)2.94(s，3H)，4.45(s，2H)，4.56(s，2H)，6.22(s，1H)，6.48(s，1H)，6.94(s，1H)，7.69(s 1H).
實(shí)施例11(5R)(6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟1(3R)-硫代嗎啉-3-羧酸以與Shiraiwa等人(Biosci.Biotechnol.Biochem.1998，62，2382-2387)相同的方法制備標(biāo)題化合物。
步驟23-氧代-3a，4，6，7-四氫-3H-2-氧雜-5-硫雜-1-氮雜-7a-azonioindenide在0℃下，在氮?dú)夥罩?，將NaNO2(3.14g)加入到1mol/L的(3R)-硫代嗎啉-3-羧酸(4.96g)的HCl(33.7mL)溶液中，攪拌0.5小時(shí)。溶液用CHCl3(5次)萃取，有機(jī)層用鹽水洗滌?；旌衔镌贛gSO4中干燥，在減壓下濃縮，得到粗的(3R)-4-亞硝基硫代嗎啉-3-羧酸，為淺黃色晶體。
在0℃下，在氮?dú)夥罩校瑢⑷佐?7.07g)加入到粗的(3R)-4-亞硝基硫代嗎啉-3-羧酸的THF(169mL)溶液中，并在0℃攪拌3小時(shí)，接著在室溫下攪拌17小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物用硅膠柱層析進(jìn)行提純，柱子用正己烷-AcOEt(1/1-0/1)進(jìn)行洗脫。得到淺褐色晶體形式的標(biāo)題化合物(3.41g，64％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.15(t，2H，J＝5.5Hz)，3.71(s，2H)，4.54(t，2H，J＝5.5Hz).
步驟36，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-羧酸乙酯將丙炔酸乙酯(2.33g)加入到3-氧代-3a，4，6，7-四氫-3H-2-氧雜-5-硫雜-1-氮雜-7a-azonioindenide(3.41g)的鄰二甲苯(72mL)溶液中，回流15小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(2/1-1/1)進(jìn)行洗脫。得到黃色油形式的標(biāo)題化合物(3.13g，68％)，和另一個(gè)不需要的區(qū)域異構(gòu)體是黃色油形式的6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-3-羧酸乙酯(556mg，12％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.31(t，3H，J＝7.1Hz)，3.04(t，2H J＝5.7Hz)，3.81(s，2H)，4.32(q，2H，J＝7.1Hz)，4.40(t，2H，J＝5.7Hz)，6.54(s，1H).
步驟4(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基)甲醇在室溫下，在氮?dú)夥罩?，將LiBH4(90％的濃度)(536mg)和MeOH(0.9mL)加入到6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-羧酸乙酯(3.13g)的THF(59mL)溶液中，在40℃攪拌3小時(shí)?；旌衔镉胮H為1的1mol/L的HCl熄滅，接著在室溫下攪拌1小時(shí)。向該溶液中加入固體K2CO3，調(diào)節(jié)pH至8，混合物用AcOEt萃取。將有機(jī)層在K2CO3中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得標(biāo)題化合物，是一種淺黃色油(2.51，定量)。
1H NMR(CDCl3)δ2.58(br，1H)，3.07(t，2H，J＝5.7Hz)，3.84(s，2H)，4.33(t，2H，J＝5.7Hz)，4.63(d，2H，J＝3.9Hz)，6.05(s，1H).
步驟56，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛在氮?dú)夥罩?，將MnO2(活化過(guò))(11.46g)加入到(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基)甲醇(2.31g)的CHCl3(135mL)溶液中，回流1小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(1/1)進(jìn)行洗脫。得到淺黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(1.78g，78％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.15(t，2H，J＝5.8Hz)，3.90(s，2H)，4.48(t，2H，J＝5.8Hz)，6.58(s，1H)，9.92(s，1H).
步驟6(5R)(6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(841mg)加入到無(wú)水MgBr2(1.88g)的干燥乙腈(39mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(99.7％的濃度)(1.93g)的干燥THF溶液(39mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(2.79mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用乙酸酐(0.94mL)和DMAP(61mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌17小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。
將殘余物溶于THF(83mL)和乙腈(39mL)中。剛剛活化好的鋅粉(7.72g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，122mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0.在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(150mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-85/15)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(371mg，22％，pH8.0)。
Mp 190℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.03(t，2H，J＝5.7Hz)，3.75(s，2H)，4.22(t，2H，J＝5.7Hz)，6.07(s，1H)，6.27(s，1H)，6.86(s，1H)，6.89(s，1H).
實(shí)施例12(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟13-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-5-硫雜-1-氮雜-6A-azonio-3A-pentalenide在0℃下，在氮?dú)夥罩?，將濃HCl(15mL)和NaNO2(16.6g)加入到L-硫代脯氨酸(24.3g)的H2O(166mL)溶液中，攪拌2小時(shí)。溶液用CH2Cl2萃取，有機(jī)層在MgSO4中干燥，在減壓濃縮，得到黃色固體形式的粗的N-亞硝基衍生物。
在0℃下，在氮?dú)夥罩?，將三氟醋?5.0mL)加入到粗的N-亞硝基硫代脯氨酸的THF(350mL)溶液中，在0℃攪拌5小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(1∶1)進(jìn)行洗脫。得到淺褐色固體形式的標(biāo)題化合物(4.0g，15.1％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.04(t，2H，J＝1.7Hz)，5.40(t，2H，J＝1.7Hz).
步驟24H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-羧酸乙酯在氮?dú)夥罩?，將丙炔酸乙?3.1mL)加入到3-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-5-硫雜-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide(4.0g)的鄰二甲苯(130mL)溶液中，接著回流19小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷∶AcOEt(4/1)進(jìn)行洗脫。得到黃色固體形式的標(biāo)題化合物(2.7g，49.3％)，和淺黃色晶體形式的4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-3-羧酸乙酯(1.2g，21.7％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.40(t，3H，J＝7.1Hz)，4.11(d，2H，J＝2.1Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)，5.24(t，2H，J＝1.6Hz)，6.61(s，1H).
步驟3(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲醇在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢iBH4(90％的濃度)(459mg)加入到4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-羧酸乙酯(2.5g)和MeOH(0.77mL)的乙醚(126mL)溶液中，然后回流1.5小時(shí)。混合物用1mol/L的HCl(25mL)熄滅，在室溫下攪拌1小時(shí)。混合物用飽和碳酸氫鈉溶液中和，分離。水層用二氯甲烷(10×25mL)萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用AcOEt洗脫。得到淺黃色固體形式的標(biāo)題化合物(1.7g，87.9％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.95(t，1H，J＝5.6Hz)，4.07(s，2H)，4.62(d，2H，J＝5.1Hz)，5.13(t，1H，J＝1.6Hz)，6.04(s，1H).
步驟44H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-甲醛在-78℃下，將二甲亞砜(2.2mL)的干燥二氯甲烷(8mL)溶液滴加到草酰氯(2.0mL)的干燥二氯甲烷(110mL)溶液中。反應(yīng)混合物在相同的溫下攪拌15分鐘。在-78℃下，將(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲醇(1.7g)的干燥二氯甲烷(40mL)溶液滴加到反應(yīng)混合物中，繼續(xù)攪拌額外的15分鐘。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?45℃并攪拌1小時(shí)。滴加三乙胺(11.3mL)，反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃。20分鐘后，加入飽和氯化銨溶液(50mL)和水(100mL)，然后分離。水層用AcOEt(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)層用水(200mL)和鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(1∶1)進(jìn)行洗脫。得到淺黃色固體形式的標(biāo)題化合物(1.7g，定量)。
1H NMR(CDCl3)δ4.13(s，2H)，5.26(d，2H，J＝1.4Hz)，6.59(s，1H)，9.90(s，1H).
步驟5(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢?H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-甲醛(1.7g)的干燥乙腈(92mL)溶液加入到MgBr2(5.0g)的干燥乙腈(92mL)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(4.3g)的干燥THF(184mL)溶液，接著將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(7.4mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(138mg)和乙酸酐(2.1mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入1mol/L的檸檬酸水溶液(1000mL)，水層用乙酸乙酯(3×400mL)萃取。合并的有機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(19.3g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 6.5，100mL)一起快速地加入到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的THF(100mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2.5小時(shí)。反應(yīng)溶液通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，用水(200mL)和正丁醇(200mL)洗滌襯墊。水層分離，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×50mL)萃取。將合并的水層濃縮至90g，加入1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至8.0，然后使用DiaionHP-21樹(shù)脂(180mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)進(jìn)行柱層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用15％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(634mg，17.4％，pH7.25)。
Mp 150℃(分解)；1H NMR(D2O)δ4.00(s，2H)，5.09(s，2H)，6.14(s，1H)，6.36(s，1H)，6.91(s，1H)，6.92(s，1H)；IR(KBr)3381，1752，1683，1600，1558cm-1；λmax(H2O)292，196nm.
實(shí)施例13(5R)(6Z)-6-(7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟1噻唑烷-4-酮以與Marvin M.和Allen R.harkness(Tetrahedron.Letters.1994，35，6971-6974)相同的方法制備標(biāo)題化合物。
步驟2噻唑烷-4-硫酮將拉韋松試劑(33.5g)加入到噻唑烷-4-酮(14.2g)在干燥THF(690mL)中的溶液中，反應(yīng)混合物回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。在室溫下，將殘余物與CHCl3∶MeOH＝7∶3的溶液(65mL)一同研磨30分鐘。濾出沉淀，用CHCl3∶正己烷＝7∶3的溶液(15mL)洗滌，在真空中干燥。得到淺黃色粉末形式的噻唑烷-4-硫酮(10.7g，65％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.08(s，2H)，4.70(s，2H).
步驟34-甲硫基-2，5-二氫-噻唑?qū)⒌饧淄?28.4g)加入到噻唑烷-4-硫酮(9.5g)在氯仿(400mL)中的沸騰溶液中，反應(yīng)混合物回流1.5小時(shí)。以30-60分鐘的時(shí)間間隔，分五批，將額外的碘甲烷(56.8g)加入到反應(yīng)混合物中?；亓黝~外的1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。然后，加入10％的碳酸鉀水溶液(200ml)，并在室溫下攪拌15分鐘。分離有機(jī)層后，水層用CHCl3(100mL×3)萃取。合并有機(jī)層，在MgSO4中干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，在真空中干燥。干燥后，得到褐色油形式的標(biāo)題化合物(11.0g，定量)。
1H NMR(CDCl3)δ2.51(s，3H)，3.91(t，2H，J＝3.5Hz)，5.21(t，2H，J＝3.5Hz).
步驟4噻唑烷-4-亞基胺將4-甲硫基-2，5-二氫噻唑(10.7g)和氯化銨(6.4g)在無(wú)水乙醇(400mL)中的混合物回流27.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行蒸發(fā)。將殘余物溶于氯仿(300mL)和10％的碳酸鉀水溶液(200mL)中，然后在室溫下攪拌20分鐘。分離有機(jī)層后，水層用氯仿(100mL×5)萃取。合并有機(jī)層，在MgSO4中干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮，在真空中干燥，得到褐色固體形式的粗的噻唑烷-4-亞基胺(5.5g)，它包含副產(chǎn)物一種乙氧基衍生物和初始物質(zhì)4-甲硫基-2，5-二氫噻唑。通過(guò)1H-NMR測(cè)得這三種化合物的比例分別為61∶34∶5。
1H NMR(CDCl3)δ3.75(t，2H，J＝2.8Hz)，4.97(t，2H，J＝2.9Hz).
步驟57H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-甲醛在室溫下，將2-溴-3-異丙氧基丙烯醛(6.9g)在干燥乙腈(326mL)中的溶液加入到粗的噻唑烷-4-亞基胺(3.3g)在干燥乙腈(326mL)中的溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌19.5小時(shí)，加入三乙胺(4.9mL)，然后回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后在減壓下進(jìn)行蒸發(fā)。將殘余物溶于二氯甲烷(300mL)中，并用50％的碳酸鉀水溶液(20g)洗滌。過(guò)濾和分離后，水層用二氯甲烷(50mL×4)萃取。合并有機(jī)層，在MgSO4中干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行蒸發(fā)。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-MeOH(100∶3)洗脫，得到褐色固體形式的粗的7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-甲醛。在0℃下，將粗產(chǎn)物用CHCl3-正己烷(第一次30∶5，第二次30∶60)進(jìn)行兩次重結(jié)晶，得到淺褐色晶體形式的所需的醛(收率1.84g，15％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.09(t，2H，J＝1.3Hz)，5.08(t，2H，J＝1.2Hz)，7.63(s，1H)，9.81(s，1H).
步驟6(5R)(6Z)-6-(7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢?H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-甲醛(841mg)加入到無(wú)水MgBr2(2.93g)的干燥乙腈(116mL)的溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(99.7％的濃度)(2.51g)的干燥THF溶液(116mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(2.20mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌4小時(shí)，然后用乙酸酐(1.26mL)和DMAP(160mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。
將殘余物溶于THF(53mL)和乙腈(25mL)中。剛剛活化好的鋅粉(15.1g)與0.5M的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，78mL)一起加入到混合物中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(321mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(1.1，51％，pH7.5)。
Mp 145℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.85(s，2H)，4.88(s，2H)，6.32(s，1H)，6.78(s，1H)，6.85(s，1H)，7.27(s，1H).
實(shí)施例14(5R，6Z)-7-氧代-6-[(4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)亞甲基]-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟1二乙基1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二羧酸酯在氮?dú)庵校蚨一?，5-吡唑二羧酸酯(2.17g，10mmol)在乙腈(10ml)中的溶液中加入碳酸鉀(2.07g，15mmol)和2-溴代乙氧基-叔丁基二甲基硅烷(2.90g，12mmol)?；旌衔镌诨亓飨聰嚢璺磻?yīng)18小時(shí)。然后，將混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(20ml)稀釋，然后通過(guò)酸式硅酸鎂過(guò)濾。濾墊用2×10ml的乙酸乙酯洗滌，將合并的濾液進(jìn)行蒸發(fā)。將殘余物溶于己烷中，并將其通過(guò)硅膠柱(70g)。用己烷(100ml)洗脫后，柱子用乙酸乙酯洗脫。蒸發(fā)乙酸乙酯洗脫液，得到3.71g無(wú)色油；MS m/e 371(MH+)。
步驟21-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲醇在0℃下，在氮?dú)庵校瑢?2ml、1.0M的二異丁基氫化鋁在二氯甲烷中的溶液加入到二乙基1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二羧酸酯(0.74g，2mmol)在二氯甲烷(8ml)中的溶液中。在0℃攪拌0.5小時(shí)后，將混合物在0.5小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。然后，?5ml飽和氯化銨溶液熄滅混合物，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，蒸發(fā)，得到0.44g白色固體；mp 82-83℃；MS m/e 287(MH+)。
步驟31-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲醛向攪拌下的1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲醇(1.18g，4mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中加入4-甲基嗎啉-N-氧化物(2.89g，24mmol)和分子篩4A(4g)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘。然后用peruthenate四丙銨(0.15g，0.4mmol)處理。繼續(xù)攪拌2小時(shí)。濃縮該二氯甲烷溶液，用乙醚(40ml)稀釋。混合物通過(guò)硅膠(40g)襯墊過(guò)濾，過(guò)濾襯墊用2×20ml乙醚洗滌。合并的洗脫液用1N的HCl和鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，蒸發(fā)后得到0.79g白色固體；mp 63-64 C；MS m/e 283(MH+)。
步驟44-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并-[5，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛在0℃下，將6.68ml、1.0M的氟化四丁基銨在THF中的溶液加入到1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲醛(1.02g，6.07mmol)在THF(30ml)中的溶液中。攪拌1小時(shí)后，混合物用10ml的飽和氯化銨溶液處理，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)溶液用鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，通過(guò)酸式硅酸鎂過(guò)濾并蒸發(fā)。用己烷洗滌該粗膠，在真空中干燥，然后將其溶于二氯甲烷(20ml)中。向這種溶液中加入4-甲基嗎啉-N-氧化物(2.89g，24mmol)和分子篩4A(6g)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘。然后用peruthenate四丙銨(0.11g，0.3mmol)處理。繼續(xù)攪拌2小時(shí)。濃縮二氯甲烷溶液，用乙酸乙酯(40mL)稀釋?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅膠(40g)襯墊過(guò)濾，襯墊用乙酸乙酯(2×20ml)洗滌。合并的洗脫液用1N的HCl和鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，蒸發(fā)，得到0.30g白色固體；mp 135-136℃；MS m/e167(MH+)。
步驟54-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氮?dú)庵?，攪拌下向MgBr2(0.46g，2.52mmo)在乙腈(13ml)中的溶液中加入4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛(0.14g，0.84mmol)。然后，加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(0.32g，0.84mmole)在干燥THF(13ml)中的溶液，混合物冷卻至-20℃。向其中加入三乙胺(0.35ml，2.52mmol)，在-20℃下，在黑暗中，將混合物攪拌4小時(shí)。然后，混合物用乙酸酐(0.2ml，2.0mmol)和4-N，N-二甲基氨基吡啶(12mg，0.1mmol)處理，并在0℃下保持18小時(shí)。混合物進(jìn)行濃縮，將殘余物溶于乙酸乙酯中。乙酸乙酯溶液用5％的檸檬酸、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，然后蒸發(fā)。粗物質(zhì)用硅膠(EtOAc-CH2Cl2/1∶5)進(jìn)行色譜分離，得到0.27g的一種灰白色的固體；mp 107-110℃；MS m/e 595(MH+)。
步驟6(5R，6Z)-7-氧代-6-[(4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)亞甲基]-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸在氮?dú)庀拢?-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(0.22g，0.37mmol)在THF(15ml)中的溶液中加入15ml的磷酸鹽緩沖液(0.5M，pH6.5)和80mg的10％的鈀/C。混合物在40-50psi下氫化3小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾。用THF洗滌濾墊，濾液用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取液在無(wú)水硫酸鈉中干燥，蒸發(fā)。用乙醚洗滌殘余物，得到0.07g黃色固體；MS m/e 320(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)δ4.55-4.57(m，2H)，4.764.80(m，2H)，6.50(s，1H)，6.63(s，1H)，7.58(s，1H)，7.76(s，1H).
實(shí)施例156-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟16，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-甲醛的制備在3分鐘內(nèi)，將POCl3(3.83ml，50mmol)滴加到冰冷卻的DMF(3.85ml，50mmol)中。加入DCM(20ml)，當(dāng)反應(yīng)介質(zhì)出現(xiàn)糊狀時(shí)，除去冰浴。反應(yīng)在23℃保持2小時(shí)。然后，在此將反應(yīng)冷卻至0℃。然后，在3分鐘內(nèi)，滴加在10ml DCM中的4H-吡喃-4-酮(5g，50mmol)。反應(yīng)在0℃保持2小時(shí)。將混合物傾倒到冰和醋酸鈉溶液上，用DCM(2×200)萃取。合并的有機(jī)層在MgSO4中干燥。濾出干燥劑，濃縮，得到5.0克產(chǎn)物。將化合物溶于DCM(200ml)中，加入6.0克乙基2-6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]噻喃-2-甲醛-乙酸酯和10mlTEA?；旌衔锘亓?8小時(shí)。然后，用水洗滌，在硫酸鎂中干燥。然后，過(guò)濾，濃縮，用進(jìn)行快速色譜分離(20乙酸乙酯在己烷中)，將收集到的物質(zhì)溶于100ml THF中，注入LAH(150ml，0.5M在THF中)并在23℃下保持10分鐘。然后，回流18小時(shí)。在23℃下，加入水和1N的HCl熄滅混合物。用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，合并的有機(jī)層在硫酸鎂中干燥。過(guò)濾，濃縮，得到2.3克產(chǎn)物。將粗物質(zhì)溶于DCM(300mL)中，向其中加入二氧化錳(15g)。反應(yīng)在23℃進(jìn)行0.5小時(shí)。然后，每半小時(shí)后，加入2×15克的氧化劑。然后，物質(zhì)通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，濃縮?？焖偕V分離后，得到1.206克(14％收率)的油狀產(chǎn)物。
H-NMRδ9.84(s，1H)，7.41(s，1H)，4.74(s，2H)，4.00(t，2H，J＝5.6Hz)，2.969(t，2H，J＝5.6Hz)；MS169.1(M+H)步驟26-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備在N2氛下，將6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-甲醛(336mg，2mmol)溶于20ml乙腈中，然后向其中加入溴化鎂(516mg，2mmol)?；旌衔镌?3℃攪拌半小時(shí)。然后，一次性加入在20ml THF中的6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(770mg，2mmol)，立即將混合物冷卻至-20℃，然后加入三乙胺(1ml)，混合物在-20℃下攪拌三小時(shí)。然后，加入乙酸酐(0.4ml)，混合物在0℃下攪拌18小時(shí)。然后，反應(yīng)介質(zhì)用400ml乙酸乙酯稀釋，用100ml5％的檸檬酸、100ml飽和碳酸氫鈉和100ml鹽水洗滌。然后，有機(jī)層在硫酸鎂中干燥，過(guò)濾，濃縮。使用在己烷中的20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到491mg(41％)產(chǎn)物。然后，將此產(chǎn)物溶于15mlTHF和15ml磷酸鹽緩沖液水溶液(pH＝6.5)中。然后，用0.5克10％的鈀/炭，在45psi氫氣下對(duì)混合物進(jìn)行氫化1小時(shí)。然后，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，在真空中進(jìn)行濃縮，除去大部分THF。然后，將溶液冷卻至0℃，用1N氫氧化鈉堿化至pH＝8。然后，通過(guò)反相HPLC，使用2升水，接著使用在水中的5％的乙腈進(jìn)行提純。在真空中濃縮除去水，收集100mg(38％)產(chǎn)物；MP＞250℃；H-NMRδ7.36(s，1H)，7.15(s，1H)，6.55(s，1H)，6.44(s，1H)，4.61(s，2H)，3.88(m，2H)，2.86(m，2H)，2.27(m，2H)，1.43(t，3H)MS320.3(M-H)實(shí)施例166-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟16，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-甲醛的制備在3分鐘內(nèi)，將POCl3(4.02ml，43mmol)滴加到冰冷卻的DMF(3.34ml，43mmol)中。加入DCM(20ml)，當(dāng)反應(yīng)介質(zhì)出現(xiàn)糊狀時(shí)，除去冰浴。反應(yīng)在23℃保持2小時(shí)。然后，再次冷卻至0℃。然后，在3分鐘內(nèi)，滴加在10ml DCM中的4H-硫代吡喃-4-酮(5g，43mmol)。反應(yīng)在0℃保持2小時(shí)。用DCM(250ml)稀釋，然后與冰一起用冷的200ml飽和醋酸鈉水溶液洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥。濾出干燥劑，濃縮，使用在己烷中的10％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到1.3g(8mmol)產(chǎn)物。將化合物溶于DCM(100ml)中，加入1.2ml(11mmol)2-巰基-乙酸乙酯和1ml TEA。混合物回流18小時(shí)。然后，用水洗滌，在硫酸鎂中干燥。過(guò)濾，濃縮，使用在己烷中的20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到1.1g(11％的收率)產(chǎn)物。
H-NMRδ6.68(s，1H)，4.73(s，2H)，3.68(s，2H)，3.04(t，2H，J＝7.6Hz)，2.91(t，2H，J＝7.6Hz).；MS(EI)185.99(M+)加入1.1g(4.8mmol)6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-羧酸乙酯溶于100ml THF中，加入LAH(40ml，0.5M在DMG中)，反應(yīng)在23℃下保持10分鐘。然后，將反應(yīng)回流18小時(shí)。在23℃下，用水(10ml)熄滅。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行潷析，剩余部分用20mlDCM進(jìn)行洗滌。合并的有機(jī)層在硫酸鎂中干燥。過(guò)濾，濃縮，使用10-20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到940mg粗產(chǎn)物。將此粗物質(zhì)溶于DCM(40mL)中，向其中加入二氧化錳(2g)。反應(yīng)在23℃進(jìn)行0.5小時(shí)。然后，物質(zhì)通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，濃縮。快速色譜分離后，得到320mg(36％收率)的產(chǎn)物。
H-NMRδ9.82(s，1H)，7.46(s，1H)，3.56(s，2H)，3.15(t，2H，J＝7.2Hz)，2.95(t，2H，J＝7.2Hz).；MS(EI)228.02(M+)步驟26-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備在N2氛下，將6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-甲醛(320mg，1.72mmol)溶于17ml乙腈中，然后向其中加入溴化鎂醚合物(450mg，1.74mmol)?；旌衔镌?3℃攪拌半小時(shí)。然后，一次性加入在17ml THF中的6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(660mg，1.72mmol)，立即將混合物冷卻至-20℃，然后加入三乙胺(1ml)，混合物在-20℃下攪拌三小時(shí)。然后，加入乙酸酐(0.4ml)，混合物在0℃下攪拌18小時(shí)。然后，反應(yīng)介質(zhì)用400ml乙酸乙酯稀釋，用100ml 5％的檸檬酸、100ml飽和碳酸氫鈉和100ml鹽水洗滌。然后，有機(jī)層在硫酸鎂中干燥，過(guò)濾，濃縮。使用在己烷中的20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到461mg(44％)產(chǎn)物。然后，將此產(chǎn)物溶于20ml THF和20ml磷酸鹽緩沖液水溶液(pH＝6.5)中。然后，用0.5克10％的鈀/炭，在40psi氫氣下將混合物氫化1.5小時(shí)。然后，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，在真空中濃縮，除去大部分THF。然后，將該溶液冷卻至0℃，用1N的氫氧化鈉將溶液堿化至pH＝8。然后，通過(guò)反相HPLC，使用2升水，接著使用在水中的5％的乙腈進(jìn)行提純。在真空中濃縮除去水，收集21mg(8.6％)產(chǎn)物；MP＞250℃；H-NMR7.34(s，1H)，7.18(s，1H)，6.59(s，1H)，6.44(s，1H)，3.71(s，2H)，2.93(s，2H)，2.50(s，2H).；MS338.0(M+H)實(shí)施例176-(5-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟1(5-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)-甲醇的制備將6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5-二羧酸二乙酯(46g，163mmol)溶于200ml THF中。在23℃下，向該溶液中加入300ml的LAH(1M，THF)。然后，在23℃攪拌18小時(shí)。用10ml水熄滅反應(yīng)，直接在硫酸鈉中干燥。過(guò)濾，濃縮，得到29.3克(160mmol，98％)粗產(chǎn)物。
H-NMR6.55(s，1H)，4.70(s，2H)，3.41(s，2H)，2.86(t，2H，J＝5.6Hz)，2.73(t，2H，J＝5.6Hz)，2.38(s，3H)；MS184.0(M+H)步驟25-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲醛的制備將在5ml CH2Cl2中的DMSO(1.7ml，24mmol)冷卻至-50-60℃。然后，在50℃下，在5分鐘內(nèi)，加入在20ml DCM中的草酰氯(1ml，11mmol)。混合物在-50℃保持5分鐘，然后在50℃下加入在20ml DCM中的(5-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)-甲醇，混合物在50℃下再攪拌15分鐘。然后，在-50℃下，加入三乙胺(7ml)，5分鐘后，除去浴器，讓混合物自然溫?zé)嶂?3℃。用100ml水洗滌混合物，然后用100ml乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層在無(wú)水硫酸鎂中干燥。過(guò)濾，濃縮，使用在乙酸乙酯中的0-15％的甲醇進(jìn)行快速色譜分離，得到736mg(45％的收率)產(chǎn)物。
H-NMR9.81(s，1H)，7.42(s，1H)，3.56(s，2H)，3.00(t，2H，J＝5.6Hz)，2.91(t，2H，J＝5.6Hz)，2.51(s，3H)；MS182.1(M+H)步驟36-(5-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備將2-甲?；?6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-羧酸乙酯(724mg，4mmol)溶于40ml乙腈中，然后，在N2氛下，加入溴化鎂醚合物(1.2克，4.65mmol)?；旌衔镌?3℃攪拌半小時(shí)。一次性加入在40ml THF中的6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(1.54克，4mmol)，將混合物立即冷卻至-20℃。然后加入三乙胺(2ml)，混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)。然后，加入乙酸酐(0.66ml)，混合物在0℃下攪拌48小時(shí)。然后，反應(yīng)介質(zhì)用500ml乙酸乙酯稀釋，用50ml 5％的檸檬酸、50ml飽和碳酸氫鈉和50ml鹽水洗滌。用另外300ml乙酸乙酯對(duì)每個(gè)水溶液進(jìn)行洗滌。然后，合并的有機(jī)層在硫酸鈉中干燥。過(guò)濾，濃縮，使用在己烷中的20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到1.56g(64％的收率)產(chǎn)物。然后，將此產(chǎn)物溶于20ml THF和20ml磷酸鹽緩沖液水溶液(pH＝6.5)中。然后，用0.5g 10％的鈀/炭，在40psi氫氣下將混合物氫化兩小時(shí)。然后，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，在真空中進(jìn)行濃縮，除去大部分THF。然后，將溶液冷卻至0℃，用1N的氫氧化鈉將該溶液堿化至pH＝8.然后，通過(guò)反相HPLC，使用2升水，接著使用在水中的5％的乙腈進(jìn)行提純。然后，通過(guò)在真空中濃縮除去水，收集112mg(13％)產(chǎn)物。
MP＞250℃H-NMRδ7.48(s，1H)，7.37(s，1H)，7.21(s，1H)，7.10(s，1H)，3.41(s，2H)，2.88(s，2H)，2.68(s，2H)，2.37(s，3H)；MS335.0(M+H)實(shí)施例182-(2-羧基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-亞甲基)-6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-羧酸乙酯的制備將2-甲酰基-6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-羧酸乙酯(480mg，2mmol)溶于20ml乙腈中，然后，在N2氛下，加入溴化鎂醚合物(516mg，2mmol)?；旌衔镌?3℃攪拌半小時(shí)。然后，一次性加入在20mlTHF中的6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(770mg，2mmol)，混合物立即冷卻至-20℃。然后加入三乙胺(1ml)，混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)。然后，加入乙酸酐(0.4ml)，混合物在0℃下攪拌48小時(shí)。然后，反應(yīng)介質(zhì)用200ml乙酸乙酯稀釋，用50ml 5％的檸檬酸、50ml飽和碳酸氫鈉和50ml鹽水洗滌。然后，有機(jī)層在硫酸鈉中干燥。過(guò)濾，濃縮，使用在己烷中的20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到690mg(50％，收率)產(chǎn)物。然后，將此產(chǎn)物的一部分(456mg，0.69mmol)溶于15ml THF和15ml磷酸鹽緩沖液水溶液(pH＝6.5)中。然后，用0.5g 10％的鈀/炭，在40psi氫氣下將混合物氫化兩小時(shí)。然后，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，在真空中進(jìn)行濃縮，除去大部分THF。然后，將溶液冷卻至0℃，用1N的氫氧化鈉將該溶液堿化至pH＝8。然后，通過(guò)反相HPLC，使用2升水，接著使用在水中的5％的乙腈進(jìn)行提純。然后，通過(guò)在真空中濃縮除去水，收集18mg(5％)產(chǎn)物。
MP＞250℃；H-NMR7.35(s，1H)，7.24(s，1H)，6.61(s，1H)，6.45(s，1H)，4.48(s，2H)，4.08(四重峰，2H，J＝7.2Hz)，3.68(m，2H)，2.87(m，2H)，1.20(t，3H，J＝7.2Hz)；MS393.0(M+H)實(shí)施例197-氧代-6-(6，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氮雜_-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟16，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氯雜-2-甲醛的制備將硫代己內(nèi)酰胺(6.45g，50mmol)溶于400ml CH2Cl2中，接著向其中加入碘甲烷(16ml，5當(dāng)量)?；旌衔镌诘?dú)庵袛嚢?8小時(shí)。然后，混合物用100ml碳酸鉀(50％，水溶液處理)然后，有機(jī)層在硫酸鎂中干燥。過(guò)濾和濃縮后，得到7.3g物質(zhì)。將此物質(zhì)溶解在300ml乙醇中，加入2.83g氯化銨。混合物回流1小時(shí)。然后，在真空中除去溶劑。將一半的該物質(zhì)加入到200ml乙醇中，接著加入1.35g(25mmol)甲醇鈉和4.8g(25mmol)2-溴-3-異丙氧基-丙烯醛，混合物在23℃下攪拌2小時(shí)。然后，除去溶劑，200ml氯仿與10ml三乙胺一起加入?；旌衔锘亓?小時(shí)，然后冷卻至23℃。反應(yīng)介質(zhì)在300ml DCM和2×150碳酸鉀(50％)之間進(jìn)行分配。有機(jī)層在硫酸鎂中干燥。過(guò)濾和濃縮后，得到2.1g油狀產(chǎn)物。
H-NMR9.62(s，1H)，7.60(s，1H)，6.61(s，1H)，6.45(s，1H)，4.58(s，2H)，2.96(2m，H)，1.90(m，2H)，1.72(m，2H)；MS164.9(M+H)步驟27-氧代-6-(6，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氮雜_-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備將6，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氮雜-2-甲醛(1.312g，8mmol)溶于80ml乙腈中，然后在N2氛下，向其中加入溴化鎂醚合物(2.94g，8mmol)?；旌衔镌?3℃攪拌半小時(shí)。然后，一次性加入在60ml THF中的6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(1.155g，3mmol)，將混合物立即冷卻至-20℃。然后加入三乙胺(4ml)，混合物在-20℃下攪拌4小時(shí)。然后，加入乙酸酐(1ml)，混合物在0℃下攪拌20小時(shí)。然后，反應(yīng)介質(zhì)用500ml乙酸乙酯稀釋，用100ml 5％的檸檬酸、100ml飽和碳酸氫鈉和100ml鹽水洗滌。然后，有機(jī)層在硫酸鈉中干燥。過(guò)濾，濃縮，使用在己烷中的20％的乙酸乙酯進(jìn)行快速色譜分離，得到800mg產(chǎn)物。然后，將此產(chǎn)物溶于20mlTHF和20ml磷酸鹽緩沖液水溶液(pH＝6.5)中。然后，用0.5克10％的鈀/炭，在40psi氫氣下將混合物氫化1小時(shí)。然后，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，在真空中進(jìn)行濃縮，除去大部分THF。然后，將溶液冷卻至0℃，用1N的氫氧化鈉將該溶液堿化至pH＝8。然后，通過(guò)反相HPLC，使用2升水，接著使用在水中的5％的乙腈進(jìn)行提純。然后，通過(guò)在真空中濃縮除去水，收集131mg(31％)產(chǎn)物。
MP＞250℃H-NMRδ7.78(s，1H)，7.02(s，1H)，6.94(s，1H)，6.36(s，1H)，3.92(m，2H)，2.80(m，2H)，1.78(m，2H)，1.61(m，2H)，1.54(m，2H)；MS318.2(M+H).
實(shí)施例20(5R)，(6Z)-6-(7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟17-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯在室溫下，將Et3N(6.27mL)、PhCHO(4.92mL)依次加入到5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯鹽酸鹽(9.47g)的EtOH(81mL)溶液中，并在氮?dú)夥罩袛嚢?小時(shí)。然后，將NaBH3CN(2.97g)加入到反應(yīng)混合物中，并攪拌19小時(shí)?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，用CH2Cl2稀釋，用50％的K2CO3水溶液進(jìn)行洗滌。有機(jī)層在K2CO3中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物用于硅膠柱層析，然后柱子用CHCl3-丙酮(1/0-9/1)和CHCl3-MeOH(19/1-9/1)進(jìn)行洗脫。得到淺黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(4.16g，36％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.36(t，3H，J＝7.1Hz)，2.87(t，2H，J＝5.2Hz)，3.71(s，2H)，3.75(s，2H)，4.01(m，2H)，4.34(q，2H，J＝7.1Hz)，7.25-7.34(m，5H)，7.51(s，1H).
步驟27-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛在-78℃下，在氮?dú)夥罩校瑢?.01M的DIBAL在甲苯(1mL+0.2mL+0.3mL)中的溶液加入到7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-羧酸乙酯(283mg)的干燥CH2Cl2(5mL)溶液中，攪拌1.5小時(shí)?；旌衔镉?M的HCl(5mL)熄滅。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用50％的K2CO3水溶液進(jìn)行洗滌。水層用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)層在K2CO3中干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。將殘余物用于硅膠柱層析，柱子用CHCl3-丙酮(9/1-4/1)和CHCl3-MeOH(19/1)進(jìn)行洗脫。得到無(wú)色晶體形式的標(biāo)題化合物(148mg，61％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.90(t，2H，J＝5.5Hz)，3.74(s，2H)，3.76(s，2H)，4.06(t，2H，J＝5.5Hz)，7.28～7.35(m，5H)，7.53(s，1H)，9.80(s，1H).
步驟3(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(非對(duì)映混合物)在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢?-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(139mg)加入到無(wú)水MgBr2(325mg)的干燥乙腈(8.7mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(223mg)的干燥THF(8.7mL)溶液加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(0.24mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌5小時(shí)，然后用乙酸酐(0.11mL)和DMAP(7mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(3/1-1/1)進(jìn)行洗脫。得到兩個(gè)非對(duì)映混合物形式的標(biāo)題化合物(80/20，紫色無(wú)定形固體；233mg，61％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.99(s，0.8×3H)，2.23(s，0.2×3H)，2.83～2.89(m，2H)，3.68(d，2H，J＝4.9Hz)，3.71(s，2H)，3.94～4.13(m，2H)，5.27(d，1H，J＝13.6Hz)，5.41(d，0.2×1H，J＝13.6Hz)，5.45(d，0.8×1H，J＝13.6Hz)，6.05(s，0.2×1H)，6.28(s.0.8×1H)，6.31(s，0.8×1H)，6.790(s，0.2×1H)，6.793(s，0.2×1H)，7.01(s，0.6×1H)，7.27～7.36(m，5H)，7.42(s，0.2×1H)，7.46(s，0.8×1H)，7.61(d，2H，J＝8.6Hz)，8.22(d，2H，J＝8.6Hz).
步驟4(5R)，(6Z)-6-(7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽將(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(1.27g)溶于THF(55mL)和乙腈(55mL)中。剛剛活化好的鋅粉(5.08g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，80mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(79mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-4/1)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(390mg，49％，pH7.7)。
Mp 180℃(分解)；1H NMR(D2O)δ2.84～2.95(m，2H)，3.61(d，2H，J＝7.2Hz)，3.67(s，2H)，3.96(t，2H，J＝5.7Hz)，6.43(s，1H)，6.89(s，1H)，6.93(s，1H)，7.28～7.37(m，6H).
實(shí)施例21(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟12-甲?；鵞5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶在室溫下，向攪拌下的2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]-5(4H)-吡啶(1.05g，5.2mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入3-吡啶甲基氯鹽酸鹽(0.852g，5.2mmol)和N，N-二異丙基乙胺(10mL，過(guò)量)。反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，然后用水熄滅。反應(yīng)混合物用氯仿萃?。挥盟浞窒礈?，在無(wú)水MgSO4中干燥。過(guò)濾并濃縮。產(chǎn)物用SiO2柱層析(用乙酸乙酯洗脫)進(jìn)行提純。淺黃色半固體。收率800mg，59％；M+H259。
步驟24-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，將2-甲?；鵞5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶(516mg，2.0mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(772mg，2.0mmol)的干燥THF溶液(20mL)依次加入到無(wú)水MgBr2:O(Et)2(390mg，1.5mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。所收集的組分在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率700mg，51％；M+H685和687。
步驟3(5R，6Z)-6-{[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸將4-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(686mg，1.0mmol)溶于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。剛剛活化好的鋅粉(5.2g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入0.1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮，得到黃色沉淀。產(chǎn)物用HP21樹(shù)脂反相柱層析進(jìn)行提純。開(kāi)始時(shí)，柱子用去離子水(2升)進(jìn)行洗脫，然后再用10％的CAN∶水進(jìn)行洗脫。收集含產(chǎn)物的組分，并在室溫下減壓濃縮。黃色固體用丙酮洗滌，然后過(guò)濾。干燥。收率50mg，12％；黃色晶體；mp.134-136℃；(M+H)412。
1H NMR(DMSO-d6)δd 2.8(m，2H)，2.92(bm，2H)，3.6(m，2H)，3.86(s，2H)，6.3(s，1H)，6.41(s，1H)，7.17(s，1H)，7.29(s，1H)，7.35(m，1H)，7.7(m，1H)，8.48(d，1H)，8.54(s，1H).
實(shí)施例22(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟12-甲?；鵞5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶在室溫下，向攪拌下的2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]-5(4H)-吡啶(606mg，3.0mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入煙酰氯鹽酸鹽(531mg，3.0mmol)和N，N-二異丙基乙胺(10mL，過(guò)量)。反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，然后用水熄滅。反應(yīng)混合物用氯仿萃??；用水充分洗滌，在無(wú)水MgSO4中干燥。過(guò)濾并濃縮。產(chǎn)物用SiO2柱層析(用乙酸乙酯洗脫)進(jìn)行提純。淺黃色半固體。收率600mg，73％；M+H 273。
步驟24-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)羰基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，將2-甲酰基[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶(400mg，1.4mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(772mg，2.0mmol)的干燥THF溶液(20mL)依次加入到無(wú)水MgBr2:O(Et)2(619mg，2.4mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。所收集的組分在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率300mg，30％；M.p.71℃；M+H 701.
步驟3(5R，6Z)-6-{[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽將4-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(800mg，1.14mmol)溶于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。剛剛活化好的鋅粉(5.2g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入0.1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮，得到黃色沉淀。產(chǎn)物用HP21樹(shù)脂反相柱層析進(jìn)行提純。開(kāi)始時(shí)，柱子用去離子水(2升)進(jìn)行洗脫，然后再用10％的CAN∶水進(jìn)行洗脫。收集含產(chǎn)物的組分，并在室溫下減壓濃縮。黃色固體用丙酮洗滌，然后過(guò)濾。干燥。收率50mg，12％；黃色晶體；mp.195℃；(M+H)426。
實(shí)施例23(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(苯乙?；?-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟12-甲?；鵞5-(苯乙?；?-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶在室溫下，向攪拌下的2-(甲?；?-6，7-二氫噻吩并[3，2-c]-5(4H)-吡啶(0.41mg，2mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入苯基乙酰氯(0.35mg，2.2mmol)和N，N-二異丙基乙胺(10mL，過(guò)量)。反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，然后用水熄滅。反應(yīng)混合物用氯仿萃??；用水充分洗滌，在無(wú)水MgSO4中干燥。過(guò)濾并濃縮。產(chǎn)物用SiO2柱層析(用乙酸乙酯洗脫)進(jìn)行提純。白色固體。收率510mg，89％；M+H 286。
步驟24-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(苯乙?；?-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，將2-甲?；鵞5-(苯乙?；?-4，5，6，7-四氫噻吩并][3，2-c]吡啶(340mg，1.2mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(390mg，1.0mmol)的干燥THF溶液(20mL)依次加入到無(wú)水MgBr2:O(Et)2(310mg，1.2mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。所收集的組分在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率360mg，50％；M+H 713。
步驟3(5R，6Z)-6-{[5-(苯乙酰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞乙基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸將4-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)[5(苯乙酰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(300mg，0.4mmol)溶于THF(50mL)和0.5M的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28mL)中。在40psi壓力下，在10％鈀/C(80mg)存在下，將該溶液氫化2小時(shí)。最后，反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，濃縮。將分離后的黃色固體溶于乙酸乙酯中，并用水充分洗滌。干燥有機(jī)層，并濃縮。分離后的黃色固體與乙醚一同研磨，然后過(guò)濾。黃色固體用乙醚充分洗滌，發(fā)現(xiàn)它是純度為95％的化合物。收率160mg，91％；黃色固體；mp.166-169℃；(M+H)439。
實(shí)施例24
(5R)，(6Z)-6-(5，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟15，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛在0℃下，將m-氯過(guò)苯甲酸(69％的濃度)(6.36g)加入到6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(1.86g)的CH2Cl2(111mL)溶液中。反應(yīng)混合物在相同的溫下攪拌0.5小時(shí)，接著在室溫下攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物在減壓下濃縮。殘余物與10mL THF一起進(jìn)行研磨，過(guò)濾，得到晶體。濾液在減壓下濃縮。殘余物與5mL THF一起進(jìn)行研磨，過(guò)濾，得到晶體。合并的晶體在減壓下干燥，得到標(biāo)題化合物，是一種無(wú)色晶體(1.96g，89％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.60(t，2H，J＝6.1Hz)，4.47(s，2H)，4.87(t，2H，J＝6.1Hz)，6.71(s，1H)，9.94(s，1H).
步驟2(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(5，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(1.95g)加入到無(wú)水MgBr2(98％的濃度)(5.48g)的干燥乙腈(112mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(96.5％的濃度)(3.88g)的干燥THF溶液(112mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(99％的濃度)(3.79mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用乙酸酐(97％的濃度)(3.79mL)和DMAP(99％的濃度)(120mg)一次性處理.反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌16小時(shí)。向反應(yīng)混合物一次性加入乙酸酐(97％的濃度)(0.95mL)和DMAP(99％的濃度)(120mg)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，接著在減壓下濃縮。殘余物用硅膠柱層析(CHCl3∶丙酮＝19∶1-4∶1)進(jìn)行提純，得到淺褐色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(非對(duì)映混合物(8∶2)，1.35g，22％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.07(s，3H×0.2)，2.25(s，3H×0.8)，3.45-3.60(m，2H)，4.39(d，1H，J＝17.0Hz)，4.44(d，1H，J＝17.0Hz)，4.65-4.78(m，2H)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.43(d，1H×0.8，J＝13.5Hz)，5.44(d，1H×0.2，J＝13.5Hz)，6.05(s，1H×0.8)，6.20(s，1H×0.8)，6.22(s，1H×0.2H)，6.38(s，1H×0.2)，6.39(s，1H×0.2)，6.79(s，1H×0.8)，7.42(s，1H×0.8)，7.44(s，1H×0.2)，7.60(d，2H，J＝8.7Hz)，8.24(d，2H，J＝8.7Hz).
步驟3(5R)，(6Z)-6-(5，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽將(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(5，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]-噻嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(1.33g)溶于THF(19mL)和乙腈(9mL)中。剛剛活化好的鋅粉(5.32g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，27mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。濾出不溶性物質(zhì)，并用H2O(27mL)洗滌。向?yàn)V液中加入H2O(27mL)，用乙酸乙酯(27mL)洗滌，水層冷卻至3℃，加入1M的HCl將pH調(diào)節(jié)至2.5。反應(yīng)混合物在相同的溫度下攪拌1天，加入H2O(55mL)，然后在相同的溫度攪拌4天。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10小時(shí)。將所得混合物冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(80mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd有限公司。)樹(shù)脂柱層析進(jìn)行處理。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(306mg，38％，pH7.4)。
Mp 180℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.83(t，2H，J＝6.1Hz)，4.68(s，2H)，4.72(t，2H，J＝6.1Hz)，6.37(s，1H)，6.40(s，1H)，6.95(s，1H)，6.98(s，1H).
實(shí)施例25(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備哌嗪-2-羧酸，二鹽酸化物以與M.T.Wu等人(Bioorg.Med.Chem.Lett.1993，3，2023-2028)相同的方法制備標(biāo)題化合物。
步驟1哌嗪-1，3-二羧酸1-(4-硝基芐基)酯CuCO3·Cu(OH)2-H2O(15.8g)加入到哌嗪-2-羧酸二鹽酸化物(22.3g)的H2O(275mL)溶液中，然后攪拌下，將該混合物回流10分鐘。濾出不溶性物質(zhì)，并用熱H2O(165mL)洗滌。將濾液冷卻至室溫，向該深藍(lán)色溶液中加入NaHCO3(9.2g)和1，4-二噁烷(220mL)。將混合物冷卻至0℃，在0.5小時(shí)內(nèi)，向該混合物中加入NaHCO3(18.5g)和4-硝基芐基氯甲酸酯在1，4-二噁烷(61.7g)中的50％的溶液。在0℃下額外再攪拌1.5小時(shí)后，將沉淀過(guò)濾并用冷H2O(140mL)、EtOH(100mL)、丙酮(200mL)和Et2O(100mL)洗滌、然后在減壓下干燥，得到淺藍(lán)色晶體。在30分鐘內(nèi)，將該晶體加入到1mol/L的EDTA-2Na(20.5g)的HCl(330mL)溶液中，并在室溫下攪拌2小時(shí)。過(guò)濾懸浮液，過(guò)濾物質(zhì)用EtOH-H2O(7∶3，550mL)稀釋，并回流10分鐘。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，得到無(wú)色晶體形式。將濾液重結(jié)晶三次，得到額外的晶體。合并的晶體在減壓下干燥，得到標(biāo)題化合物，是一種無(wú)色晶體(26.25g，77％)。
1H NMR(D2O)δ2.54-2.81(m，1H)，2.89(dt，2H，J＝12.7，3.4Hz)，2.97(br，1H)，3.13(br，1H)，3.62-4.04(m，2H)，5.16(s，2H)，7.49(d，2H，J＝8.6Hz)，8.14(d，2H，J＝8.6Hz).
步驟25-(4-硝基芐氧基羰基)-3-氧代-3a，4，6，7-四氫-3H-2-氧雜-1，5-二氮雜-7a-azoniainden-3a-化物在0.5小時(shí)內(nèi)，在氮?dú)夥罩?，將NaNO2(98.5％的濃度)(6.66g)的H2O(300mL)溶液加入到哌嗪-1，3-二羧酸1-(4-硝基芐基)酯(26.72g)的乙酸(864mL)溶液中，并攪拌1小時(shí)。在0.5小時(shí)內(nèi)，在0℃下，向該溶液中加入NaNO2(98.5％的濃度)(2.41g)的H2O(132mL)溶液，并攪拌1小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮，向殘余物中加入H2O(500mL)。溶液用AcOEt(5次)萃取，有機(jī)層用鹽水洗滌。混合物在MgSO4中干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮，得到粗的淺褐色無(wú)定形的4-亞硝基哌嗪-1，3-二羧酸1-(4-硝基芐基)酯(27.83g(毛重)，25.77g(凈重)，88.2％)。
在0℃下，在氮?dú)夥罩校?5分鐘內(nèi)，將三氟醋酐(24.0g)的THF(10mL)溶液加入到粗的4-亞硝基哌嗪-1，3-二羧酸1-(4-硝基芐基)酯的THF(371mL)溶液中。該溶液在0℃下攪拌1.5小時(shí)，接著在室溫下攪拌1小時(shí)。在5分鐘內(nèi)，加入三氟醋酐(8.0g)的THF(5mL)溶液，接著在室溫下攪拌20小時(shí)。在5分鐘內(nèi)，向該溶液中加入三氟醋酐(8.0g)，并將該溶液攪拌4小時(shí)。將沉淀過(guò)濾，用THF和Et2O洗滌。濾液在減壓下濃縮。將殘余物與THF一起進(jìn)行研磨，過(guò)濾并用Et2O洗滌。將這些物質(zhì)合并，然后在減壓下干燥，得到標(biāo)題化合物，是一種無(wú)色晶體(22.3g，91％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.06(t，2H，J＝5.4Hz)，4.37(t，H，J＝5.4Hz)，4.63(s，2H)，5.30(s，2H)，7.54(d，2H，J＝8.7Hz)，8.25(d，2H，J＝8.7Hz).
步驟36，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2，5-二羧酸2-乙酯5-(4-硝基芐基)酯在氮?dú)夥罩?，將丙炔酸乙?99％的濃度)(8.28g)加入到5-(4-硝基芐氧基羰基)-3-氧代-3a，4，6，7-四氫-3H-2-氧雜-1，5-二氮雜-7a-azoniainden-3a-化物(22.3g)的鄰二甲苯(348mL)溶液中，并回流16小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮，接著進(jìn)行三次硅膠柱層析(正己烷/AcOEt＝2/1-1/3)。得到淺黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(16.78g，64％)。此外，還得到淺黃色晶體形式的6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5-二羧酸3-乙酯5-(4-硝基芐基)酯(6.18g，24％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，3H，J＝7.1Hz)，4.01(t，2H，J＝5.5Hz)，4.31(t，2H，J＝5.5Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)，4.79(s，2H)，5.29(s，2H)，6.64(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.6Hz)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz).
步驟42-羥甲基-6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢iBH4(640mg)和MeOH(1.2mL)加入到6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c]吡嗪-2，5-二羧酸2-乙酯5-(4-硝基芐基)酯(10g)的THF(267mL)溶液中，接著在40℃下攪拌3小時(shí)。向該溶液中加入額外的LiBH4(523mg)和MeOH(1.0mL)，接著在40℃下攪拌1小時(shí)，然后在50℃下攪拌1小時(shí)。將混合物用3mol/L的HCl酸化至pH2，接著在室溫下攪拌1小時(shí)，然后將K2CO3加入到該溶液中，將pH調(diào)節(jié)到8。濾出不溶性物質(zhì)，濾液用AcOEt萃取。有機(jī)層在K2CO3中干燥，在減壓下濃縮。殘余物硅膠柱層析(CHCl3/MeOH＝49/1-19/1)進(jìn)行提純，得到淺黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(8.44g，95％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.69(br，1H)，3.98(t，2H，J＝5.5Hz)，4.19(t，2H，J＝5.5Hz)，4.65 (s，2H)，4.75(s，2H)，5.28(s，2H)，6.08(s，1H)，7.53(d，2H，J＝8.7Hz)，8.24(d，2H，J＝8.7Hz).
步驟52-甲酰基-6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯將MnO2(活化)(84.2g)加入到2-羥甲基-6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯(8.42g)的CHCl3-MeOH(95∶5，253mL)溶液中，并將該混合物在氮?dú)夥罩谢亓?小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。將硅膠(20g)加入到濾液中，在減壓下除去溶劑，得到硅膠涂覆的粗反應(yīng)物。將上述硅膠吸附到硅膠柱層析上，柱子用CHCl3-MeOH(49/1-19/1)進(jìn)行洗脫。得到黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(2.82g，34％)。
1H NMR(CDCl3)□4.05(t，2H，J＝5.5Hz)，4.32(t，2H，J＝5.5Hz)，4.81(s，2H)，5.29(s，2H)，6.62(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.7Hz)，8.24(d，2H，J＝8.7Hz)，9.93(s，1H).
步驟62-{[RS)-乙酰氧基-[(5R，6RS)-6-溴-2-(4-硝基芐氧基羰基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-基]-甲基}-6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?-甲?；?6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯(2.71g)加入到無(wú)水MgBr2(98％的濃度)(6.17g)的干燥乙腈(164mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(96.5％的濃度)(3.27g)的干燥THF溶液(164mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(99％的濃度)(9.24mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌1.5小時(shí)，然后用乙酸酐(97％的濃度)(3.19mL)和DMAP(99％的濃度)(203mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌1小時(shí)。然后，將乙酸酐(3.19mL)加入到該溶液中，并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，接著在減壓下濃縮。殘余物用硅膠柱層析提純?nèi)?正己烷-AcOEt(1/1-2/3)，CHCl3-丙酮(29/1-19/1)和CHCl3-丙酮(29/1))。得到黃色無(wú)定形形式的標(biāo)題化合物(非對(duì)映混合物(64∶36)，3.30g，53％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.06(s，3H×0.36)，2.26(s，3H×0.64)，3.95-4.04(m，2H)，4.18(s，2H)，4.73(d，1H，J＝18.2Hz)，4.78(d，1H，J＝18.2Hz)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.28(s，2H)，5.43(d，1H×0.64，J＝13.5Hz)，5.44(d，1H×0.38)，6.06(s，1H×0.64)，6.06(s，1H×0.64)，6.24(s，1H×0.36)，6.27(s，1H×0.36)，6.41(s，1H×0.36)，6.79(s，1H×0.64)，7.42(s，1H×0.64)，7.44(s，1H×0.36)，7.53(d，2H，J＝8.6Hz)，7.60(d，2H，J＝8.8Hz)，8.24(d，2H，J＝8,8Hz)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz).
步驟7(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽向2-{(RS)-乙酰氧基-[(5R，6RS)-6-溴-2-(4-硝基芐氧基羰基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-基]-甲基}-6，7-二氫-4H-吡唑并[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯的THF(43mL)和乙腈(20ml)溶液中快速加入鋅粉(12.36g)和0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，63mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。濾出不溶性物質(zhì)，并用H2O(63mL)洗滌。濾液用乙酸乙酯(63mL)洗滌，將水層冷卻至3℃，加入1M的HCl將pH調(diào)節(jié)到2.5。反應(yīng)混合物在相同的溫度下攪拌4小時(shí)，加入H2O(63mL)并使用1M的HCl將pH調(diào)節(jié)到2.5，然后在相同的溫度下攪拌17小時(shí)。加入1M的NaOH，將混合物的pH調(diào)節(jié)到8。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(124mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱層析進(jìn)行處理。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-95/5)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(288mg，22％，pH8.8)。
Mp 160℃(分解)；1H NMR(D2O)δ2.94(t，2H，J＝5.6Hz)，3.67(d，1H，J＝17.2Hz)，3.70(d，1H，J＝17.2Hz)，3.82(t，2H，J＝5.6Hz)，5.84(s，1H)，6.03(s，1H)，6.65(s，1H)，6.67(s，1H).
實(shí)施例26(5R)(6Z)-6-(5，5-二甲基-4H-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽5，5-二甲基-2-哌啶酮5，5-二甲基-2-哌啶酮根據(jù)Nagasawa(J.Med.Chem.，20，1176(1977))的方法進(jìn)行制備。
步驟13，3-二氯-5，5-二甲基-2-哌啶酮以溫度不超過(guò)7℃的速度，將PCl5(57.1g，0.26mol)加入到冷的(0℃)攪拌下的5，5-二甲基-2-哌啶酮(30.2g，0.24mol)在475mL CHCl3中的溶液中。加畢后，繼續(xù)攪拌10分鐘。向其中緩慢加入磺酰氯(96.6mg，0.72mol)，混合物加熱回流1小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物在冰中冷卻，用250mL的冰-水稀釋。然后，產(chǎn)物用CHCl3(6×250mL)萃取，有機(jī)層干燥(MgSO4)，接著過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用CHCl3-MeOH(50∶1)進(jìn)行洗脫。得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(41.3g，88.8％)。(J.Med.Chem.，20，1176(1977))1H NMR(CDCl3)δ1.17(s，6H)，2.76(s，2H)，3.19(d，2H，J＝3.0Hz)，6.82(brs，1H).
步驟23-氯-5，5-二甲基-2-哌啶酮向溶于410mL AcOH中的40.8g(0.21mol)3，3-二氯-5，5-二甲基-2-哌啶酮中加入10％的Pd/C(50％濕度，6.2g)和NaOAc-3H2O(62.4g，0.46mol)，將混合物在300kPa下氫化20分鐘。每5分鐘，在300kPa處調(diào)節(jié)氫氣壓力。過(guò)濾除去催化劑，將濾液在濃縮減壓下。將CHCl3(400mL)和水(300mL)加入到殘余物中，水層用4mol/L的NaOH中和。分離混合物，水層用CHCl3(5×300mL)萃取，有機(jī)層干燥(MgSO4)，接著過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(1∶1)進(jìn)行洗脫。得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(20.4g，59.9％)。(J.Med.Chem.，20，1176(1977))1H NMR(CDCl3)δ1.10(s，3H)，1.12(s，3H)，2.02(dd，1H，J＝10.8，13.6Hz)，2.20(ddd，1H，J＝2.2，8.7，13.6Hz)，2.97(ddd，1H，J＝2.3，3.9，12.1Hz)，3.22(d，1H，J＝12.1Hz)，4.44(dd，1H，J＝6.8，10.7Hz)，6.66(brs，1H).
步驟34，4-二甲基吡咯烷-2-羧酸在Parr裝置中，在150℃下，將3-氯-5，5-二甲基-2-哌啶酮(20.4g，0.13mol)和Ba(OH)3·8H2O(45.2g，0.14mol)在252mL水中的懸浮液加熱6小時(shí)。然后，加入18.6g(0.14mol)硫酸銨。濾出沉淀，溶液在減壓下濃縮至干。得到白色固體形式的粗的4，4-二甲基吡咯烷-2-羧酸(37.5g)。(J.Med.Chem.，20，1176(1977)，EP 0 447 704 A1，第17頁(yè))
1H NMR(D2O)δ1.10(s，3H)，1.11(s，3H)，1.88(dd，1H，J＝7.8，13.2Hz)，2.21(dd，1H，J＝9.2，13.2Hz)，3.12(dd，2H，J＝11.5，23.5Hz)，4.22(dd，1H，J＝8.1，8.9Hz).
步驟45，5-二甲基-3-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-5-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide在室溫下，在15分鐘內(nèi)，向37.5g粗的4，4-二甲基吡咯烷-2-羧酸在420mL AcOH中的懸浮液中加入13.3g(0.19mol)NaNO2在210mL水中的溶液，然后攪拌3小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。將丙酮(250mL)加入到殘余物中，濾出沉淀，溶液在濃縮減壓下至干，得到褐色油形式的粗的4，4-二甲基-1-亞硝基吡咯烷-2-羧酸。
在0℃下，在氮?dú)夥罩?，向粗?，4-二甲基-1-亞硝基吡咯烷-2-羧酸在252mL干燥THF中的溶液中加入三氟醋酐(81.3g，0.39mol)，并在0℃下攪拌6小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(2∶1)進(jìn)行洗脫。得到褐色固體形式的標(biāo)題化合物(12.0g，61.7％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.38(s，6H)，2.71(s，2H)，4.12(s，2H).
步驟55，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-羧酸乙酯在氮?dú)夥罩校瑢?，5-二甲基-3-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-5-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide(10.8g，0.07mol)和丙炔酸乙酯(10.8mL，0.11mol)在鄰二甲苯(350mL)中的溶液回流16小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(3/1)進(jìn)行洗脫。得到淺褐色固體形式的標(biāo)題化合物(4.63g，31.7％)，和黃色固體形式的5，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-3-羧酸乙酯(4.73g，32.4％)。
5，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-羧酸乙酯1H NMR(CDCl3)δ1.29(s，6H)，1.40(t，3H，J＝7.1Hz)，2.71(s，2H)，3.93(s，2H)，4.39(q，2H，J＝7.1Hz)，6.54(s，1H).
5，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-3-羧酸乙酯1H NMR(CDCl3)δ1,32(s，6H)，1.33(t，3H，J＝7.1Hz)，2.89(s，2H)，3.90(s，2H)，4.26(q，2H，J＝7.1Hz)，7.90(s，1H).
步驟65，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲醛在0℃下，在氮?dú)夥罩?，?.63g(22.2mmol)在222mL干燥THF中的5，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-羧酸乙酯中加入LiAlH4(0.85g，22.3mmol)，然后攪拌1小時(shí)?；旌衔镉盟?5.0mL)熄滅，沉淀通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，襯墊用水(50mL)和THF(150mL)洗滌。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，然后向其中加入水(50mL)。水層用CHCl3(5×100mL)萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。在減壓下對(duì)濾液進(jìn)行濃縮，得到黃色固體形式的粗5，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基)甲醇(3.19g)。
在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?.19g在222mL CHCl3中的粗(5，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基)甲醇中加入活化的MnO2(18.5g)，然后回流1小時(shí)?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，在減壓下對(duì)濾液進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用己烷-AcOEt(3∶1)進(jìn)行洗脫。得到褐色固體形式的標(biāo)題化合物(2.48g，68.0％從酯算起)。
1H NMR(CDCl3)δ1.32(s，6H)，2.73(s，2H)，3.95(s，2H)，6.52(s，1H)，9.90(s，1H).
步驟7(5R)(6Z)-6-(5，5-二甲基-4H-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，5-二甲基-5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲醛(2.48g，15.1mmol)的干燥乙腈(16mL)溶液加入到MgBr2(3.07g，16.4mmol)的干燥乙腈(90mL)溶液中，然后將該混合物攪拌15分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(5.30g，13.8mmol)的干燥THF(106mL)溶液，將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(4.6mL，33.0mmol)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(172mg，1.4mmol)和乙酸酐(2.6mL，27.6mmol)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌16小時(shí)。將乙酸乙酯(420mL)和1mol/L檸檬酸水溶液(210mL)加入到反應(yīng)混合物中，接著分離。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，5-二甲基-4H-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(32.0g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，167mL)一起快速加入到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，5-二甲基-4H-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的THF(114mL)和乙腈(53mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。在0℃下冷卻反應(yīng)溶液，然后將pH調(diào)節(jié)到8.0。將乙酸乙酯(85mL)加入到混合物中，混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。襯墊用水(120mL)洗滌。水層分離，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×50mL)萃取。合并的水層在0℃下冷卻，然后將pH調(diào)節(jié)到8.5。混合物濃縮至325g，然后使用DiaionHP-21(240mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析，吸附后，柱子用水(480mL)洗脫，接著用乙腈水溶液(10％；480mL，20％；720mL)洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的活性組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(2.00g，42.8％，pH7.16)。
Mp 150℃(分解)；1H NMR(D2O)δ1.19(s，6H)，2.67(s，2H)，3.85(s，2H)，6.15(s，1H)，6.45(s，1H)，6.96(s，1H)，7.03(s，1H)；IR(KBr)3422，1752，1683，1598，1557cm-1；λmax(H2O)296，198nm.
實(shí)施例27(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟15，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-羧酸甲酯根據(jù)與Tim Johnson等人(synlett 2001，5，646-648)相同的方法制備標(biāo)題化合物。
步驟2(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基)甲醇在0℃下，在氮?dú)夥罩?，?，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-羧酸甲酯(2.24g)加入到LiAlH4(511mg)的THF(59mL)溶液中，接著在0℃攪拌1小時(shí)?；旌衔镉?0mL水熄滅，接著過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮，所得水溶液用CHCl3萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，在MgSO4中干燥，然后過(guò)濾。濃縮濾液，得到標(biāo)題化合物，是一種黃色油(1.86g，定量)。
1H NMR(CDCl3)δ1.66(t，1H，J＝5.9Hz)，2.38-2.46(m，2H)，2.50-2.55(m，2H)，2.65-2.70(m，2H)，4.54(d，2H，J＝5.9Hz)，6.15(s，1H).
步驟35，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-甲醛在氮?dú)夥罩?，將活化MnO2(9.3g)加入到(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基)甲醇(1.86g)的CHCl3(135mL)溶液中，回流1小時(shí)反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(9/1-7/1)進(jìn)行洗脫。得到黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(1.51g，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.47-2.57(m，2H)，2.63(t，2H，J＝6.8Hz)，2.78(t，2H，J＝7.3Hz)，7.06(s，1H)，9.44(s，1H).
步驟4(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-甲醛(1.33g)的乙腈溶液(50mL)加入到無(wú)水MgBr2(98％的濃度)(5.52g)的干燥乙腈(101mL)溶液中。將(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(96.5％的濃度)(3.91g)的干燥THF溶液(151mL)加入到該混合物中，冷卻至-20℃，接著一次性加入Et3N(99％的濃度)(8.28mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(97％的濃度)(4.13mL)和DMAP(99％的濃度)(121mg)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌16小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷∶AcOEt＝4∶1-3∶1)進(jìn)行提純，得到褐色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(3.34g，61％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.21(s，3H)，2.40-2.48(m，2H)，2.53(t，2H，J＝7.0Hz)，2.69(t，2H，J＝7.0Hz)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.43(d，1H，J＝13.5Hz)，6.00(s，1H)，6.37(s，1H)，6.71(s，1H)，7.41(s，1H)，7.60(d，2H，J＝8.1Hz)，8.24(d，2H，J＝8.1Hz).
步驟5(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽將(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(3.28g)溶于THF(46mL)和乙腈(21mL)中。剛剛活化好的鋅粉(13.12g)與0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，67mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.25小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。將水層冷卻至3℃，加入1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.0。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(181mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-85/15)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到標(biāo)題粗產(chǎn)物(288mg)。將此粗產(chǎn)物用DiaionHP-21(100mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-85/15)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(185mg，10％，pH7.2)。
Mp 170℃(分解)；1H NMR(D2O)δ2.24-2.30(m，2H)，2.37(t，2H，J＝6.5Hz)，2.52-2.57(t，2H，J＝7.1Hz)，6.32(s，1H)，6.55(s，1H)，6.73(s，1H)，6.86(s，1H).
實(shí)施例28(5R)(6Z)-6-(4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-diazainden-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟1DL-四氫-1，3-噻嗪-4-羧酸鹽酸鹽DL-四氫-1，3-噻嗪-4-羧酸鹽酸鹽根據(jù)Lewis(J.Med.Chem.，21，1070(1978))的方法進(jìn)行制備。
步驟24，5-二氫-3aH，7H-2-氧雜-3-氧代-6-硫雜-1-氮雜-7a-azonioinden在室溫下，在16分鐘內(nèi)，向DL-四氫-1，3-噻嗪-4-羧酸鹽酸鹽(48.6g，0.26mol)在666mL AcOH中的懸浮液中加入27.4g(0.40mol)NaNO2在333mL水中的溶液，并攪拌3小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。將丙酮(300mL)加入到殘余物中，濾出沉淀。濾液在減壓下濃縮干，得到褐色無(wú)定形固體形式的粗的3-亞硝基[1，3]thiazinane-4-羧酸。
在0℃下，在氮?dú)夥罩?，?0分鐘內(nèi)，向粗的3-亞硝基[1，3]thiazinane-4-羧酸在530mL干燥THF中的溶液中加入三氟醋酐(168.4g，0.80mol)，并在0℃下攪拌5小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(1/2)進(jìn)行洗脫。得到褐色粉末形式的標(biāo)題化合物(28.0g，67.0％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.00(t，2H，J＝5.7Hz)，3.07(t，2H，J＝5.7Hz)，5.16(s，2H).
步驟34，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-羧酸乙酯在氮?dú)夥罩?，?，5-二氫-3aH，7H-2-氧雜-3-氧代-6-硫雜-1-氮雜-7a-azonioinden(28.0g，0.18mol)和丙炔酸乙酯(27.0mL，0.27mol)在鄰二甲苯(590mL)中的溶液回流16小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用正己烷-AcOEt(3/1)進(jìn)行洗脫。得到淺褐色針狀形式的標(biāo)題化合物(22.1g，58.7％)，和淺褐色晶體形式的4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-3-羧酸乙酯(12.7g，33.9％)。
4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-羧酸乙酯；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，3H，J＝7.1Hz)，2.98(t，2H，J＝6.1Hz)，3.21(t，2H，J＝6.1Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)，5.17(s，2H)，6.60(s，1H).
4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-3-羧酸乙酯；1H NMR(CDCl3)δ1.34(t，3H，J＝7.1Hz)，2.99(t，2H，J＝6.1Hz)，3.45(t，2H，J＝6.1Hz)，4.28(q，2H，J＝7.1Hz)，5.11(s，2H)，7.85(s，1H).
步驟44，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-甲醛在0℃下，在氮?dú)夥罩?，?2.1g(0.10mol)在520mL干燥THF中的4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-羧酸乙酯中加入LiAlH4(3.95g，0.10mol)，然后攪拌45分鐘?；旌衔镉盟?20mL)熄滅，沉淀通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，襯墊用水(100mL)和THF(250mL)洗滌。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，然后向其中加入水(300mL)。水層用CH2Cl3(6×500mL)萃取。有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，然后過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮，獲得淺黃色晶體形式的粗產(chǎn)物(17.2g)。
在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?7.2g在520mL CHCl3中的粗的(4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-基)甲醇中加入活化的MnO2(88.0g)，然后回流2小時(shí)?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，在減壓下對(duì)濾液進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，柱子用己烷-AcOEt(2/1)進(jìn)行洗脫。得到黃色晶體形式的標(biāo)題化合物(13.0g，74.5％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.00(t，2H，J＝6.0Hz)，3.23(t，2H，J＝6.0Hz)，5.18(s，2H)，6.58(s，1H)，9.92(s，1H).
步驟5(5R)(6Z)-6-(4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-甲醛(1.70g，10.1mmol)的干燥乙腈(11mL)溶液加入到MgBr2(2.03g，11.0mmol)的干燥乙腈(60mL)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(3.55g，9.2mmol)的干燥THF(71mL)溶液，將混合物冷卻至-20℃，，然后一次性加入三乙胺(3.1mL，22.2mmol)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(0.11g，0.9mmol)和乙酸酐(1.8mL，18.6mmol)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)。將乙酸乙酯(280mL)和1mol/L的檸檬酸水溶液(140mL)加入到反應(yīng)混合物中，接著分離。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4，5-二甲基-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(21.4g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，112mL)一起快速加入到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-二氮雜茚-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的THF(76mL)和乙腈(36mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。在0℃下冷卻反應(yīng)溶液，然后將pH調(diào)節(jié)到8.0。將乙酸乙酯(56mL)加入到混合物中，混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。襯墊用水(150mL)洗滌。水層分離，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×30mL)萃取。合并的水層在0℃下冷卻，然后將pH調(diào)節(jié)到8.0?；旌衔餄饪s至236g，然后使用DiaionHP-21(480mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用水(960mL)洗脫，接著用乙腈水溶液(5％；960mL，10％；960mL，20％；960mL)洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的活性組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(1.28g，40.5％，pH7.45)。
Mp 200℃(分解)；1H NMR(D2O)δ2.95(t，2H，J＝6.1Hz)，3.12(t，2H，J＝6.1Hz)，5.08(s，2H)，6.23(s，1H)，6.46(s，1H)，6.97(s，1H)，7.01(s，1H)；IR(KBr) 3382，1752，1684，1597，1554cm-1；λmax(H2O)366，292，197nm.
實(shí)施例29(5R)，(6Z)-6-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽的制備步驟15，5-二甲基-2-哌啶酮的制備根據(jù)Nagasawa(J.Med.Chem.，23，1176(1977))的方法制備5，5-二甲基-2-哌啶酮(1)。
步驟23，3-二甲基-6-甲氧基-2，3，4，5-四氫吡啶的制備在室溫下，將三甲基氧鎓四氟硼酸鹽(97％，11.9g，78mmol)加入到5，5-二甲基-2-哌嗪酮(9.93g，78mmol)的干燥二氯甲烷(156mL)溶液中，接著攪拌14小時(shí)。反應(yīng)混合物用10％的飽和碳酸氫鈉水溶液中和，分離有機(jī)層。水層用乙酸乙酯(3×120mL)萃取，然后合并的有機(jī)層用10％的碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，獲得淺黃色油形式的標(biāo)題化合物(9.0g，82.0％)。
1H NMR(CDCl3)δ0.92(s，6H)，1.49(t，2H，J＝7.0Hz)，2.18(t，2H，J＝7.0Hz)，3.19(s，2H)，3.63(s，3H).
步驟35，5-二甲基哌啶-2-亞基胺單鹽酸鹽將3，3-二甲基-6-甲氧基-2，3，4，5-四氫吡啶(9.0g，64mmol)和氯化銨(3.4g，64mmol)在無(wú)水乙醇(160mL)中的混合物加熱回流2小時(shí)。然后，在減壓下濃縮反應(yīng)混合物，獲得白色固體形式的標(biāo)題化合物(9.9g，94.6％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(s，6H)，1.52(t，2H，J＝6.9Hz)，2.55(t，2H，J＝6.9Hz)，2.99(d，2H，J＝2.1Hz).
步驟46，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲醛和6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲醛將2-溴-3-羥基丙烯醛(10.1g，67mmol)、對(duì)甲苯磺酸一水合物(0.13g，0.6mmol)和2-丙醇(12.6mL，165mmol)在環(huán)己烷(100mL)中的混合物進(jìn)行共沸蒸餾，直到蒸氣溫度達(dá)到80℃為止。在減壓下將反應(yīng)混合物進(jìn)行濃縮。將殘余物溶于無(wú)水EtOH(200ml)中。在室溫下，加入5，5-二甲基哌啶-2-亞基胺單鹽酸鹽(9.9g，61mmol)的無(wú)水EtOH(350mL)溶液和NaOMe(28％，11.7g，61mmol)的無(wú)水EtOH(50mL)溶液。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后在真空中除去反應(yīng)溶液。殘余物溶于CHCl3(300mL)中，加入三乙胺(8.5mL，61mmol)，然后反應(yīng)混合物加熱回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后在真空中除去反應(yīng)溶液。殘余物用CH2Cl2(600mL)溶解，并用50％的K2CO3水溶液(2×200mL)洗滌。合并的水溶液用CH2Cl2(2×200mL)萃取。合并的有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3-甲醇(50∶1)洗脫，得到6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲醛(褐色固體，4.4g，40.7％)和6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲醛(橙色固體，1.7g，15.8％)。
6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲醛1HNMR(CDCl3)δ1.10(s，6H)，1.78(t，2H，J＝6.9Hz)，2.95(t，2H，J＝6.9Hz)，3.71(s，2H)，7.46(s，1H)，9.83(s，1H).
6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，3-a]吡啶-3-甲醛1HNMR(CDCl3)δ1.09(s，6H)，1.74(t，2H，J＝6.8Hz)，2.97(t，2H，J＝6.8Hz)，4.05(s，2H)，7.74(s，1H)，9.64(s，1H).
步驟5(5R)，(6Z)-6-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢?，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲醛(4.55g，26mmol)的干燥乙腈(28mL)溶液加入到MgBr2(5.22g，28mmol)的干燥乙腈(152mL)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(8.94g，23mmol)的干燥THF(180mL)溶液，將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(7.8mL，56mmol)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(0.29g，2.4mmol)和乙酸酐(4.4mL，47mmol)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌16小時(shí)。將乙酸乙酯(715mL)加入到反應(yīng)混合物中，然后有機(jī)層用1mol/L的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)，過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(53.6g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 6.5，282mL)一起快速加入到(5R)-6-[乙酰氧基-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的THF(192mL)和乙腈(90mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物在0℃下冷卻，然后將pH調(diào)節(jié)到7.6。將乙酸乙酯(140mL)加入到反應(yīng)混合物中，然后混合物通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，襯墊用水(200mL)洗滌。水層分離，然后，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×50mL)萃取。將合并的水層的pH調(diào)節(jié)到8.1，并將混合物濃縮至584g。加入1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至8.2，然后使用DiaionHP-21樹(shù)脂(420mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)進(jìn)行柱層析。吸附后，柱子用2.5％(2床體積)、5％(2床體積)、10％(1床體積)和20％的乙腈水溶液洗脫。在35℃下，在高真空下，濃縮合并的活性組分，冷凍干燥，得到粗的(5R)，(6Z)-6-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽，為黃色無(wú)定形固體(1.19g)。
將粗的(5R)，(6Z)-6-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽用制備HPLC(Mightysil RP-18 GP(5□m)，Kanto Chemical Co.Inc.，35×250mm，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.2)∶CH3CN＝70∶30，20mL/分)提純。提純后的產(chǎn)物通過(guò)DiaionHP-21樹(shù)脂(50mL)柱層析進(jìn)行脫鹽，得到230mg(2.8％)黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物。
Mp 210℃(分解)；1H NMR(D2O)δ；0.91(s，3H)，0.93(s，3H)，1.63(t，2H，J＝6,8Hz)，2.72(t，2H，J＝6.8Hz)，3.60(s，2H)，6.44(s，1H)，6.90(s，1H)，6.91(s，1H)，7.19(s，1H).
實(shí)施例30(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8-H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛(813mg)的干燥乙腈(40mL)溶液加入到MgBr2(2.2g)的干燥乙腈(40mL)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(2.1g)的干燥THF(80mL)溶液，接著將混合物冷卻至-20℃，一次性加入三乙胺(1.7mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3.5小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(64mg)和乙酸酐(0.9mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌14小時(shí)。將10％的檸檬酸水溶液(500mL)加入到反應(yīng)混合物中，水層用乙酸乙酯(3×200mL)進(jìn)行萃取。有機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，使用CH2Cl2-丙酮(20∶1)進(jìn)行洗脫，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色固體。
將上面層析得到的固體溶于THF(11ml)中。剛剛活化好的鋅粉(1.4g)和0.5mol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.5，11mL)一起快速加入。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時(shí)。反應(yīng)溶液通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，用水(26mL)和正丁醇(26mL)洗滌襯墊。水層分離，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×5mL)萃取。將合并的水層濃縮至18g，加入1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.3，然后使用DiaionHP-21樹(shù)脂(20mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)進(jìn)行柱層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用5％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(81mg)。
Mp 145℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.05-3.08(m，1H)，3.83(s，1H)，4.13-4.16(m，1H)，6.37(s，1H)，6.91(s，1H)，7.01(s，1H)，7.04(s，1H)；IR(KBr)3371，1770，1672，1613cm-1；λmax(H2O)314nm.
實(shí)施例31(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟13-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-5-硫雜-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide的制備在0℃下，在氮?dú)夥罩?，將濃HCl(15mL)和NaNO2(16.6g)加入到L-硫代脯氨酸(24.3g)的H2O(166mL)溶液中，攪拌2小時(shí)。溶液用CH2Cl2萃取，有機(jī)層在MgSO4中干燥，在減壓濃縮，得到黃色固體形式的粗的N-亞硝基化合物。
在0℃下，在氮?dú)夥罩校瑢⑷佐?5.0mL)加入到粗的正-亞硝基硫代脯氨酸的THF(350mL)溶液中，并在0℃攪拌5小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-AcOEt(1∶1)進(jìn)行洗脫。得到淺褐色固體形式的標(biāo)題化合物(4.0g，15.1％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.04(t，2H，J＝1.7Hz)，5.40(t，2H，J＝1.7Hz).
步驟24H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-羧酸乙酯的制備在氮?dú)夥罩?，將丙炔酸乙?3.1mL)加入到3-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-5-硫雜-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide(4.0g)的鄰二甲苯(130mL)溶液中，并回流19小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-AcOEt(4∶1)進(jìn)行洗脫。得到黃色固體形式的標(biāo)題化合物(2.7g，49.3％)，和淺黃色晶體形式的4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-3-羧酸乙酯(1.2g，21.7％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.40(t，3H，J＝7.1Hz)，4.11(d，2H，J＝2.1Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)，5.24(t，2H，J＝1.6Hz)，6.61(s，1H).
步驟3(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲醇的制備在室溫下，在氮?dú)夥罩校瑢iBH4(90％的濃度)(459mg)加入到4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-羧酸乙酯(2.5g)和MeOH(0.77mL)的乙醚(126mL)溶液中，然后回流1.5小時(shí)。混合物用1mol/L的HCl(25mL)熄滅，并在室溫下攪拌1小時(shí)?；旌衔镉蔑柡吞妓釟溻c溶液中和，分離。水層用二氯甲烷(10×25mL)萃取。有機(jī)層在MgSO4中干燥，過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用AcOEt洗脫。得到淺黃色固體形式的標(biāo)題化合物(1.7g，87.9％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.95(t，1H，J＝5.6Hz)，4.07(s，2H)，4.62(d，2H，J＝5.1Hz)，5.13(t，1H，J＝1.6Hz)，6.04(s，1H).
步驟44H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-甲醛的制備在-78℃下，將二甲亞砜(2.2mL)的干燥二氯甲烷(8mL)溶液滴加到草酰氯(2.0mL)的干燥二氯甲烷(110mL)溶液中。反應(yīng)混合物在相同的溫度下攪拌15分鐘。在-78℃下，將(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲醇(1.7g)的干燥二氯甲烷(40mL)溶液滴加到反應(yīng)混合物中，并繼續(xù)攪拌額外的15分鐘。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?45℃并攪拌1小時(shí)。滴加三乙胺(11.3mL)，反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃。20分鐘后，加入飽和氯化銨溶液(50mL)和水(100mL)，然后分離。水層用AcOEt(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)層用水(200mL)和鹽水(200mL)洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-AcOEt(1∶1)進(jìn)行洗脫。得到黃色固體形式的標(biāo)題化合物(1.7g，定量)。
1H NMR(CDCl3)δ4.13(s，2H)，5.26(d，2H，J＝1.4Hz)，6.59(s，1H)，9.90(s，1H).
步驟5(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-甲醛(1.7g)的干燥乙腈(92mL)溶液加入到MgBr2(5.0g)的干燥乙腈(92mL)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(4.3g)的干燥THF(184mL)溶液，接著將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(7.4mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(138mg)和乙酸酐(2.1mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入1mol/L的檸檬酸水溶液(1000mL)，水層用乙酸乙酯(3×400mL)萃取。合并的有機(jī)層用水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，然后過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(19.3g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，100mL)一起快速地加入到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的THF(100mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2.5小時(shí)。反應(yīng)溶液通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，用水(200mL)和正丁醇(200mL)洗滌襯墊。水層分離，然后，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×50mL)萃取。將合并的水層濃縮至90g，加入1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至8.0，然后使用DiaionHP-21樹(shù)脂(180mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd)進(jìn)行柱層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用15％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(634mg，17.4％，pH7.25)。
Mp 150℃(分解)；1H NMR(D2O)δ4.00(s，2H)，5.09(s，2H)，6.14(s，1H)，6.36(s，1H)，6.91(s，1H)，6.92(s，1H)；IR(KBr)3381，1752，1683，1600，1558cm-1；λmax(H2O)292，196nm.
實(shí)施例32(5R)(6Z)-6-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟13-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-4-硫雜-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide的制備在室溫下，在13分鐘內(nèi)，向噻唑烷-2-羧酸(39.9g，0.30mol)在1,000mL乙酸中的懸浮液中加入31.0g(0.45mol)亞硝酸鈉在500ml水中的溶液，接著攪拌5小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。將丙酮(500mL)加入到殘余物中，沉淀通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。襯墊用丙酮(500mL)洗滌。濾液在減壓下濃縮至干，得到黃色固體形式的粗的3-亞硝基噻唑烷-2-羧酸。
在0℃下，在氮?dú)夥罩?，?0分鐘內(nèi)，向粗的3-亞硝基噻唑烷-2-羧酸在600mL干燥四氫呋喃中的溶液中加入三氟醋酐(189.6g，0.90mol)，并在0℃下攪拌19小時(shí)。溶液在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-乙酸乙酯(1∶1)進(jìn)行洗脫。得到淺褐色結(jié)晶形式的標(biāo)題化合物(19.2g，44.5％)。
1H NMR(CDCls)δ3.98(t，2H，J＝7.7Hz)，4.65(t，2H，J＝7.7Hz).
步驟22，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-羧酸乙酯和2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-羧酸乙酯的制備在氮?dú)夥罩?，將丙炔酸乙?20.3mL，0.20mol)加入到3-氧代-3a，4-二氫-3H，6H-2-氧雜-4-硫雜-1-氮雜-6a-azonio-3a-pentalenide(19.2g，0.13mol)的鄰二甲苯(600mL)溶液中，并回流21小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，并在減壓下進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-乙酸乙酯(2∶21-1∶1)進(jìn)行洗脫。得到褐色油形式的2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-羧酸乙酯和2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-羧酸乙酯的混合物，它們的比例為1∶1.5。(21.2g，收率80.0％)。
2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-羧酸乙酯；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，3H，J＝7.1Hz)，3.82(t，2H，J＝7.5Hz)，4.39(q，2H，J＝7.1Hz)，4.42(t，2H，J＝7.5Hz)，6.52(s，1H).
2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-羧酸乙酯；1H NMR(CDCl3)δ1.34(t，3H，J＝7.1Hz)，3.85(t，2H，J＝7.8Hz)，4.28(q，2H，J＝7.1Hz)，4.39(t，2H，J＝7.8Hz)，7.87(s，1H).
步驟32，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-甲醛和2，3-二氫-吡唑并[5，1-b]噻唑-7-甲醛在0℃下，在氮?dú)夥罩校騕21.2g(0.11mol)]2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-羧酸乙酯和2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-羧酸乙酯在540mL干燥四氫呋喃中的混合物中加入LiAlH4(4.05g，0.11mol)，然后在室溫下攪拌2.5小時(shí)?；旌衔镉盟?15mL)熄滅，沉淀通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用水(100mL)和四氫呋喃(500ml)洗滌。濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，然后向其中加入水(1500mL)。水層用二氯甲烷(15×250mL)萃取。合并的有機(jī)層在MgSO4中進(jìn)行干燥，過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，得到淺褐色油形式的(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基)甲醇和(2，3二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-基)甲醇的混合物(15.5g)。
在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基)甲醇和(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-基)甲醇在500mL氯仿中的混合物[15.5g(0.10mol)]中加入活化的MnO2(77.7g)，然后回流3小時(shí)。混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，在減壓下對(duì)濾液進(jìn)行濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-乙酸乙酯(2∶1-1∶1)進(jìn)行洗脫。得到黃色結(jié)晶形式的標(biāo)題化合物2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-甲醛(2.50g，15.2％)和淺褐色固體形式的2，3-二氫-吡唑并[5，1-b]噻唑-7-甲醛(5.57g，33.8％)。
2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-甲醛；1H NMR(CDCl3)δ3.86(t，2H，J＝7.5Hz)，4.45(t，2H，J＝7.5Hz)，6.50(s，1H)，9.83(s，1H).
2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-7-甲醛；1H NMR(CDCl3)δ3.92(t，2H，J＝7.9Hz)，4.40(t，2H，J＝7.9Hz)，7.91(s，1H)，9.76(s，1H).
步驟4(5R)(6Z)-6-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽的制備在室溫下，在氮?dú)夥罩?，?，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-甲醛(2.50g，16.2mmol)的干燥乙腈(19ml)溶液加入到MgBr2(3.67g，19.9mmol)的干燥乙腈(106ml)溶液中，然后將該混合物攪拌10分鐘。加入p-硝基芐基(5R，6S)-6-溴代表霉烯-3-羧酸酯(6.23g，16.2mmol)的干燥四氫呋喃(125mL)溶液，將混合物冷卻至-20℃，然后一次性加入三乙胺(5.4mL，38.7mmol)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后用4，4-二甲氨基吡啶(198mg，1.62mmol)和乙酸酐(3.1mL，32.9mmol)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌16小時(shí)。將乙酸乙酯(500mL)加入到反應(yīng)混合物中，有機(jī)層用1mol/L的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，過(guò)濾。將濾液在減壓下進(jìn)行濃縮，得到粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯，為褐色無(wú)定形固體。
將剛剛活化好的鋅粉(37.4g)與0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，196mL)一起快速加入到(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸p-硝基芐基酯的四氫呋喃(134mL)和乙腈(62mL)溶液中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)混合物在0℃下冷卻，然后將pH調(diào)節(jié)到8.0。將乙酸乙酯(100ml)加入到反應(yīng)混合物中?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，襯墊用水(300ml)洗滌。水層分離，然后，有機(jī)層用0.5mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，2×50mL)萃取。將合并的水層的pH調(diào)節(jié)到8.0，并將混合物濃縮至426g。將濃縮物的pH調(diào)節(jié)至8.0，然后使用DiaionHP-21(540mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析，吸附后，柱子用水(1床體積)，然后5％(2床體積)、10％(2床體積)和20％的乙腈水溶液洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的活性組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到橙色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(2.09g，39.2％，pH7.10)。
Mp 150℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.75(t，2H，J＝7.5Hz)，4.27(t，2H，J＝7.5Hz)，6.00(s，1H)，6.34(s，1H)，6.85(s，1H)，6.94(s，1H)；IR (KBr)3392，1755，1596，1554cm-1；λmax(H2O)290，223nm.
實(shí)施例33(5R)(6Z)-6-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噁唑-6-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟12，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-羧酸乙酯的制備向攪拌下的5-羥基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(10.34g，0.66mol)和36.62g碳酸鉀在500ml乙腈中的懸浮液中加入13.68g 1，2-二溴乙烷，然后回流16小時(shí)。將反應(yīng)混合物自然冷卻至室溫，過(guò)濾，固體用乙腈洗滌。將濾液濃縮至一種油。將殘余物溶于乙酸乙酯中，并用水萃取。有機(jī)相在MgSO4中進(jìn)行干燥，蒸發(fā)至干。得到5.80g所需的產(chǎn)物(48％)。
步驟22，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-甲醇的制備向攪拌下的2，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-羧酸乙酯(5.47g，35mmol)在100ml THF中的溶液中加入1.05g硼氫化鋰和1.54g甲醇。溶液在40℃下加熱2.5小時(shí)。反應(yīng)用1N的HCl熄滅，將pH調(diào)節(jié)至1.3，接著在室溫下攪拌1小時(shí)。用K2CO3將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至8。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層物在硫酸鎂中干燥，濃縮至一種油，然后進(jìn)行柱層析，得到2.68g所需的產(chǎn)物(65％)。
步驟32，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-甲醛的制備向攪拌下的2，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-甲醇(2.60g，18.5mmol)在60ml CH3Cl中的溶液中加入12.9g MnO2。在氮?dú)夥罩?，懸浮液回?.5小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。對(duì)濾液進(jìn)行濃縮，得到一種黃色油。產(chǎn)物用色譜進(jìn)行提純。得到2.15g產(chǎn)物(84.3％)。
步驟44-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(2，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-基)-)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，將2，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-甲醛(607mg，4.3mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(1.54g，4.6mmol)的干燥THF溶液(20mL)依次加入到無(wú)水MgBr2:O(Et)2(2.21g，8.5mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。所收集的組分在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率1.9g，81％；M+H 566。
H-NMR(CDCl3)8.24(2H，d，J＝6.6Hz)，7.60(2H，d，J＝6.6Hz)，7.44(1H，s)，6.34(1H，s)，6.23(1H，s)，5.56(1H，s)，5.44(1H，d，J＝10.2Hz)，5.27(1H，d J＝10.2Hz)，5.04(2H，m)，4.30(2H，m)，2.10(3H，s).
C21H17BrN4O8S元素分析，理論值C，44.61，H，3.03，N，9.91；實(shí)測(cè)值C，45.00，H，3.14，N，9.53
步驟5(5R，6Z)-6-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-基亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽將4-硝基芐基-6-[(乙酰氧基)(2，3-二氫吡唑并[5，1-b][1，3]噁唑-6-基)-)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(700mg，1.2mmol)溶于THF(20ml)、乙腈(10ml)和0.5M磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28ml)中，在10％的鈀/C下，在40psi壓力下，氫化。4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入0.1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮，得到黃色沉淀。產(chǎn)物用HP21樹(shù)脂反相柱層析進(jìn)行提純。開(kāi)始時(shí)，柱子用去離子水(2升)進(jìn)行洗脫，然后再用10％的CAN∶水進(jìn)行洗脫。收集含產(chǎn)物的組分，并在室溫下減壓濃縮。黃色固體用丙酮洗滌，然后過(guò)濾。干燥。收率276mg，73％；黃色無(wú)定形固體；(M+H+Na)314。
1H-NMR(D2O)；δ6.97(1H，s)，6.95(1H，s)，6.46(1H，s)，5.56(1H，s)5.07(2H，d，J＝6.3Hz)，4.30(2H，t，J＝6.3Hz).
實(shí)施例34(5R，6Z)-6-[(5-乙?；?4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸(E+Z異構(gòu)體混合物，鈉鹽)的制備步驟15-乙?；?4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲醛在N2大氣壓下，在干燥條件中，向1.5g(7.4mmol)4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲醛鹽酸鹽在50mL二氯甲烷中的冷的(0℃)懸浮液中滴加攪拌下的2.6mL(2.5當(dāng)量)三乙胺。在0℃下，將RM攪拌30分鐘。向其中滴加0.7g(8.1mmol，1.1當(dāng)量)乙酰氯在15mL二氯甲烷中的溶液，將RM自然達(dá)到室溫，接著攪拌3小時(shí)。通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，濾液用3×50mL水進(jìn)行洗滌，干燥，蒸發(fā)，得到1.1g(71.4％)標(biāo)題化合物，粘性油，(M+H)+210.3。
步驟24-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(5-乙?；?4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯的制備在室溫下，在氬氣氛中，向無(wú)水MgBr2:O(Et)2(2.21g，8.5mmol)的干燥乙腈(15mL)溶液中依次加入5-乙酰基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲醛(540mg，2.57mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(950mg，2.5mmol)的干燥THF溶液(20mL)。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂專⒂?％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。所收集的組分在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率870mg，53％；m.p.46-48℃；(M+H)+637.6。
1H NMR(CDCl3)δ2.15(t，6H)；2.8-3.0(m，2H)；3.7-3.9(m，2H)；4.58-4.68(m，2H)；5.30-5.45(dd，2H)；5.85(d，1H)；6.71(s，1H)；6.95(s，1H)；7.35 7.45(d，1H)；7.60(dd，2H)；8.25(dd，2H).
步驟3(5R，6Z)-6-[(5-乙?；?4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸(E+Z異構(gòu)體混合物，鈉鹽)在0.4g、10％的鈀/炭催化劑存在下，在40psi的壓力下，將0.77g(1.21mmol)4-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(5-乙酰基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在40mL THF和40mL磷酸鹽緩沖液(pH＝6.36)中的溶液氫化3小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾，將濾液的pH調(diào)節(jié)至8.0，在真空中進(jìn)行濃縮，殘余物用反相色譜柱(amberlite)(使用5％..10％的ACN/水混合物作為溶劑)進(jìn)行提純，得到0.107g(23％)標(biāo)題化合物，微紅色晶體，m.p.362.4℃，(M+H)+409.5。
1H NMRδ2.08(s，3H)；2.80-2.95(m，1H)；3.74(m，2H)；3.98-4.06(d，2H)6.32-6.42(s，1H)；6.50-6.60(s，1H)；6.98-7.20(s，1H)；7.30-7.40(s，1H).
實(shí)施例35(5R，6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備步驟14-亞硝基嗎啉-3-羧酸在0℃下，在氮?dú)庀?，向嗎?3-羧酸(6.96g，52mmol)在水(20ml)中的溶液中加入濃鹽酸(4ml)，接著分小批量加入亞硝酸鈉(5.0g，72mmol)?；旌衔镌?℃下攪拌1小時(shí)，然后在30-35℃下，在真空中進(jìn)行濃縮。殘余物用200mL丙酮攪拌，接著過(guò)濾。將濾液蒸發(fā)，殘余物用50mL的THF處理，接著濃縮。用2×50mL THF重復(fù)該方法，得到11.87g淺黃色泡沫；MS(ESI)m/z 159.2(M-H)。
步驟26，7-二氫-4H-[1，2，3]噁二唑并[4，3-c][1，4]噁嗪-8-ium-3-olate將從步驟1中制得的粗4-亞硝基嗎啉-3-羧酸(11.0g)溶于THF(250ml)中，接著冷卻至0℃。攪拌下，在10分鐘內(nèi)，向其中加入三氟醋酐(7.4ml，52mmol)在THF(20ml)中的溶液。所得混合物在0℃下攪拌5小時(shí)，然后在16小時(shí)內(nèi)，將其溫?zé)嶂潦覝?。蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用250ml乙酸乙酯稀釋，接著又與30g無(wú)水碳酸鉀一起進(jìn)行攪拌?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅膠襯墊進(jìn)行過(guò)濾，并將濾液進(jìn)行蒸發(fā)。殘余物用乙酸乙酯-乙醚的混合物洗滌，得到3.80g白色固體；mp.132-133℃；MS(ESI)m/z 143.1(M+H)。
步驟36，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-羧酸乙酯向6，7-二氫-4H-[1，2，3]噁二唑并[4，3-c][1，4]噁嗪-8-ium-3-olate(3.41g，24mmol)在鄰二甲苯(80ml)中的部分溶液中加入丙炔酸乙酯(2.7ml，26mmol)?；旌衔镌?40℃下攪拌3小時(shí)。然后，加入額外的2.0ml(19mmol)的丙炔酸乙酯，混合物在回流下攪拌18小時(shí)。在真空下對(duì)最終溶液進(jìn)行蒸發(fā)，將殘余物溶于二氯甲烷和己烷(1∶5)的混合物中。溶液通過(guò)硅膠襯墊，用二氯甲烷-己烷洗滌襯墊，接著用乙酸乙酯洗滌濾墊。將乙酸乙酯洗脫液進(jìn)行蒸發(fā)，殘余物用己烷洗滌，得到4.10g白色固體；mp.63℃；MS(ESI)m/z 197.1(M+H)。
步驟46，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基甲醇在0℃下，在氮?dú)庀拢?，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-羧酸乙酯(1.57g，8.0mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液中加入24ml 1.0M的二異丁基氫化鋁在二氯甲烷中的溶液。在0℃攪拌0.5小時(shí)后，在2小時(shí)內(nèi)，將混合物溫?zé)嶂潦覝?。然后，?0ml飽和氯化銨溶液處理混合物，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)溶液用鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)，得到1.27g無(wú)色油；MS(ESI)m/z 155.3(M+H)。
步驟56，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛在室溫下，在攪拌下，向6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基甲醇(1.08g，7.0mmol)在1，2-二氯乙烷(30ml)中的溶液中加入5.4g活化的二氧化錳。在1小時(shí)內(nèi)，將混合物加熱至60℃，然后在室溫下攪拌16小時(shí)。最終的混合物通過(guò)頂端為硅藻土的硅膠柱進(jìn)行過(guò)濾。濾墊用二氯甲烷、接著用乙酸乙酯進(jìn)行洗脫。將乙酸乙酯洗脫液進(jìn)行蒸發(fā)，殘余物與一起進(jìn)行研磨，得到0.81g白色固體；mp.91℃；MS(ESI)m/z 153.2(M+H)。
步驟64-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在攪拌下，向MgBr2(0.94g，5.1mmol)在乙腈(25ml)中的溶液中加入6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛(0.26g，1.7mmol)。然后，加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(0.58g，1.5mmol)在THF(25ml)中的溶液，接著將混合物冷卻至-20℃。向其中加入三乙胺(0.71ml，5.1mmol)，在-20℃下，在黑暗中，將混合物攪拌5小時(shí)。然后，混合物用乙酸酐(0.6ml，6.0mmol)和4-N，N-二甲基氨基吡啶(24mg，0.2mmol)處理，接著在0℃下保持18小時(shí)。將混合物進(jìn)行濃縮，殘余物溶于乙酸乙酯中。乙酸乙酯溶液用5％的檸檬酸、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉中干燥，然后蒸發(fā)。粗物質(zhì)用硅膠(EtOAc-CH2Cl2/1∶5)進(jìn)行色譜分離，得到0.77g白色泡沫；MS(ESI)m/z 578.9(M+H)。
步驟7(5R，6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸在氮?dú)庀拢?-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(0.35g，0.6mmol)在THF(20ml)中的溶液中加入20ml磷酸鹽緩沖液(0.5M，pH6.5)和120mg的10％的Pd/C?；旌衔镌?0-50psi下氫化3小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾。用THF洗滌濾墊，濾液用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取液在無(wú)水硫酸鈉中干燥，蒸發(fā)。用乙醚洗滌殘余物，得到0.09g黃色固體；HRMSC13H11N3O4S元素分析的理論值305.0470；實(shí)測(cè)值(ESI+)，306.05434；1H NMR(DMSO-d6)δ4.07-4.09(t，2H)，4.13-4.17(t，2H)，4.82(s，2H)，6.36(s，1H)，6.55(s，1H)，7.17(s，1H)，7.55(s，1H)，12.80(bs，1H).
實(shí)施例36(5R)(6Z)-6-(6，7-5H-二氫吡唑并[5，1-b]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽的制備步驟16，7-二氫-5H-吡唑并[5，1-b] [1，3]噁嗪-2-羧酸乙酯的制備向攪拌下的5-羥基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(10.34g，0.66mol)和36.62g碳酸鉀在500ml乙腈中的懸浮液中加入14.7g 1，3-二溴丙烷，然后回流16小時(shí)。將反應(yīng)混合物自然冷卻至室溫，過(guò)濾，固體用乙腈洗滌。將濾液濃縮至一種油。將殘余物溶于乙酸乙酯中，并用水萃取。有機(jī)相在MgSO4中進(jìn)行干燥，蒸發(fā)至干。得到8.80g所需的產(chǎn)物(68％)，m.p.44-46℃(M+H)+197.1。
步驟22，3-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-基-甲醇的制備向攪拌下的6，7-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-羧酸酯(4.0g，20mmol)在100mlTHF中的溶液中加入0.71g硼氫化鋰和1.03g甲醇。溶液在40℃下加熱2.5小時(shí)。反應(yīng)用1N的HCl熄滅，并將pH調(diào)節(jié)至1.3，接著在室溫下攪拌1小時(shí)。用K2CO3將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至8。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層在硫酸鎂中干燥，濃縮至一種油，然后進(jìn)行柱層析，得到2.08g所需的產(chǎn)物(67％)；(M+H)155。
步驟36，7-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-甲醛的制備向攪拌下的2，3-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-基-甲醇(2.08g，13.5mmol)在60ml CH3Cl中的溶液中加入9.38g MnO2。在氮?dú)夥罩?，將懸浮液回?小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。對(duì)濾液進(jìn)行濃縮，得到一種黃色油。產(chǎn)物用色譜進(jìn)行提純。得到2.15g產(chǎn)物(78％)。
步驟44-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(6，7-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯在室溫下，在氬氣氛中，向無(wú)水MgBr2∶O(Et)2(1.2g)的干燥乙腈(15mL)溶液中依次加入6，7-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-甲醛(330mg，2mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基-芐基酯(0.794g，2.2mmol)的干燥THF溶液(20mL)。冷卻至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃攪拌2小時(shí)，然后用乙酸酐(1.04mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌15小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，通過(guò)硅藻土襯墊過(guò)濾。襯墊用乙酸乙酯洗滌。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。所收集的組分在減壓下濃縮，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物用于下一步反應(yīng)中。淺黃色無(wú)定形固體；收率0.76g，65％；M+H579。
步驟5(5R)(6Z)-6-(6，7-5H-二氫吡唑并[5，1-b]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽將4-硝基芐基(5R)-6-[(乙酰氧基)(6，7-二氫-5H-吡唑并[5，1-b][1，3]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯(350mg，0.6mmol)溶于THF(20ml)、乙腈(10mL)和0.5M的磷酸鹽緩沖液(pH6.5，28mL)，接著在10％的Pd/C中，在40psi壓力下氫化。4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，冷卻至3℃，加入0.1M的NaOH，將pH調(diào)節(jié)至8.5。濾液用乙酸乙酯洗滌，分離水層。在35℃下，在高真空中，將水層濃縮，得到黃色沉淀。產(chǎn)物用HP21樹(shù)脂反相柱層析進(jìn)行提純。開(kāi)始時(shí)，柱子用去離子水(2升)進(jìn)行洗脫，然后再用10％的CAN∶水進(jìn)行洗脫。收集含產(chǎn)物的組分，并在室溫下減壓濃縮。黃色固體用丙酮洗滌，然后過(guò)濾。干燥。收率103mg，52％；黃色無(wú)定形固體；(M+H+Na)327。
1H-NMR(D2O)；δ6.97(1H，s)，6.93(1H，s)，6.47(1H，s)，5.65(1H，s)4.28(2H，m)，4.10(2H，m)，2.21(2H，m).
實(shí)施例37(5R)，(6Z)-6-[5-(3-羧丙?；?-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，二鈉鹽的制備上述化合物通過(guò)上述實(shí)施例中所列方法進(jìn)行制備。將(5R)，(6Z)-6-{5-[3-(4-itro芐氧基羰基)丙酰基]-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽(467mg)在Pd/C(10％)中進(jìn)行氫化，分離得到無(wú)定形固體形式的276mg(74％)(5R)，(6Z)-6-[5-(3-羧丙?；?-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，二鈉鹽。Mp.180℃(分解)；1H NMR(D2O)□2.41(t，2H)，2.42(t，2H)，2.67(t，2H)，2.72(t，2H)，3.95-4.09(m，2H)，4.18(t，2H)，4.28(t，2H)，4.75(s，2H)，4.87(s，2H)，6.33(s，1H)，6.34(s，1H)，6.53(s，1H)，7.00(s，1H)，7.09(s，1H).
實(shí)施例38(5R)，(6Z)-6-[5-(2-甲氧基乙?；?-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，鈉鹽的制備(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽(實(shí)施例25)在0℃下，向(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽(實(shí)施例25)(638mg)的THF(64ml)和H2O(64ml)溶液中緩慢地加入0.1M的NaOH水溶液，將pH調(diào)節(jié)至12.5。在5分鐘內(nèi)，向混合物中加入甲氧基乙酰氯(0.28mL)。混合物在0℃下攪拌0.5小時(shí)，然后將甲氧基乙酰氯(0.09mL)加入到混合物中?；旌衔镌谙嗤臏囟认聰嚢?.5小時(shí)后，加入0.1M的NaOH水溶液，將pH調(diào)節(jié)至8.05。在35℃下，在高真空中，濃縮混合物。濃縮物用DiaionHP-21(78mL，MitsubishiKasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1∶0-9∶1)進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(509mg，65％，pH7.58)。Mp 170℃(分解)；1H NMR(D2O)□3.28(s，3H×1/2)，3.29(s，3H×1/2)，3.78(t，2H×1/2，J＝5.4Hz)，3.89-3.93(m，2H×1/2)，4.09(t，2H×1/2，J＝5.4Hz)，4.14(t，2H×1/2，J＝5.4Hz)，4.20(s，2H×1/2)，4.25(s，2H×1/2)，4.61(s，2H×1/2)，4.66(s，2H×1/2)，6.19(s，1H×1/2)，6.22(s，1H×1/2)，6.37(s，1H×1/2)，6.372(s，1H×1/2)，6.87(s，1H)，6.93(s，1H)實(shí)施例39(5R)，(6Z)-6-[5-(2-甲氧基乙?；?-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，鈉鹽的制備(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基)-甲醇將甲醇(150ml)加入到2-羥甲基-6，7-二氫-4H-吡唑[1，5-a]吡嗪-5-羧酸4-硝基芐基酯(實(shí)施例25)(2.38g)和10％Pd-C(50％濕度，1.19g)的混合物中。反應(yīng)混合物在氫氣中攪拌2小時(shí)。過(guò)濾混合物，并在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用在氯仿中的50％的甲醇洗脫。得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(1.08g，98％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)□3.22-3.25(m，2H)，3.99(s，2H)，4.03-4.06(m，2H)，4.52(s，2H)，6.06(s，1H).吡嗪-2-基]-甲醇將在乙醚(0.7ml)中的氯化氫(2mol/l)溶液加入到(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基)-甲醇(1.08g)和2-甲基硫烷基-4，5-二氫噻唑(1.03g)的甲醇(20ml)溶液中。將反應(yīng)混合物回流4天?；旌衔镉蒙倭康娘柡吞妓徕浫芤合纾稍?MgSO4)，然后過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用在氯仿中的10％的甲醇洗脫。得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(1.49g，89％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)□2.04(brs，1H)，3.39(t，2H，J＝7.5Hz)，3.90(t，2H，J＝ 5.3Hz)，4.06(t，2H，J＝7.5Hz)，4.21(t，2H，J＝5.3Hz)，4.66(s，2H)，4.69(s，2H)，6.07(s，1H).
(5R)，(6Z)-6-[5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽在室溫下，將活化過(guò)的錳(IV)氧化物(16.75g)加入到5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基]-甲醇(3.35g)的氯仿(180ml)溶液中。將反應(yīng)混合物回流1小時(shí)?；亓骱螅旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾，在減壓下對(duì)濾液進(jìn)行濃縮。在真空中干燥殘余物，得到無(wú)色固體形式的粗5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-甲醛。在室溫下，在氮?dú)夥罩?，將由此得到的粗?2.56g)加入到MgBr2(7.36g)的干燥乙腈(200ml)溶液中，然后將混合物攪拌10分鐘。向其中加入WLJ 20,014(4.16g)的干燥THF(200ml)溶液，然后將混合物冷卻至-20℃。然后，一次性加入三乙胺(11.3ml)。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌1.5小時(shí)，然后用4，4-二甲基氨基吡啶(132mg)和乙酸酐(4.2mL)一次性處理。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并在0℃下攪拌20小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，并用5％的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌。有機(jī)層在MgSO4中干燥，過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮。殘余物進(jìn)行硅膠柱層析，然后柱子用正己烷-AcOEt(1∶2)和氯仿-甲醇(9∶1)洗脫。得到(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基]-甲基)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(5.41g，75.4％)。
將(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸4-硝基芐基酯(5.41g)溶于THF(76ml)和乙腈(35ml)中。將剛剛活化好的鋅粉(21.6g)與0.5M的磷酸鹽緩沖液(pH 6.5，111mL)一起加入到混合物中。反應(yīng)器用金箔罩住，避免光照。反應(yīng)混合物在30-35℃下劇烈攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物在0℃下冷卻，然后將pH調(diào)節(jié)到7.6。將乙酸乙酯加入到反應(yīng)混合物中，然后通過(guò)硅藻土襯墊進(jìn)行過(guò)濾。用水洗滌襯墊，接著分離水層。在35℃下，在高真空中，對(duì)水層進(jìn)行濃縮。濃縮物用DiaionHP-21(170ml，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)樹(shù)脂柱進(jìn)行層析。吸附后，柱子先用水進(jìn)行洗脫，接著用5％-15％的乙腈水溶液進(jìn)行洗脫。在35℃下，在高真空中，將合并的活性組分進(jìn)行濃縮，冷凍干燥，得到粗的黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(1.60g)。
將該粗化合物用制備HPLC(Mightysil RP-18GP，KANTOCHEMICAL CO.，INC.，35×250mm，0.05mol/l的磷酸鹽緩沖液(pH7.1)∶乙腈＝80∶20，25ml/分鐘)進(jìn)行提純，接著在DiaionHP-21樹(shù)脂(150ml，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)上脫鹽，得到黃色無(wú)定形固體形式的標(biāo)題化合物(1.06g，收率31.5％，pH8.33).
Mp 100℃(分解)；1H NMR(D2O)□3.18(t，2H，J＝7.6Hz)，3.60(t，2H，J＝5.3Hz)，3.73(t，2H，J＝7.6Hz)，3.94(t，2H，J＝5.3Hz)，4.37(s，2H)，6.01(s，1H)，6.21(s，1H)，6.77(s，1H)，6.78(s，1H)；IR(KBr)3381，1752，1606cm-1；λmax(H2O)369，291，208nm。
實(shí)施例40(5R)，(6Z)-6-[5-(2-甲氧基乙酰基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，鈉鹽的制備2-[(乙酰氧基)((5R)-6-溴-2-{[(4-硝基芐基)氧代]羰基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-基)甲基]-4，7-二氫呋喃并[2，3-c]吡啶-6(5H)-羧酸乙酯的制備由0.669g 2-甲?；?4，7-二氫呋喃并[2，3-c]吡啶-6(5H)-羧酸甲酯和1.155g4-硝基芐基(5R)-6-溴-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸酯，制備標(biāo)題化合物，得到1.65g產(chǎn)物(84％)，其直接用于下一步反應(yīng)中。MS652.2(M+H)(5R，6Z)-6-{[6-(乙氧羰基)-4，5，6，7-四氫呋喃并[2，3-c]吡啶-2-基]亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸的制備由1.65g 2-[(乙酰氧基)((5R)-6-溴-2-{[(4-硝基芐基)氧代]羰基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-基)甲基]-4，7-二氫呋喃并[2，3-c]吡啶-6(5H)-羧酸乙酯，制備標(biāo)題化合物，得到0.386g產(chǎn)物(41％)。MP在175℃下分解。MS375.0(M-H)。
H-NMR(D2O)□6.91(s，1H)，6.84(s，1H)，6.62(s，1H)，6.39(s，1H)，4.41(b，2H)，4.04(q，2H，J＝5Hz)，3.52(b，2H)，2.42(b，2H)，1.14(t，3H，J＝5Hz)，
權(quán)利要求
1.式I的化合物 其中A和B之一表示氫，另一個(gè)表示任選取代的稠合二環(huán)雜芳基；X是O或S；R5是H、C1-C6烷基、C5-C6環(huán)烷基或CHR3OCOC1-C6烷基；R3是H、C1-C6烷基、C5-C6環(huán)烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中二環(huán)雜芳基是 其中Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2、N、O、S或N-R1，條件是Z1-Z3中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1；條件是沒(méi)有生成S-S或O-O或S-O鍵，以飽和環(huán)體系；t＝1-4；R1是H、任選取代的C1-C6烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或單或二環(huán)飽和雜環(huán)、任選取代的C5-C7環(huán)烷基、任選取代的C3-C6鏈烯基、任選取代的C3-C6炔基條件是兩個(gè)雙鍵和三鍵不應(yīng)該存在于直接與N連接的碳原子上；任選取代的-C1-C6全氟代烷基、-S(O)p任選取代的烷基或芳基其中p是0-2、任選取代的-C＝O雜芳基、任選取代的-C＝O芳基、任選取代的-C＝O(C1-C6)烷基、任選取代的-C＝O(C5-C6)環(huán)烷基、任選取代的-C＝O單或二環(huán)飽和雜環(huán)、任選取代的C1-C6烷基芳基、任選取代的C1-C6烷基雜芳基、任選取代的芳基-C1-C6烷基、任選取代的雜芳基-C1-C6烷基、任選取代的C1-C6烷基單或二環(huán)飽和雜環(huán)、任選取代的8-16個(gè)碳原子的芳基鏈烯基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、任選取代的芳基烷氧基烷基、任選取代的-烷基-O-烷基-芳基、任選取代的-烷基-O-烷基-雜芳基、任選取代的芳氧基烷基、任選取代的雜芳氧基烷基、任選取代的芳氧基芳基、任選取代的芳氧基雜芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基雜芳基、任選取代的烷基芳氧基烷基胺、任選取代的烷氧基羰基、任選取代的芳氧基羰基、任選取代的雜芳氧基羰基；R2是氫、任選取代的C1-C6烷基、任選取代的C2-C6鏈烯基、任選取代的C2-C6炔基、鹵素、氰基、N-R6R7、任選取代的C1-C6烷氧基、羥基；任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、COOR6、任選取代的烷基芳氧基烷基胺、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、任選取代的C3-C6鏈烯氧基、任選取代的C3-C6炔氧基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷氧基、亞烷基二氧基、任選取代的芳氧基-C1-C6烷基胺、C1-C6全氟代烷基、S(O)q-任選取代的C1-C6烷基、S(O)q-任選取代的芳基其中q是0、1或2、CONR6R7、胍基或環(huán)狀胍基、任選取代的C1-C6烷芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的C1-C6烷基雜芳基、任選取代的雜芳基-C1-C6烷基、任選取代的C1-C6烷基單環(huán)或二環(huán)飽和雜環(huán)、8-16個(gè)碳原子的任選取代的芳基鏈烯基、SO2NR6R7、任選取代的芳基烷氧基烷基、任選取代的芳氧基烷基、任選取代的雜芳氧基烷基、任選取代的芳氧基芳基、任選取代的芳氧基雜芳基、任選取代的雜芳氧基芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任選取代的C1-C6烷基芳氧基雜芳基、任選取代的芳氧基烷基、任選取代的雜芳氧基烷基、任選取代的烷基芳氧基烷基胺；R4是H、任選取代的C1-C6烷基、R4中的一個(gè)是OH、C1-C6烷氧基、-S-C1-C6烷基、COOR6、-NR6R7、-CONR6R7；或者R4R4可以一起是＝O，或者R4R4可以與它們相連的碳一起形成5-8元的、任選存在選自N、O、S＝(O)n(其中n＝0-2)、N-R1的雜原子的螺環(huán)體系；R6和R7獨(dú)立地是H、任選取代的C1-C6烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的C1-C6烷基芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的C1-C6烷基雜芳基，R6和R7可以一起形成一個(gè)3-7元的、任選具有一個(gè)或兩個(gè)選自N、O或S雜原子的飽和環(huán)體系。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中二環(huán)雜芳基是 Z1、Z2和Z3獨(dú)立地是CR2、N、O、S或N-R1，只要Z1-Z3中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1；t＝1-4；Y1和Y2獨(dú)立地是N或C；條件是如果二環(huán)雜芳基的芳香族環(huán)部分是咪唑，那么非芳香族環(huán)部分不可以含有與橋頭碳鄰接的S；以及R1、R2、R4、R6和R7如權(quán)利要求2中定義。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中二環(huán)雜芳基是 其中Z1、Z2、Z3和Z4獨(dú)立地是CR2或N，只要Z1-Z4中的一個(gè)是與分子的其余部分相連的碳；W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1；條件是沒(méi)有形成S-S或O-O或S-O鍵，以形成飽和的環(huán)體系；t＝1-4；Y1和Y2獨(dú)立地是C或N；以及R1、R2、R4、R6和R7如權(quán)利要求2中所定義。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中Z1-Z3中的一個(gè)是CR2。
6.權(quán)利要求2或5的化合物，其中Z2或Z3中的一個(gè)是N、O或S。
7.權(quán)利要求2、5和6任一項(xiàng)的化合物，其中W1、W2和W3中的至少一個(gè)是CR4R4。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中W1、W2和W3獨(dú)立地是CR4R4。
9.權(quán)利要求2和5-7任一項(xiàng)的化合物，其中t＝1-3。
10.權(quán)利要求3的化合物，其中t＝3。
11.權(quán)利要求3或10的化合物，其中Z1、Z2、Z3、Y1和Y2中的至少兩個(gè)是N。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中Z1、Z2、Z3、Y1和Y2中的三個(gè)是N。
13.權(quán)利要求3和10-12任一項(xiàng)的化合物，其中W1、W2和W3中的兩個(gè)獨(dú)立地是CR4R4。
14.權(quán)利要求13的化合物，其中R4是H。
15.權(quán)利要求3和10-14任一項(xiàng)的化合物，其中Y1和Y2中的一個(gè)是C，另一個(gè)是N。
16.權(quán)利要求3和10-15任一項(xiàng)的化合物，其中Z1、Z2和Z3中的兩個(gè)獨(dú)立地是CR2。
17.權(quán)利要求4的化合物，其中Z1-Z4中的三個(gè)獨(dú)立的是CR2，另一個(gè)是C。
18.權(quán)利要求4或17的化合物，其中Z1-Z4中的至少一個(gè)是N。
19.權(quán)利要求18的化合物，其中Z1是N。
20.權(quán)利要求18的化合物，其中Z1-Z4中的兩個(gè)是N。
21.權(quán)利要求18的化合物，其中Z1-Z4中的三個(gè)是N。
22.權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)的化合物，其具有結(jié)構(gòu)
23.權(quán)利要求1的化合物，選自(5R，6Z)-6-[(5-芐基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R，6Z)-6-{[5-(4-甲氧苯甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氫-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氫-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽；(5R)(6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-6-(7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R，6Z)-7-氧代-6-[(4-氧代-6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)亞甲基]-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；6-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；6-(6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]噻喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；6-(5-甲基-4，5，6，7-四氫-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；2-(2-羧基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-6-亞甲基)-6，7-二氫-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-羧酸乙酯；7-氧代-6-(6，7，8，9-四氫-5H-咪唑并[1，2-a]氮雜_-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R)，(6Z)-6-(7-芐基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸鈉鹽；(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(苯乙?；?-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亞甲基}-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R)，(6Z)-6-(5，5-二氧代-4，5，6，7-四氫-5λ6-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-6-(5，5-二甲基-4H-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽5，5-二甲基-2-哌啶酮；(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-4H-環(huán)戊二烯并[b]呋喃-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-6-(4，5-二氫-6-硫雜-1，7a-diazainden-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(6，6-二甲基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氫-8-H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫雜-1，6a-二氮雜并環(huán)戊二烯-2-基亞甲基)-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-6-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噻唑-6-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)(6Z)-6-(2，3-二氫吡唑并[5，1-b]噁唑-6-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R，6Z)-6-[(5-乙酰基-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亞甲基]-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸(E+Z異構(gòu)體混合物，鈉鹽)；(5R，6Z)-6-(6，7-二氫-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸；(5R)(6Z)-6-(6，7-5H-二氫吡唑并[5，1-b]噁嗪-2-基亞甲基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-[5-(3-羧丙酰基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，二鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-[5-(2-甲氧基乙?；?-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-[5-(2-甲氧基乙酰基)-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，鈉鹽；(5R)，(6Z)-6-[5-(2-甲氧基乙?；?-4，5，6，7-四氫吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基亞甲基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2-烯-羧酸，鈉鹽。
24.一種在需要的患者中治療細(xì)菌感染或疾病的方法，包括給予所述的患者一種有效量的權(quán)利要求1-23任一項(xiàng)所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
25.權(quán)利要求24的方法，其中化合物與β內(nèi)酰胺抗生素一起給藥。
26.權(quán)利要求25的方法，其中β-內(nèi)酰胺抗生素與本發(fā)明化合物的比例在約1∶1-約100∶1的范圍內(nèi)。
27.權(quán)利要求26的方法，其中β-內(nèi)酰胺抗生素與本發(fā)明化合物的比例小于10∶1。
28.權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中β內(nèi)酰胺抗生素選自青霉素抗生素和頭孢菌素抗生素。
29.權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中β內(nèi)酰胺抗生素選自哌拉西林、羥氨芐青霉素、替卡西林、青霉素G、氨必西林、磺芐西林、頭孢三嗪、頭孢利定、噻孢霉素、頭孢唑啉、頭孢菌素IV、先鋒霉素VI、氨曲南和拉氧頭孢。
30.權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中β內(nèi)酰胺抗生素是哌拉西林或羥氨芐青霉素。
31.權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中β內(nèi)酰胺抗生素是哌拉西林并且通過(guò)靜脈內(nèi)給予患者。
32.權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的方法，其中β內(nèi)酰胺抗生素是羥氨芐青霉素并且通過(guò)口服給予患者。
33.一種藥物組合物，包括一種藥學(xué)上可接受的載體和一種有效量的權(quán)利要求1-23任一項(xiàng)所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
34.權(quán)利要求33的組合物，還包括一種β內(nèi)酰胺抗生素。
35.一種制備式I化合物的方法，包括將式II的化合物進(jìn)行還原性消除反應(yīng) 其中A′是如權(quán)利要求1中定義的A或B，X是O或S，P是一種酯離去基團(tuán)，例如，乙酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，R是一種保護(hù)基，如果必要，接著除去保護(hù)基，得到式I的化合物，其中R5是氫；如果需要，轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R5是C1-C6烷基、C5-C6環(huán)烷基或CHR3OCOC1-C6烷基。
全文摘要
本發(fā)明提供一種式(I)的化合物、其藥物組合物和其用途，用于治療在需要的患者中的細(xì)菌感染或疾病。
文檔編號(hào)A61K31/437GK1649883SQ03809733
公開(kāi)日2005年8月3日 申請(qǐng)日期2003年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月1日
發(fā)明者A·M·溫卡特桑, T·S·曼索爾, T·阿貝, I·雅馬穆拉, T·塔卡薩基, A·阿加瓦, O·D·桑托斯, F·-W·岑, Y·-I·林 申請(qǐng)人:惠氏公司