專利名稱：含有α－蒎烯和1,8－桉油精的藍桉油的藥物組合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藍桉油的藥物組合物，尤其涉及含有α-蒎烯和1，8-桉油精的藍桉油的藥物組合物及其用途，優(yōu)選用于呼吸道疾病的祛痰止咳治療。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物，其藍桉油中主要含有α-蒎烯和1，8-桉油精，還含有藥用稀釋劑和藥用添加劑。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物，藍桉油中含有α-蒎烯5～30％、1，8-桉油精為30～80％。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物中所用的稀釋劑包括乙醇、表面活性劑、碳水化合物、和/或植物油。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物，其藍桉油與稀釋劑比例為0.1∶10至10∶0.1之間。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物，可以固體或半固體形式給藥，包括軟膠囊、膠丸、腸溶膠囊和液體明膠硬膠囊，優(yōu)選軟和硬明膠膠囊形式。還可以液體形式給藥，包括混懸劑或乳劑。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物的制劑，可經口服、靜脈內、局部給藥，優(yōu)選口服給藥。
本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物的制劑，其中含藍桉油按重量比在1～80％，優(yōu)選2～60％。
本發(fā)明的另一個目的是該藥物組合物的制劑在呼吸道疾病如急性上呼吸道感染、急慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、肺結核、矽肺等痰多咳嗽時的祛痰止咳方面的用途。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點1.本發(fā)明提取的藥物組合物中藍桉油是從桃金娘科植物藍桉葉提取的含有α-蒎烯和1，8-桉油精組分的藍桉油。
2.本發(fā)明提取的藥物組合物中藍桉油經藥效學證明具有祛痰止咳和抗炎作用；3.本發(fā)明提供的藥物組合物，可用于治療呼吸系統(tǒng)疾病如急性上呼吸道感染、急慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、肺結核、矽肺等痰多咳嗽時的祛痰止咳治療以及呼吸系統(tǒng)疾病的急慢性炎癥的治療。
4.本發(fā)明提取的藥物組合物作為祛痰止咳藥，使用后有清涼之感，感覺舒適；5.本發(fā)明提取的藥物組合物毒性小，除輕度消化道反應外，無明顯其它不良反應。
實施例1 藥學研究1.生產工藝研究水蒸氣蒸餾法，提取揮發(fā)油。在常壓下，分餾，收集60～80℃餾分的藍桉油有效部位(稱藍桉油)。藍桉油為無色或微黃色油狀液，有特異香氣，味辛、涼。相對密度為0.890～0.910，折光率為1.455～1.465。采用GC法測定，含量限度α-蒎烯應不少于20.0％、桉油素應不少于55.0％。軟膠囊制劑含量限度α-蒎烯應不少于12.0％、桉油素應不少于28.0％。
2.化學成分分析(1)藍按揮發(fā)油的化學成分分析采用GC-MS測定，經化學成分分析主要含有α-蒎烯(α-pinene)7.9～13.05％、p-傘花烴(para-cymene)、桉油精(1，8-cineol)41.5～46.85％、γ-萜品烯(γ-terpinene)、α-萜品烯醇(α-terpineol)、藍桉醇(globulol)、白干層醇(viriddiflorol)、α、β、γ-桉油醇(α、β、γ-eudesmol)等，揮發(fā)油有48個峰，保留時間到43min。
(2)藍桉油化學成分分析采用GC-MS檢測，分析結果主成分有α-蒎烯(α-pinene)25～30％、p-傘花烴(para-cymene)、桉油素(1，8-cineol)66～70％、γ-萜品烯(γ-terpinene)、α-萜品烯醇(α-terpineol)、藍桉醇(globulol)等共有27個峰，保留時間22.85min以后基本未出現(xiàn)色譜峰。
實施例2藥效學研究1.藍桉油對小鼠氣道酚紅排泄量的影響利用酚紅小鼠腹腔注射后部分從氣道排泄的特點，測定小鼠氣道酚紅排泄量，以判斷受試藥對氣道分泌液量的影響，以了解受試藥的祛痰作用。
方法小鼠，實驗前饑餓16～18小時。藍桉油在注射酚紅前30min灌胃，然后腹腔注射1％酚紅生理鹽水溶液0.2ml/10g，注射后30min脫頸處死。剪開頸部皮膚、分離氣管、用細塑膠管插入氣管，用5％碳酸氫鈉0.8ml，輕輕灌洗支氣管三次，共計2.4ml。用波長546nm比色，與酚紅標準曲線比較，算出酚紅量。
結果藍桉油可增加小鼠氣道酚紅排泄量。(見表1)表1 藍桉油對小鼠氣道酚紅排泄量的影響組別 n 酚紅排泄量μg/ml對照組 184.99±0.98藍桉油300mg/kg 166.31±1.98+100mg/kg 166.81±1.67*30mg/kg176.58±1.92*10mg/kg104.72±2.28(與對照組比較+p＜0.05，*p＜0.01下表同)結論:藍桉油可增加小鼠氣道酚紅排泄量而稀釋痰液，起到祛痰作用。
2.藍桉油對豚鼠氣道粘液粘蛋白的影響氣管粘液主要由杯細胞和粘液性腺細胞產生和分泌，內含粘蛋白，由粘多糖和蛋白質構成。測定粘蛋白的含量以反映藍桉油對氣道杯細胞和粘液性腺細胞分泌功能的影響。
方法處死豚鼠，取出氣管稱重，剪開氣管用棉棒取氣管粘液，取出的粘液用1.5ml蒸餾水洗下，3000rpm離心15min，上清液待用。用咔唑法測定粘蛋白的含量。
結果藍桉油可增加豚鼠氣道粘液粘蛋白的含量，表明藍桉油對氣道杯細胞和粘液性腺細胞分泌有促進作用。(見表2)
表2 藍桉油對豚鼠氣道粘液粘蛋白的影響組別 n 粘蛋白含量mg/ml對照組 10 1.69±0.40藍桉油100mg/kg 72.43±0.53*30mg/kg 82.51±1.23結論藍桉油可促進氣道杯細胞和粘液性腺細胞分泌，表明藍桉油具有祛痰作用。
3.藍桉油對鴿氣管纖毛運動的影響從末梢細支氣管到上部呼吸道粘膜上皮布滿纖毛。通過纖毛的運動可使呼吸道液體、微粒、痰等向口腔方向運動，這對呼吸道異物的排除起重要作用。觀察藥物對鴿氣管纖毛運動的影響，以了解藍桉油的祛痰作用。
方法鴿，體重250～350g，不麻醉背位固定，沿頸部中線切開，分離氣管，在氣管上做好2cm的標記，切開氣管，暴露氣管粘膜，穩(wěn)定10～15min后，將軟木顆粒放入氣管2cm向心端的氣管內，記錄軟木顆粒開始走至2cm末端所需的時間。觀察給藥前及給藥后0.5h的走速，每次記錄3～4粒軟木顆粒的走速，求平均值。藥物口腔內給藥。
結果藍桉油能明顯增快鴿氣管纖毛運動速度。(見表3)表3.藍桉油對鴿氣管纖毛運動的影響纖毛運動速度(s/2cm)組別 n用藥前用藥后差值對照組(吐溫80) 8 158.2±57.7 211.3±102.7 53.5±53.7藍桉油100mg/kg 8 161.6±82.5 133.3±48.7-28.4±86.4+藍桉油30mg/kg8 170.9±67.3 174.0±80.13.2±38.6+藍桉油10mg/kg8 129.9±27.5 146.8±54.816.9±53.4結論藍桉油能增快鴿氣管纖毛運動速度而促進異物排出，表明藍桉油具有祛痰作用。
4.藍桉油對小鼠氨水引咳試驗的影響小鼠吸入刺激性化學藥品后，刺激呼吸道感受器，反射性引起咳嗽。凡能降低呼吸感受器敏感性的藥物，均有止咳作用。該實驗觀察藍桉油對小鼠氨水引咳的止咳作用。
方法將小鼠放入鐘罩內，用超聲霧化器霧化吸入氨水15秒，記錄2min內咳嗽次數(shù)。
結果藍桉油對小鼠氨水引咳的咳嗽次數(shù)有明顯的抑制作用。(見表4)
表4 藍桉油對小鼠氨水引咳試驗的影響組別劑量 咳嗽次數(shù)(mg/kg) n (次/5min)對照 25 11.2±5.0藍桉油 100mg/kg 26 6.1±3.1*30mg/kg 25 8.9±4.610mg/kg 24 9.8±6.1可待因 30mg/kg 24 6.0±2.7*結論 藍桉油對小鼠氨水引咳的咳嗽次數(shù)有明顯的抑制作用，表明藍桉油有鎮(zhèn)咳作用。
5.藍桉油對豚鼠枸櫞酸引咳試驗的影響用枸櫞酸溶液噴霧，刺激豚鼠呼吸道粘膜感受器，反射性引起咳嗽。該實驗觀察藍桉油對豚鼠枸櫞酸引咳的止咳作用。
方法將豚鼠放入鐘罩內，用超聲霧化器霧化吸入17.5％枸櫞酸1min，記錄5min和10min內咳嗽次數(shù)。
結果藍桉油對豚鼠枸櫞酸引咳的咳嗽次數(shù)有明顯的抑制作用。(見表5)表5 藍桉油對豚鼠枸櫞酸引咳試驗的影響組別劑量 n 咳嗽次數(shù) 咳嗽次數(shù)(mg/kg)(次/5min) (次/10min)對照 14 14.93±7.1532.36±13.64藍桉油 100 15 10.80±4.1123.53±5.96+30 16 10.19±5.11+26.00±8.3210 14 14.28±4.7030.07±8.89可待因 30 17 8.71±6.05+23.65±12.44結論藍桉油對豚鼠枸櫞酸引咳的咳嗽次數(shù)有明顯的抑制作用，表明藍桉油有鎮(zhèn)咳作用。
6.藍桉油對大鼠SO2吸入性慢性氣道炎癥的影響方法大鼠在熏箱內吸入SO2氣體(用5g亞硫酸鈉加過量濃硫酸在反應罐中反應，產生的SO2混合氣體通入體積為45cm×25cm×10cm的熏箱內)30min，每周6d，共5周。大鼠吸入SO2前30min灌胃給藥。造模5周，大鼠處死后，在支氣管分叉處結扎左肺做病理切片用，右肺行支氣管肺泡灌洗，支氣管肺泡灌洗液經離心后，沉淀計數(shù)細胞總數(shù)和細胞分類。
結果①藍桉油對大鼠SO2吸入性慢性氣道炎癥的BALF中細胞總數(shù)和分類的影響模型對照組支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞總數(shù)及中性粒細胞明顯高于正常對照組，藍桉油用藥組可明顯降低BALF中白細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)(見表6)，表明藍桉油對SO2吸入性慢性氣道炎癥的細胞數(shù)增高有抑制作用。
表6 藍桉油對SO2吸入性慢性氣道炎癥的BALF中白細胞總數(shù)和分類的影響組別 劑量 白細胞總數(shù) 巨噬細胞％ 中性粒細胞％ 淋巴細胞％(mg/kg) 109/L模型對照組20.31±8.27#(9) 81.3±6.3#(10) 5.1±2.6#(10) 13.7±4.6#(10)藍桉油300 12.69±3.88+(8) 87.8±5.8+(8) 2.5±2.3+(8) 10.7±6.9(8)藍桉油100 17.61±11.86(8) 83.5±12.0(8)1.9±1.46(8) 10.6±1.8(8)藍桉油 30 19.19±25.13(5) 83.2±7.0(5) 3.8±2.0(5)12.8±4.8(5)正常對照組6.55±3.63(8)90.1±3.2(8) 1.7±1.5(8)8.1±2.4(8)(與模型對照組比較+p＜0.05 *p＜0.01；與正常對照組比較#p＜0.05；( )動物數(shù)；下表同)②藍桉油對大鼠SO2吸入性慢性氣道炎癥病理改變的影響a.對大鼠SO2吸入性慢性細支氣管炎的影響模型對照組細支氣管炎、細支氣管炎累積數(shù)的發(fā)生及嚴重程度比正常對照組明顯增加，藍桉油用藥組細支氣管炎、細支氣管炎累積數(shù)的發(fā)生和嚴重程度比模型對照組明顯降低(見表7)。
表7 藍桉油對大鼠SO2吸入性慢性細支氣管炎的影響細支氣管炎 細支氣管炎組別 n +++ ++ + -u值 累積數(shù)(％)模型對照組 10 42 4 0 2.65☆☆31.77±12.30#藍桉油300mg/kg 810 6 1 1.98*16.48±14.83*藍桉油100mg/kg 920 3 4 1.97*19.77±25.95藍桉油30mg/kg 521 2 0 0 16.36±8.77*正常對照組 800 7 1 14.19±7.04(與模型對照組比較*p＜0.05；與正常對照組比較#p＜0.05.##p＜0.01；Ridit檢驗☆p＜0.05＝1.96＜u＜2.58，☆☆p＜0.01＝u＞2.58；下表同)b.對大鼠SO2吸入性杯狀細胞陽性細支氣管數(shù)的影響模型對照組的杯狀細胞陽性細支氣管數(shù)明顯高于正常對照組，藍桉油300mg/kg組可明顯減少杯狀細胞陽性細支氣管數(shù)(見表8)。
表8 藍桉油對大鼠SO2吸入性慢性氣道炎癥杯狀細胞的影響杯狀細胞陽性組別n 細支氣管數(shù)(％)模型對照組 10 15.23±7.8##藍桉油300mg/kg 8 7.23±3.96**藍桉油100mg/kg 9 10.65±5.88藍桉油30mg/kg 5 18.37±14.29
正常對照組 80±0結論SO2吸入性慢性氣道炎癥有典型的細胞數(shù)增高和炎癥病理改變，藍桉油可明顯降低BALF中白細胞總數(shù)及中性粒細胞數(shù)和改善氣道炎癥的病理改變，表明藍桉油有預防SO2吸入傷模型的形成和治療慢性氣道炎癥作用。
7.藍桉油對大鼠LPS誘導的氣道炎癥的影響方法乙醚輕度麻醉大鼠，用耳鏡插入喉口，以靜脈套管針，隨呼吸喉部張開時注入1mg/ml的脂多糖(LPS)0.2ml(200μg)。造模次日藍桉油灌胃給藥，用藥3周。3周后處死大鼠，在支氣管分叉處結扎左肺做病理切片用，右肺行支氣管肺泡灌洗，BALF經離心后沉淀計數(shù)細胞總數(shù)和分類。
結果①藍桉油對大鼠LPS誘導的氣道炎癥的BALF中細胞總數(shù)和分類的影響模型對照組BALF中細胞總數(shù)明顯高于正常對照組，藍桉油用藥組可明顯降低BALF中白細胞總數(shù)。BALF中細胞分類以淋巴細胞增高明顯，藍桉油300mg/kg組可使淋巴細胞細胞數(shù)明顯降低(見表9)。表明藍桉油對LPS誘導的BALF中白細胞總數(shù)和細胞分類中淋巴細胞升高有抑制作用。
表9 藍桉油對LPS誘導氣道炎癥的BALF中細胞總數(shù)和分類的影響組別mg/kg白細胞總數(shù)109/L 巨噬細胞％ 中性粒細胞％淋巴細胞％模型對照組 34.38±22.40#(10) 78.2±7.1#(10) 6.5±2.2#(10)15.6±6.2#(10)藍桉油 300 18.13±10.15+(10) 86.4±4.6+(10) 4.5±2.8(10) 9.0±4.1+(10)藍桉油 100 15.72±7.62+(10) 75.4±5.7(10)6.4±3.3(10) 18.2±6.6(10)藍桉30 14.44±3.57+(6)74.0±9.1(9) 5.4±6.5(9)20.6±8.6(9)正常對照組 6.79±3.92(9) 91.9±3.1(9) 0.9±0.8(9)6.6±3.4(8)②藍桉油對LPS誘導的氣道炎癥病理學改變的影響 各組大鼠均有不同數(shù)量、不同程度的氣管、支氣管、細支氣管炎及間質性肺炎，炎癥細胞多以淋巴細胞為主，并有少量漿細胞、中性粒細胞、酸性粒細胞。氣管、支氣管未見典型的鱗狀上皮化生，亦未見明顯的乳頭狀增生等病變。少數(shù)氣管、支氣管可見柱狀上皮脫落。根據(jù)炎癥、上皮脫落程度將炎癥分為“-、+、++、+++”四級，“-”即未見明顯炎癥細胞浸潤，“+”少量炎癥細胞浸潤，氣管結構完整?！?++”見大量炎癥細胞浸潤，并可出現(xiàn)管壁破壞及(或)上皮脫落?！?+”界于“+”與“+++”之間。計數(shù)肺內細支氣管總數(shù)(整個切面)，同時計數(shù)有炎癥病變的細支氣管數(shù)。間質性肺炎按肺泡壁及動脈管壁周圍炎癥細胞浸潤的程度分為“-、+、++、+++”四級。
病理學檢查表明模型對照組與正常對照組比較氣管、支氣管、細支氣管的炎癥發(fā)生和嚴重程度明顯增加以及細支氣管炎累積數(shù)亦增加，藍桉油對氣管、支氣管、細支氣管的炎癥發(fā)生和嚴重程度有抑制作用(見表10，11)，細支氣管炎累積數(shù)明顯減少(見表11)，對LPS引起的肺間質炎亦有抑制作用(見表12)。
表10 藍桉油對LPS誘導的氣管炎和支氣管炎的影響氣管炎支氣管炎組別mg/kg n+++ ++ + -u值+++ ++ + -u值模型對照組1018 1 0 3.58☆☆3 7 0 0 3.72☆☆藍桉油300 1042 4 0 0 2 3 4 1 1.84藍桉油100 1022 6 0 1.49 2 3 3 2 1.84藍桉油30 1000 10 0 3.87##2 1 7 0 2.38#正常對照組1001 2 70 1 2 7表11 藍桉油對LPS誘導的細支氣管炎的影響組別 細支氣管炎 細支氣管炎累積數(shù)(％)n+++ ++ +-u值模型對照組10 7210 3.40☆☆46.17±15.57##藍桉油300mg/kg 10 0181 3.58##19.93±10.63**藍桉油100mg/kg 10 4141 1.67 34.13±10.89*藍桉油30mg/kg 10 2260 2.44#50.05±28.69正常對照組10 1027 5.49±9.57表12 藍桉油對大鼠LPS誘導的肺間質炎的影響肺間質炎組別 N+++ +++ -u值模型對照組10 532 03.69☆☆藍桉油300mg/kg10 116 22.63##藍桉油100mg/kg10 064 02.03#藍桉油30mg/kg 10 235 01.56正常對照組10 003 7結論LPS氣管內滴入可引起B(yǎng)ALF中細胞數(shù)增高和炎癥病理改變，藍桉油可降低BALF中白細胞總數(shù)和細胞分類中淋巴細胞的增高，對炎癥病理改變有抑制作用。表明藍桉油可預防LPS誘導的氣道炎癥的發(fā)生和抑制嚴重程度。
實施例3 毒理研究藍桉油小鼠LD50為1.716±0.148g/kg，95％可信限為1.5746～1.8707g/kg。根據(jù)WHO急性毒性分級，小鼠口服LD50501～5000mg/kg屬于低毒，藍桉油屬于低毒藥物，低毒藥物的人可能致死量250g。
實施例4 制劑本發(fā)明提供的藍桉油藥物組合物，含有α-蒎烯、1，8-桉油精、稀釋劑及藥用敷料，其中含α-蒎烯5～30％、1，8-桉油精30～80％，優(yōu)選含α-蒎烯不低于20％，1，8-桉油精不低于55％。
含有α-蒎烯和1，8-桉油精的藍桉油可經靜脈內、局部給藥，但以口服給藥為優(yōu)選，用于祛痰止咳。該藥優(yōu)選以軟和硬明膠膠囊形式，或以液體或半固體形式給藥。以軟膠囊為例以明膠、甘油、水為囊材，尼泊金乙酯為防腐劑。藍桉油是揮發(fā)油，對囊殼有滲出作用，因此，加入稀釋劑(精制植物油)，藍桉油與精制植物油的配比可為1∶5至5∶1，優(yōu)選配比藍桉油∶精制植物油為3∶2，無滲出作用。每個膠囊內含藍桉油50～350mg，最佳量300mg。日服量10～30mg/kg體重。
藍桉油還可以與乙醇、表面活性劑、碳水化合物或這些物質的混合物配備，制備成混懸劑或乳劑。其含藍桉油的量按重量比在1～30％，最佳2～3％，混懸液，每ml含30mg，每次10ml，日服量30ml。乳劑，每100ml含2g，靜脈注射100ml，每天1次。
本發(fā)明涉及的部分參考文獻1.中華人民共和國藥典·2000年版(一部)；p2272.Morice AH.et al.Thorax，1994，49(10)102權利要求
1.一種含有α-蒎烯和1，8-桉油精的藍桉油藥物組合物及其用途，其特征是藍桉油中主要含有α-蒎烯和1，8-桉油精，還含有藥用稀釋劑和藥用添加劑。
2.如權利要求1所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藍桉油中含有α-蒎烯5～30％、1，8-桉油精為30～80％。
3.如權利要求1和2所述的藍桉油藥物組合物，其特征是所用的稀釋劑包括乙醇、表面活性劑、碳水化合物、和/或植物油。
4.如權利要求1和3所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藍桉油與稀釋劑比例為0.1∶10至10∶0.1之間。
5.如權利要求1和2所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藥物組合物可制成固體或半固體形式給藥，包括軟膠囊、膠丸、腸溶膠囊和液體明膠硬膠囊，優(yōu)選軟和硬明膠膠囊形式。
6.如權利要求1和2所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藥物組合物可制成液體形式給藥，包括混懸劑或乳劑。
7.如權利要求5和6所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藥物組合物可經口服、靜脈內、局部給藥，優(yōu)選口服給藥。
8.如權利要求1所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藥物組合物中含藍桉油的量按重量比在1～80％，優(yōu)選2～60％。
9.如權利要求1所述的藍桉油藥物組合物，其特征是藥物組合物在呼吸道疾病的祛痰止咳方面的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種含有α－蒎烯和1，8－桉油精的藍桉油的藥物組合物及其用途。藥物組合物中藍桉油主要含有α－蒎烯和1，8－桉油精，還含有藥用稀釋劑和藥用添加劑。該藥物組合物可以固體或半固體形式給藥，還可以液體形式給藥，其制劑可經口服、靜脈內、局部給藥。該藥物組合物的制劑可用于治療呼吸系統(tǒng)疾病如急性上呼吸道感染、急慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、肺結核、矽肺等痰多咳嗽時的祛痰止咳治療以及呼吸系統(tǒng)疾病的急慢性炎癥的治療。
文檔編號A61K9/48GK1448131SQ0311676
公開日2003年10月15日 申請日期2003年4月28日 優(yōu)先權日2003年4月28日
發(fā)明者唐法娣, 孫靜蕓 申請人:浙江大學