專利名稱：金粉蕨素在制備治療或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及金粉蕨素的用途，尤其涉及在制備治療或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
《天然產(chǎn)物研究與開發(fā)》2000年第12期第42-45頁發(fā)表的《栗柄金粉蕨的黃酮成分》文章中和《云南植物研究》1999年第21期第386-392頁發(fā)表的《高山金粉蕨的黃酮類成分》文章中已經(jīng)公開了金粉蕨素，其化學(xué)名稱為7-鼠李糖葡萄糖基-5-羥基-二氫黃酮，結(jié)構(gòu)式為 分子式為C27H32O13，分子量為564，白色針狀結(jié)晶，易溶于二甲亞砜，溶于乙醇，微溶于水，屬黃酮類化合物。
該化合物可由中國蕨科(Sinopteridaceae)金粉蕨屬(Onychiumching)粟柄金粉蕨(Onycium lucidum)植物全草及高山金粉蕨(Onychium japonica)中提取制得。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供金粉蕨素的一種用途，即在制藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及金粉蕨素在制備治療或預(yù)防心血管疾病及具有保護(hù)心血管作用的藥物中的應(yīng)用。
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用金粉蕨素的藥理試驗(yàn)及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的用途。
采用從湖南永州采集的中國蕨科(Sinopteridaccac)金粉蕨屬(Onychium ching)粟柄金粉蕨(Onycium lucidum)植物全草干粉先用工業(yè)酒精浸泡，然后其粗提取物經(jīng)101大孔吸附樹脂柱層析，收集到30％乙醇洗脫部分，再減壓回收溶液后，經(jīng)硅膠層析用氯仿—甲醇梯度洗脫，收集到含10％甲醇之氯仿洗脫部分，最后濃縮即析出金粉蕨素結(jié)晶。結(jié)晶先用少許二甲亞砜(DMSO)溶液溶解后，再用磷酸緩沖液(PBS)稀釋制成制劑產(chǎn)品備用。
經(jīng)初步研究發(fā)現(xiàn)金粉蕨素在異丙腎上腺素誘導(dǎo)SD大鼠心肌缺血模型實(shí)驗(yàn)中，金粉蕨素可以明顯改善心肌缺血狀況，減輕異丙腎上腺素引起的心電圖ST段下降。
在培養(yǎng)的牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，金粉蕨素明顯抑制氧化應(yīng)激引起的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，并有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長作用還能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)釋放利合成一氧化氮(NO)。另外，采用MTT比色法、Westenr Blot法、流式細(xì)胞儀等方法，觀測金粉蕨素對(duì)超氧陰離子損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金粉蕨素對(duì)受傷的內(nèi)皮細(xì)胞具有明顯保護(hù)作用，明顯降低LDH的釋放，增強(qiáng)eNOS活性，增加NO釋放，降低內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。
在培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞，金粉蕨素明顯抑制氧化應(yīng)激(ox-LDL)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖、鈣超載和抑制絲裂素活化蛋白激酶(ERK1/2)活性。
通過家兔離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)溶血性磷脂酰膽堿損傷血管內(nèi)皮依賴的舒張功能具有保護(hù)作用，其作用可被一氧化氮合酶(nitric oxide synthase NOS)抑制劑N-L-A和環(huán)氧酶抑制劑吲哚美辛所阻斷，提示金粉蕨素作用與其保護(hù)血管內(nèi)皮釋放小分子物質(zhì)NO和PGI2有關(guān)。因?yàn)镹O和PGI2是氧自由基和過氧化物的清除劑，推測金粉蕨素應(yīng)具有抗過氧化物的作用。經(jīng)采用溴代苯致小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型，發(fā)現(xiàn)金粉蕨素能降低肝勻漿TBARs含量，具有抗脂質(zhì)過氧化作用。
為觀察金粉蕨素(Onychin)的毒性，首先采用急性毒性實(shí)驗(yàn)方法，以一次大劑量給小白鼠灌胃金粉蕨素，連續(xù)觀察小鼠行為活動(dòng)等指標(biāo)和毒性反應(yīng)程度，并在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死小白鼠進(jìn)行剖檢，以獲得金粉蕨素最初的毒性資料，為評(píng)價(jià)其毒性等級(jí)以及擬訂臨床安全劑量提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察14天，小鼠無明顯行為異常，也未出現(xiàn)死亡，求不出LD50，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的最高劑量640mg/kg及其以下劑量對(duì)小白鼠無明顯毒性作用。故金粉蕨素在臨床和藥理實(shí)驗(yàn)上應(yīng)用是安全的。再通過SD大鼠腹腔注射金粉蕨素每次150mg/kg，每天1次，連續(xù)七天，未見明顯器官毒性，血液學(xué)檢查和骨髓象與溶媒對(duì)照組比較無明顯改變。因此本發(fā)明是一種作用效果明顯，毒副作用小，有一定發(fā)展前景的防治心血管疾病的新藥。
具體實(shí)施例方式
采用從湖南永州采集的中國蕨科(Sinopteridaceae)金粉蕨屬(Onychium ching)粟柄金粉蕨(Onycium lucidum)植物全草干粉先用工業(yè)酒精浸泡，然后其粟柄金粉蕨素的工業(yè)酒精粗提取物經(jīng)101大孔吸附樹脂柱層析，收集到30％乙醇洗脫部分，再減壓回收溶液后，經(jīng)硅膠層析用氯仿一甲醇梯度洗脫，收集到含10％甲醇之氯仿洗脫部分，最后濃縮即析出金粉蕨素結(jié)晶。結(jié)晶先用少許二甲亞砜(DMSO)溶液溶解后，再用磷酸緩沖液(PBS)稀釋制成制劑產(chǎn)品備用。
權(quán)利要求
1.金粉蕨素在制備治療或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及金粉蕨素在制備治療或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。該物質(zhì)可以明顯改善心肌缺血狀況，減輕異丙腎上腺素引起的心電圖ST段下降；可以明顯抑制氧化應(yīng)激引起的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，并有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長作用還能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放和合成一氧化氮；其對(duì)受傷的內(nèi)皮細(xì)胞具有明顯保護(hù)作用，可以明顯降低LDH的釋放，增強(qiáng)cNOS活性，增加NO釋放，降低內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡；可以明顯抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖、鈣超載和抑制絲裂素活化蛋白激酶活性。其對(duì)溶血性磷脂酰膽堿損傷血管內(nèi)皮依賴的舒張功能具有保護(hù)作用。該物質(zhì)在臨床和藥理實(shí)驗(yàn)上應(yīng)用是安全的。本發(fā)明是一種選擇性高、作用效果明顯，具有心血管保護(hù)作用及防治心血管疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1435181SQ02113958
公開日2003年8月13日 申請(qǐng)日期2002年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月31日
發(fā)明者廖端芳, 鄭興, 黃紅林 申請(qǐng)人:南華大學(xué)