專利名稱：抗炎、抗腫瘤和抗血栓形成作用苯并異硒唑衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗炎、抗腫瘤和抗血栓形成作用的苯并異硒唑衍生物及其應(yīng)用。本發(fā)明還涉及包含該苯并異硒唑衍生物的藥物組合物以及該衍生物在制備藥物中的應(yīng)用和治療炎癥、腫瘤或抗血栓形成的方法。
背景技術(shù)：
硒是重要的微量元素之一，流行病學(xué)調(diào)查表明，人體中血硒含量長期低于0.1ppm，有可能引起肝壞死、心肌損傷、癌癥和關(guān)節(jié)炎等眾多疾病。硒作為哺乳動物(包括人類)的生命必需微量元素的地位的確立源于1957年K.Schwarz和C.M.Foltz的硒對動物的營養(yǎng)作用的發(fā)現(xiàn)。.近二十年來，硒在生命科學(xué)領(lǐng)域取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，科學(xué)家們連續(xù)發(fā)現(xiàn)了哺乳動物體內(nèi)的四種硒酶細(xì)胞谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)，磷脂氫過氧化物谷胱甘肽過氧化物酶(PHG-Px)，血漿谷胱甘肽過氧化物酶(P GSH-Px)和I型碘甲狀腺素5’脫碘酶(5’-DI)，以及與某些疾病相關(guān)的硒酶硫氧還蛋白酶等。
硒對生命科學(xué)的重要性，使得含硒藥物或保健功能品成為眾人矚目的焦點(diǎn)。通常無機(jī)硒不易被吸收，生物活性較低，毒性大；有機(jī)硒易被肌體吸收，在血液中維持時(shí)間較長，在體內(nèi)易被轉(zhuǎn)化為有活性的代謝中間產(chǎn)物，生物活性較長，毒性相對較小。
在本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)中，通過人工的方法可以獲得具有谷胱甘肽過氧化酶GSHPx樣活性作用的模擬物。實(shí)驗(yàn)證明苯并異硒唑酮類化合物(Benzisoselenazolones，BISA)能夠抑制體外微粒體脂質(zhì)過氧化作用，具有保護(hù)機(jī)體免受過氧化作用的損傷功能。其中具有以下化學(xué)式的2-苯基-1，2-苯并異硒唑-3(2)-酮(依布硒啉，Ebselen)，是目前公認(rèn)的最有前景的GSH-Px的模擬物，不僅抗氧化活性高，而且毒性極低(LD50＞6810mg/kg mice)，是迄今為止有機(jī)硒類抗氧化劑的最佳代表， 日本第一制藥公司已完成了Ebselen的三期臨床研究。
雖然在利用此母核將其改造成抗腫瘤活性化合物方面有眾多研究，但成功的抗腫瘤活性化合物發(fā)現(xiàn)尚未見報(bào)道。因此，本發(fā)明的目的是在依布硒啉基礎(chǔ)上改造出抗炎性更高、適應(yīng)性更廣、毒性較低的新型有機(jī)硒抗炎藥物和抗血栓藥物；同時(shí)也利用依布硒啉抗氧化母核結(jié)構(gòu)定位改造出具有“生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑”特點(diǎn)的抗腫瘤活性的有機(jī)硒化合物。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)一個(gè)方面，本發(fā)明化合物提供以下通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物及其藥物學(xué)上可接受的鹽
其中R是C1-12亞烷基、亞苯基、亞聯(lián)苯基、亞三苯基、或者-(CH2)SS(CH2)--(CH2)CH(CH3)--(RaO)2Ra--(CH2)(RaO)3Ra--RaN(CH3)2Ra--RaNHRa-RaSSRa-其中Ra是C1-6亞烷基； 其中M是Pt、Pd或Rh，R′是糖殘基或者 其中R″為Cl、H2O、OH、Br、或者I，R為-H、-CH2C6H5OH、-CH2OH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH -CH2(CH2)4NH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3CH、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-(CH2)3CHCH2、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或者-CH2CH2SCH3，以及R″″為-H、-CH2C6H5OH、-CH2OH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH-CH2(CH2)4NH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3CH、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-(CH2)3CHCH2、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或者-CH2CH2SCH3。
根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含上述通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物以及藥物學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
根據(jù)再一個(gè)方面，本發(fā)明提供上述通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽在制備用于抗炎、抗腫瘤或者抗血栓形成的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供在包括人的哺乳動物中治療炎癥、腫瘤或者血栓形成疾病的方法，其包括向需要此等治療的患者給藥治療有效量的上述通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽。
根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供在包括人的哺乳動物中治療炎癥、腫瘤或者血栓形成疾病的方法，其包括向需要此等治療的患者聯(lián)合給藥治療有效量的上述通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽以及其他的抗炎藥或抗腫瘤藥物。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物是在考慮充分保留依布硒啉的活性母核，增強(qiáng)功能基團(tuán)的藥物設(shè)計(jì)思路下，定位設(shè)計(jì)的一系列化合物。由于結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)因而在生物體內(nèi)具有多作用靶點(diǎn)，從而具有多種生物活性。由于此化合物是以生物應(yīng)答器中的調(diào)節(jié)點(diǎn)為靶標(biāo)定向主抗腫瘤藥物，因而在作為抗腫瘤藥物時(shí)具有“生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑”的抗腫瘤特點(diǎn)。是一類新型的具有全面調(diào)節(jié)機(jī)體、多作用靶點(diǎn)的抗腫瘤活性化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，其提供以下通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物及其藥物學(xué)上可接受的鹽
其中R是C1-12亞烷基、亞苯基、亞聯(lián)苯基、亞三苯基、或者-(CH2)SS(CH2)--(CH2)CH(CH3)--(RaO)2Ra--(CH2)(RaO)3Ra--RaN(CH3)2Ra--RaNHRa-RaSSRa-其中Ra是C1-6亞烷基； 其中M是Pt、Pd或Rh；R′是糖殘基或者
其中R″為Cl、H2O、OH、Br、或者I，R為-H、-CH2C6H5OH、-CH2OH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH -CH2(CH2)4NH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3CH、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-(CH2)3CHCH2、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或者-CH2CH2SCH3，以及R″″為-H、-CH2C6H5OH、-CH2OH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH-CH2(CH2)4NH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3CH、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-(CH2)3CHCH2、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或者-CH2CH2SCH3。
在本實(shí)施方案中，R優(yōu)選為C1-4亞烷基、亞苯基、亞聯(lián)苯基，更優(yōu)選為亞丁基和亞聯(lián)苯基。
R′優(yōu)選為1，3，4，6-四-O-乙?；?2-去氧-D-吡喃葡萄糖基。
R和R″″優(yōu)選分別獨(dú)立地為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或-CH2CH2SCH3。
本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法或者在本說明書中記載的方法來合成。例如，在冷卻和惰性氣體氛圍下，使2-硒氯苯甲酰氯與相應(yīng)的二胺類化合物或者氨基糖在合適的有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。然后可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行分離，得到目標(biāo)化合物。
對于其中R或者R′為金屬配合物的本發(fā)明苯并異硒唑衍生物，可用諸如順鉑的有機(jī)金屬化合物作為起始物按照領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行合成。
順鉑本發(fā)明的衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽可以純化合物形式或適宜的藥物組合物進(jìn)行給藥，可采用任何可接受的給藥方式或用于類似用途的試劑進(jìn)行。因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供包含上述通式(I)或(II)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物以及藥物學(xué)上可接受的賦形劑或載體，其可用于抗炎、抗腫瘤以及防止血栓形成的治療。
采用的給藥方式可選擇通過口、鼻內(nèi)、直腸、透皮或注射給藥方式，其形式為固體、半固體、凍干粉或液體藥劑形式給藥，例如，片劑、栓劑、丸劑、軟和硬明膠膠囊劑、散劑、溶液劑、混懸劑或氣霧劑等，優(yōu)選采用適用于精確劑量的簡單給藥的單元劑量形式。組合物可包含常規(guī)藥用載體或賦形劑和作為活性成分(一種或多種)的本發(fā)明的結(jié)合物，此外，還可包含其它藥劑、載體、輔劑等。
通常，根據(jù)所需給藥方式，藥學(xué)上可接受的組合物將包含約1至約99重量％的本發(fā)明結(jié)合物、以及99至1重量％的適宜的藥用賦形劑。優(yōu)選組合物包含約5至75重量％的本發(fā)明結(jié)合物，其余為適宜的藥用賦形劑。
優(yōu)選的給藥途徑是注射給藥，采用常規(guī)日劑量方案，該方案可根據(jù)疾病的嚴(yán)重程度進(jìn)行調(diào)整。本發(fā)明的結(jié)合物或其藥學(xué)上可接受的鹽也可配制成注射用劑，例如使用約0.5至約50％的活性成分分散于可采用液體形式給藥的藥用輔劑中，實(shí)例為水、鹽水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，從而形成溶液劑或混懸劑。
可采用液體形式給藥的藥物組合物例如可通過溶解、分散等手段將本發(fā)明的結(jié)合物(約0.5至約20％)和選擇性存在的藥用輔劑溶解、分散于載體中，載體的實(shí)例為水、鹽水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，從而形成溶液劑或混懸劑。
如果需要的話，本發(fā)明的藥物組合物還可包含少量的輔助物質(zhì)，如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖劑、抗氧化劑等，例如檸檬酸、脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羥基甲苯等。
該類劑型的實(shí)際制備方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的或者顯而易見的，例如可參見Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(MackPublishing Company，Easton，Pennsylvania，1990)。無論如何，按照本發(fā)明的技術(shù)，所使用的組合物將含有治療有效量的本發(fā)明結(jié)合物，以用于治療相應(yīng)的疾病。
根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供在包括人的哺乳動物中治療炎癥以及腫瘤疾病的方法，其包括向需要此等治療的患者給藥治療有效量的上述通式(I)或(II)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽。
根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供在包括人的哺乳動物中治療炎癥、腫瘤或者血栓形成疾病的方法，其包括向需要此等治療的患者聯(lián)合給藥治療有效量的上述通式(I)或(II)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽以及其他的抗炎藥或抗腫瘤藥物。
在本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物與其他抗炎藥、抗腫瘤藥或者抗血栓形成藥物聯(lián)合使用時(shí)，可同時(shí)或者順序地給藥這兩種藥物，包括先給藥本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物，然后再給藥其他的抗炎藥、抗腫瘤藥或抗血栓形成藥物，以及先給藥其他的抗炎藥、抗腫瘤藥或者抗血栓形成藥物，然后再給藥本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述其他的抗腫瘤藥物是阿霉素、順鉑、紫杉醇、卡鉑、氟脲嘧啶、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、雷莫司汀、福莫司汀、絲裂霉素、柔紅霉素、表阿霉素、甲氨喋呤、平陽霉素等，或者是它們的組合。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的其他抗炎藥物是阿司匹林、消炎痛、頭孢菌素類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素等，或者是它們的組合。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的其他抗血栓形成藥物是阿司匹林。
本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物在治療腫瘤疾病時(shí)，其給藥劑量為約0.05-250mg/kg體重；在治療炎癥時(shí)，給藥劑量為約1-100mg/kg體重；而在抗血栓形成時(shí)，給藥劑量為約1-100mg/kg體重。
在與其他的抗炎藥、抗腫瘤藥或者抗血栓形成藥物聯(lián)合使用時(shí)，本發(fā)明的衍生物以及相應(yīng)的其他藥物的給藥劑量都可顯著降低，約為單獨(dú)使用時(shí)的十分之一到二分之一。
以下將通過實(shí)施例更為詳細(xì)地描述本發(fā)明。
實(shí)施例1制備1，2-二{(1，2)-苯并異硒唑-3(2H)-酮}-乙烷(E003)冰浴，N2保護(hù)下，向包含0.14ml乙二胺、1.29ml三乙胺的四氫呋喃中滴加1g的2-硒氯苯甲酰氯于四氫呋喃中的溶液，出現(xiàn)白色沉淀，攪拌3小時(shí)后得淡黃色乳濁液；減壓蒸去溶劑，水洗，抽濾，DMSO重結(jié)晶得0.1g淡黃色固體，產(chǎn)率為11％，m.p＞320℃。
EI-MS(m/z)(m+)424；1HNMR(DMSO-d6)，7.37-7.98(8H，m，ArH)，4.02(4H，S，-CH2CH2-)。
實(shí)施例2制備4，4′-二{(1，2)-苯并異硒唑-3(2H)-酮}-聯(lián)苯(E002)冰浴中，N2保護(hù)下，向包含0.182g聯(lián)苯胺和0.62ml三乙胺的四氫呋喃中滴加0.5g 2-硒氯苯甲酰氯的四氫呋喃溶液，攪拌3小時(shí)，產(chǎn)生大量白色固體，抽濾，用四氫呋喃，乙醇洗滌，DMSO重結(jié)晶，得淺淙色固體0.1g，產(chǎn)率為18.2％，m.p＞320℃。
EI-MS(m/z)(m+)550；1HNMR(DMSO-d6)，7.48-8.12(m，16H，ArH)。
實(shí)施例3制備{2-(1，3，4，6-四-O-乙?；?-2-去氧-D-吡喃葡萄糖基}-1，2苯并異硒唑-3(2H)一酮(E001)在N2保護(hù)下，冰浴中，將730mg的{1，3，4，6-四乙?；?D-氨基葡萄糖溶于氯仿中，加入0.64ml乙胺，電磁攪拌下，緩慢滴入0.551g的2-硒氯苯甲酰氯的氯仿溶液，攪拌2小時(shí)，反應(yīng)液以硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，石油醚乙酸乙酯＝3∶1分離得淡黃色固體200mg，產(chǎn)率為18％，m.p 73-75℃。
IR1745(-CO)；UV(CHCl3)320nm，260nm(示異硒唑環(huán))；FAB-MS(m/z)566.3(M+K)；1H NMRδH(ppm)7.24-8.12(4H，m，ArH)，6.20(IH，d，糖端基H)，3.97-5.64(m，6H，糖環(huán)H)，1.82-2，16(12H，m，-COCH3)；13C NMRδ(ppm)166.77，168.66，169.29，169.61，170.44(-CO)，124.22，126.28，128.81，132.37，138.30(芳環(huán)碳)，91.43，(糖端基碳，C-I)，60.15，61.35，68.35，71.91，72.35，(糖環(huán)碳，C-2，3，4，5，6)，20.34，20.48，20.55，20.78，(-COCH3)。
實(shí)施例4環(huán)己二胺合鉑Ebselen甘氨酸的合成1)KPtCl4的合成0.7g的K2PtCl6(1.44mmol)溶于7ml水中，于80水浴上小心緩慢滴加10％的水合肼溶液，注意攪拌使反應(yīng)充分，待溶液變成深紅色后，過濾除去未反應(yīng)的KPtCl6及副產(chǎn)物鉑黑，濃縮濾液得KPtCl4紅色針狀晶體0.5g，產(chǎn)率約為84％。
2)環(huán)己二胺合鉑的合成0.2g的K2PtCl4(0.48mmol)溶于2ml水中。0.8g的KI溶于0.6g水中，與KPtCl4溶液在沸騰水浴上避光混合，迅速升溫至80，然后在暗處靜置半小時(shí)。向溶液中加入約0.05g環(huán)己二胺固體，生成黃色沉淀，過濾.沉淀以少量冰水，乙醇和乙醚洗滌，干燥后稱重為0.21g產(chǎn)率為78％。
3)甘氨酸依布硒環(huán)己二胺合鉑的合成取0.020g的甘氨酸乙酯依布硒林溶于0.5ml氯仿，再加入1M的氫氧化鈉溶液15ml，在50-60℃下溫育10小時(shí)，將變?yōu)辄S色的水層吸出，另加入1M的氫氧化鈉溶液15ml，令酯的水解充分。合并水層，加1M的鹽酸使之酸化析出，過濾干燥得甘氨酸依布硒林0.025g。
稱取0.015g環(huán)己二胺溶于0.15ml水得黃色糊狀物，稱取0.009g的AgNO溶于0.5ml水中，加入到黃色糊狀物中，避光攪拌4小時(shí)。過濾除去生成的黃色AgI沉淀，用少量冰水洗滌濾餅，取一滴濾液與一滴1M的KCl溶液混合應(yīng)看不到白色混濁.
取0.015g的甘氨酸依布硒林，加0.0036g的KOH和約2ml的水，使之充分溶解得黃色懸浮液，加入到鉑的溶液中，避光攪拌90分鐘，過濾，濾液減壓干燥后得黃色晶體約25mg。產(chǎn)率為50％。FABm/z(M+1)566，遠(yuǎn)紅外IR 340cm-1(示有Pt-O)，IR 420cm-1(示有Pt-N)。
實(shí)施例5藥物對腫瘤細(xì)胞的生長抑制實(shí)驗(yàn)在本實(shí)施例中是采用SRB法來研究藥物對腫瘤細(xì)胞(貼壁細(xì)胞)的生長抑制作用。具體而言，取對數(shù)生長期的細(xì)胞(3-5×104cells/ml)，分別接種于96孔培養(yǎng)板中(180μl/孔)，置于37℃、5％ CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，加入20μl不同濃度的受試化合物，置于37℃、5％CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中再分別繼續(xù)培養(yǎng)所需時(shí)間。細(xì)胞在加藥培養(yǎng)結(jié)束后，棄掉培養(yǎng)液，加入10％三氯醋酸(TCA)100μl并置于4℃冰箱，固定細(xì)胞1小時(shí)。棄液，去離子水沖洗。甩干水后，每孔加入0.4％的SRB溶液(用1％HAC溶液配制)50μl，室溫放置10分鐘。棄掉多余的SRB后，用1％的醋酸溶液沖洗96孔板5遍，去除未與蛋白結(jié)合的SRB。將96孔板甩干后，置于空氣干燥。每孔加入10mmol/L非緩沖Tris堿液(pH10.5)150μl，完全溶解細(xì)胞結(jié)合的SRB。經(jīng)平板搖床搖勻后，在TECANSUNRISE Magellan 96 Well酶標(biāo)儀(USA)的540nm處，測定每個(gè)小孔的OD值。其中，所用的測試孔OD值＝測試孔OD值-本底OD值(即完全培養(yǎng)基加MTT、SRB，無細(xì)胞)。重復(fù)孔的OD值為平均值±SD。然后根據(jù)以下公式計(jì)算細(xì)胞的存活率以及藥物對細(xì)胞增殖的抑制率。
細(xì)胞存活率％＝(加藥細(xì)胞的OD值/對照細(xì)胞的OD值)×100細(xì)胞增殖抑制率％＝[1-(加藥細(xì)胞的OD值/對照細(xì)胞的OD值)]×100根據(jù)以上的SRB法，對本發(fā)明的化合物E003的體外抗腫瘤活性進(jìn)行了初篩，結(jié)果(如表1所示)表明，其對Bel-7402人肝癌、對KB人鼻咽癌和人宮頸癌(HeLa)有抗癌活性。
表1


另外，還根據(jù)相同的方法測定了E003對體外培養(yǎng)的九種人腫瘤細(xì)胞在不同時(shí)間對細(xì)胞生長抑制作用的IC50值，由此評價(jià)E003對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用。所得結(jié)果見表2。
表2E003對體外培養(yǎng)的九種人腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用IC50值IC50值(μmol/L)細(xì)胞名稱24h 48h 72hHL-60 33.03 3.773 0.1467K562 - 8.507 4.24A549 3.920 3.600 2.904Calu-3 45.41 16.77 14.18BGC-82331.92 19.07 12.97Bel-7402 35.23 12.06 7.867Hela 16.78 10.31 9.845MCF-7 **39.88 27.49KB **2.067 ****表示該細(xì)胞的該時(shí)間段的生長抑制IC50值未做；-表示該細(xì)胞株在該時(shí)間段沒有獲得IC50值。
實(shí)施例6藥物對腫瘤重量的影響Lewis肺癌新鮮組織塊，經(jīng)寬縫研磨器研磨后凍存。凍存組織復(fù)蘇后，在C57小鼠皮下接種傳代，然后取接種傳代后長成的腫瘤組織，經(jīng)寬縫研磨器研磨，用生理鹽水制成濃度106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在每只C57小鼠的后背接種0.2-0.3ml。
將已接種腫瘤組織的C57小鼠隨機(jī)分為三組，每組十只；第一組為給藥組，對受試小鼠腹腔注射E003，劑量為50mg/Kg；第二組為陽性對照組，對受試小鼠腹腔注射順鉑(DDP)，劑量為2mg/Kg。第三組為陰性對照組(溶劑組)，腹腔注射0.5％CMC-Na，給藥體積與給藥組相同。
受試小鼠接種腫瘤株后第二天，腹腔注射給藥，連續(xù)給藥三天后，脊椎脫臼處死。受試小鼠經(jīng)70％的酒精消毒后，先對小鼠的腫瘤外形拍照，小心剝離出腫瘤組織，拍照后稱重，再將所得的腫瘤組織置于甲醛固定，作其他分析用。DDP和E003對Lewis肺癌小鼠作用三天時(shí)對動物腫瘤體積影響的結(jié)果見表3。
表3

由表3的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的化合物與順鉑相比具有更加顯著的抗腫瘤作用。
實(shí)施例7本發(fā)明的苯并異硒唑衍生物與其他抗腫瘤藥物的協(xié)同增效作用本實(shí)施例中使用與實(shí)施例4相同的方法測量在實(shí)施例1中制得的化合物E003分別與其他抗腫瘤藥物——紫杉醇、阿霉素和順鉑聯(lián)合給藥時(shí)的協(xié)同作用。E003與其他抗癌藥物的聯(lián)合給藥方式有三種二者同時(shí)給藥；二者先后給藥，此時(shí)的給藥間隔為4.0小時(shí)。
具體的結(jié)果見下表4-6所示。
表4E003與紫三醇聯(lián)合給藥對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用的影響

表5E003與阿霉素聯(lián)合給藥對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用的影響

表6E003與順鉑聯(lián)合給藥對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用的影響

說明(1)藥物代號及其濃度E代表E003，濃度單位為μmol/LA代表阿霉素，濃度單位為mg/LDDP代表順鉑，濃度單位為μmol/LT代表紫杉醇，濃度單位為mg/L(2)給藥方式以E和A為例解釋聯(lián)合給藥方式的符號表示，E+A表示二者同時(shí)給藥；E-A表示給予E后4h，再給予A；A-E表示給予A后4h，再給予E。E和DDP、T聯(lián)合給藥及其表示方式以此類推。
實(shí)施例8本發(fā)明化合物的抗炎作用如下進(jìn)行二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)將昆明小鼠隨機(jī)分組，每組10只，灌胃給藥，陽性對照藥為阿司匹林和消炎痛，陰性為等容積生理鹽水。1小時(shí)后，將二甲苯0.05ml滴于小鼠右耳；2小時(shí)后將小鼠脫臼致死，敲下左右耳片，直徑(8毫米)，稱重。然后根據(jù)所得的耳重量計(jì)算本發(fā)明的化合物E001-E003對二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用。結(jié)果如表7所示。
表7

以上的結(jié)果說明，本發(fā)明的化合物具有優(yōu)于消炎痛和阿司匹林的抗炎活性。
實(shí)施例9本發(fā)明化合物對血栓形成的影響雄性SD大鼠(300-400g)，禁食12小時(shí)后隨機(jī)分為PX組、溶劑對照組(0.25％的CMC)、ASA陽性對照組(0.25％的CMC，并加少量的吐溫80)、以及給藥組(分別給藥本發(fā)明的衍生物E001-003)，每組5只動物。所有的藥物或者溶劑都是通過灌胃給藥，劑量為30mg/kg。給藥1小時(shí)后，用烏拉坦麻醉，手術(shù)分離頸總動脈，測定OT值(刺激條件電流3mA，時(shí)間為180秒)。結(jié)果見以下表8。
表8

與溶劑對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.05。
權(quán)利要求
1.以下通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物及其藥物學(xué)上可接受的鹽 其中R是C1-12亞烷基、亞苯基、亞聯(lián)苯基、亞三苯基、或者-(CH2)SS(CH2)--(CH2)CH(CH3)--(RaO)2Ra--(CH2)(RaO)3Ra--RaN(CH3)2Ra--RaNHRa--RaSSRa-其中Ra是C1-6亞烷基； 其中M是Pt、Pd或Rh，R′是糖殘基或者 其中R″為Cl、H2O、OH、Br、或者I，R為-H、-CH2C6H5OH、-CH2OH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH -CH2(CH2)4NH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3CH、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-(CH2)3CHCH2、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或者-CH2CH2SCH3，以及R″″為-H、-CH2C6H5OH、-CH2OH、-CH2CONH2、-CH2CH2COOH-CH2(CH2)4NH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-(CH2)3CH、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-(CH2)3CHCH2、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、或者-CH2CH2SCH3。
2.如權(quán)利要求1所述的苯并異硒唑衍生物，其中R是C1-12亞烷基。
3.如權(quán)利要求2所述的苯并異硒唑衍生物，其中R是亞丁基。
4.如權(quán)利要求1所述的苯并異硒唑衍生物，其中R是亞苯基或亞聯(lián)苯基。
5.如權(quán)利要求4所述的苯并異硒唑衍生物，其中R是亞聯(lián)苯基。
6.如權(quán)利要求1所述的苯并異硒唑衍生物，其中R′是1，3，4，6-四-O-乙?；?2-去氧-D-吡喃葡萄糖基。
7.如權(quán)利要求1所述的苯并異硒唑衍生物，其中R和R″″分別獨(dú)立地為-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2C6H5、-CH2SH、-CH2CH2SCH3。
8.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物以及藥物學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其還包含其他的抗炎、抗腫瘤或者抗血栓形成藥物。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述的其他抗腫瘤藥物是阿霉素、順鉑、紫杉醇或者它們的組合。
11.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述的其他抗炎藥物是阿司匹林、消炎痛或者它們的組合。
12.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述的其他抗血栓形成藥物是阿司匹林。
13.如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽在制備用于抗炎、抗腫瘤或者抗血栓形成的藥物中的應(yīng)用。
14.在包括人的哺乳動物中治療炎癥、腫瘤或者血栓形成疾病的方法，其包括向需要此等治療的患者給藥治療有效量的如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽。
15.在包括人的哺乳動物中治療炎癥、腫瘤或者血栓形成疾病的方法，其包括向需要此等治療的患者聯(lián)合給藥治療有效量的如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽以及其他的抗炎藥、抗腫瘤或者抗血栓形成藥物。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽是與其他的抗炎藥、抗腫瘤或者抗血栓形成藥物同時(shí)給藥的。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中先給藥如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽，然后再給藥所述的其他抗炎藥、抗腫瘤或者抗血栓形成藥物。
18.如權(quán)利要求15所述的方法，其中先給藥所述的其他抗炎藥、抗腫瘤或者抗血栓形成藥物，然后再給藥如權(quán)利要求1所述的通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽。
19.如權(quán)利要求15-18之一所述的方法，其中所述的其他抗腫瘤藥物是阿霉素、順鉑、紫杉醇或者它們的組合。
20.如權(quán)利要求15-18之一所述的方法，其中所述的其他抗炎藥物是阿司匹林、消炎痛或者它們的組合。
21.如權(quán)利要求15-18之一所述的方法，其中所述的其他抗血栓形成藥物是阿司匹林。
全文摘要
本發(fā)明涉及以下通式(I)、(II)或(III)的苯并異硒唑衍生物及其藥物學(xué)上可接受的鹽。該衍生物可用于抗炎、抗病毒或者抗血栓形成。
文檔編號A61K31/7056GK1511835SQ0215891
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月27日
發(fā)明者曾慧慧 申請人:北京大學(xué)藥學(xué)院