專利名稱：含有因子Ⅶ多肽和因子Ⅺ多肽的藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的藥用組合物。本發(fā)明還涉及因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽結(jié)合用于制備治療患有出血發(fā)作的受試者，或預(yù)防其發(fā)作的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及治療受試者出血發(fā)作的方法及促進(jìn)受試者形成凝血的方法。本發(fā)明還涉及含有這些化合物的試劑盒。
背景技術(shù)：
止血由血管壁損傷后暴露于循環(huán)血液中的組織因子(TF)與循環(huán)中以相應(yīng)于大約1％總FVII蛋白質(zhì)質(zhì)量存在的FVIIa之間形成復(fù)合物來起動(dòng)。該復(fù)合物錨著于攜帶TF的細(xì)胞上并在細(xì)胞表面上將FX激活成FXa且將FIX激活成FIXa。FXa將凝血酶原激活成凝血酶，后者激活FVIII，F(xiàn)V，F(xiàn)XI和FXIII。此外，在止血起始步驟中形成的有限量的凝血酶也激活血小板。在血小板上的凝血酶起作用后其形狀改變并暴露其表面的帶電磷脂。這種激活的血小板表面形成FX進(jìn)一步激活和凝血酶充分產(chǎn)生的模板。通過在激活的血小板表面形成FIXa-FVIIIa復(fù)合物，使得在激活的血小板表面進(jìn)一步激活FX，然后FXa仍然在該表面將凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶。然后凝血酶將血纖蛋白原轉(zhuǎn)變成不溶且穩(wěn)定起始血小板栓塞的血纖蛋白。這一過程為區(qū)域化的，即局限于TF表達(dá)或暴露的位點(diǎn)，從而使全身性激活凝血系統(tǒng)的風(fēng)險(xiǎn)最小化。不溶性血纖蛋白形成的栓塞由FXIII-催化的血纖蛋白纖維的交聯(lián)進(jìn)一步穩(wěn)定。
FVIIa在血漿中主要以單鏈酶原存在，該酶原被FXa裂解成其雙鏈的活化形式，即FVIIa。已經(jīng)開發(fā)了重組活化因子VIIa(rFVIIa)作為促止血(pro-haemostatic)劑。在由于形成抗體而不能用凝血因子產(chǎn)品治療的患有出血的血友病受試者中施用rFVIIa，可產(chǎn)生迅速和高效的促止血反應(yīng)。用FVIIa也可成功地治療患有因子VII缺乏的出血受試者或具有正常凝血系統(tǒng)但發(fā)生過多出血的受試者。在這些研究中，沒有發(fā)現(xiàn)rFVIIa的不良副作用(特別是出現(xiàn)血栓栓塞)。
額外外源性施用FVIIa增加在激活的血小板表面上的凝血酶形成。這在缺乏FIX或FVIII從而喪失凝血酶充分形成的最有效途徑的血友病受試者中發(fā)生。另外，在血小板數(shù)量降低或血小板具有功能缺陷的情況下，額外的FVIIa增加凝血酶形成。
重組人FVIIa的商業(yè)制品以NovoSeven銷售(Novo Nordisk A/S，丹麥)。Novoseven標(biāo)示用于治療血友病A和B患者的出血發(fā)作。Novoseven是市場(chǎng)上可獲得的用于有效且可靠治療出血發(fā)作的唯一重組FVIIa。
FXI是內(nèi)源性凝血途徑的組分。FXI缺乏與特別是在具有高度局部纖維蛋白溶解活性的組織中的輕微到中度出血紊亂相關(guān)。相反，據(jù)信高水平的FXI是靜脈血栓形成的危險(xiǎn)因素。FXI是被FXIIa，凝血酶和FXIa激活的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的酶原?；罨腇XI(FXIa)參與FIX的激活，后者又(與FVIII結(jié)合)進(jìn)一步激活FX且因此導(dǎo)致凝血酶產(chǎn)生。
與手術(shù)或嚴(yán)重外傷相關(guān)的出血過多且需要輸血的受試者比沒有經(jīng)歷任何出血的受試者形成更多的并發(fā)癥是熟知的。然而，中度出血需要施用人血或血液產(chǎn)品(血小板，白細(xì)胞，用于治療凝血缺陷的血漿來源的濃縮物，等)也可導(dǎo)致與傳遞人病毒(肝炎，HIV，細(xì)小病毒及其它至今未知的病毒)的危險(xiǎn)相關(guān)的并發(fā)癥。廣泛出血需要大量輸血可導(dǎo)致形成多個(gè)器官的衰竭，包括損害肺和腎功能。一旦受試者形成這些嚴(yán)重的并發(fā)癥，涉及許多細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)事件和炎癥反應(yīng)就開始，使得任何治療都非常困難且不幸的是通常都不成功。因此，手術(shù)以及嚴(yán)重組織損傷治療中的主要目標(biāo)是避免或最小化出血。為了避免或最小化這種出血，確保形成不容易被纖維蛋白溶解酶溶解的穩(wěn)定固體止血栓是重要的。而且，重要的是確?？焖俸陀行纬稍撍ㄈ蚰?br> 現(xiàn)在，經(jīng)歷出血發(fā)作的受試者，包括外傷受害者和與手術(shù)相關(guān)的出血受試者，通常用幾次注射或輸注FVIIa進(jìn)行治療，因?yàn)镕VIIa的半壽期短(2.5小時(shí))而需要一次以上的給藥來維持某一水平的止血能力。加快阻止出血對(duì)該受試者具有重要益處。終止出血和維持止血所需的給藥次數(shù)的減少也是如此。
日本專利申請(qǐng)59-116213A涉及用作組織粘合劑的含有凝血?jiǎng)┳鳛榛钚猿煞莸臍馊苣z組合物。該凝血?jiǎng)┛蛇x自凝血因子I，II，III，IV，V，VII，VIII，IX，X，XI，XII，和XIII，前激肽釋放酶，高多聚體激肽原和凝血酶。優(yōu)選F XIII與凝血酶的組合。
歐洲專利225.160(Novo Nordisk)涉及FVIIa的組合物和用于治療不是由凝血因子缺陷或凝血因子抑制劑引起的出血疾病的方法。
歐洲專利82.182(Baxter Travenol Lab.)涉及因子VIIa的組合物在受試者中對(duì)抗凝血因子缺陷的用途或作為抑制劑對(duì)凝血因子的影響。
國(guó)際專利申請(qǐng)WO 93/06855(Novo Nordisk)涉及FVIIa的局部應(yīng)用。
美國(guó)專利5,252,217涉及制備用于治療用途的人因子XI濃縮物的方法。
本領(lǐng)域仍然需要對(duì)經(jīng)歷出血發(fā)作的受試者進(jìn)行改良型治療，包括由以下原因引起的出血發(fā)作由手術(shù)，外傷，或其它形式的組織損傷引起；誘導(dǎo)型凝血病，包括在多次輸血的受試者中的凝血??；先天性或獲得性凝血或出血疾病，包括肝功能降低(“肝臟疾病”)；缺陷型血小板功能或血小板數(shù)目減少；主要凝血“化合物”(例如，血小板或馮.維勒布蘭德因子蛋白)缺乏或異常；纖維蛋白溶解增加；抗凝劑療法或溶解血栓療法；或干細(xì)胞移植。
本領(lǐng)域仍然需要改良的，可靠的和廣泛適用的方法用于增強(qiáng)凝血，增強(qiáng)或確保形成穩(wěn)定的止血栓，或提高治療受試者的方便性，或在受試者，特別是凝血酶產(chǎn)生減少的受試者中實(shí)現(xiàn)完全止血。也需要降低了實(shí)現(xiàn)完全止血所需的FVIIa量的方法和縮短了阻止出血的時(shí)間的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供可有效用于治療或預(yù)防出血發(fā)作和凝血疾病的組合物。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供單個(gè)單位劑型的組合物，它可有效用于治療或預(yù)防出血發(fā)作或作為前凝血?jiǎng)?。本發(fā)明的另一目的是提供表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)的組合物，治療方法或試劑盒。
本發(fā)明的另一目的是提供表現(xiàn)出無顯著副作用，例如高水平的全身性激活凝血系統(tǒng)的組合物，治療方法或試劑盒。
本發(fā)明的其它目的在閱讀本說明書時(shí)將是顯而易見的。
在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽，和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的藥用組合物。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了含有治療出血發(fā)作的部件的試劑盒，包括a)在第一個(gè)單位劑型中的有效量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和藥用上可接受的載體；
b)在第二個(gè)單位劑型中的有效量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品和藥用上可接受的載體；和c)含有所述第一和第二劑型的容器裝置。
在其不同的實(shí)施方案中，該試劑盒還含有有效量的TFPI-抑制劑和/或因子VIII；該TFPI-抑制劑或因子VIII(或兩者的組合)可存在于分開的單位劑型中或者可存在于含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽，或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的一個(gè)單位劑型中。
在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了因子VII或因子VII相關(guān)性多肽與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的組合在制備治療受試者出血發(fā)作的藥物中的用途。在另一方面，本發(fā)明提供了權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)所述的組合物用于制備治療受試者出血發(fā)作的藥物中的用途。
在其不同的實(shí)施方案中，該藥物用于縮短凝血時(shí)間，延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間，和增加凝血強(qiáng)度。
在另一實(shí)施方案中，該藥物配制成用于靜脈內(nèi)給藥，優(yōu)選注射或輸注，特別是注射。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物配制成單個(gè)單位的劑型；在另一實(shí)施方案中它配制成含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品的第一單位劑型和含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的第二單位劑型的形式。
在不同的實(shí)施方案中，該藥物用于治療經(jīng)歷出血發(fā)作的受試者，所述出血發(fā)作由以下原因引起手術(shù)，外傷，或其它形式的組織損傷；凝血病，包括在多次輸血的受試者中的凝血??；先天性或獲得性凝血或出血疾病，包括肝功能降低(“肝臟疾病”)；缺陷型血小板功能或血小板數(shù)目減少；主要凝血“化合物”(例如，血小板或馮.維勒布蘭德因子蛋白)缺乏或異常；纖維蛋白溶解增加；抗凝劑療法或溶解血栓療法；干細(xì)胞移植。在一系列的實(shí)施方案中，出血發(fā)生在諸如腦，內(nèi)耳區(qū)，眼，肝臟，肺，腫瘤組織，胃腸道的器官中；在另一系列的實(shí)施方案中，它是彌散型出血，例如出血性胃炎和過多的子宮出血。在另一系列的實(shí)施方案中，出血發(fā)作是在具有急性出血性關(guān)節(jié)病(關(guān)節(jié)出血)，慢性血友病關(guān)節(jié)病，血腫，(例如肌肉，腹膜后，舌下和咽后)的受試者中與手術(shù)或外傷相聯(lián)系的出血，在其它組織中的出血，血尿(腎道出血)，腦出血，手術(shù)(例如，肝切除術(shù))，拔牙，和胃腸出血(例如，UGI出血)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物用于治療受試者中由于外傷，或手術(shù)，或血小板計(jì)數(shù)或活性降低引起的出血發(fā)作。
在另一方面，本發(fā)明提供了治療受試者出血發(fā)作的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)治療出血有效。
在另一方面，本發(fā)明提供了縮短受試者凝血時(shí)間的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)縮短凝血時(shí)間有效。
在另一方面，本發(fā)明提供了在受試者中增強(qiáng)止血的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增強(qiáng)止血有效。
在另一方面，本發(fā)明提供了在受試者中延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間有效。
在另一方面，本發(fā)明提供了在受試者中增加凝血強(qiáng)度的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增加凝血強(qiáng)度有效。
在該方法的一系列實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以單個(gè)單位的劑型給藥。
在另一系列的實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品的第一單位劑型和含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的第二單位的劑型的形式給藥。在其一個(gè)系列的實(shí)施方案中，第一單位劑型和第二個(gè)單位劑型以不超過15分鐘的時(shí)間間隔給藥。
在另一方面，本發(fā)明提供了含有治療出血發(fā)作的試劑盒，包含d)在一個(gè)單位的劑型中的有效量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和有效量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽和藥用上可接受的載體；和
e)含有所述一個(gè)單位的劑型的容器裝置。
在本發(fā)明的一個(gè)系列的實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII相關(guān)性多肽。在本發(fā)明的一個(gè)系列的實(shí)施方案中，因子VII相關(guān)性多肽是因子VII氨基酸序列變異體。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在本說明書所述的“體外水解試驗(yàn)”中檢測(cè)時(shí)因子VII相關(guān)性多肽的活性和天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比率是至少大約1.25。
在本發(fā)明的一個(gè)系列的實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的因子VII是人因子VII。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII是牛，豬，犬，馬，鼠或鮭魚因子VII。在另一實(shí)施方案中，因子VII是重組制備的。在另一實(shí)施方案中，因子VII來源于血漿。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，因子VII是重組人因子VII。在本發(fā)明一個(gè)系列的實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是其活化形式。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，因子VII是重組人因子VIIa。
在一個(gè)系列的實(shí)施方案中，因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是因子XI相關(guān)性多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI相關(guān)性多肽是因子XI氨基酸序列變異體。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在本說明書所述的“FXI產(chǎn)色試驗(yàn)”中檢測(cè)時(shí)所述的因子XI相關(guān)性多肽的活性和天然人血漿因子XI(野生型FXI)的活性之間的比率是至少大約1.25。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是因子XI多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI是人因子XI。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI是牛，豬，犬，馬，鼠或鮭魚因子XI。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，因子XI是重組制備的。在另一實(shí)施方案中，因子XI來源于血漿。在另一實(shí)施方案中，因子XI是血小板衍生的因子XI。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，因子XI是重組人血漿因子XI。在本發(fā)明一個(gè)系列的實(shí)施方案中，因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是其活化形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI相關(guān)性多肽是因子XI的片斷。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI相關(guān)性多肽是雜合因子XI多肽，例如豬/人雜合體。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI是人血漿活化因子XI(FXIa)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以大約100∶1到大約1∶100(w/w因子VII∶因子XI)之間的質(zhì)量比存在。
在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII相關(guān)性多肽是與野生型因子VII相比具有不超過20個(gè)氨基酸取代，缺失或插入的氨基酸序列變異體(即，具有美國(guó)專利號(hào)4,784,950中公開的氨基酸序列的多肽)。在另一實(shí)施方案中，因子VII變異體具有不超過15個(gè)氨基酸的取代，缺失或插入；在另一實(shí)施方案中，因子VII變異體與野生型因子VII相比具有不超過10個(gè)氨基酸(例如8，6，5，或3個(gè)氨基酸)的取代，缺失或插入。在一實(shí)施方案中，因子VII變異體選自L305V-FVIIa，L305V/M306D/D309S-FVIIa，L305I-FVIIa，L305T-FVIIa，F(xiàn)374P-FVIIa，V158T/M298Q-FVIIa，V158D/E296W/M298Q-FVIIa，K337A-FVIIa，M298Q-FVIIa，V158D/M298Q-FVIIa，L305V/K337A-FVIIa，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVIIa，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVIIa，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVIIa，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，和S336G-FVII。
在另一實(shí)施方案中，因子VII相關(guān)性多肽與天然人凝血因子VIIa相比具有增加的不依賴于組織因子的活性。在另一實(shí)施方案中，該活性增加并不伴隨著底物特異性的改變。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，因子VII相關(guān)性多肽與組織因子的結(jié)合不減少且因子VII相關(guān)性多肽與組織因子結(jié)合時(shí)至少具有野生型因子VIIa的活性。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是重組人因子VIIa和重組人血漿因子XI或重組人因子VIIa和重組人血漿因子XIa。
在一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的凝血時(shí)間縮短。在另一實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的止血增強(qiáng)。在另一實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的凝血溶解時(shí)間延長(zhǎng)。在另一實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液中的凝血強(qiáng)度提高。在一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液是人血。在另一實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物血液是正常人血；在一個(gè)實(shí)施方案中，該血液是來自具有凝血酶產(chǎn)生減少的受試者的血液。在一個(gè)實(shí)施方案中，血液是來自具有一種或多種凝血因子缺陷的受試者的血液；在另一實(shí)施方案中，血液是來自具有針對(duì)一種或多種凝血因子的抑制劑的受試者的血液；在一個(gè)實(shí)施方案中，血液是來自具有血纖蛋白原濃度降低的受試者的血液；在一個(gè)實(shí)施方案中，血液是因子XI缺乏的人血。在一個(gè)系列的實(shí)施方案中，血液是血漿。
在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽在正常人血漿中延長(zhǎng)了體外凝血的溶解時(shí)間。在另一實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽提高了正常人血漿中的體外最大凝血強(qiáng)度凝血溶解時(shí)間。在另一實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽縮短了正常人血漿的體外凝血時(shí)間。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI-相關(guān)性多肽是該組合物中所包含的唯一的止血?jiǎng)?。在另一?shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是該組合物中所包含的唯一的活性止血?jiǎng)?。在另一?shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是給受試者施用的唯一的凝血因子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是給患者施用的唯一的活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物基本上無凝血酶原；在另一實(shí)施方案中，該組合物基本上無FX；在另一實(shí)施方案中，該組合物基本上無FXa。
在另一實(shí)施方案中，該藥物組合物配制成用于靜脈給藥，優(yōu)選注射或輸注，特別是注射。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物含有至少一種藥用上可接受的賦形劑或載體。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物是單個(gè)單位劑型，其中單個(gè)單位劑型含有兩種凝血因子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物是組裝試劑盒形式，其中含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品作為第一單位劑型和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品作為第二單位的劑型，且包含容器裝置用于容納所述第一和第二單位劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物或試劑盒可按需進(jìn)一步含有分別施用該組合物或分開組分的說明書。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以單個(gè)劑型給藥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI-相關(guān)性多肽以含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品的第一單位劑型和含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品的第二單位劑型的形式給藥。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽同時(shí)給藥。在另一實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽依次給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以不超過15分鐘，優(yōu)選10，更優(yōu)選5，更優(yōu)選2分鐘的時(shí)間間隔給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以高達(dá)2小時(shí)，優(yōu)選1到2小時(shí)，更優(yōu)選高達(dá)1小時(shí)，更優(yōu)選30分鐘到1小時(shí)，更優(yōu)選高達(dá)30分鐘，更優(yōu)選15到30分鐘的時(shí)間間隔給藥。
在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的有效量是從大約0.05mg/天到大約500mg/天(70-kg的受試者)的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的有效量是從大約0.01mg/天到大約500mg/天(70-kg的受試者)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以大約100∶1到大約1∶100(w/w因子VII∶因子XI)之間的質(zhì)量比存在。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該藥用組合物是單個(gè)劑型且基本上由因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品，以及選自藥用上可接受的賦形劑或載體，穩(wěn)定劑，去污劑，中性鹽，抗氧化劑，防腐劑，和蛋白酶抑制劑中的一種或多種成份組成。
在另一實(shí)施方案中，受試者是人；在另一實(shí)施方案中，受試者凝血酶產(chǎn)生受損；在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者血纖蛋白原的血漿濃度降低(例如，多次輸血的受試者)；在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者因子VII的血漿濃度降低。
在另一方面，本發(fā)明涉及在患有因子VII應(yīng)答綜合征的受試者中與該受試者用因子VII作為唯一凝血蛋白進(jìn)行的治療相比增強(qiáng)止血的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增強(qiáng)止血有效。
在另一方面，本發(fā)明涉及在受試者中增強(qiáng)凝血酶形成的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增強(qiáng)凝血酶形成有效。
在另一方面，本發(fā)明涉及在患有因子VII應(yīng)答綜合征的受試者中與該受試者用因子VII作為唯一凝血蛋白進(jìn)行的治療相比增強(qiáng)凝血酶形成的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增強(qiáng)凝血酶形成有效。
在另一方面，本發(fā)明涉及，在患有因子VII應(yīng)答綜合征的受試者中，與該受試者施用因子VII作為唯一凝血因子蛋白需要的給藥次數(shù)相比，減少完成止血所需的凝血因子蛋白給藥次數(shù)的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)減少凝血因子蛋白給藥次數(shù)有效。
在另一方面，本發(fā)明涉及在患有因子VII應(yīng)答綜合征的受試者中治療出血的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)治療出血有效。
在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII是人重組因子VIIa(rFVIIa)。在另一實(shí)施方案中，rFVIIa是NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，丹麥)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥用組合物配制成靜脈內(nèi)給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物還含有纖維蛋白溶解系統(tǒng)的抑制劑，包括，但不限于，抑肽酶，ε-氨基己酸或氨甲環(huán)酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物還含有TFPI抑制劑和/或FVIII。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物還含有因子VII。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VIII是活化因子VIII(因子VIIIa)。在另一實(shí)施方案中，因子VIII是重組因子VIIIa。在另一實(shí)施方案中，因子VIII是重組人因子VIIIa。
在另一實(shí)施方案，本發(fā)明涉及因子VIIa與因子XI組合在制備增強(qiáng)哺乳動(dòng)物血漿中血纖蛋白凝血形成的藥物中的用途。
在另一方面，本發(fā)明涉及增強(qiáng)受試者中血纖蛋白凝血形成的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起在治療出血中有效。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物組合物(以單個(gè)制品的形式時(shí))基本上由因子VIIa和因子XI，和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑組成。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，該藥物組合物(以單個(gè)制品的形式時(shí))基本上由因子VIIa和因子XI，和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑，和TFPI抑制劑組成。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，該藥物組合物(以單個(gè)制品的形式時(shí))基本上由因子VIIa和因子XI，和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑，和因子VIII，和任選一種TFPI抑制劑組成。
在另一實(shí)施方案中，該藥用組合物(以試劑盒的形式時(shí))由基本上由因子VIIa和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑組成的第一單位劑型，和基本上由因子XI和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑組成的第二單位劑型組成。
在另一實(shí)施方案中，該藥用組合物(以試劑盒的形式時(shí))由基本上由因子VIIa和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑組成的第一單位劑型，和基本上由因子XI和任選一種藥用上可接受的賦形劑或載體，和任選一種穩(wěn)定劑，和任選一種去污劑，和任選一種中性鹽，和任選一種抗氧化劑，和任選一種防腐劑，和任選一種蛋白酶抑制劑組成的第二單位劑型組成；其中第一單位劑型或第二單位劑型或者兩個(gè)劑型都進(jìn)一步含有因子VIII和/或TFPI抑制劑。


圖1加入FVIIa導(dǎo)致凝血溶解時(shí)間的劑量依賴型延長(zhǎng)。該效果在10nMFVIIa下最佳。
圖2在10nM FVIIa存在下，加入FXI導(dǎo)致凝血溶解時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)。該效果為劑量依賴型且在30nM FXI下最佳。
圖3使用凝血彈性描記法(roTEG)測(cè)量，分析FVIIa和FXI對(duì)最大凝血硬度(MCF)，以及對(duì)t-PA介導(dǎo)的溶解的凝血抗性的影響。
圖4這些結(jié)果證實(shí)了FVIIa和FXI加入血漿時(shí)以協(xié)同方式縮短N(yùn)HP中的凝血時(shí)間。
發(fā)明詳述與手術(shù)或嚴(yán)重外傷相聯(lián)系的過多出血且因此需要輸血的受試者比沒有經(jīng)歷任何出血的受試者形成更多的并發(fā)癥。然而，中度出血在需要給予人血或血產(chǎn)品(血小板，白細(xì)胞，用于治療凝血缺陷的血漿來源的濃縮物，等)的情況下也可導(dǎo)致并發(fā)癥，因?yàn)檫@與傳遞人病毒(例如，肝炎，HIV，細(xì)小病毒，或其它至今未知的病毒)以及非病毒病原體的危險(xiǎn)相關(guān)。廣泛出血需要大量輸血可導(dǎo)致形成多個(gè)器官的衰竭，包括損害肺和腎功能。一旦受試者形成這些嚴(yán)重的并發(fā)癥，涉及許多細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)事件和炎癥反應(yīng)就開始，使得任何治療都非常困難且不幸的是通常都不成功。經(jīng)歷嚴(yán)重失血的病人在臨床上不穩(wěn)定。該病人存在經(jīng)歷心房纖維性顫動(dòng)的危險(xiǎn)，它可引起致命的心臟活動(dòng)停止；腎功能受損；或肺液體外滲(也稱為“濕肺”或ARDS)。因此，手術(shù)以及嚴(yán)重組織損傷治療中的主要目標(biāo)是避免或最小化出血。為了避免或最小化這種不需要的出血，確保形成不容易被纖維蛋白溶解酶溶解的穩(wěn)定固體止血栓是重要的。而且，重要的是確?？焖俸陀行纬稍撍ㄈ蚰?br> 具有血小板減少癥的受試者(血小板計(jì)數(shù)或活性降低)也具有受損的凝血酶產(chǎn)生以及血纖蛋白栓穩(wěn)定化缺陷，導(dǎo)致止血栓容易過早溶解。此外，受到嚴(yán)重外傷或器官損傷且因此經(jīng)常接受輸血的受試者通常具有降低的血小板計(jì)數(shù)以及降低的血纖蛋白原，因子VIII，和其它凝血蛋白水平。這些受試者經(jīng)歷受損(或降低)的凝血酶產(chǎn)生。因此，這些受試者具有缺陷型，或效率較低的止血，導(dǎo)致形成容易且過早被蛋白水解酶溶解的血纖蛋白血栓，該蛋白水解酶在以大范圍外傷和器官損傷為特征的情況下進(jìn)一步廣泛釋放。
組織出血也可導(dǎo)致形成血腫。血腫的大小(特別是顱間和脊柱)與神經(jīng)功能的損傷程度，康復(fù)難度，和/或康復(fù)后神經(jīng)功能永久損傷的嚴(yán)重性和程度密切相關(guān)。當(dāng)血腫位于腦中時(shí)出現(xiàn)血腫的最嚴(yán)重后果，它們甚至可導(dǎo)致患者死亡。
因此，在出血治療中的主要目的是在最短的時(shí)間內(nèi)止血，從而使失血保持最少。
因此本發(fā)明提供了有益的組合物，其用途和在需要治療的受試者中治療出血發(fā)作的治療方法。該組合物，用途和方法與一些有益效果相關(guān)，所述效果例如止血前失血較少，手術(shù)期間需血較少，止血前血壓維持在可接受的水平，血壓穩(wěn)定化加快，所治療的患者恢復(fù)時(shí)間縮短，所治療的患者康復(fù)時(shí)間縮短，包括腦中血腫的血腫形成減少或形成的血腫較小，出血的終止加快，停止出血和維持止血所需的給藥次數(shù)減少。
因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品，例如因子VIIa與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品結(jié)合給藥與單獨(dú)用因子VIIa或因子XI給藥時(shí)的凝血時(shí)間，凝血硬度和抗性相比提供了縮短的凝血時(shí)間，更大的凝血硬度和對(duì)纖維蛋白溶解的抗性增加。
因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品(例如因子VIIa)與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品結(jié)合給藥與單獨(dú)用因子VIIa或因子XI給藥時(shí)的情況相比，阻止出血所需的時(shí)間縮短，維持止血所需的給藥次數(shù)減少。本發(fā)明提供了同時(shí)或依次給藥因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品和因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品的有益效果。根據(jù)本發(fā)明的藥用組合物可以是單個(gè)組合物的形式或者可以是多個(gè)組分的試劑盒形式(組裝的試劑盒)。根據(jù)本發(fā)明的組合物在包括諸如人類的靈長(zhǎng)類的哺乳動(dòng)物中作為治療性和預(yù)防性前凝血?jiǎng)┦褂?。本發(fā)明還提供了在包括人類的受試者中治療(包括預(yù)防性治療或防止)出血發(fā)作的方法。
在本說明書中無論何時(shí)提及第一或第二或第三，等，的單位劑量，它并不表示優(yōu)選的給藥順序，而僅僅是為了描述方便。
因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的組合是保證凝血時(shí)間縮短，止血栓迅速形成，和形成穩(wěn)定的止血栓的一種有益產(chǎn)品。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了因子VII或因子VII相關(guān)性多肽與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的組合是保證形成堅(jiān)硬，穩(wěn)定和快速形成的止血栓的有益產(chǎn)品。
本發(fā)明人表明因子VIIa和因子XI組合比單獨(dú)的因子VIIa或因子XI可更有效地縮短正常人血漿的凝血時(shí)間。還表明因子VIIa和因子XI的組合比單獨(dú)的因子VIIa或因子XI可更有效地增強(qiáng)凝血硬度。通過將處在觀察到凝血硬度不再進(jìn)一步增加的濃度下的因子VIIa與也處在觀察到凝血硬度不再進(jìn)一步增加的濃度下的因子XI結(jié)合，意外發(fā)現(xiàn)凝血硬度進(jìn)一步增強(qiáng)。還表明了因子VIIa和因子XI組合比單獨(dú)的因子VIIa或因子XI可更有效地延長(zhǎng)正常人血漿中的體外凝血溶解時(shí)間。也表明了因子VIIa和因子XI組合比單獨(dú)的因子VIIa或因子XI可更有效地延長(zhǎng)正常人血漿中的半凝血溶解時(shí)間。還表明了因子VIIa和因子XI組合比單獨(dú)的因子VIIa或因子XI可更有效地在正常人血漿中防止凝血的纖維蛋白溶解，特別是tPA-介導(dǎo)的纖維蛋白溶解。
因此，通過增強(qiáng)凝血，可獲得對(duì)受試者的出血更有效的治療。
不希望受理論的約束，據(jù)信充分產(chǎn)生凝血酶是形成堅(jiān)硬的，穩(wěn)定的止血栓所必需的，且因此是維持止血所必需的。該血栓的血纖蛋白結(jié)構(gòu)依賴于形成的凝血酶的量和開始產(chǎn)生凝血酶的速度。在凝血酶產(chǎn)生受損的條件下，形成高度可滲透的多孔血纖蛋白血栓。一般存在于血纖蛋白表面的纖維蛋白溶解酶容易溶解該血纖蛋白血栓。穩(wěn)定的血纖蛋白血栓的形成也依賴于因子XIIIa的存在，因子XIIIa被凝血酶激活且因此也依賴于凝血酶充分產(chǎn)生。另外，最近描述的凝血酶激活的纖維蛋白溶解抑制劑，即TAFI，需要相當(dāng)高的凝血酶量用于其激活。因此在凝血酶形成不夠充分的情況下，TAFI不被激活，導(dǎo)致形成的止血栓比被正常纖維蛋白溶解活性的正常溶解更容易。在血小板數(shù)目降低的情況下，即血小板減少癥，施用外源性的額外因子VIIa可起動(dòng)更快的凝血酶產(chǎn)生。然而，即使在高濃度下，因子VIIa不能使總體凝血酶產(chǎn)生正常化。
在血纖蛋白原的血漿濃度降低的受試者(由于多處外傷或大范圍手術(shù)多次輸血的受試者)中不發(fā)生凝血酶充分激活。而通過因子VII和因子XI的聯(lián)合給藥獲得了更有效的止血。
患有血小板減少癥的受試者具有受損的凝血酶產(chǎn)生以及血纖蛋白血栓穩(wěn)定化缺陷，導(dǎo)致止血栓容易過早溶解。另外，受到嚴(yán)重外傷或器官受損且因此經(jīng)常接受輸血的受試者通常具有降低的血小板計(jì)數(shù)以及降低的血纖蛋白原，因子VIII，和其它凝血蛋白水平。這些受試者經(jīng)歷受損(降低)的凝血酶產(chǎn)生。另外，其降低的血纖蛋白原水平負(fù)向干擾因子XIII的激活。因此，這些受試者具有止血缺陷型，或止血效率較低，導(dǎo)致形成的血纖蛋白血栓容易且過早地被蛋白水解酶溶解，該蛋白水解酶在以大范圍外傷和器官損傷為特征的情況下進(jìn)一步被廣泛釋放。
為了幫助在受試者中形成具有維持止血的全部能力的充分穩(wěn)定的血栓，可施用根據(jù)本發(fā)明的組合物。該組合物在血小板數(shù)目降低的受試者和血纖蛋白原和/或其它凝血蛋白的血漿水平降低的受試者中特別有益。
在因子XI存在的條件下，據(jù)信較低濃度的因子VIIa可足以確保充分止血。
因子VII多肽在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，可使用在預(yù)防或治療出血中有效的任何因子VII多肽。它包括來自血液或血漿，或者以重組方式產(chǎn)生的因子VII多肽。
本發(fā)明包括因子VII多肽，例如，具有美國(guó)專利號(hào)4,784,950(野生型人因子VII)中公開的氨基酸序列的多肽。在一些實(shí)施方案中，因子VII多肽是在例如，美國(guó)專利號(hào)4,784,950(野生型因子VII)中公開的人因子VIIa。在一系列實(shí)施方案中，因子VII多肽包括表現(xiàn)出人因子VIIa的特異性生物學(xué)活性的至少大約10％，優(yōu)選至少大約30％，更優(yōu)選至少大約50％，且最優(yōu)選至少大約70％的多肽。在一系列實(shí)施方案中，因子VII多肽包括表現(xiàn)出人因子VIIa的特異性生物學(xué)活性的至少大約90％，優(yōu)選至少大約100％，優(yōu)選至少大約120％，更優(yōu)選至少大約140％，且最優(yōu)選至少大約160％的多肽。在一系列實(shí)施方案中，因子VII多肽包括與美國(guó)專利號(hào)4,784,950中公開的野生型因子VII的序列表現(xiàn)出至少大約70％，優(yōu)選至少大約80％，更優(yōu)選至少大約90％，且最優(yōu)選至少大約95％相同性的多肽。
本文使用的“因子VII多肽”包括，但不限于，因子VII，以及因子VII相關(guān)性多肽。術(shù)語“因子VII”試圖包括，但不限于，具有野生型人因子VII(在美國(guó)專利號(hào)4,784,950中公開)的氨基酸序列1-406的多肽，以及來自于其它物種的野生型因子VII，例如牛，豬，犬，鼠，和鮭魚因子VII，所述的因子VII來自于血液或血漿，或者以重組方式產(chǎn)生。它還包括從一個(gè)個(gè)體到另一個(gè)體中存在和出現(xiàn)的因子VII的天然等位基因變異體。另外，糖基化的程度和位置或其它翻譯后修飾可根據(jù)選定的宿主細(xì)胞和宿主細(xì)胞環(huán)境的特性而變化。術(shù)語“因子VII”也試圖包括其未裂解(酶原)形式的因子VII多肽，和已經(jīng)被蛋白水解加工以產(chǎn)生其各自的生物活性形式，且命名為因子VIIa的那些多肽。一般來說，因子VII在殘基152和153之間裂解以產(chǎn)生因子VIIa。
“因子VII-相關(guān)性多肽”包括，但不限于，相對(duì)于人因子VII被化學(xué)修飾和/或相對(duì)于人因子VII含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列改變(即，因子VII變異體)，和/或相對(duì)于人因子VII含有截短的氨基酸序列(即，因子VII片斷)的因子VII多肽。該因子VII相關(guān)性多肽可相對(duì)于人因子VII表現(xiàn)出不同特性，包括穩(wěn)定性，磷脂結(jié)合，比活改變，等。術(shù)語“因子VII相關(guān)性多肽”試圖包括其未裂解(酶原)形式的該多肽，和已經(jīng)被蛋白水解加工以產(chǎn)生其各自的生物活性形式，且可命名為“因子VIIa相關(guān)性多肽”或“活化的因子VII相關(guān)性多肽”的那些多肽。
本文使用的“因子VII相關(guān)性多肽”包括，但不限于，相對(duì)于野生型人因子VII表現(xiàn)出基本上相同或提高的生物學(xué)活性的多肽，以及因子VIIa的生物學(xué)活性相對(duì)于野生型人因子VIIa的活性基本上被修飾或降低的多肽。這些多肽包括，但不限于，被化學(xué)修飾的因子VII或因子VIIa和導(dǎo)入了可修飾或破壞該多肽生物活性的特定氨基酸序列改變的因子VII變異體。
它還包括具有略有修飾的氨基酸序列的多肽，例如，具有包括N-末端氨基酸缺失或添加的修飾的N-末端的多肽，和/或相對(duì)于人因子VIIa被化學(xué)修飾的多肽。
不論比野生型因子VII表現(xiàn)出基本上相同或更好的生物活性，還是選擇相對(duì)于野生型因子VII表現(xiàn)出基本上修飾或降低的生物學(xué)活性，包括因子VII的變異體的因子VII相關(guān)性多肽包括，但不限于，具有通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入，缺失，或取代而不同于野生型因子VII序列的氨基酸序列的多肽。
因子VII相關(guān)性多肽(包括變異體)，涵蓋了那些在上述一個(gè)或多個(gè)凝血試驗(yàn)，蛋白水解試驗(yàn)，或TF結(jié)合試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，表現(xiàn)相同細(xì)胞類型中的野生型因子VIIa比活的至少大約10％，至少大約20％，至少大約25％，至少大約30％，至少大約40％，至少大約50％，至少大約60％，至少大約70％，至少大約75％，至少大約80％，至少大約90％，至少大約100％，至少大約110％，至少大約120％，或至少大約130％的多肽。
相對(duì)于野生型因子VIIa具有基本上相同或改進(jìn)的生物學(xué)活性的因子VII相關(guān)性多肽(包括變異體)，涵蓋了那些在上述一個(gè)或多個(gè)凝血試驗(yàn)，蛋白水解試驗(yàn)，或TF結(jié)合試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，表現(xiàn)相同細(xì)胞類型中的野生型因子VIIa比活的至少大約25％，優(yōu)選至少大約50％，更優(yōu)選至少大約75％，更優(yōu)選至少大約100％，更優(yōu)選至少大約110％，更優(yōu)選至少大約120％，且最優(yōu)選至少大約130％的多肽。
相對(duì)于野生型因子VIIa具有基本上降低的生物學(xué)活性的因子VII相關(guān)性多肽(包括變異體)是，在上述一個(gè)或多個(gè)凝血試驗(yàn)，蛋白水解試驗(yàn)，或TF結(jié)合試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，表現(xiàn)相同細(xì)胞類型中的野生型因子VIIa比活的約25％以下，優(yōu)選約10％以下，更優(yōu)選約5％以下且最優(yōu)選約1％以下的多肽。相對(duì)于野生型因子VII具有基本上修飾的生物學(xué)活性的因子VII變異體包括，但不限于，表現(xiàn)出TF依賴型因子X蛋白水解活性的因子VII變異體和結(jié)合TF但不裂解因子X的那些變異體。
在一些實(shí)施方案中，因子VII多肽是因子VII相關(guān)性多肽，特別是變異體，其中在“體外水解試驗(yàn)”(參見下文“試驗(yàn)”)中檢測(cè)時(shí)所述的因子VII多肽的活性和天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比率是至少大約1.25；在其它實(shí)施方案中，該比率為至少大約2.0；在其它實(shí)施方案中，該比率是至少大約4.0。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，因子VII多肽是因子VII相關(guān)性多肽，特別是變異體，其中在“體外蛋白水解試驗(yàn)”(參見下文“試驗(yàn)”)中檢測(cè)時(shí)所述的因子VII多肽的活性和天然人因子VIIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比率是至少大約1.25；在其它實(shí)施方案中，該比率為至少大約2.0；在其它實(shí)施方案中，該比率是至少大約4.0；在其它實(shí)施方案中，該比率是至少大約8.0。
在一些實(shí)施方案中，因子VII多肽是在例如，美國(guó)專利號(hào)4,784,950(野生型因子VII)中公開的人因子VII。在一些實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。在一系列實(shí)施方案中，因子VII多肽是表現(xiàn)出人因子VIIa的特異性生物學(xué)活性的至少大約10％，優(yōu)選至少大約30％，更優(yōu)選至少大約50％，且最優(yōu)選至少大約70％的因子VII相關(guān)性多肽。在一些實(shí)施方案中，因子VII多肽具有通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入，缺失，或取代而不同于野生型因子VII序列的氨基酸序列。
與野生型因子VIIa相比具有基本上相同或更好的生物學(xué)活性的因子VII變異體的非限制性例子包括，但不限于，在丹麥專利申請(qǐng)?zhí)朠A 2000 00734和PA 2000 01360(相應(yīng)于WO 01/83725)，和PA 2000 01361(相應(yīng)于WO02/22776)中所述的那些變異體。與野生型因子VII相比，具有基本上相同或更高生物學(xué)活性的因子VII變異體的非限制性例子包括S52A-FVII，S60A-FVII(lino等，Arch.Biochem.Biophys.352182-192，1998)；L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F(xiàn)374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，和S336G-FVII；美國(guó)專利號(hào)5,580,560中公開的表現(xiàn)出蛋白水解穩(wěn)定性增加的FVIIa變異體；在殘基290和291之間或殘基315和316之間經(jīng)蛋白水解裂解的因子VIIa(Mollerup等，Biotechnol.Bioeng.48501-505，1995)；和因子VIIa的氧化形式(Kornfelt等，Arch.Biochem.Biophys.36343-54，1999)。相對(duì)于野生型因子VII具有基本上降低或修飾的生物學(xué)活性的因子VII變異體的非限制性例子包括R152E-FVIIa(Wildgoose等，Biochem 293413-3420，1990)，S344A-FVIIa(Kazama等，J.Biol.Chem.27066-72，1995)，F(xiàn)FR-FVIIa(Holst等，Eur.J.Vasc.Endovasc.Surg.15515-520，1998)，和缺少Gla結(jié)構(gòu)域的因子VIIa(Nicolaisen等，F(xiàn)EBS Letts.317245-249，1993)?；瘜W(xué)修飾的因子VII多肽和序列變異體的非限制性例子在例如，美國(guó)專利號(hào)5,997,864中描述。
因子VIIa在凝血中的生物學(xué)活性來自于其(i)與組織因子(TF)結(jié)合和(ii)催化因子IX或因子X的蛋白水解裂解產(chǎn)生活化因子IX或X(分別為因子IXa或Xa)的能力。
為達(dá)到本發(fā)明的目的，按例如美國(guó)專利號(hào)5,997,864所述使用因子VII不足的血漿和組織促凝血酶原激酶通過測(cè)量該制品促進(jìn)凝血的能力可定量因子VII多肽的生物學(xué)活性(“因子VII生物學(xué)活性”)。在該試驗(yàn)中，生物學(xué)活性表示為相對(duì)于對(duì)照樣品凝血時(shí)間的縮短且通過與含有1單位/ml因子VII活性的收集的人血標(biāo)準(zhǔn)比較轉(zhuǎn)換成“因子VII單位”。另外，因子VIIa的生物學(xué)活性可定量如下(i)測(cè)量因子VIIa或因子VIIa相關(guān)性多肽在含有包埋于脂膜中的TF和因子X的系統(tǒng)中產(chǎn)生活化的因子X(因子Xa)的能力。(Persson等，J.Biol.Chem.27219919-19924，1997)；(ii)在含水系統(tǒng)中測(cè)量因子X的水解(“體外蛋白水解試驗(yàn)”，見下文)；(iii)使用基于表面胞質(zhì)團(tuán)共振的儀器測(cè)量因子VIIa或因子VIIa相關(guān)性多肽與TF的物理結(jié)合(Persson，F(xiàn)EBS Letts.413359-363，1997)；和
(iv)測(cè)量因子VIIa和/或因子VIIa相關(guān)性多肽對(duì)合成底物的水解(“體外水解試驗(yàn)”，見下文)；和(v)測(cè)量在不依賴于TF的體外系統(tǒng)中凝血酶的產(chǎn)生。
術(shù)語“因子VII生物學(xué)活性”或“因子VII活性”試圖包括產(chǎn)生凝血酶的能力；該術(shù)語也包括在不存在組織因子的條件下在活化的血小板表面產(chǎn)生凝血酶的能力。
可按照本發(fā)明使用的因子VIIa制品是NovoSeven(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark)，而不限于此。
因子XI多肽在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，可使用在預(yù)防或治療出血中有效的任何因子XI多肽。它包括來自血液或血漿，或者以重組方式產(chǎn)生的因子XI多肽。另外，血小板可含有FXI的在結(jié)構(gòu)上不同的形式(可能是由于FXI基因的可選擇的剪接)。血小板因子XI在Lipscomb，M.S.& Walsh，P.N.(1979)，Journal of ClinicalInvestigation，63，1006-1014中描述。
本文使用的“因子XI多肽”包含，但不限于，因子XI，以及因子XI相關(guān)性多肽。術(shù)語“因子XI”試圖包含，但不限于，具有在Sun，Y.& Gailani，D.(1996)，J.Biol.Chem.27129023-29028(野生型人因子XI，血漿)中所述的氨基酸序列的多肽，以及來自于其它物種的野生型因子XI，例如，牛，豬，犬，鼠，和鮭魚因子XI。在一些實(shí)施方案中，因子XI多肽是在例如，Sun，Y.& Gailani，D.(1996)，J.Biol.Chem.27129023-29028中公開的野生型人因子XI。
它還包括從一個(gè)個(gè)體到另一個(gè)體中存在和出現(xiàn)的因子XI的天然等位基因變異體。另外，糖基化的程度和位置或其它翻譯后修飾可根據(jù)選定的宿主細(xì)胞和宿主細(xì)胞環(huán)境的特性而變化。術(shù)語“因子XI”也試圖包括其未裂解(酶原)形式的因子XI多肽，和已經(jīng)被蛋白水解加工以產(chǎn)生其各自的生物活性形式，且可命名為因子XIa的那些多肽。
“因子XI-相關(guān)性多肽”包括，但不限于，相對(duì)于人因子XI被化學(xué)修飾和/或相對(duì)于人因子XI含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列改變(即，因子XI變異體)，和/或相對(duì)于人因子XI含有截短的氨基酸序列(即，因子XI片斷)的因子XI多肽。該因子XI相關(guān)性多肽可相對(duì)于人因子XI表現(xiàn)出不同特性，包括穩(wěn)定性，磷脂結(jié)合，比活改變，等。
術(shù)語“因子XI相關(guān)性多肽”試圖包括以其未裂解(酶原)形式的該多肽，和已經(jīng)被蛋白水解加工以產(chǎn)生其各自的生物活性形式，且可命名為“因子XIa相關(guān)性多肽”或“活化的因子XI相關(guān)性多肽”的那些多肽。
本文使用的“因子XI相關(guān)性多肽”包括，但不限于，相對(duì)于野生型人因子XI表現(xiàn)出基本上相同或提高的生物學(xué)活性的多肽，以及因子XI的生物學(xué)活性相對(duì)于野生型人因子XI的活性基本上被修飾或降低的多肽。這些多肽包括，但不限于，被化學(xué)修飾的因子XI或因子XIa和導(dǎo)入了可修飾或破壞該多肽生物活性的特定氨基酸序列改變的因子XI變異體。
它還包括具有略有修飾的氨基酸序列的多肽，例如，具有包括N-末端氨基酸缺失或添加的修飾的N-末端的多肽，和/或相對(duì)于人因子XI被化學(xué)修飾的多肽。
不論比野生型因子XI表現(xiàn)出基本上相同或更好的生物活性，還是選擇相對(duì)于野生型因子XI表現(xiàn)出基本上修飾或降低的生物學(xué)活性，包括因子XI的變異體的因子XI相關(guān)性多肽包括，但不限于，具有通過一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入，缺失，或取代而不同于野生型因子XI序列的氨基酸序列的多肽。
包括變異體的因子XI相關(guān)性多肽包括在本說明書所述的因子XI活性試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)表現(xiàn)出至少大約10％，至少大約20％，至少大約30％，至少大約40％，至少大約50％，至少大約60％，至少大約70％，至少大約80％，至少大約90％，至少大約100％，至少大約110％，至少大約120％，且至少大約130％的在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型因子XI的比活的那些多肽。
相對(duì)于野生型因子XI具有基本上相同或改進(jìn)的生物學(xué)活性的包括變異體的因子XI相關(guān)性多肽包括在所述一個(gè)或多個(gè)特異性因子XI活性試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)表現(xiàn)出至少大約25％，優(yōu)選至少大約50％，更優(yōu)選至少大約75％，更優(yōu)選至少大約100％，更優(yōu)選至少大約110％，更優(yōu)選至少大約120％，且最優(yōu)選至少大約130％的在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型人因子XI的特異性生物學(xué)活性的那些多肽。為了本發(fā)明的目的，因子XI的生物學(xué)活性可按本說明書中隨后所述定量(“試驗(yàn)部分”)。
相對(duì)于野生型因子XI具有基本上降低的生物學(xué)活性的包括變異體的因子XI相關(guān)性多肽是在上述一個(gè)或多個(gè)特異性因子XI活性試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)表現(xiàn)出不低于約25％，優(yōu)選不低于約10％，更優(yōu)選不低于約5％且最優(yōu)選不低于約1％的在相同細(xì)胞類型中產(chǎn)生的野生型因子XI的比活的那些多肽。
因子XI多肽的非限制性例子包括在例如，Gailani & Broze(1993)，BloodCoagul.Fibrinolysis，415-20，或Kerbiriou & Griffin(1979)，J.Biol.Chem.，25412020-12207中所述的血漿來源的人因子XI。
在一些實(shí)施方案中，因子XI是因子XI相關(guān)性多肽，其中在“FXI產(chǎn)色試驗(yàn)”(參見下文)中檢測(cè)時(shí)所述的因子XI多肽的活性和天然人因子XI(野生型因子XI)的活性之間的比率是至少大約1.25；在其它實(shí)施方案中，該比率為至少大約2.0；在其它實(shí)施方案中，該比率是至少大約4.0。
因子XI相關(guān)性多肽也包括保留其特征性止血相關(guān)活性的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的片斷。例如，使用在本說明書中所述的因子XI活性試驗(yàn)可測(cè)量因子XI多肽的止血相關(guān)活性。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，因子XI是人血漿因子XI或活化的人血漿因子XIa。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)XI是血小板因子XI。在另一實(shí)施方案中，F(xiàn)XI是重組制備的。
定義在本文中，氨基酸的三字母或單字母代碼按表1所示的其常規(guī)含義使用。除非清楚表明，本文提及的氨基酸是L-氨基酸。應(yīng)明白，在例如，K337中的第一個(gè)字母代表野生型因子VII在所述位置天然存在的氨基酸，且例如，[K337A]-FVIIa表示FVII-變異體，其中在所示位置天然存在的由單字母代碼K表示的氨基酸被單字母代碼A表示的氨基酸取代。
表1氨基酸的縮寫

術(shù)語“因子VIIa”或“VIIa”可互換使用。術(shù)語因子VIIa包括酶原因子VII(單鏈因子VII)。術(shù)語“因子XI”或“FXI”可互換使用。該術(shù)語“因子VIII”或“FVIII”可互換使用。術(shù)語“因子VIII”或“FVIII”包括活化的因子VIII(FVIIIa)，保留了特征性FVIII-相關(guān)的止血活性的變異體和截短形式；該術(shù)語包括重組制備的FVIII和血漿來源的FVIII。優(yōu)選人FVIII和人重組FVIII。
在本文中，“凝血酶產(chǎn)生受損的受試者”是指在活化的血小板表面不能產(chǎn)生充分的凝血酶爆發(fā)的受試者，且包括比具有完全功能的正常止血系統(tǒng)，包括正常量和功能的凝血因子，血小板和血纖蛋白原(例如，在收集的正常人血漿中)的受試者產(chǎn)生的凝血酶更少的受試者，且包括，但不限于，缺乏因子VIII的受試者；血小板數(shù)目降低或血小板具有功能缺陷的受試者(例如，血小板減少癥或格蘭茨曼血小板功能不全或出血過多的受試者)；凝血酶原，F(xiàn)X或FVII水平降低的受試者；一些凝血因子水平降低的受試者(例如，由于外傷或大范圍手術(shù)出血過多)；和血纖蛋白原的血漿濃度降低的受試者(例如，多次輸血的受試者)。
“凝血酶產(chǎn)生水平”或“正常凝血酶產(chǎn)生”是指與健康受試者的水平相比患者的凝血酶產(chǎn)生的水平。該水平稱為正常水平百分?jǐn)?shù)。如果合適，該術(shù)語可互換使用。
術(shù)語“止血系統(tǒng)的增強(qiáng)”是指產(chǎn)生凝血酶的能力增強(qiáng)。術(shù)語“增強(qiáng)止血”試圖包含，在相同的凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的試驗(yàn)樣品所測(cè)量的凝血酶產(chǎn)生，相對(duì)于分別僅含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的對(duì)照樣品的單個(gè)凝血酶產(chǎn)生而言，延長(zhǎng)的情況。凝血酶產(chǎn)生可按在本說明書的凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)中所述測(cè)定(參見“試驗(yàn)部分”)。
本文使用的“唯一”試劑或因子是指，因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽一起是藥用組合物或試劑盒中包含的唯一止血?jiǎng)蚧钚灾寡獎(jiǎng)?，或凝血因子，或者是在特定療程中，例如在特定出血發(fā)作過程中給患者施用的唯一止血?jiǎng)蚧钚灾寡獎(jiǎng)?，或凝血因子。?yīng)明白這些情況包括，其它可以應(yīng)用的止血?jiǎng)┗蚰蜃拥牧炕蚧钚圆蛔阋悦黠@影響一種或多種凝血參數(shù)的那些情況。
凝血溶解時(shí)間，凝血強(qiáng)度，血纖蛋白凝血形成，和凝血時(shí)間是用于測(cè)定患者止血系統(tǒng)狀態(tài)的臨床參數(shù)。血液樣品以合適的時(shí)間間隔從患者抽取且通過諸如凝血彈性描記法等方法測(cè)定一種或多種參數(shù)，例如按Meh等，BloodCoagulation & Fibrinolysis 2001；12627-637；Vig等，Hematology，Vol.6(3)，第205-213頁(2001)；Vig等，Blood coagulation & fibrinolysis，Vol.12(7)，第555-561頁(2001)Oct；Glidden等，Clinical and applied thrombosis/hemostasis，Vol.6(4)，第226-233頁(2000)Oct；McKenzie等，Cardiology，Vol.92(4)，第240-247頁(1999)Apr；或Davis等，Journal of the American Society ofNephrology，Vol.6(4)，第1250-1255頁(1995)所述。
術(shù)語“延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間”試圖包含，在相同的凝血溶解試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，對(duì)于含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的試驗(yàn)樣品測(cè)量的凝血溶解時(shí)間相對(duì)于分別僅含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的對(duì)照樣品的單個(gè)凝血溶解時(shí)間延長(zhǎng)的情況。凝血溶解時(shí)間可按上述測(cè)定。
術(shù)語“增強(qiáng)凝血強(qiáng)度”試圖包含在相同的凝血強(qiáng)度試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，對(duì)于含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的試驗(yàn)樣品測(cè)量的凝血強(qiáng)度，例如機(jī)械強(qiáng)度相對(duì)于分別僅含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的對(duì)照樣品的單個(gè)凝血強(qiáng)度增強(qiáng)的情況。凝血強(qiáng)度可按例如，Carr等，1991.(Carr ME，Zekert SL，血漿凝血形成期間血小板介導(dǎo)的強(qiáng)度形成，AM J MED SCI 1991；30213-8)所述，或者按上述通過凝血彈性描記法測(cè)定。
術(shù)語“增強(qiáng)血纖蛋白凝血形成”試圖包含在相同的凝血試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，對(duì)于含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的試驗(yàn)樣品測(cè)量的血纖蛋白凝血形成的速率或程度相對(duì)于分別僅含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的對(duì)照樣品的單個(gè)血纖蛋白凝血形成的速率或程度提高的情況。血纖蛋白凝血形成可按上述測(cè)定。
術(shù)語“縮短凝血時(shí)間”試圖包含在相同的凝血試驗(yàn)中檢測(cè)時(shí)，對(duì)于含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的試驗(yàn)樣品測(cè)量的凝血形成時(shí)間(凝血時(shí)間)相對(duì)于分別僅含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的對(duì)照樣品的單個(gè)凝血時(shí)間縮短(注原文為“增加”，可能有誤)的情況。凝血時(shí)間可借助于普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)PT或aPTT試驗(yàn)來測(cè)定。
術(shù)語“血小板計(jì)數(shù)或活性降低”是指受試者血漿中存在的血小板(凝血細(xì)胞)的數(shù)目和該血小板的生物學(xué)的，凝血相關(guān)的活性。計(jì)數(shù)降低可能是由于例如，血小板破壞增加，血小板生產(chǎn)降低，和比脾臟中血小板正常部分更大的聚集。例如，血小板減少癥限定為每微升不低于150,000個(gè)血小板的血小板計(jì)數(shù)；正常血小板計(jì)數(shù)的上限一般認(rèn)為在每微升350,000至450,000個(gè)血小板之間。血小板計(jì)數(shù)可通過自動(dòng)血小板計(jì)數(shù)器測(cè)量；它是本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法。血小板計(jì)數(shù)降低引起的綜合征包括，但不限于血小板減少癥，凝血病。“活性”包括，但不限于，血小板的聚集，粘附，和凝血活性?；钚韵陆悼赡苁怯捎冢?，糖蛋白異常，細(xì)胞膜-細(xì)胞骨架相互作用異常，血小板顆粒異常，血小板凝血活性異常，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和分泌異常。血小板活性，包括聚集，粘附和凝血活性，通過技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量，例如，參見Platelets.A Practical Approach，Ed.S.P.Watson & K.S.AuthiClinicalAspects of Platelet Disorders(K.J.Clemetson)15299-318，1996，OxfordUniversity Press；Williams Hematology，Sixth Edition，Eds.Butler，Lichtman，Coller，Kipps & Seligsohn，2001，McGraw-Hill。血小板活性降低引起的綜合征包括，但不限于，格蘭茨曼血小板功能不全，伯-蘇綜合征，抗凝劑治療和溶解血栓治療。“降低”是指在相同試驗(yàn)中測(cè)量時(shí)與正常收集的血漿樣品中的計(jì)數(shù)或活性相比的試驗(yàn)血漿樣品的計(jì)數(shù)或活性。
本文使用的術(shù)語“出血紊亂”是指在出血發(fā)作中出現(xiàn)的細(xì)胞或分子來源的，先天性，獲得性或誘導(dǎo)性的任何缺陷。出血紊亂的例子包括，但不限于，凝血因子缺乏(例如，凝血因子VIII，IX，XI或VII缺乏)，凝血因子抑制劑，缺陷型血小板功能(例如，格蘭茨曼血小板功能不全和伯-蘇綜合征)，血小板減少癥，馮.維勒布蘭德病，和諸如由凝血蛋白稀釋，纖維蛋白溶解增加和由于出血和/或輸血的血小板數(shù)目降低(例如，在經(jīng)歷手術(shù)或外傷的多次輸血的受試者中)引起的凝血病。
出血是指血液從循環(huán)系統(tǒng)的任何成份中溢出。術(shù)語“出血發(fā)作”是指包括與手術(shù)，外傷，或其它形式的組織損傷相聯(lián)系的，不需要的，不受控制的且通常是過多的出血，以及在具有出血紊亂的受試者中不需要的出血。出血發(fā)作可在具有基本上正常的凝血系統(tǒng)但經(jīng)歷了(暫時(shí))凝血病的受試者中，以及在具有先天性或獲得性凝血或出血紊亂的受試者中發(fā)生。在具有缺陷型血小板功能的受試者中，出血類似于由血友病引起的出血，因?yàn)榕c血友病中一樣，止血系統(tǒng)缺乏或具有異常的必需凝血“化合物”(例如，血小板或馮.維勒布蘭德因子蛋白)。在經(jīng)歷諸如與手術(shù)或嚴(yán)重外傷相聯(lián)系的廣泛組織損傷的受試者中，即時(shí)止血的要求可能超出正常的止血機(jī)制且不管基本上(外傷前或手術(shù)前)正常的止血機(jī)制存在與否他們都可形成過多出血。該受試者通常還接受多次輸血，由于出血和/或輸血形成(暫時(shí))凝血病(即，由于出血和/或輸血稀釋凝血蛋白，纖維蛋白溶解增加和血小板數(shù)目降低)。出血也可能出現(xiàn)在諸如腦，內(nèi)耳區(qū)和眼的器官中，它們是手術(shù)止血可能性有限的區(qū)域且因此實(shí)現(xiàn)滿意的止血成問題。在從各種器官(肝臟，肺，腫瘤組織，胃腸道)取活檢組織的過程中以及在腹腔鏡檢手術(shù)和游離恥骨后前列腺切除術(shù)中會(huì)出現(xiàn)相同的問題。所有這些情況的共同點(diǎn)是難以通過手術(shù)技術(shù)(縫合，止血鉗，等)進(jìn)行止血，當(dāng)出血擴(kuò)散(例如，出血性胃炎和過多的子宮出血)時(shí)情況也是如此。出血也可能出現(xiàn)在抗凝劑治療的受試者中；其中由提供的治療誘導(dǎo)了止血缺陷；這些出血通常是急性和過多的?？鼓齽┋煼ㄍǔＳ糜诜乐寡ㄋㄈ膊　Ｔ摨煼砂ǜ嗡?，其它形式的蛋白聚糖，華法令或其它形式的維生素K拮抗劑以及阿斯匹林和其它血小板聚集抑制劑，例如，抗體或GP IIb/IIIa活性的其它抑制劑。出血也可以是由于包含與抗血小板劑(例如乙酰水楊酸)，抗凝劑(例如，肝素)，和纖維蛋白溶解劑(例如，組織纖溶酶原激活劑，tPA)聯(lián)合治療的所謂溶解血栓療法引起。出血發(fā)作也意味著包括，但不限于在具有急性出血性關(guān)節(jié)病(關(guān)節(jié)出血)，慢性血友病關(guān)節(jié)病，血腫，(例如肌肉，腹膜后，舌下和咽后)的受試者中與手術(shù)或外傷相聯(lián)系的不受控制的和過多的出血，在其它組織中的出血，血尿(腎道出血)，腦出血，手術(shù)(例如，肝切除術(shù))，拔牙，和胃腸出血(例如，UGI出血)。出血發(fā)作可與抗因子VIII的抑制劑；血友病A；具有抑制劑的血友病A；血友病B；因子VII缺乏；因子XI缺乏；血小板減少癥；馮.維勒布蘭德因子缺乏(馮.維勒布蘭德疾病)；嚴(yán)重組織損傷；嚴(yán)重外傷；手術(shù)；腹腔鏡檢手術(shù)；出血性胃炎；進(jìn)行活組織檢查；抗凝劑療法；上部胃腸道出血(UGI)；或干細(xì)胞移植相聯(lián)系。出血發(fā)作可以是過多的子宮出血；在機(jī)械止血可能性有限的器官中發(fā)生；在腦部發(fā)生；在內(nèi)耳區(qū)發(fā)生；或在眼中發(fā)生。術(shù)語“出血發(fā)作”和“出血”如果合適可互換使用。
在本文中，術(shù)語“治療”意味著包括為了抑制或最小化出血而阻止預(yù)期的出血(如手術(shù)中的出血)，和調(diào)節(jié)已經(jīng)發(fā)生的出血(如外傷中的出血)。上文提及的“預(yù)期的出血”可以是預(yù)期在特定組織或器官中發(fā)生的出血，或者可以是非特定的出血。因此在術(shù)語“治療”中包括預(yù)防性施用因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品。
本文使用的術(shù)語“受試者”是指任何動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，例如人，且如果合適，可與術(shù)語“患者”互換使用。
本說明書中限定的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽可同時(shí)或順序給藥。該因子可按單個(gè)劑型提供，其中單個(gè)劑型含有兩種凝血因子，或者以含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品作為第一單位劑型和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品作為第二單位的劑型的組裝試劑盒形式提供。在本說明書中無論何時(shí)提及第一或第二或第三，等，的單位劑量，它并不表示優(yōu)選的給藥順序，而僅僅是為了描述方便。
“同時(shí)”施用因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品是指以單個(gè)劑型施用凝血因子蛋白質(zhì)，或者先施用第一凝血因子蛋白質(zhì)，接著在不超過15分鐘，優(yōu)選10，更優(yōu)選5，更優(yōu)選2分鐘的時(shí)間間隔內(nèi)施用第二凝血因子蛋白質(zhì)?？墒紫仁┯萌我灰蜃?。
“順序”給藥是指先施用第一凝血因子蛋白質(zhì)，接著在多達(dá)2小時(shí)，優(yōu)選1至2小時(shí)，更優(yōu)選多達(dá)1小時(shí)，更優(yōu)選30分鐘至1小時(shí)，更優(yōu)選多達(dá)30分鐘，更優(yōu)選15至30分鐘的時(shí)間間隔內(nèi)施用第二凝血因子蛋白質(zhì)?？墒紫仁┯脙煞N單位劑型或者凝血因子蛋白質(zhì)中的任一種。優(yōu)選的是，通過同一次靜脈內(nèi)途徑注射兩種產(chǎn)品。
“因子XI的水平”或“因子XI水平”是指與健康受試者水平相比的患者凝血因子XI活性水平。該水平稱為正常水平的百分?jǐn)?shù)。該術(shù)語如果合適可互換使用。
“因子XI的水平降低”或“降低的因子XI水平”是指與沒有凝血因子XI缺陷或針對(duì)凝血因子XI的抑制劑的受試者群體中的平均因子XI水平相比血流中存在的因子XI或其活性的減少。循環(huán)因子XI的水平可通過凝血或免疫學(xué)試驗(yàn)中的任一種來測(cè)量。因子XI的促凝血活性通過患者血漿矯正因子XI缺陷型血漿的凝血時(shí)間的能力來測(cè)定(例如，APTT試驗(yàn)，見下文；也參見本說明書“試驗(yàn)部分”)。
一個(gè)單位的因子XI定義為在1毫升正常(收集的)人血漿中存在的因子XI的量(相應(yīng)于100％的因子XI水平)。
一個(gè)單位的因子VII定義為在1ml正常血漿中存在的因子VII的量，相應(yīng)于大約0.5μg蛋白質(zhì)。活化后，50個(gè)單位相應(yīng)于大約1μg蛋白質(zhì)。
“缺乏”是指與正常健康個(gè)體相比血漿中的例如，因子XI的存在或活性減少。該術(shù)語如果合適可與“因子XI水平降低”互換使用。
“APTT”或“aPTT”是指活化的部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間(例如，Proctor RR，Rapaport SI用高嶺土的部分組織促凝血酶原激酶時(shí)間；第一階段血漿凝血因子缺陷的簡(jiǎn)單篩選試驗(yàn)。Am J Clin Pathol 36212，1961所述)。
“因子XI反應(yīng)綜合征”是指給需要的受試者施用的外源性因子XI可預(yù)防，治愈或改善預(yù)期或存在的，由該綜合征引起的任何癥狀，狀況或疾病的綜合征。包括，但不限于，由因子XI水平降低引起的綜合征，例如，由因子XI的抑制劑引起的出血紊亂。因子XI反應(yīng)綜合征也可用根據(jù)本發(fā)明的組合物治療。
“因子VII反應(yīng)綜合征”是指給需要的受試者施用的外源性因子VII，優(yōu)選因子VIIa可預(yù)防，治愈或改善預(yù)期或存在的，由該綜合征引起的任何癥狀，狀況或疾病的綜合征。包括，但不限于，由凝血因子VIII，IX，XI或VII水平降低，凝血因子抑制劑，缺陷型血小板功能引起的綜合征(例如，格蘭茨曼血小板功能不全和伯-蘇綜合征)，血小板減少癥，馮.維勒布蘭德病，和諸如由凝血蛋白稀釋，纖維蛋白溶解增加和由于出血和/或輸血的血小板數(shù)目降低(例如，在經(jīng)歷手術(shù)或外傷的多次輸血的受試者中)引起的凝血病。
“半壽期”是指因子VII或因子VII相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的血漿濃度從特定值減少到該值的一半所需的時(shí)間。
“初級(jí)止血”是指由FXa和TF因子VIIa初步產(chǎn)生凝血酶，接著激活血小板且活化的，附著的血小板形成初步的松散血栓，其還未被血纖蛋白穩(wěn)固，最終被交聯(lián)的血纖蛋白穩(wěn)固。如果不被在止血過程的第二步期間形成的血纖蛋白穩(wěn)固(維持止血)，該血栓容易被纖維蛋白溶解系統(tǒng)溶解。
“次級(jí)止血”或“維持止血”是指在活化的血小板表面發(fā)生的且由因子VIIa和因子VIIIa催化的凝血酶的次級(jí)，完全，和主要的爆發(fā)或產(chǎn)生，隨后形成血纖蛋白和穩(wěn)固初步血小板血栓。血纖蛋白穩(wěn)固血栓導(dǎo)致完全止血。
“完全止血”是指在損傷位點(diǎn)形成有效止血且不容易被纖維蛋白溶解系統(tǒng)溶解的穩(wěn)定且堅(jiān)硬的血纖蛋白凝血或血栓。在本說明書中，術(shù)語止血可用于表示上述完全止血。
制品中蛋白質(zhì)的總量可用公知的方法，例如，通過測(cè)量光密度來測(cè)量。凝血因子XI或因子VII蛋白質(zhì)(“抗原”)的量可通過諸如標(biāo)準(zhǔn)ELISA免疫測(cè)定法的公知方法來測(cè)量。一般來說，該測(cè)定法通過使例如含有因子XI蛋白質(zhì)制品的溶液與固定到ELISA板上的抗FXI抗體接觸，隨后使固定的抗體-因子XI復(fù)合物與攜帶標(biāo)記的第二抗FXI抗體接觸，在第三步中測(cè)量該標(biāo)記的量來進(jìn)行。各凝血因子的量可使用合適的抗體以相似的方式測(cè)量。制品中存在的凝血因子蛋白質(zhì)的總量可通過加入各凝血因子蛋白質(zhì)的量來測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，該制品包含分離的凝血因子。在另一實(shí)施方案中，該制品不含凝血因子II和凝血因子IIa(凝血酶原和凝血酶)和/或因子X或Xa。
本文所用的術(shù)語“分離的”是指從合成它們的細(xì)胞中或者天然發(fā)現(xiàn)它們的介質(zhì)(例如，血漿或血液)中分離的諸如因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的凝血因子。通過本領(lǐng)域已知的任何方法，包括，但不限于，從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物中取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過濾以去掉非貼壁細(xì)胞；等來完成從其來源細(xì)胞分離多肽。通過本領(lǐng)域已知的任何方法，包括，但不限于，諸如分別在抗因子VII或抗因子XI抗體柱上的親和色譜法；疏水相互作用色譜法；離子交換色譜法；大小排阻色譜法；電泳方法(例如，制備型等電聚焦(IEF))，差示溶解(例如，硫酸銨沉淀)，或萃取等可完成從其天然存在的介質(zhì)中分離多肽。
術(shù)語“TFPI抑制劑”是指抑制TFPI(組織因子途徑抑制劑)的抗凝血活性的化合物。該術(shù)語包括諸如在歐洲專利號(hào)558,529，WO 96/28153和US5,622,988中公開的那些化合物。“TFPI”和“EPI”(外源性途徑抑制劑)可交換使用。
本發(fā)明中因子VII多肽和因子XI多肽的“有效量”定義為因子VII多肽，例如FVIIa，和因子XI多肽一起足以防止或減少出血或失血，足以治愈，減輕或部分控制該疾病及其并發(fā)癥的量。
術(shù)語“因子VIIa的活性”或“因子VIIa活性”包括產(chǎn)生凝血酶的能力；該術(shù)語也包括在不存在組織因子時(shí)在活化的血小板表面產(chǎn)生凝血酶的能力。
根據(jù)本發(fā)明的組合物還包括TFPI-抑制劑。根據(jù)本發(fā)明的組合物還包括因子VIII。該組合物優(yōu)選給沒有針對(duì)因子VIII的抑制劑的受試者給藥。
縮寫TF組織因子FVII 以其單鏈，未活化形式的因子VIIFVIIa 以其活化形式的因子VIIrFVIIa以其活化形式的重組因子VIIFXI 以其酶原的，未活化形式的因子XIFXIa 以其活化形式的因子XIrFXI 重組FXIrFXIa 重組FXIaFVIII 以其酶原的，未活化形式的因子VIII
rFVIII 重組FVIIIFVIIIa 以其活化形式的因子VIIIrFVIIIa重組FVIIIaTFPI 組織因子途徑抑制劑化合物的制備適用于本發(fā)明的人純化因子VIIa優(yōu)選以DNA重組技術(shù)，例如按Hagen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 832412-2416，1986所述，或者按歐洲專利號(hào)200，421(ZymoGenetics，Inc.)所述制備。
因子VII也可按Broze and Majerus，J.Biol.Chem.255(4)1242-1247，1980和Hedner and Kisiel，J.Clin.Invest.711836-1841，1983所述的方法產(chǎn)生。這些方法產(chǎn)生因子VII，不含可檢測(cè)量的其它凝血因子。通過包括額外的凝膠過濾作為最終純化步驟可獲得甚至更純化的因子VII制品。然后通過已知方法，例如通過一些不同的血漿蛋白質(zhì)，例如因子XIIa，IX或Xa可將因子VII轉(zhuǎn)變成活化因子FVIIa。另外，按Bjoern等(Research Disclosure，269，1986年9月，第564-565頁)所述，將其通過諸如Mono Q(Pharmacia fineChemicals)等的離子交換色譜柱可活化因子VII。
因子VII相關(guān)性多肽可通過修飾野生型因子VII或者通過重組技術(shù)產(chǎn)生。與野生型因子VII相比具有改變的氨基酸序列的因子VII相關(guān)性多肽可通過已知方法，例如通過定點(diǎn)誘變改變編碼天然因子VII的核酸中的氨基酸密碼子或者去掉一些氨基酸密碼子來修飾編碼野生型因子VII的核酸序列來生產(chǎn)。
可在因子VIIa或因子XI分子的功能關(guān)鍵性區(qū)域之外進(jìn)行取代且仍然產(chǎn)生活性多肽對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。按照本領(lǐng)域已知的方法，例如定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變可鑒定對(duì)因子VII或因子VII相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的活性必需的，且因此優(yōu)選不進(jìn)行取代的氨基酸殘基(參見，例如，Cunningham and Wells，1989，Science 2441081-1085)。在后一技術(shù)中，在該分子的每一個(gè)帶正電荷的殘基處導(dǎo)入突變，并檢測(cè)所得的突變體分子的凝血，各自的交聯(lián)活性以鑒定對(duì)該分子的活性關(guān)鍵的氨基酸殘基。底物-酶相互作用位點(diǎn)也可通過分析以諸如核磁共振分析，結(jié)晶學(xué)或光親和標(biāo)記的技術(shù)測(cè)定的三維結(jié)構(gòu)來測(cè)定(參見，例如，de Vos等，1992，Science 255306-312；Smith等，1992，Journal of Molecular Biology 224899-904；Wlodaver等，1992，F(xiàn)EBS Letters 30959-64)。
使用本領(lǐng)域已知的任一方法通過定點(diǎn)誘變可完成將突變導(dǎo)入核酸序列使得用一個(gè)核苷酸替換另一核苷酸。特別有用的是利用含有目的插入片斷的超螺旋雙鏈DNA載體和含有所需突變的兩個(gè)合成引物的方法。分別與該載體的相反鏈互補(bǔ)的寡核苷酸引物借助于Pfu DNA聚合酶在溫度循環(huán)期間延伸。該引物摻入時(shí)，產(chǎn)生含有交錯(cuò)缺口的突變質(zhì)粒。溫度循環(huán)后，用對(duì)甲基化和半甲基化DNA特異性的DpnI處理該產(chǎn)物以便消化親本DNA模板并選擇含有突變的合成DNA。也可使用本領(lǐng)域已知的產(chǎn)生，鑒定和分離變異體的其它方法，例如，基因改組或噬菌體展示技術(shù)。
通過本領(lǐng)域已知的任一方法，包括，但不限于，從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過濾以去掉非貼壁細(xì)胞；等可完成從其細(xì)胞來源分離多肽。
任選的是，可進(jìn)一步純化因子VII或因子VII相關(guān)性多肽。使用本領(lǐng)域已知的任何方法，包括，但不限于，諸如在抗因子VII抗體柱上的親和色譜法(參見，例如，Wakabayashi等，J.Biol.Chem.26111097，1986；和Thim等，Biochem.277785，1988)；疏水相互作用色譜法；離子交換色譜法；大小排阻色譜法；電泳方法(例如，制備型等電聚焦(IEF))，差示溶解(例如，硫酸銨沉淀)，或萃取等可完成純化。一般來說，參見Scopes，Protein Purification，Springer-Verlag，New York，1982；和Protein Purification，J.C.Janson and LarsRyden，editors，VCH Publishers，New York，1989。純化后，該制品優(yōu)選含有約10％重量以下，更優(yōu)選約5％以下，最優(yōu)選約1％以下的來自宿主細(xì)胞的非因子VII或因子VII相關(guān)性多肽。
因子VII或因子VII相關(guān)性多肽可使用因子XIIa或具有胰蛋白酶樣特異性的其它蛋白酶，例如，因子IXa，激肽釋放酶，因子Xa，和凝血酶通過蛋白水解裂解活化。參見，例如，Osterud等，Biochem.112853(1972)；Thomas，美國(guó)專利號(hào)4,456,591；和Hedner等，J.Clin.Invest.711836(1983)。另外，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽可將其通過諸如Mono Q(Pharmacia)等的離子交換色譜柱活化。然后所得的活化因子VII或因子VII相關(guān)性多肽可按下文所述配制和給藥。
本發(fā)明中使用的因子XI可按照已知方法，例如本文作為參考文獻(xiàn)引用的Koide等(Biochemistry 162279-2286，1977)和Bouma等(J.Biol.Chem.2526432-6437，1977)公開的那些方法從血漿中制備。然而，優(yōu)選使用重組因子XI以避免使用帶有疾病傳播危險(xiǎn)的血液或組織來源的產(chǎn)品。制備重組因子XI的方法是本領(lǐng)域已知的。參見，例如，Kemball-Cook等(Gene 139(2)275-279，1994)，F(xiàn)ujikawa等(Biochemistry 252417-2424，1986)，Meijers等(Blood 79(6)1435-1440，1992)，本文引用以其整體作為參考。
因子XI相關(guān)性多肽可通過修飾野生型因子XI或者通過重組技術(shù)產(chǎn)生。與野生型因子XI相比具有改變的氨基酸序列的因子XI相關(guān)性多肽可按上文更詳細(xì)的描述通過已知方法，例如通過定點(diǎn)誘變改變編碼天然因子XI的核酸中的氨基酸密碼子或者去掉一些氨基酸密碼子，修飾編碼野生型因子XI的核酸序列來生產(chǎn)。通過本領(lǐng)域已知的任一方法，包括，但不限于，從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過濾以去掉非貼壁細(xì)胞；等可完成從其細(xì)胞來源分離多肽。任選的是，可進(jìn)一步純化因子XI或因子XI相關(guān)性多肽?？砂瓷衔母敿?xì)的描述使用本領(lǐng)域已知的任何方法，包括，但不限于，諸如在抗因子XI抗體柱上的親和色譜法；疏水相互作用色譜法；離子交換色譜法；大小排阻色譜法；電泳方法(例如，制備型等電聚焦(IEF))，差示溶解(例如，硫酸銨沉淀)，或萃取等完成純化。純化后，該制品優(yōu)選含有約10％重量以下，更優(yōu)選約5％以下，最優(yōu)選約1％以下的來自宿主細(xì)胞的非因子XI或因子XI相關(guān)性多肽。然后所得的活化因子XI或因子XI相關(guān)性多肽可按下文所述配制和給藥。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員將預(yù)料到，優(yōu)選使用與受試者同源的因子XI和因子VIIa蛋白質(zhì)以降低誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。非人因子XI的制備和鑒定已被例如，Gailani(Blood 90(3)1055-1064，1997)公開。本發(fā)明還包括該因子XI和因子VIIa蛋白質(zhì)在獸醫(yī)方法中的用途。
藥用組合物和使用方法本發(fā)明的制品可用于治療任何因子VII反應(yīng)綜合征，例如出血紊亂，包括，但不限于由凝血因子VIII，IX，XI或VII水平降低，凝血因子抑制劑，缺陷型血小板功能引起的綜合征(例如，格蘭茨曼血小板功能不全和伯-蘇綜合征)，血小板減少癥，馮.維勒布蘭德病，和諸如由凝血蛋白稀釋，纖維蛋白溶解增加和由于出血和/或輸血的血小板數(shù)目降低(例如，在經(jīng)歷手術(shù)或外傷的多次輸血的受試者中)引起的凝血病。根據(jù)本發(fā)明的含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的藥用組合物主要用于腸胃外給藥用于預(yù)防性和/或治療性治療。優(yōu)選的是，該藥用組合物通過腸胃外給藥，即靜脈內(nèi)，皮下，或肌肉內(nèi)；最優(yōu)選靜脈內(nèi)給藥。它們也可通過連續(xù)或脈動(dòng)輸注給藥。
根據(jù)本發(fā)明的藥用組合物或配制品包含以單個(gè)單位劑型或者以組裝試劑盒的形式配制的，優(yōu)選溶于藥用上可接受的載體，優(yōu)選含水載體或稀釋劑中的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽，和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽。簡(jiǎn)單地說，適合于根據(jù)本發(fā)明的用途的藥用組合物可通過將因子VIIa，或因子XI，或者因子VIIa與因子XI的組合(優(yōu)選純化形式)，與合適的佐劑和合適的載體或稀釋劑混合來制備?？墒褂酶鞣N含水載體，例如水，緩沖水，0.4％鹽水，0.3％甘氨酸等。本發(fā)明的制品也可使用非水載體配制，例如，以凝膠的形式或者作為脂質(zhì)體制品用于給藥或者定向到損傷位點(diǎn)。脂質(zhì)體制品一般按例如，美國(guó)專利號(hào)4,837,028，4,501,728，和4,975,282中所述。該組合物可按常規(guī)的，熟知的滅菌技術(shù)滅菌。包裝所得的水溶液備用或者在無菌條件下過濾并凍干，該凍干制品在給藥前與無菌水溶液混合。
該組合物可含有藥用上可接受的輔助物質(zhì)或佐劑，包括，但不限于，pH調(diào)節(jié)和緩沖劑和/或張力調(diào)節(jié)劑，例如，乙酸鈉，乳酸鈉，氯化鈉，氯化鉀，氯化鈣，等。
配制品還可包括一種或多種稀釋劑，乳化劑，防腐劑，緩沖劑，賦形劑等且可作為諸如液體，粉末，乳劑，緩釋劑等的形式提供。本領(lǐng)域的技術(shù)人員以合適的方式且根據(jù)諸如在Remington′s Pharmaceutical Sciences.Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990中公開的公認(rèn)的實(shí)踐可配制本發(fā)明的組合物。因此，用于靜脈內(nèi)輸注的典型藥用組合物可配制成含有250ml的無菌林格溶液和10mg該制品。
可施用含有本發(fā)明制品的組合物用于預(yù)防性和/或治療性治療。在治療應(yīng)用中，給已經(jīng)患有上述疾病的受試者施用對(duì)于治愈，減輕或部分阻止該疾病及其并發(fā)癥的臨床表現(xiàn)足夠量的組合物。實(shí)現(xiàn)這點(diǎn)的足夠量定義為“治療有效量”。各目的的有效量依賴于該疾病或損傷的嚴(yán)重性以及受試者的體重和一般狀態(tài)。應(yīng)明白測(cè)定合適的劑量可使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)通過建立數(shù)值矩陣并試驗(yàn)該矩陣中的不同點(diǎn)來完成。
本發(fā)明制品的局部給藥，例如，局部應(yīng)用可通過例如，借助于噴霧，灌注，雙氣囊導(dǎo)管，支架(stent)，插入血管移植物或支架，用于覆蓋氣襄導(dǎo)管的水凝膠，或者其它充分確定的方法進(jìn)行。在任一情況下，該藥用組合物應(yīng)提供足以有效治療該狀況的制品量。
在這些配制品中因子VII或因子VII相關(guān)性多肽，因子XI或因子XI相關(guān)性多肽，或者因子VII或因子VII相關(guān)性多肽與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的組合的濃度可在大范圍內(nèi)變化，即從不足約0.5％的重量，通常為或者至少為大約1％的重量至高達(dá)15或20％的重量且根據(jù)選定的具體給藥方式主要通過液體體積，粘度等進(jìn)行選擇。優(yōu)選通過注射或輸注，特別是注射給藥。因此，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以適合于靜脈內(nèi)給藥的形式制備，例如該制品可以是在一種劑型中同時(shí)含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的溶解凍干粉末或液體配制品，或者是在一種劑型中含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的溶解凍干粉末或液體配制品和在另一劑型中含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的溶解凍干粉末或液體配制品。
應(yīng)明白因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的量和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的量一起包含治療出血發(fā)作的合計(jì)有效量。
必須記住本發(fā)明的物質(zhì)一般可用于嚴(yán)重疾病或損傷狀態(tài)，即威脅生命或可能威脅生命的情況。在該情況下，鑒于外源性物質(zhì)最小化且人體因子VIIa和因子XI的免疫原性總體缺乏，主治醫(yī)師可能且認(rèn)為需要施用基本上過量的該組合物。
在預(yù)防性應(yīng)用中，含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的組合物可給疾病狀態(tài)或損傷易感性或者有該危險(xiǎn)的受試者給藥以增強(qiáng)受試者自身的凝血能力。這一量定義為“預(yù)防有效量”。應(yīng)明白因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的量和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的量一起包含預(yù)防出血發(fā)作的合計(jì)有效量。
可用主治醫(yī)師選定的劑量水平和方式進(jìn)行該組合物的單次或多次給藥。該組合物可每天或者每周給藥一次或多次。該藥用組合物的有效量是提供對(duì)出血發(fā)作臨床上明顯有效的量。該量部分取決于所治療的具體癥狀，受試者的年齡，體重，和一般健康狀態(tài)，以及對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的其它因素。
本發(fā)明的組合物一般在預(yù)期出血前或者在出血開始時(shí)以單個(gè)劑量給藥。然而，也可根據(jù)提供的劑量和受試者的狀況，優(yōu)選以2-4-6-12小時(shí)的間隔重復(fù)給藥(為多劑量)。
在與有備介入相關(guān)的治療中，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽一般在介入前大約24小時(shí)內(nèi)給藥，且此后持續(xù)多達(dá)7天或更長(zhǎng)。作為抗凝劑的給藥可按本文所述的各種途徑進(jìn)行。
該組合物可以是以合適的濃度同時(shí)含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的單個(gè)制品形式(單個(gè)劑型)。該組合物也可以是由含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品的第一單位劑型和含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的第二單位劑型組成的組裝試劑盒的形式。在該情況下，因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽應(yīng)一個(gè)接著一個(gè)給藥，優(yōu)選彼此在大約15分鐘的間隔內(nèi)，例如，彼此在10分鐘內(nèi)，或者優(yōu)選在5分鐘內(nèi)，或更優(yōu)選彼此在2分鐘內(nèi)?？墒紫仁┯脙蓚€(gè)單位劑型中的任一種。
該試劑盒包括至少兩個(gè)分離的藥物組合物。該試劑盒包括諸如分開的瓶子或者分開的箔包裝的含有該分開的組合物的容器裝置。一般來說，該試劑盒包括該分開的成份的給藥說明。當(dāng)該分開的成份優(yōu)選以不同的劑型給藥，以不同的給藥間隔給藥時(shí)，或者當(dāng)主治醫(yī)師需要組合的各個(gè)成份的滴定值時(shí)，該試劑盒形式特別有利。
根據(jù)本發(fā)明施用的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的量和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的量可在大約1∶100至大約100∶1(w/w)之間的比率中變化。因此因子VII與因子XI的比率可以是，例如，大約1∶100，或1∶90，或1∶80，或1∶70或1∶60，或1∶50，或1∶40，或1∶30，或1∶20，或1∶10，或1∶5，或1∶2，或1∶1，或2∶1，或5∶1，或10∶1，或20∶1，或30∶1，或40∶1，或50∶1，或60∶1，或70∶1，或80∶1，或90∶1，或100∶1；或者在大約1∶90至大約1∶1之間，或者在大約1∶80至大約1∶2之間，或者在大約1∶70至大約1∶5之間，或者在大約1∶60至大約1∶10之間，或者在大約1∶50至大約1∶25之間，或者在大約1∶40至大約1∶30之間，或者在大約90∶1至大約1∶1之間，或者在大約80∶1至大約2∶1之間，或者在大約70∶1至大約5∶1之間，或者在大約60∶1至大約10∶1之間，或者在大約50∶1至大約25∶1之間，或者在大約40∶1至大約30∶1之間。
因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的劑量對(duì)于70-kg的受試者作為裝載和維持劑量，可依賴于受試者的體重，狀況和癥狀的嚴(yán)重性在相應(yīng)于大約0.05mg至大約500mg/天的野生型因子VII，例如，從大約1mg至大約200mg/天，或者，例如，從大約5mg至大約175mg/天的劑量中變化。
因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的劑量對(duì)于70-kg的受試者作為裝載和維持劑量，可依賴于受試者的體重，狀況和癥狀的嚴(yán)重性在相應(yīng)于大約0.05mg至大約500mg/天的野生型因子XI，例如，從大約1mg至大約200mg/天，或者，例如，從大約1mg至大約175mg/天的劑量中變化。
因子VIIa和因子XI的組合在體外凝血硬度和纖維蛋白溶解時(shí)間試驗(yàn)中表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。而且，因子VIIa和因子XI的組合在形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝血，延長(zhǎng)半凝血溶解時(shí)間，增加凝血強(qiáng)度和增強(qiáng)對(duì)纖維蛋白溶解的抗性中表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。
該組合物可以是以合適的濃度同時(shí)含有因子VIIa和因子XI的單個(gè)制品形式。該組合物也可以是由含有因子VIIa的第一單位劑型和含有因子XI的第二單位劑型和任選含有因子VIII和/或TFPI抑制劑的一個(gè)或多個(gè)其它單位劑型組成的試劑盒的形式。在該情況下，因子VIIa和因子XI應(yīng)順序給藥，優(yōu)選彼此在大約1-2小時(shí)的間隔內(nèi)，例如，彼此在30分鐘內(nèi)，或者優(yōu)選在10分鐘內(nèi)，或更優(yōu)選彼此在5分鐘內(nèi)?？墒紫仁┯脙蓚€(gè)單位劑型中的任一種。
由于本發(fā)明涉及通過用可分開給藥的活性成份的聯(lián)合處理進(jìn)行出血發(fā)作的預(yù)防或治療或者用于凝血處理，因此，本發(fā)明還涉及以試劑盒的形式組合分開的藥用組合物。該試劑盒包括至少兩個(gè)分開的藥用組合物。該試劑盒包括諸如分開的瓶子或者分開的箔包裝的含有該分開的組合物的容器裝置。一般來說，該試劑盒包括該分開的成份的給藥說明。當(dāng)該分開的成份優(yōu)選以不同的劑型給藥，以不同的給藥間隔給藥時(shí)，或者當(dāng)主治醫(yī)師需要組合的各個(gè)成份的滴定值時(shí)，該試劑盒形式特別有利。
試驗(yàn)檢測(cè)因子VIIa的活性在體外試驗(yàn)中以簡(jiǎn)單的預(yù)試進(jìn)行合適的試驗(yàn)以檢測(cè)因子VIIa活性，從而選擇合適的因子VIIa變異體體外水解試驗(yàn)可測(cè)定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變異體(兩者下文均稱為“因子VIIa”)的比活。也可平行測(cè)定它們以便直接比較其比活。在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)上進(jìn)行該測(cè)定。將顯色底物D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilide(S-2288，Chromogenix，Sweden)以終濃度1mM加入溶于含有0.1M NaCl，5mM CaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白的50mMHepes，pH7.4中的因子VIIa(終濃度為100nM)中。在SpectraMaxTM340平板閱讀器(Molecular Devices，USA)上連續(xù)測(cè)量405nm下的吸光度。溫育20分鐘期間形成的吸光度減去不含酶的空白孔中的吸光度后用于計(jì)算變異體和野生型因子VIIa活性之間的比率比率＝(A405nm因子VIIa變異體)/(A405nm因子VIIa野生型)。
在此基礎(chǔ)上，鑒定活性相當(dāng)于或者高于天然因子VIIa的因子VIIa變異體，例如，變異體的活性和天然因子VII(野生型FVII)的活性之間的比率為大約，或者高于1.0的變異體。
因子VIIa或因子VIIa變異體的活性也可使用諸如因子X的生理底物，以100-1000nM的合適濃度測(cè)量，其中在加入合適的產(chǎn)色底物(例如，S-2765)后測(cè)量產(chǎn)生的因子Xa。另外，可在生理溫度下進(jìn)行活性試驗(yàn)。
體外蛋白水解試驗(yàn)平行測(cè)定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變異體(兩者下文均稱為“因子VIIa”)以便直接比較其比活。在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)上進(jìn)行該測(cè)定。在100微升含有0.1M NaCl，5mM CaCl2和1mg/ml牛血清白蛋白的50mM Hepes，pH7.4中，將因子VIIa(10nM)和因子X(0.8微摩爾)溫育15分鐘。然后加入50微升含有0.1M NaCl，20mM EDTA和1mg/ml牛血清白蛋白的50mM Hepes，pH7.4終止因子X的裂解。通過加入終濃度為0.5mM的顯色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilide(S-2765，Chromogenix，Sweden)測(cè)量產(chǎn)生的因子Xa的量。在SpectraMaxTM340平板閱讀器(MolecularDevices，USA)上連續(xù)測(cè)量405nm下的吸光度。10分鐘期間形成的吸光度減去不含F(xiàn)VIIa的空白孔中的吸光度后用于計(jì)算變異體和野生型因子VIIa的蛋白水解活性之間的比率比率＝(A405nm因子VIIa變異體)/(A405nm因子VIIa野生型)。
在此基礎(chǔ)上，鑒定活性相當(dāng)于或者高于天然因子VIIa的因子VIIa變異體，例如，變異體的活性和天然因子VII(野生型FVII)的活性之間的比率為大約，或者高于1.0的變異體。
凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)因子VII或因子VII相關(guān)性多肽或者因子XI或因子XI相關(guān)性多肽(例如，變異體)產(chǎn)生凝血酶的能力可在包含生理濃度下的所有相關(guān)凝血因子和抑制劑以及活化血小板的試驗(yàn)中測(cè)量(按Monroe等(1997)Brit.J.Haematol.99，542-547中第543頁所述，本文引用以供參考)。
檢測(cè)因子XI的活性使用例如，Gailani等(Blood 97(10)3117-3122，2001)(“FXI產(chǎn)色試驗(yàn)”)所述的產(chǎn)色底物在體外試驗(yàn)中可簡(jiǎn)單地進(jìn)行合適的試驗(yàn)以檢測(cè)因子XI的酰胺分解活性，從而選擇合適的因子XI變異體。
按例如，Gailani等(Blood 97(10)3117-3122，2001)所述在測(cè)量因子IX活化成IXa的體外試驗(yàn)中也可簡(jiǎn)單地進(jìn)行因子XI的生物學(xué)活性測(cè)定。
檢測(cè)因子VIII的活性按例如，Kirkwood TBL，Rizza CR，Snape TJ，Rhymes IL，Austen DEG.在因子VIII試驗(yàn)中鑒定實(shí)驗(yàn)室間差異的來源。B J Haematol 1981；37；559-68；或Kessels等，British Journal of Haematology，Vol.76(Suppl.1)pp.16(1990)所述在體外試驗(yàn)中可簡(jiǎn)單地進(jìn)行合適的試驗(yàn)以檢測(cè)因子VIII的活性，從而提供選擇用于本發(fā)明的合適因子VIII變異體的方法。因子VIII的活性也可基于產(chǎn)生的FXa的酰胺分解活性通過兩步產(chǎn)色試驗(yàn)來測(cè)量(Wagenvoord等，1989，Haemostasis，19(4)196-204)。
按例如，Nilsson等，1959.(Nilsson IM，Blombaeck M，Thilen A，vonFrancken I.，血友病A攜帶者-實(shí)驗(yàn)室研究，Acta Med Scan 1959；165357)中所述通過測(cè)量制品校正因子VIII缺陷型血漿的凝血時(shí)間的能力也可定量因子VIII的生物學(xué)活性。在該試驗(yàn)中，生物學(xué)活性表示為單位/ml血漿(1個(gè)單位相應(yīng)于正常收集的血漿中存在的FVIII的量)。
本發(fā)明的方面
方面1含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽，和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的藥用組合物。
實(shí)施方案2方面1中的組合物，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII相關(guān)性多肽。
實(shí)施方案3方面1的組合物，其中因子VIIa是人因子VIIa。
實(shí)施方案4方面1或方面3中的組合物，其中因子VIIa和因子XI是重組人因子VIIa和重組人因子XI。
實(shí)施方案5方面1-4中任一項(xiàng)的組合物，其中因子XI是血小板因子XI。
實(shí)施方案6方面1-5中任一項(xiàng)的組合物，其中因子XI是活化的因子XI。
實(shí)施方案7方面1-6中任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物還含有TFPI抑制劑。
實(shí)施方案8方面1-7中任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物還含有因子VIII。
方面2含有治療出血發(fā)作的試劑盒，包括a)在第一個(gè)單位劑型中的有效量的因子VIIa和藥用上可接受的載體；b)在第二個(gè)單位劑型中的有效量的因子XI和藥用上可接受的載體；和c)含有所述第一和第二劑型的容器裝置。
實(shí)施方案10方面2中的組合物，包含a)在第一個(gè)單位劑型中的有效量的因子VIIa和藥用上可接受的載體；b)在第二個(gè)單位劑型中的有效量的因子XI和藥用上可接受的載體；c)在第三個(gè)單位劑型中的有效量的TFPI抑制劑和藥用上可接受的載體；和d)含有所述第一，第二和第三劑型的容器裝置。
方面3含有治療出血發(fā)作的試劑盒，包括a)在第一個(gè)單位劑型中的有效量的因子VIIa和TFPI抑制劑和藥用上可接受的載體；b)在第二個(gè)單位劑型中的有效量的因子XI和藥用上可接受的載體；和c)含有所述第一和第二劑型的容器裝置。
方面4含有治療出血發(fā)作的試劑盒，包括a)在第一個(gè)單位劑型中的有效量的因子VIIa和藥用上可接受的載體；
b)在第二個(gè)單位劑型中的有效量的因子XI和TFPI抑制劑和藥用上可接受的載體；和c)含有所述第一和第二劑型的容器裝置。
實(shí)施方案9實(shí)施方案2-4中任一項(xiàng)的試劑盒，還含有以分開的單位劑型配制的，或者包含在還含有選自因子VIIa，因子XI或TFPI抑制劑中的一種或多種化合物的一個(gè)單位劑型內(nèi)的因子VIII。
方面6因子VIIa與因子XI的組合在制備治療受試者出血發(fā)作的藥物中的用途。
方面7因子VIIa與因子XI的組合在制備用于在受試者中縮短凝血時(shí)間的藥物中的用途。
方面8因子VIIa與因子XI的組合在制備用于在正常哺乳動(dòng)物血漿中延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間的藥物中的用途。
方面9因子VIIa與因子XI的組合在制備用于在正常哺乳動(dòng)物血漿中增加凝血強(qiáng)度的藥物中的用途。
方面10因子VIIa與因子XI的組合在制備用于在正常人血漿中增強(qiáng)血纖蛋白凝血形成的藥物中的用途。
方面11增強(qiáng)受試者血纖蛋白凝血形成的方法，該方法包括給受試者施用有效量的因子VIIa與有效量的因子XI的組合。
方面12治療受試者出血發(fā)作的方法，包括給受試者施用有效量的因子VIIa與有效量的因子XI的組合。
實(shí)施方案10方面19或20的方法，其中因子VIIa和因子XI以單個(gè)劑型給藥。
實(shí)施方案11方面19或20的方法，其中因子VIIa和因子XI順序給藥。
通過下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，然而，它們不能解釋成限制保護(hù)范圍。在上面描述和下面實(shí)施例中公開的特征可分開和以其任意組合作為以其不同形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的基礎(chǔ)。
實(shí)施例實(shí)施例1通過將凝血因子VIIa和XI組合來提高止血型凝血的穩(wěn)定性方法凝血溶解試驗(yàn)將用含有Innovin(Dade Behring，2000-倍稀釋)，rFVIIa(Novo Nordisk A/S，Bagsvaerd，Denmark；各種濃度)和t-PA(AmericanDiagnostics，8nM)的緩沖液(20mM HEPES，150mM NaCl，5mM CaCl，pH7.4)10倍稀釋的正常人血漿加入96孔ELISA平板中并在室溫下測(cè)量650nm下的濁度一段時(shí)間。在指明的位置，包含純化的人FXI(HaematologicTechnologies，各種濃度)。
旋轉(zhuǎn)(Rotatonal)凝血彈性描記法(roTEG)在加入了5nM t-PA的檸檬酸化正常人血漿中進(jìn)行測(cè)量，分析單獨(dú)或與30nM FXI(Haematologic Technologies)組合加入1nM FVIIa的效果。加入在20mM HEPES，150mM NaCl，pH7.4緩沖液中的Innovin(2000-倍稀釋的終濃度，Dade Behring # 526945)和鈣(15mM的終濃度)開始凝血。
結(jié)果凝血溶解試驗(yàn)加入FVIIa導(dǎo)致凝血溶解時(shí)間的劑量依賴型延長(zhǎng)(圖1)。該效果在10nM FVIIa下最佳。在10nM FVIIa存在下，加入FXI導(dǎo)致凝血溶解時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)(圖2)。該效果為劑量依賴型且在30nM FXI下最佳。
凝血彈性描記法roTEG測(cè)量用于分析FVIIa和FXI對(duì)最大凝血硬度(MCF)，以及凝血對(duì)t-PA介導(dǎo)型溶解的抗性的影響。加入FVIIa/FXI前，MCF為25mm且凝血溶解一半所需的時(shí)間為12.3分鐘(圖3)。加入FXI(30nM)不改變MCF但將半凝血溶解時(shí)間延長(zhǎng)到16.1分鐘(圖3)。同樣，加入FVIIa(1nM)導(dǎo)致凝血被保護(hù)而不受t-PA介導(dǎo)的纖維蛋白溶解(半凝血溶解時(shí)間16.7分鐘)，對(duì)MCF無任何影響(圖3)。然而，F(xiàn)VIIa(1nM)與FXI(30nM)一起加入增加MCF(29mm)，以及半凝血溶解時(shí)間(24.2分鐘，圖3)。
結(jié)論這些結(jié)果證明FVIIa和FXI加入血漿中以協(xié)同的方式提高凝血的機(jī)械強(qiáng)度和對(duì)t-PA介導(dǎo)的纖維蛋白溶解的抗性。
實(shí)施例2通過組合凝血因子VIIa和XI縮短正常人血漿中的凝血時(shí)間方法
凝血試驗(yàn)單獨(dú)的rFVIIa(1μg/ml)，單獨(dú)的FXI(25nM)，或rFVIIa與FXI在50mM Pipes，100mM NaCl，2mM EDTA，1％BSA，pH7.2中的等分試樣(55μl)與在相同緩沖液中含有100μM PC/PS囊泡和50mM CaCl2的55μl等分試樣溫育5分鐘。然后加入55μl正常人血漿(NHP)的等分試樣，使用標(biāo)準(zhǔn)APTT程序在ACL凝血機(jī)中凝血400秒。
結(jié)果凝血試驗(yàn)加入rFVIIa或FXI前，NHP在400秒的監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)不凝血。加入FXI(25nM)后，凝血時(shí)間仍然長(zhǎng)于400秒。加入FVIIa(1μg/ml)將凝血時(shí)間縮短到159.4±1.4秒(圖4)。同時(shí)加入FVIIa(1μg/ml)和FXI(25nM)將凝血時(shí)間縮短到95.0±1.4秒(圖4)。
結(jié)論這些結(jié)果證明向血漿中加入FVIIa和FXI以協(xié)同的方式縮短N(yùn)HP中的凝血時(shí)間。
權(quán)利要求
1.含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽，和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的藥用組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII相關(guān)性多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述的因子VII-相關(guān)性多肽是因子VII的氨基酸序列變異體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3的組合物，其中當(dāng)在本說明書所述的“體外水解試驗(yàn)”中檢測(cè)時(shí)所述的因子VII相關(guān)性多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比率是至少大約1.25。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中所述的因子VII是人因子VII。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中所述的因子VII是重組人因子VII。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的組合物，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是其活化形式。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中所述的因子VII是重組人因子VIIa。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的組合物，其中所述的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是因子XI相關(guān)性多肽。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述的因子XI-相關(guān)性多肽是因子XI的氨基酸序列變異體。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11的組合物，其中當(dāng)在本說明書所述的“FXI產(chǎn)色試驗(yàn)”中檢測(cè)時(shí)所述的因子XI相關(guān)性多肽的活性與天然人血漿因子XI(野生型FXI)的活性之間的比率是至少大約1.25。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的組合物，其中所述的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是因子XI多肽。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中所述的因子XI是人因子XI。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述的因子XI是重組人血漿因子XI。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述的因子XI是重組人血小板因子XI。
17.根據(jù)權(quán)利要求1至16任一項(xiàng)的組合物，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽與所述的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以大約100∶1至大約1∶100(w/w因子VII因子XI)之間的質(zhì)量比存在。
18.根據(jù)權(quán)利要求1至17任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物還含有適合于注射或輸注，特別是注射的藥用上可接受的賦形劑。
19.含有治療出血發(fā)作的組裝試劑盒，包括f)在第一個(gè)單位劑型中的有效量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽的制品和藥用上可接受的載體；g)在第二個(gè)單位劑型中的有效量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品和藥用上可接受的載體；和h)含有所述第一和第二劑型的容器裝置。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的試劑盒，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII相關(guān)性多肽。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的試劑盒，其中所述的因子VII-相關(guān)性多肽是因子VII的氨基酸序列變異體。
22.根據(jù)權(quán)利要求20或21的試劑盒，其中當(dāng)在本說明書所述的“體外水解試驗(yàn)”中檢測(cè)時(shí)所述的因子VII相關(guān)性多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比率是至少大約1.25。
23.根據(jù)權(quán)利要求19的試劑盒，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是因子VII。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的試劑盒，其中所述的因子VII是人因子VII。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的試劑盒，其中所述的因子VII多肽是重組人因子VII。
26.根據(jù)權(quán)利要求19至25任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽是其活化形式。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的試劑盒，其中所述的因子VII是重組人因子VIIa。
28.根據(jù)權(quán)利要求19至27任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是因子XI相關(guān)性多肽。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的試劑盒，其中所述的因子XI-相關(guān)性多肽是因子XI的氨基酸序列變異體。
30.根據(jù)權(quán)利要求28或29的試劑盒，其中當(dāng)在本說明書所述的“FXI產(chǎn)色試驗(yàn)”中檢測(cè)時(shí)所述的因子XI相關(guān)性多肽的活性與天然人血漿因子XI(野生型FXI)的活性之間的比率是至少大約1.25。
31.根據(jù)權(quán)利要求19至27任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽是因子XI。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的試劑盒，其中所述的因子XI是人因子XI。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的試劑盒，其中所述的因子XI是重組人血漿因子XI。
34.根據(jù)權(quán)利要求32的試劑盒，其中所述的因子XI是重組人血小板因子XI。
35.根據(jù)權(quán)利要求19至34任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以大約100∶1至大約1∶100(w/w因子VII∶因子XI)之間的質(zhì)量比存在。
36.因子VII或因子VII相關(guān)性多肽與因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的組合在制備治療受試者出血發(fā)作的藥物中的用途。
37.根據(jù)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的組合物在制備治療受試者出血發(fā)作的藥物中的用途。
38.根據(jù)權(quán)利要求36或37的用途，其中該藥物用于縮短凝血時(shí)間。
39.根據(jù)權(quán)利要求36或37的用途，其中該藥物用于延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間。
40.根據(jù)權(quán)利要求36或37的用途，其中該藥物用于增加凝血強(qiáng)度。
41.根據(jù)權(quán)利要求36至40任一項(xiàng)的用途，其中該藥物配制成用于注射或輸注，特別是注射。
42.根據(jù)權(quán)利要求36至41任一項(xiàng)的用途，其中出血發(fā)作是由于外傷，或者手術(shù)，或者血小板的計(jì)數(shù)或活性降低。
43.根據(jù)權(quán)利要求36至42任一項(xiàng)的用途，其中該藥物是單個(gè)劑型。
44.根據(jù)權(quán)利要求36至42任一項(xiàng)的用途，其中該藥物以含有因子VII或因子VII相關(guān)性多肽制品的第一單位劑型和含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的第二單位劑型的形式制備。
45.治療受試者出血發(fā)作的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)治療出血有效。
46.縮短受試者凝血時(shí)間的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)縮短凝血時(shí)間有效。
47.增強(qiáng)受試者止血的方法，該方法包括給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增強(qiáng)止血有效。
48.在受試者中延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)延長(zhǎng)凝血溶解時(shí)間有效。
49.在受試者中增加凝血強(qiáng)度的方法，該方法包含給需要的受試者施用第一量的因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽的制品和第二量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的制品，其中第一和第二量一起對(duì)增加凝血強(qiáng)度有效。
50.根據(jù)權(quán)利要求45至49任一項(xiàng)的方法，其中因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以單個(gè)劑型給藥。
51.根據(jù)權(quán)利要求45至49任一項(xiàng)的方法，其中因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽以含有因子VII或因子VII-相關(guān)性多肽制品的第一劑型和含有因子XI或因子XI相關(guān)性多肽制品的第二劑型的形式給藥。
52.根據(jù)權(quán)利要求51的方法，其中第一劑型和第二劑型以不超過15分鐘的時(shí)間間隔給藥。
53.含有治療出血發(fā)作的試劑盒，包含a)在一個(gè)單位的劑型中的有效量的因子VII或因子VII相關(guān)性多肽和有效量的因子XI或因子XI相關(guān)性多肽和藥用上可接受的載體；和b)含有所述一個(gè)單位的劑型的容器裝置。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有因子VII或因子VII－相關(guān)性多肽和因子XI或因子XI相關(guān)性多肽的組合物，及其用于治療出血發(fā)作的用途。
文檔編號(hào)A61P7/04GK1556710SQ02818539
公開日2004年12月22日 申請(qǐng)日期2002年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月20日
發(fā)明者拉斯馬斯·羅杰克杰爾, 拉斯馬斯 羅杰克杰爾 申請(qǐng)人:諾沃挪第克健康護(hù)理股份公司