專利名稱：二元酸二(5－雄甾烯－17－酮－3β－羥基)酯用于制備藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二元酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(式I)在制藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
由于生活水平的提高和醫(yī)療保健的不斷進步，人均壽命越來越長，使世界人口老齡化的趨勢越來越明顯。據(jù)中國老年協(xié)會專家指出，我國老年人口迅速增長，1990年以來，我國老年人口以平均每年3.32％的速度增長，到1994年底，全國60歲以上老年人口總數(shù)已達到1.1億，約占人中總數(shù)的9.5％。到本世紀末，我國已成為“老年型”國家，隨著老年人口增加，對老年性疾病的防治問題也越米越突出。因此，研制開發(fā)新的抗衰老及防治常見老年性疾病的新藥，已成為當今醫(yī)藥學界的一個研究熱點。
前列腺增生等是常見的老年性疾病。但是，現(xiàn)有的治療該疾病的藥物普通存在著療效不盡理想、毒副作用大的問題。因此，研究開發(fā)一種治療治療前列腺增生疾病效果好、毒副作用小的藥物，這對保證老年人健康將具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供二元酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯在制備用于治療前列腺增生疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的二元酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯化合物的結(jié)構(gòu)如式I所示(以下簡稱式I化合物)。 式I式I中R’為 或 n＝2～5，n’＝1～4。
即式I化合物依R’基團的不同可分為兩類。一類為二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3 β-羥基)酯(以下篩稱為式IA類化全物)，具體可以是乙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丁二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯或戊二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯；另一類為二元酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(以下簡稱為式IB類化全物)，具體可以是丙二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丁二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、戊二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯或己二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯。
在本發(fā)明中，式I化合物最優(yōu)選的是丁二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(式II)。 式II本發(fā)明經(jīng)實驗證明，式I化合物在治療前列腺增生方面具有顯著的效果，由此可知，以式I化合物作為活性成份制備的藥物，將對前列腺增生具有良好的治療效果。說明式I化合物可用于制備治療前列腺增生病癥的藥物。
實驗還證明式I化合物具有低毒性和高安全性，適宜作為藥物應(yīng)用。
本發(fā)明的式I化合物用于制備藥物，可與普通常規(guī)的藥劑填充劑配合，經(jīng)常規(guī)方法而制得；可根據(jù)需要制成適當?shù)膭┬?，如針劑、輸液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑或栓劑等。以式I化合物為活性成份的藥物，通常以口服方式使用，當然也可以采用其它給藥方式；其每天使用劑量一般為約0.001～1000毫克，成年人常用量為每天0.005～500毫克，最常用劑量為0.01～300毫克；每天一次或分數(shù)次使用。
本發(fā)明中的式IA類化合物可由5-雄甾烯-17-酮-3-磺酸鈉(式III)溶于乙二醇二甲醚中，加入二鹵代烷[二碘(或溴)乙(或丙、丁、戊)烷](式IV)，在相轉(zhuǎn)移劑(四正丁基溴化銨)存在下反應(yīng)而制得。其反應(yīng)過程示意如下R-OSO3Na (式III)+X(CH2)nX (式IV)(C4H9)4NBr↓H2OROSO3(CH2)nOSO3R(式IA)其中X＝I或Br，n＝2～5，R＝C19H27O，式IV中n與式I中的n相同。
本發(fā)明中的式IB類化合物可由3β-羥基-5-雄甾烯-17-酮(式V)與相應(yīng)的二酰氯(即丙、丁、戊或己二酰氯)(式VI)在四氫呋喃∶石油醚(V∶V＝5∶1)中110℃攪拌反應(yīng)制得。其反應(yīng)過程示意如下2R-OH (式V)+XCO(CH2)n’OCX (式VI)四氫呋喃∶石油醚(V∶V＝5∶1)↓110℃，攪拌 (式IB)其中R＝C19H27O，n’＝1～4，X＝Cl，Br。
具體實施例方式
以下通過實例對式I化合物的制備方法作進一步詳細說明制備實例1稱取3.68g 5-雄甾烯-17-酮-3β-磺酸鈉鹽溶于50ml乙二醇二甲醚中，加入1.5g1，2-二碘乙烷及1.6g四正丁基溴化銨，于60℃攪拌回流反應(yīng)4小時，得到的混合物冷卻后用乙醚萃取二次，合并萃取液，用水洗，再用無水硫酸鈉干燥，蒸除溶劑，得到6.1g所需產(chǎn)物乙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯。
若分別用1，3二碘丙烷或1，4二碘丁烷、1，5二碘戊烷化替上述實例1中的1，2二碘乙烷，則最后得到的產(chǎn)物即分別為丙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯或丁二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯或戊二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯。
制備實例2稱取28.8g 3β-羥基5-雄甾烯-17-酮溶于50ml四氫呋喃溶液中，滴加入9.2g己二酰氯，80℃下攪拌反應(yīng)，TLC檢驗反應(yīng)基本完成后，將反應(yīng)混合物傾入冰水中，用乙酸乙酯∶石油醚萃＝1∶1洗滌一次，去除有機相，依次用蒸餾水冼滌，80℃干燥，得式II化合物粗品，用四氫呋喃三次重結(jié)晶得式II化合物純品17.1g。
若分別用丙二酰氯、丁二酰氯或戊二酰氯代替上述實例2中的己二酰氯，則最后得到的產(chǎn)物即分別為丙二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丁二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯或戊二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯。
下列實驗實例將進一步說明本發(fā)明的式I化合物的醫(yī)藥用途及其效果。實驗實例1 急性毒性實驗一、材料實驗樣品式I化合物(8種，式IA類，n＝2，3，4，5；式IB類，n’＝1，2，3，4)，由廣州時珍堂天然產(chǎn)物生理活性研究中心提供，批號分別為19970101，19970102，19970103，19970104，19970105，19970106，19970107，19970108。
實驗動物NIH系小鼠，由廣東省醫(yī)學實驗中心提供，批號1997A029二、方法與結(jié)果八種式I化合物分別按以下方法進行實驗2.1灌胃給予受試物急性毒性實驗選擇健康NIH系小鼠，體重20±2g，20只，雌雄各半，將受試物以0.5％羧甲基纖維素鈉配成20mg/ml懸浮液，對小鼠一次灌胃受試物懸浮液0.8ml/20g體重，連續(xù)觀察七天，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或異常反應(yīng)，限于給藥濃度和體積不能再增大，不能測出其LD50。故進行最大耐受量試驗。選擇健康小鼠20只，雌雄各半，于24小時內(nèi)分3次灌服式I化合物懸浮液(20mg/ml)，每次0.5mg/20g體重，總劑量達1.5g/kg體重，觀察7天，此期間讓小鼠自由進食和飲水，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或異常反應(yīng)。
2.2腹腔注射給予受試物急性毒性實驗選取健康NIH系小鼠，體重20±2g，20只，雌雄各半，受試物以0.5％羧甲基纖維素鈉配成20mg/ml懸浮液，經(jīng)超聲波乳化器及高速攪拌器處理使顆粒細化、均勻，對小鼠一次腹腔注射受試物1.0ml/20g體重，連續(xù)觀察7d，小鼠活動正常、敏捷，毛皮光滑，未引起動物死亡或異常反應(yīng)，限于給受試樣品濃度和體積不能再增大，故進行最大耐受量試驗。
另選擇健康NIH小鼠40只，體重20±2g，雌雄各半，于24h每隔4h受試物(20mg/ml)，每次0.5ml/20g體重，共6次。此后連續(xù)觀察7d，此期間讓小鼠自由進食和飲水。
三、結(jié)論1、小鼠每天灌胃給予式I化合物最大耐受量應(yīng)不小于0.5×3×20×50＝1.5g/kg，按體表面積換算，相當于70kg成年人用量(50mg)的232.7倍(0.5×3×20×387.9÷50)。在最大耐受量試驗給受試樣品后觀察期間，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或異常反應(yīng)。
2、小鼠注射給予式I化合物最大耐受量為不小于3g/kg體重(＝0.5×20×6×50mg)。在最大耐受量試驗給受試樣品后觀察期間，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未引起死亡或異常反應(yīng)。注射給予式I化合物對小鼠最大耐受量，相當于70kg成年人每天用量(10mg)的2327倍(0.5×6×20×387.9÷100)。
3、由此可知，式I化合物屬無毒性級化合物。
實驗實例2 治療前列腺增生作用一、實驗材料丙二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物C)，丁二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物D)，戊二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物E)，己二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)二酯(代號化合物F)，乙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物G)，丙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物H)，丁二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物I)，戊二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯(代號化合物J)；均由本實驗室合成提供使用時用0.5％CMC-Na配成所需濃度液體。去氫異雄甾酮(Prasterone，Pras)，保列治(非那雄胺，默沙東)，美國默沙東藥廠提供。羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，廣州市化學試劑玻璃儀器批發(fā)部進口分裝。
NIH小鼠，廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號2001A044。二、方法與結(jié)果模型制備性成熟雄性小鼠(8周齡，約30g)，每天s.c.注射丙酸睪丸酮5mg/kg，同時進行藥物處理，連續(xù)3周后，剖取前列腺各葉，稱取濕重。另烘干后稱取干重。
生化指標檢測ACP檢測酸性磷酸酶(ACP)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所一分所提供，批號20021010。
1.原理酸性磷酸酶分解磷酸苯二鈉，產(chǎn)生游離酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替吡啉作用經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色醌衍生物，根據(jù)紅色深淺可以測定酶活力的高低。
2.試劑組成與配制(50T)試劑一為緩沖液40ml×1瓶，4℃冷藏保存。
試劑二為基質(zhì)液40ml×1瓶，4℃避光保存。
試劑三為堿液40ml×2瓶，4℃避光保存。
試劑四為顯色劑60ml×2瓶，4℃避光保存。
酚標準貯備液1ml×1瓶，4℃避光保存，濃度為1.1mg/ml。
0.1mg/ml酚標準應(yīng)用液的配制1.1mg/ml的酚標準貯備液∶蒸餾水＝1∶10稀釋。
3.操作a)血清(漿)中ACP的測定

立即混勻，靜置10min，520nm，1cm光徑，空白管調(diào)零，比色測各管吸光度。b)單位定義100ml血.清在37℃與基質(zhì)作用30分鐘產(chǎn)生1mg酚為1個金氏單位。c)計算公式

Zn檢測血.清鋅濃度測定試劑盒，溫州市東鷗生物工程有限公司提供，批號200202052。
1.原理血清去蛋白后，解離的鋅在弱堿性緩沖液中與顯色劑作用生成紫紅色配合物，在558nm波長下比色測定。
2.試劑組成與配制3.

3.操作a)上清液制備b)上清液測定

c)計算公式

實驗結(jié)果如表1，表2所示。
表1前列腺各葉及相關(guān)器官濕重指數(shù)指標

注與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表2血清中Zn濃度和ACP含量指標

注與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001實驗討論分析上述實驗結(jié)果，從表1的前列腺及相關(guān)器官干、濕重指數(shù)指標，可知由于外源激素(丙酸睪丸酮)的作用，模型對照組較正常對照組的前列腺各葉均有明顯增生；連續(xù)給藥30天后，陽性對照藥保列治能明顯抑制該動物模型的前列腺增生，受試樣品也有明顯的抑制前列腺增生的作用(t-test具有統(tǒng)計學意義)。
前列腺含有豐富的酸性磷酸酶，其活性主要存在于腺狀上皮和腺腔內(nèi)的分泌物中。前列腺肥大和前列腺炎患者的血清酸性磷酸酶總活性及前列腺的酸性磷酸酶活性也升高。表2的實驗結(jié)果證明受試樣品能降低血清酸性磷酸酶活性(t-test具有統(tǒng)計學意義)。
前列腺增生的發(fā)生與雙氫睪酮積聚有關(guān)。在某些個體，隨年齡增長，前列腺內(nèi)形成雙氫睪酮的能力增強，發(fā)生雙氫睪酮異常增多，促發(fā)前列腺增生。前列腺增生患者血清雙氫睪酮顯著增高，其濃度與血鋅水平呈正相關(guān)，兩者在前列腺增生發(fā)生中起一定作用。由于Zn2+是維持5α-還原酶活性的重要成分，而此還原途徑是雙氫睪酮生成的主要途徑，所以降低血清Zn2+濃度可能減少雙氫睪酮的產(chǎn)生和積聚，并進而抑制前列腺增生。實驗發(fā)現(xiàn)，樣品在抑制前列腺增生的同時，能顯著降低血清Zn2+濃度(t-test具有統(tǒng)計學意義)，表明受試樣品治療前列腺增生與抑制血清鋅活性有關(guān)(表2)。
權(quán)利要求
1.式I的二元酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯化合物在制備用于治療前列腺增生疾病的藥物中的應(yīng)用 式I式I中R’為 或 n＝2-5，n’＝1-4。
2.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所說的式I化合物為乙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丙二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丁二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、戊二醇二磺酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丙二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、丁二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯、戊二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯或己二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯。
3.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所說的式I化合物為式II所示的丁二酸二(5-雄甾烯-17-酮-3β-羥基)酯 式II
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的二元酸二(5－雄甾烯－17－酮－3β－羥基)酯化合物在制備用于治療前列腺增生疾病的藥物中的應(yīng)用。式I中R’為(a)或b n＝2－5，n’＝1－4。
文檔編號A61K31/5685GK1425377SQ0214975
公開日2003年6月25日 申請日期2002年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月27日
發(fā)明者許東暉, 許實波 申請人:中山大學