專(zhuān)利名稱：治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法及其產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及純中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種治療心血管疾病的注射劑(商品名為疏血通)的制造方法及其產(chǎn)品。
目前治療心血管疾病的中西藥物雖然很多，但是高效、速效、安全的特效藥卻不多見(jiàn)，造成心血管疾病的死亡率及后遺癥的發(fā)生率居高不下。為此，研制一種高效、速效、安全的藥物，降低病死率和后遺癥發(fā)生率就成為醫(yī)藥界的主攻方向。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是它包括如下步驟(1)原料選擇及低溫浸漬在室溫條件下，將水蛭和地龍分別用生理鹽水浸泡，使其表面充分展開(kāi)，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于2～4倍的生理鹽水中，于低溫0～4℃浸漬15～30小時(shí)，過(guò)濾，將濾液與藥渣分別存放備用；(2)搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機(jī)將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合使用勻漿器磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；(3)冷凍及解融將勻漿液在-15℃以下冷凍15～30小時(shí)后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)至少2次；(4)分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機(jī)離心分離，再將上清液通過(guò)分子量為5萬(wàn)的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)105～136℃熱壓10～30分鐘；再通過(guò)分子量為1萬(wàn)的超濾柱進(jìn)一步過(guò)濾純化；(5)配液將分別提取的水蛭溶液和地龍溶液以一定比例混合均勻，包括制成1-20ml/支的注射劑，或50-200ml/瓶的注射劑，或脫水干燥成粉針劑，經(jīng)檢測(cè)后包裝。
該水蛭和/或地龍?jiān)习ǜ善泛?或鮮品。該步驟(3)的冷凍及解融中，其勻漿液為在-20℃冷凍20小時(shí)。
本發(fā)明還提供一種治療心血管疾病的注射劑，其特征是它包含有水蛭生理鹽水提取液33％～84％和地龍生理鹽水提取液16％～67％。
本發(fā)明的治療心腦血管疾病注射劑的重要意義是進(jìn)一步發(fā)掘和繼承祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)中的寶貴遺產(chǎn)；其次針對(duì)心腦血管疾病起病急驟、變化迅速、病情危急的特點(diǎn)，發(fā)掘出一種高效、速效、安全的注射劑藥物，開(kāi)創(chuàng)了動(dòng)物類(lèi)中藥復(fù)方注射劑的先河，最大限度降低心腦血管疾病的病死率和中風(fēng)后遺癥；通過(guò)對(duì)動(dòng)物類(lèi)藥物全方位的研究，在傳統(tǒng)中藥基礎(chǔ)上采用現(xiàn)代生化技術(shù)加以提高，充分發(fā)揮動(dòng)物類(lèi)中藥的優(yōu)勢(shì)，使其更好地造福于人類(lèi)。
下面結(jié)合較佳實(shí)施例和附圖
進(jìn)一步說(shuō)明。
圖2是本發(fā)明的制造50-500ml/瓶注射劑的工藝流程示意圖。
圖3是本發(fā)明的制造粉針注射劑的工藝流程示意圖。
5、配液、灌封至成品將分別提取的水蛭和地龍溶液混和均勻，加生理鹽水至2000ml，灌封，每支2ml，滅菌、檢測(cè)、包裝。
6、檢測(cè)結(jié)果總氨基酸5.90mg/支；總糖15.20mg/支；次黃嘌呤0.136mg/支；總固體25.16mg/支；可控指標(biāo)占總固體84.40％。
需要說(shuō)明的是在配液時(shí)，加入的生理鹽水可以是2000-5000ml，作成系列不同濃度的注射劑，以滿足不同病人的需求。
實(shí)施例2參閱圖2所示，本發(fā)明實(shí)施例2的治療心腦血管疾病的瓶注射劑的制造方法包括如下步驟1、原料選擇及低溫浸漬主要藥材原料是水蛭和地龍，水蛭655g(干品)及地龍345g(干品)，在室溫條件下，分別用生理鹽水浸泡2.5小時(shí)左右，使其表面充分展開(kāi)，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于4倍的生理鹽水中，于低溫(0～4℃)浸漬15小時(shí)，過(guò)濾，將濾液與藥渣分別存放備用；2、搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機(jī)(1000rpm)，利用高速轉(zhuǎn)動(dòng)的刀片將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合，使用勻漿器利用其兩個(gè)磨砂面相互摩擦，將組織磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；3、冷凍及解融將勻漿液在-15℃以下冷凍25小時(shí)后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)4次；4、分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機(jī)(5000r/min)離心分離，再將上清液通過(guò)分子量為5萬(wàn)的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)121℃熱壓20分鐘；再通過(guò)分子量為1萬(wàn)的超濾柱進(jìn)一步過(guò)濾純化；5、配液、分裝至成品將分別提取的水蛭和地龍溶液混合均勻，加生理鹽水至50000ml，分裝，每瓶100ml，滅菌、檢驗(yàn)、包裝6、檢測(cè)結(jié)果總氨基酸9.00mg/瓶；總糖29.0mg/瓶；次黃嘌呤0.331mg/瓶；總固體45.52mg/瓶；可控指標(biāo)占總固體84.21％。
實(shí)施例3
參閱圖3所示，本發(fā)明實(shí)施例3的治療心腦血管疾病的凍干粉針劑的制造方法包括如下步驟1、原料選擇及低溫浸漬主要藥材原料是水蛭和地龍，水蛭715g(干品)及地龍285g(干品)，在室溫條件下，分別用生理鹽水浸泡2小時(shí)左右，使其表面充分展開(kāi)，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于3倍的生理鹽水中，于低溫(0～4℃)浸漬25小時(shí)，過(guò)濾，將濾液與藥渣分別存放備用；2、搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機(jī)(1000rpm)，利用高速轉(zhuǎn)動(dòng)的刀片將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合，使用勻漿器利用其兩個(gè)磨砂面相互摩擦，將組織磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；3、冷凍及解融將勻漿液在-20℃冷凍15小時(shí)后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)5次；4、分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機(jī)(5000r/min)離心分離，再將上清液通過(guò)分子量為5萬(wàn)的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)130℃熱壓10分鐘；再通過(guò)分子量為1萬(wàn)的超濾柱進(jìn)一步過(guò)濾純化；5、配液、分裝、凍干將分別提取的水蛭和地龍溶液混合均勻，加入5％甘露醇，加生理鹽水至2000ml，先經(jīng)分子量為1萬(wàn)的超濾柱過(guò)濾，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端除菌過(guò)濾，分裝于西林瓶或安瓿中，在-40℃至-60℃預(yù)凍3～4小時(shí)，隨后抽真空(真空度低于15pa)，線性升溫、干燥時(shí)間20～36小時(shí)，即可制成凍干粉針劑。
6、檢測(cè)結(jié)果總氨基酸8.44mg/支；總糖28.8mg/支；次黃嘌呤0.344mg/支；總固體44.56mg/支；可控指標(biāo)占總固體84.34％。
關(guān)于本發(fā)明的制造方法的創(chuàng)造性的進(jìn)一步說(shuō)明如下1、關(guān)于原料及劑型的選擇水蛭做為一味常用的活血化瘀中藥，其適應(yīng)癥治療重點(diǎn)，也由以往的婦科疾患，轉(zhuǎn)移到現(xiàn)在的心腦血管疾病上。傳統(tǒng)的水蛭用于治療心腦血管疾病上，有以復(fù)方辨證施治的，更多的則是單味藥的投治，都收到了較好效果，由于都是口服途徑給藥，其有效物質(zhì)的生物利用度較低，造成其療效較為緩慢，不適應(yīng)急性心腦血管病的需求。
地龍的藥用價(jià)值常用于咳喘、中風(fēng)后遺癥、慢性腎小球腎炎、腮腺炎、跌打損傷等，無(wú)論是復(fù)方組合，還是單方施治，都有較好的臨床療效。但是，由于都是口服途徑給藥，其有效物質(zhì)的生物利用度較低，造成其療效較為緩慢，不適應(yīng)急性心腦血管病的需求。
本發(fā)明將以上二者合用，達(dá)到破血逐瘀之中具有活血通絡(luò)之意，軟堅(jiān)活血有助于通絡(luò)，可謂相得益彰，由于注射劑具有起效迅速可靠，適用于不宜或不能口服給藥的危重病人，而心腦血管疾病，尤其是急性心腦血管疾病，多以起病急驟、變化迅速及病情危重為特點(diǎn)，因此，注射劑為治療心腦血管疾病的首選給藥途徑。通過(guò)將水蛭和地龍配伍，制成小容量注射針劑、大容量注射劑或粉針劑，達(dá)到高效速效共奏活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)的作用，以及治療心血管疾病的目的。
2、關(guān)于原料的前處理的方法為了便于保存和運(yùn)輸，中藥材大多采用干品，本發(fā)明使用的中藥原料水蛭和地龍前處理方法是在室溫條件下，分別用生理鹽水浸泡3小時(shí)左右，使其表面充分展開(kāi)，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，其浸泡液經(jīng)過(guò)“紙色譜法”(中國(guó)藥典2000年-部附錄VI A)試驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)其中有氨基酸，該處理方法即達(dá)到使干燥藥材展開(kāi)，清除雜質(zhì)污垢，又不使有效成分損失的目的。
3、關(guān)于提取中藥的有效成分的工藝方法對(duì)于提取中藥的有效成分的傳統(tǒng)方法是采用醇提取法或水煎煮法，本發(fā)明人將醇提取法和水煎煮法與本發(fā)明的方法分別制備相同濃度的提取液應(yīng)用于大鼠，測(cè)定凝血時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表1所示。
表1

從表1可見(jiàn)三種提取液對(duì)大鼠全凝血時(shí)間(CTg)的影響，說(shuō)明本發(fā)明的方法最佳。
4、關(guān)于細(xì)胞的破碎方法本發(fā)明所使用的水蛭和地龍通常是干品，經(jīng)過(guò)清洗后再浸泡，組織雖然已變軟，但直接研磨成勻漿液，還是相當(dāng)費(fèi)時(shí)又困難，因此，本發(fā)明先采用高速組織搗碎機(jī)(1000rpm)，利用高速轉(zhuǎn)動(dòng)的鋒利的刀片將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合，使用勻漿器利用其兩個(gè)磨砂面相互摩擦，將組織磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；在機(jī)械破碎的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用物理破碎法，即反復(fù)冷凍法，即于低溫(-15～-20℃)使之凍固，然后再緩慢地解融，如此反復(fù)地操作，使大部分細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)顆粒破壞，其原理是由于滲透壓的變化，使結(jié)合水凍結(jié)，產(chǎn)生組織的變形，冰片將細(xì)胞膜破碎，使蛋白質(zhì)類(lèi)可溶性成分溶解于溶液中，同時(shí)，可以使脂蛋白凍結(jié)變性，以利于清除。
5、關(guān)于濾過(guò)條件與熱壓條件的選擇本發(fā)明的產(chǎn)品為靜脈注射劑，又是從動(dòng)物體提取的制劑，因此，不能有蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，否則其后果不堪設(shè)想。本發(fā)明所采用的方法是首先選擇5萬(wàn)分子量左右的濾柱進(jìn)行粗濾，這樣可以使低于5萬(wàn)分子量的物質(zhì)通過(guò)，除去5萬(wàn)以上的蛋白質(zhì)等大分子量物質(zhì)；第二步選用分子量1萬(wàn)以下的超濾柱過(guò)濾，使保留1萬(wàn)以下的小分子多肽，除去較大分子肽。
由于低聚肽的性質(zhì)與氨基酸相似，其既溶于水，也溶于醇，且受熱不凝固，很難除去，其無(wú)論使用高濃度醇，或采用煮沸冷藏、或活性炭吸附等均不能將其除去。本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，創(chuàng)造出使濾液經(jīng)105～136℃熱壓10～45分鐘處理，一方面可以使部分低聚肽進(jìn)一步分解成氨基酸，溶解于提取液中；另一方面可以使部分低聚肽凝固析出沉淀，以便除去。
以下是關(guān)于本發(fā)明的方法制造的治療心血管疾病的注射劑(商品名為疏血通)的藥效學(xué)、藥理學(xué)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥品穩(wěn)定性和臨床試驗(yàn)等的試驗(yàn)研究。
委托中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所、中國(guó)藥品生物制品檢定所，中國(guó)科學(xué)院物理所進(jìn)一步按照“中藥注射劑研制指導(dǎo)原則(試行)”的要求，對(duì)藥效學(xué)、藥理學(xué)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥品穩(wěn)定性等進(jìn)行了全面系統(tǒng)的試驗(yàn)研究。現(xiàn)將試驗(yàn)研究結(jié)果綜述如下(一)藥效學(xué)及一般藥理的試驗(yàn)研究1、對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響分別給小鼠尾iv注射2.5和5.0g/kg(生藥量，以下同)本發(fā)明的注射劑后，測(cè)量其凝血時(shí)間，結(jié)果表明凝血時(shí)間均顯著延長(zhǎng)；2、對(duì)大鼠血小板的影響(1)對(duì)大鼠血小板的影響分別給大鼠尾iv注射1.0、2.5和5.0g/kg本發(fā)明的注射劑后，測(cè)量其血小板數(shù)，結(jié)果表明均具有輕度降低血小板數(shù)，顯著降低血小板的粘附的作用，有利于減少血栓的形成；(2)對(duì)大鼠血小板聚集的影響分別給大鼠尾iv注射0.5、1.0和2.5g/kg本發(fā)明的注射劑后，測(cè)量其血小板聚集，結(jié)果表明均可使ADP、花生四烯酸和凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集減少，并顯示出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系；3、對(duì)血栓的影響(1)對(duì)預(yù)防血栓形成的影響分別給大鼠尾iv注射0.5、1.0和2.5g/kg本發(fā)明的注射劑后，進(jìn)行其體外血栓和體內(nèi)靜脈血栓試驗(yàn)，結(jié)果表明所形成的血栓重量均有不同程度的減輕，說(shuō)明具有抑制血栓形成的作用；對(duì)大鼠動(dòng)脈預(yù)防性血栓形成的影響分別給大鼠舌靜脈注射0.5、1.0和2.5g/kg本發(fā)明的注射劑后，進(jìn)行其血栓試驗(yàn)，結(jié)果表明均使血栓形成的時(shí)間延長(zhǎng)；(2)溶血栓的作用①對(duì)股動(dòng)脈血栓狗的動(dòng)脈血流量的影響給狗注射30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測(cè)量其血流量，結(jié)果表明血流量明顯增加；②不同劑量的本發(fā)明的注射劑和UK，對(duì)纖維蛋白原的影響給狗注射30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測(cè)量其纖維蛋白原的含量，結(jié)果表明均無(wú)明顯的變化，表明本發(fā)明的注射劑對(duì)纖維蛋白原無(wú)影響；③對(duì)股動(dòng)脈血栓狗的血漿優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間的影響給股動(dòng)脈血栓狗注射15g/kg和30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測(cè)量其優(yōu)球蛋白溶解的時(shí)間，結(jié)果表明均明顯的縮短，與給藥前比較差異顯著；④對(duì)狗股脈血栓重量的影響給股動(dòng)脈血栓狗注射30g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，測(cè)量其股動(dòng)脈血栓重量，結(jié)果表明股動(dòng)脈血栓重量明顯減輕，左右股動(dòng)脈血栓重量分別減少35.8％和34.9％；給股動(dòng)脈血栓狗注射15g/kg本發(fā)明的注射劑30分鐘后，左右股動(dòng)脈血栓重量分別減少17.8％和32.6％。表明本發(fā)明的注射劑具有溶解血栓的作用；4、對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈結(jié)扎引起缺血的影響本發(fā)明的注射劑按照1.0、2.5和5.0g/kg給藥，使結(jié)扎大鼠大腦動(dòng)脈引起的缺血行為障礙減輕，腦缺血面積分別減少28.4％、35.8％和71.7％，表明本發(fā)明的注射劑對(duì)缺血性腦血管病和中風(fēng)具有良好的治療作用。
5、對(duì)正常麻醉犬的試驗(yàn)給正常麻醉的犬iv注射本發(fā)明的注射劑，按照0.75和1.5g/kg給藥，測(cè)量BP和HR均無(wú)明顯改變，但是按照3.0g/kg給藥，測(cè)量BP和HR，則明顯減慢HR，而對(duì)BP無(wú)明顯影響。提示本發(fā)明的注射劑對(duì)抗腦缺血性疾病和血栓可能不是通過(guò)擴(kuò)張腦血管實(shí)現(xiàn)的。
6、一般藥理實(shí)驗(yàn)將本發(fā)明的注射劑按照1.0、2.5和5.0g/kg給昆明種小鼠尾iv注射后，未發(fā)現(xiàn)活動(dòng)和外觀行為異常，表明該藥對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)及外觀行為無(wú)明顯影響；且對(duì)小鼠自主活動(dòng)無(wú)明顯影。
另將本發(fā)明的注射劑以0.5和2.0g/kg給犬iv注射，對(duì)犬的呼吸深度、頻率、血壓，心率及II導(dǎo)電圖均無(wú)明顯的影響。
(二)毒理試驗(yàn)研究1、急性毒性試驗(yàn)通過(guò)大量的動(dòng)物試驗(yàn)表明靜脈注射給小鼠的LD50為112.5g/kg(按照生藥量計(jì)算)，腹腔注射的LD50為173.83g/kg，灌胃給藥的最大耐受量為390g/kg。腹腔用藥相當(dāng)臨床人用藥量的4345倍；靜滴用藥量相當(dāng)臨床人用藥量的2800倍(關(guān)于此點(diǎn)的計(jì)算方法是小鼠的LD50為112.5g/kg，臨床用針劑為0.5g/ml(生藥)；成人每日用4ml，相當(dāng)靜滴入2g生藥，按體重50kg估算，每人每日靜滴入0.04g/kg計(jì)，給小鼠靜注的LD50值為112.5g/kg，相當(dāng)于人臨床用藥的2800倍)，表明本發(fā)明的注射劑的毒性較低，臨床用藥屬于安全。
2、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)①將本發(fā)明的注射劑按照0.4、2.5和15.0g/kg的三個(gè)劑量給大鼠靜脈注射，連續(xù)30天的結(jié)果和恢復(fù)期的結(jié)果，表明各給藥組的一般行為表現(xiàn)、攝食量、體重增長(zhǎng)率、血液學(xué)、血清生化學(xué)檢查、臟器系數(shù)和組織病理學(xué)檢查等指標(biāo)，與空白對(duì)照組比較，均無(wú)明顯差異，說(shuō)明本發(fā)明的注射劑在0、4～15.0g/kg(相當(dāng)臨床擬用量10～375倍)劑量范圍內(nèi)，對(duì)大鼠無(wú)明顯毒副作用。
②將本發(fā)明的注射劑按照0.5、1.0和3.0g/kg的三個(gè)劑量給Beagla犬靜脈注射，連續(xù)30天的結(jié)果和恢復(fù)期的結(jié)果，一般觀察，未見(jiàn)異常；在給藥2～4周和恢復(fù)期進(jìn)行血液學(xué)、血液生化學(xué)檢查、臟器系統(tǒng)和心電圖，均未見(jiàn)異常；組織病理學(xué)檢查和臟器均無(wú)明顯差異，說(shuō)明本發(fā)明的注射劑在0、5～3.0g/kg(大劑量組相當(dāng)臨床擬用量75倍)劑量范圍內(nèi)，對(duì)犬無(wú)明顯毒副作用?？梢暠景l(fā)明的注射劑為安全的藥物。
(三)安全性試驗(yàn)1、刺激性試驗(yàn)
①局部刺激性試驗(yàn)將本發(fā)明的注射劑對(duì)兩只家兔四塊股四頭肌注射，均為未見(jiàn)無(wú)血或壞死現(xiàn)象，根據(jù)刺激反應(yīng)級(jí)的分值為0，即為無(wú)明顯變化；病理檢查無(wú)明顯炎癥反應(yīng)。表明無(wú)局部刺激性反應(yīng)。
②血管刺激性試驗(yàn)將本發(fā)明的注射劑對(duì)家兔按照1.0g/kg的劑量耳部注射，連續(xù)3次，末次給藥后24小時(shí)處死家兔，均為未見(jiàn)無(wú)血或壞死現(xiàn)象，取注射部位的耳片固定，常規(guī)病理組織學(xué)檢查，在顯微鏡下，未觀察到注射局部的血管有組織變性或壞死等刺激性的反應(yīng)。
2、過(guò)敏性試驗(yàn)按照“中藥注射劑指導(dǎo)原則(試行)”附件一過(guò)敏性試驗(yàn)要求，對(duì)豚鼠注射本發(fā)明的注射劑后15分鐘內(nèi)均未見(jiàn)豎毛、呼吸困難、噴嚏、咳嗽、干嘔、抽搐、虛脫、死亡等反應(yīng)現(xiàn)象，表明本發(fā)明的注射劑對(duì)豚鼠無(wú)過(guò)敏性。
3、溶血性試驗(yàn)本發(fā)明的注射劑和濃縮液均未發(fā)現(xiàn)有溶血現(xiàn)象，亦未見(jiàn)有紅細(xì)胞凝集作用。
(四)本發(fā)明的注射劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按照衛(wèi)生部頒布的“中藥注射劑指導(dǎo)原則(試行)”中關(guān)于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的要求，建立了紫外最大吸收、孔C及凝膠電泳的鑒別；檢查項(xiàng)目按照有關(guān)規(guī)定制訂了重金屬、砷鹽、蛋白質(zhì)、Ph、相對(duì)密度、熾灼殘?jiān)?、鉀離子等項(xiàng)的檢查，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求；含量測(cè)定采取高效液相色譜法測(cè)定總氨基酸、多肽氨基酸、和次黃嘌呤；用碘量法測(cè)定總糖和多糖；用干燥法測(cè)定總固體含量；使可控部分的指標(biāo)達(dá)到總固體的60％以上。
(五)藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)采取留樣觀察法、光照法、40℃恒溫恒濕箱中的加速試驗(yàn)法等穩(wěn)定性試驗(yàn)方法，進(jìn)行了連續(xù)三個(gè)月的觀察，以質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)作為考察指標(biāo)，按期進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果與0月比較，其理化性質(zhì)穩(wěn)定無(wú)變化，說(shuō)明本發(fā)明的注射劑的質(zhì)量穩(wěn)定。
以下是本發(fā)明的注射劑的臨床試驗(yàn)研究。
本發(fā)明的治療心血管疾病的注射劑經(jīng)過(guò)大量的臨床應(yīng)用試驗(yàn)研究，證明其具有治療心血管疾病的特效和速效，且無(wú)有毒副作用及具有減少后遺癥的功效。以下舉例說(shuō)明。
1、臨床試驗(yàn)1通過(guò)對(duì)10名健康人志愿者試驗(yàn)，本發(fā)明的注射劑以每日相當(dāng)于生藥量2克用量靜滴21日，無(wú)論從臨床表現(xiàn)，還是血、尿常規(guī)，肝、腎、心功能檢查，均未發(fā)現(xiàn)毒副作用。
而后提高劑量1.5倍，即本發(fā)明的注射劑每日相當(dāng)于生藥量3克用量靜滴21日，無(wú)論從臨床表現(xiàn)，還是血、尿常規(guī)，肝、腎、心功能檢查，均未發(fā)現(xiàn)毒副作用。認(rèn)為本發(fā)明的注射劑每日給藥相當(dāng)生藥量3克的用量靜滴21日是安全的。
2、臨床試驗(yàn)2使用本發(fā)明的注射劑對(duì)50例腦梗塞病人進(jìn)行了為期一個(gè)療程(10天)的治療臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明總有效率達(dá)84％，療效明顯優(yōu)于對(duì)照組，對(duì)照組使用“曲克蘆丁”的總有效率僅為36％；上述兩組治療前后CT檢查結(jié)果是治療組好轉(zhuǎn)率達(dá)96％，對(duì)照組好轉(zhuǎn)率為54％；治療兩周后，其中20例的額顳氏低密度區(qū)平均縮小64％，表示大腦中動(dòng)脈供血改善；其中10例的額頂葉低密度區(qū)有占位性病變，經(jīng)繼續(xù)治療，其低密度區(qū)平均縮小20％，占位性病變消失。
其中10例腦梗塞原左基底節(jié)區(qū)呈卵園低密度區(qū)邊緣清晰，且中線右移，經(jīng)治療低密度平均縮小70％，中線右移消失。
3、臨床試驗(yàn)3使用本發(fā)明的注射劑對(duì)30例心血管疾病病人進(jìn)行臨床試驗(yàn)，對(duì)照組為使用腹蛇抗栓酶試驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明的注射劑的有效率達(dá)90％，而對(duì)照組為86％；同時(shí)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的注射劑治療的病人的血栓素B2和纖維蛋日原及血小板數(shù)均比治療前有非常顯著的減少；全血比粘度、血漿比粘度和全血還原粘度均比治療前明顯降低，說(shuō)明本發(fā)明的注射劑能有效降低血粘度，改善血細(xì)胞電泳率，降低血小板粘附，使腦梗塞區(qū)的供血和腦細(xì)胞水腫得到改善，使受損的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)其功能。
綜上所述，經(jīng)過(guò)對(duì)本發(fā)明的注射劑全面、系統(tǒng)的試驗(yàn)研究，表明各項(xiàng)研究?jī)?nèi)容均符合衛(wèi)生部發(fā)布的“中藥注射劑研制指導(dǎo)原則(試行)”及新藥審批辦法“有關(guān)中藥部分的修訂和補(bǔ)充規(guī)定”的要求。
關(guān)于本發(fā)明的治療心血管疾病的注射劑的臨床應(yīng)用試驗(yàn)研究的詳細(xì)內(nèi)容，請(qǐng)參閱如下附件1～81、附件1共8頁(yè) 一般藥理研究的試驗(yàn)資料；2、附件2共22頁(yè) 疏血通的主要藥效學(xué)研究；3、附件3共21頁(yè) 動(dòng)物長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)資料；4、附件4共21頁(yè) 疏血通注射劑治療中風(fēng)病II期臨床總結(jié)；5、附件5共15頁(yè) 疏血通注射劑IV期臨床總結(jié)；6、附件6共7頁(yè) 疏血通注射劑I期臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)及I期臨床試驗(yàn)總結(jié)。
7、附件7共8頁(yè) 疏血通治療缺血性腦血管病的臨床觀察與評(píng)價(jià)。
8、附件8共4頁(yè) 疏血通治療腦梗塞的臨床療效及對(duì)血液流變學(xué)的影響。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是它包括如下步驟(1)原料選擇及低溫浸漬在室溫條件下，將水蛭和地龍分別用生理鹽水浸泡，使其表面充分展開(kāi)，再反復(fù)用生理鹽水清洗至干凈，將清洗至干凈的水蛭和地龍分別置于2～4倍的生理鹽水中，于低溫0～4℃浸漬15～30小時(shí)，過(guò)濾，將濾液與藥渣分別存放備用；(2)搗碎研磨將藥渣采用高速組織搗碎機(jī)將組織切割破碎，而后再與上述濾液混合使用勻漿器磨碎成直徑小于0.5μm的勻漿液；(3)冷凍及解融將勻漿液在-15℃以下冷凍15～30小時(shí)后取出，于低溫0～4℃條件下解融，再按上述條件冷凍和解融反復(fù)至少2次；(4)分離和純化將上述冷凍和解融液置于離心機(jī)離心分離，再將上清液通過(guò)分子量為5萬(wàn)的濾柱進(jìn)行粗濾，濾液經(jīng)105～136℃熱壓10～45分鐘；再通過(guò)分子量為1萬(wàn)的超濾柱進(jìn)一步過(guò)濾純化；(5)配液將以上制得的兩種濾液按照水蛭生理鹽水提取液33％～84％和地龍生理鹽水提取液16％～67％的比例混合均勻，制成1-20ml/支的注射劑，或50-200ml/瓶的注射劑，或脫水干燥成粉針劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是該水蛭和/或地龍?jiān)习ǜ善泛?或鮮品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是該步驟(3)的冷凍及解融中，其勻漿液為在-20℃冷凍20小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心血管疾病的注射劑的制造方法，其特征是該步驟(4)的配液中的脫水干燥成粉針劑包括，將分別提取的水蛭和地龍溶液混合均勻，加入5％甘露醇，加生理鹽水至2000ml，先經(jīng)分子量為1萬(wàn)的超濾柱過(guò)濾，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端除菌過(guò)濾，分裝于西林瓶或安瓿中，在-40℃至-60℃預(yù)凍3～4小時(shí)，隨后抽真空(真空度低于15pa)，線性升溫、干燥時(shí)間20～36小時(shí)，即制成凍干粉針劑。
5.一種治療心血管疾病的注射劑，其特征是它包含有水蛭生理鹽水提取液33％～84％和地龍生理鹽水提取液16％～67％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療心血管疾病的注射劑，其特征是該注射劑中的總氨基酸、多肽氨基酸、次黃嘌呤、總糖及多糖的含量為總固體的60％以上。
全文摘要
一種治療心腦血管疾病的注射劑的制造方法及其產(chǎn)品，通過(guò)將水蛭和地龍的生理鹽水提取液按照一定的配比組成，提供一種高效速效的治療心腦血管疾病的注射劑，具有降低心腦血管疾病的病死率和后遺癥的功效。
文檔編號(hào)A61K35/56GK1475266SQ0314828
公開(kāi)日2004年2月18日 申請(qǐng)日期2003年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月1日
發(fā)明者李振國(guó) 申請(qǐng)人:李振國(guó)