專利名稱：鈣拮抗化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新型鈣拮抗(calcilytic)化合物、含有這些化合物的藥物組合物及其作為鈣受體拮抗劑的應用。
在哺乳動物中，細胞外Ca2+處于嚴格的穩(wěn)態(tài)控制之下，并且調(diào)節(jié)各種過程，例如血液凝固、神經(jīng)和肌肉的興奮性和適當?shù)墓切纬?。細胞外Ca2+抑制從甲狀旁腺細胞分泌甲狀旁腺激素(″PTH″)，抑制破骨細胞的骨吸收，并刺激C細胞分泌降鈣素。鈣受體蛋白能夠使某些特化細胞對細胞外Ca2+濃度變化作出應答。
PTH是調(diào)節(jié)血液和細胞外液中Ca2+穩(wěn)態(tài)的主要內(nèi)分泌因子。PTH通過作用于骨和腎細胞，提高了血液中Ca2+的水平。然后，這種細胞外Ca2+的提高作為負反饋信號起作用，抑制PTH的分泌。細胞外Ca2+和PTH分泌之間的互反關系形成維持機體Ca2+穩(wěn)態(tài)的一種重要機制。
細胞外Ca2+直接作用于甲狀旁腺細胞以調(diào)節(jié)PTH的分泌。已經(jīng)證實存在探測細胞外Ca2+變化的甲狀旁腺細胞表面蛋白。參見Brown等，Nature366574,1993。在甲狀旁腺細胞中，該蛋白即所述鈣受體起到細胞外Ca2+受體的作用，探測細胞外Ca2+離子濃度的變化，并引發(fā)功能性細胞應答即PTH分泌。
細胞外Ca2+對各種細胞功能的影響，參見綜述Nemeth等，Cell Calcium11319，1990。例如，細胞外Ca2+在濾泡旁細胞(C細胞)和甲狀旁腺細胞中起作用。參見Nemeth，Cell Calcium 11323，1990。有關細胞外Ca2+對破骨細胞的作用的研究，參見Zaidi，Bioscience Reports 10493，1990。
已知許多化合物可模擬細胞外Ca2+對鈣受體分子的效應。鈣拮抗化合物是能抑制鈣受體活性的化合物，它能降低由細胞外Ca2+誘發(fā)的一種或更多鈣受體活性。在發(fā)現(xiàn)、開發(fā)、設計、修飾和/或構建對Ca2+受體顯示活性的有用鈣調(diào)節(jié)劑的過程中，鈣拮抗化合物(calcilytics)可用作主導分子。這種鈣拮抗化合物可用于治療以一種或更多種成分水平異常為特征的各種疾病狀態(tài)，所述成分例如多肽(例如激素、酶或生長因子)，它們的表達和/或分泌受一種或更多Ca2+受體活性的調(diào)節(jié)或影響。鈣拮抗化合物的靶疾病包括涉及異常骨和礦物質(zhì)穩(wěn)態(tài)的疾病。
異常鈣穩(wěn)態(tài)的特征為一種或更多以下現(xiàn)象血清鈣異常增加或降低；鈣的尿排泄的異常增加或降低；骨鈣水平的異常增加或降低(例如通過骨鹽密度測量來評估)；飲食鈣的異常吸收；影響血清鈣水平的信使(例如PTH和降鈣素)的產(chǎn)生和/或釋放中異常增加或降低；和由影響血清鈣水平的信使所激發(fā)的應答的異常變化。
因此，鈣受體拮抗劑能為異常骨或礦物質(zhì)穩(wěn)態(tài)相關疾病的藥物療法提供一種獨特的方法，所述疾病例如甲狀旁腺機能減退、骨肉瘤、牙周病、骨折愈合、骨關節(jié)炎、類風濕關節(jié)炎、Paget病、與惡性腫瘤和骨折愈合相關的體液性高血鈣癥以及骨質(zhì)疏松。
發(fā)明概述本發(fā)明包括由下式(I)所示的新型鈣受體拮抗劑及其作為鈣受體拮抗劑的應用，用于治療多種與異常骨或礦物質(zhì)穩(wěn)態(tài)相關的疾病，包括但不限于甲狀旁腺功能減退、骨肉瘤、牙周疾病、骨折愈合、骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、Paget病、與惡性腫瘤和骨折愈合相關的體液性高血鈣癥以及骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明還提供了用于在動物(包括人)中拮抗鈣受體的方法，該方法包括將有效量的下式(I)所示化合物給藥有需要的動物。
本發(fā)明還提供了提高動物(包括人)血清甲狀旁腺水平的方法，包將有效量的下式(I)所示化合物給藥有需要的動物。
發(fā)明詳述本發(fā)明化合物選自下式(I)化合物
其中A代表環(huán)I上的含有1或2個N的C或N；D代表環(huán)II上的含有1或2個N的C或N，所述環(huán)II在4或5位上與環(huán)I連接；X選自CN、NO2、Cl、F、和H；當A是C時，Y選自Cl、F、Br、I和H；當D是C時，Q選自H、R1、SO2R1′，R1C(O)OR′、四唑、CH2OH、COH、SO2NR1′R1″、C(O)NR1′R1″、和NR1SO2R1′，其中R1獨立地選自鍵、氫、C1-4烷基和任選取代的烷基，R1′和R1″獨立地選自氫、C1-4烷基，和任選取代的烷基，或者R1′和R1″一起形成3-7元任選取代的雜環(huán)；Ar是苯基或萘基，其是未取代的或取代的，雜芳基或稠雜芳基，此類雜環(huán)可含有N、O或S并可以是芳香的、二氫或四氫的、未取代的或取代的。
本文中的“烷基”是指含有1-20個碳原子并通過碳-碳單鍵連接一起的任選取代的烴基。烷烴基可以是直鏈、支鏈或環(huán)狀的，飽和或不飽和的。優(yōu)選地，可任選取代烷基的取代基選自芳基、CO2R、CO2NHR、OH、OR、CO、NH2、鹵素、CF3、OCF3和NO2，其中R代表H、C1-4烷基、C3-6環(huán)烷基、C2-5鏈烯基、C2-5炔基、雜環(huán)烷基、芳基或芳基C1-4烷基；另外的取代基選自F、Cl、Br、I、N、S和O。優(yōu)選地，不超過三個取代基。更優(yōu)選烷基具有1-12個碳原子并且未被取代。優(yōu)選為直鏈烷基。
除非另有說明，本文中的“環(huán)烷基”是指任選取代的3-7元碳環(huán)，其中任何取代基選自F、Cl、Br、I、N(R4)2、SR4和OR4。
本文中的“芳基”是指任選取代的芳族基團，該基團中至少一個環(huán)具有共軛π電子體系，包含最多二個共軛或稠合的環(huán)體系。芳基包括碳環(huán)芳基和聯(lián)芳基，所有這些基團均可被任選取代。優(yōu)選芳基包括苯基和萘基。更優(yōu)選芳基包括苯基。優(yōu)選的取代基選自鹵素、C1-4烷基、OCF3、CF3、OMe、CN、OSO2R和NO2，其中R代表C1-4烷基或C3-6環(huán)烷基。
本文中的“鏈烯基”是指包含至少一個碳-碳雙鍵并含有連接在一起的至多5個碳原子的任選取代的烴基。該鏈烯基的烴鏈可是直鏈、支鏈或環(huán)狀的。任何取代基均選自鹵素、C1-4烷基、OCF3、CF3、OMe、CN、OSO2R和NO2，其中R代表C1-4烷基或C3-6環(huán)烷基。
本文中的“炔基”是指在所述碳原子之間包含至少一個碳-碳三鍵并含有至多5個連接在一起的碳原子的任選被取代的烴基。該炔烴基可是直鏈、支鏈或環(huán)狀的。任何取代基選自鹵素、C1-4烷基、OCF3、CF3、OMe、CN、OSO2R和NO2，其中R代表C1-4烷基或C3-6環(huán)烷基。
本發(fā)明化合物可含有一種或更多不對稱的碳原子，并可存在外消旋體以及旋光體。所有這些化合物和非對映異構體包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]]-1，1-二甲基2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；和N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺。
在給藥量和濃度狀態(tài)下的藥用鹽為非毒性鹽。
藥用鹽包括酸加成鹽，例如包含硫酸鹽、鹽酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、磷酸鹽、氨基磺酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、環(huán)己基氨基磺酸鹽和奎尼酸鹽。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。藥用鹽可由以下酸獲得，例如鹽酸、馬來酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、醋酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己氨基磺酸、富馬酸和奎尼酸。
當存在酸性官能基團例如羧酸或酚時，藥用鹽也包括堿加成鹽，例如包含芐星青霉素、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺、普魯卡因、鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、銨、烷基胺和鋅。
可采用標準技術制備本發(fā)明提供的上述式(I)化合物。在此部分將對制備上述優(yōu)選化合物的總體方案加以描述。后面的實施例說明了特定化合物的合成。采用在此描述的方法為模式，本領域技術人員均可容易地制得本發(fā)明其他化合物。
所有試劑和溶劑均為市售產(chǎn)品。所用的起始物料采用標準技術和方法合成。
路線1
按路線1所述的通用方法，可合成多種化合物用適當?shù)膲A例如K2CO3，對溶于丙酮中的聯(lián)芳醇溶液加熱處理15分鐘。加入R-縮水甘油基nosylate，反應過夜，得到相應的縮水甘油醚(路線1)。在適當催化劑例如LiClO4存在下，將無水乙醇、乙腈、THP、二氧雜環(huán)己烷或任何其他相似溶劑中的取代縮水甘油醚溶液和過量胺(例如1，1-二甲基-2-(4-甲氧基苯基)乙胺)回流攪拌過夜。
產(chǎn)物通過色譜法純化。用氣體HCl或其4M二氧雜環(huán)己烷溶液，或任何其他標準方法，處理相應的游離堿制得鹽酸鹽。制備聯(lián)芳基酚的方法如路線2和3所示。
于80℃，用硼酸鹽、醋酸鉀和催化劑PdCl2(dppf)處理DMF中的2-氟-4-溴代芐腈溶液。待芳基溴化物消耗后(大約2小時)，反應混合物冷卻至室溫，并用芳香酸、2M碳酸鈉和附加的鈀催化劑處理，然后加熱18小時，得到氟取代的聯(lián)芳基產(chǎn)物。
在18-冠醚-6存在下，用乙腈中的醋酸鉀替換氟，得到相應的酚(參見路線2)?；蛘?，采用在甲苯和2M碳酸鈉混合物中的催化量的四(三苯膦)合鈀，將2-甲氧基-4-溴芐腈與硼酸取代的芳香基羧酸偶合，得到聯(lián)芳基甲醚。對甲醚脫保護(例如用碘化鋰、可力丁)，然后酯化而得到相應的聯(lián)芳基酚(路線3)。
為了使式(I)化合物或其藥用鹽用于人和其他哺乳動物的治療，通?？筛鶕?jù)標準藥學實踐將其制成藥物組合物。
鈣拮抗化合物可通過不同的途徑給藥，包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、口服、局部(經(jīng)皮)或經(jīng)粘膜給藥。對于全身給藥，優(yōu)選口服給藥。對于口服給藥，例如可將化合物制成常規(guī)口服劑型，例如膠囊劑、片劑，和液體制劑，例如糖漿劑、酏劑和濃縮滴劑。
也可采用注射劑(非腸道給藥)，例如肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射。對于注射劑，可優(yōu)選在生理相容的緩沖液或溶液中將本發(fā)明化合物制成液體溶液劑型，所述緩沖液或溶液例如鹽水溶液、Hank溶液或林格液。另外，可將化合物制成固體劑型，在使用前立即再溶解或混懸。也可制成凍干劑型。
全身給藥可通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮的方法。對于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮給藥，在制劑中使用滲透劑有利于穿透屏障。此類滲透劑是本領域公知技術，例如可用于經(jīng)粘膜給藥的膽汁鹽和梭鏈孢酸衍生物。另外，去污劑可用于促進滲透。例如可通過鼻噴霧劑、直腸栓或陰道栓，來實現(xiàn)經(jīng)粘膜給藥。
對于局部給藥，本發(fā)明化合物可制成軟膏、油膏、凝膠、或乳膏，這些也是本領域公知技術。
至于各種鈣拮抗化合物的給藥量，可采用標準方法確定，需要考慮的因素例如化合物的IC50、EC50、化合物的生物學半衰期、病人的年齡、身高和體重，以及與病人有關的疾病或病癥。這些和其他因素的重要性是本領域普通技術人員所熟知的。
給藥劑量也取決于給藥途徑和口服的生物利用度。例如，對于口服生物利用度較低的化合物，需要給藥相對高的劑量。
組合物優(yōu)選為單劑量劑型。例如，對于口服給藥，可給藥片劑或膠囊劑，對于鼻部給藥，可給藥計量氣霧劑，對于經(jīng)皮給藥，可給藥局部制劑或貼劑，對于經(jīng)粘膜給藥，可給藥口腔貼劑。在每個情況下中，劑量為可給藥病人的單劑量。
用于口服給藥的每個劑量單位均適宜地含有0.01-500mg/Kg，和優(yōu)選0.1-50mg/Kg的式(I)化合物或其藥用鹽(按游離堿進行計算)。對于非腸道、鼻腔、口腔吸入、經(jīng)粘膜或經(jīng)皮途徑給藥，每日劑量適宜地含有0.01mg-100mg/Kg的式(I)化合物。局部制劑適宜地含有0.01-5.0％的式(I)化合物。例如，所述活性組分可以每天給藥1-6次、優(yōu)選1次即足以達到所需活性，這對于本領域技術人員而言是顯而易見的。
在本文中，疾病的“治療”包括但不僅限于疾病的治療、延遲和預防。
基于受影響的細胞的可治療或預防的疾病和病癥包括骨和礦物相關的疾病或病癥；甲狀旁腺機能減退；中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病例如癲癇發(fā)作、中風、頭部創(chuàng)傷、脊髓損傷、低氧癥導致的神經(jīng)細胞損傷(例如發(fā)生在心臟停搏或新生兒窘迫癥)、癲癇、神經(jīng)變性的疾病例如Alzheimer病、Huntington病和Parkinson疾病、癡呆、肌緊張、抑郁癥、焦慮、恐慌、紊亂、強迫觀念與行為性障礙、創(chuàng)傷后的精神緊張性障礙、精神分裂癥、精神安定劑誘發(fā)的惡性綜合征和Tourette并發(fā)癥；涉及腎的過度水重吸收疾病，例如不適當?shù)腁DH分泌綜合癥(SIADH)、肝硬化、充血性心力衰竭和腎變??；高血壓；預防和/或減少陽離子抗生素(例如，氨基糖苷類抗生素)的腎毒性；腸能動性疾病例如腹瀉和痙攣性結腸；GI潰瘍疾病；鈣吸收過量的GI疾病例如類肉瘤病；自身免疫疾病和器官移植排異；鱗狀細胞癌；和胰腺炎。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明化合物用于提高血清甲狀旁腺激素(″PTH″)水平。提高血清PTH水平，有助于治療疾病例如甲狀旁腺機能減退、骨肉瘤、牙周疾病、骨折、骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、Paget病、惡性腫瘤的體液性高鈣血癥和骨質(zhì)疏松癥。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明化合物可與抗吸收劑(anti-resorptive agent)共同給藥。該抗吸收劑包括但不限于雌激素、1，25(OH)2維生素D3、降血鈣素、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、玻璃體結合蛋白受體拮抗劑、V-H+-ATPase抑制劑、src SH2拮抗劑、二膦酸鹽和組織蛋白酶K抑制劑。
本發(fā)明另一方面描述了治療病人的方法，包括給藥足以提高病人血清PTH水平量的本發(fā)明化合物。優(yōu)選地，通過給藥有效量的化合物來實施本發(fā)明方法，該劑量可有效地提高具有治療效力的血清PTH水平的持續(xù)時間和/或含量。
在各種實施方案中，給藥病人的化合物可使血清PTH增加的維持時間高達1小時、約1-24小時、約1-12小時、約1-6小時、約1-5小時、約1-4小時，約2-5小時、約2-4小時或約3-6小時。
在本發(fā)明另一可供選擇的實施方案中，給藥患者的所述化合物可使血清PTH增加的維持時間約超過24小時，前提是化合物與抗吸收劑共同給藥。
在本發(fā)明另一不同的方案中，給藥病人的化合物可使血清PTH的持續(xù)時間提高至病人峰值血清PTH水平的2倍、2-5倍、5-10倍和至少10倍。所述血清水平峰值相對于未經(jīng)治療的病人測得。
可將口服給藥時具有活性的式(I)化合物或其藥用鹽的組合物制成糖漿劑、片劑、膠囊劑和錠劑。糖漿劑通常包括化合物或其鹽和調(diào)味劑或著色劑在液體載體中的懸浮液或溶液，所述載體例如乙醇、花生油、橄欖油、甘油或水。當組合物是片劑時，可采用用于制備固體制劑的任何常規(guī)藥物載體。示例性載體包括硬脂酸鎂、白土、滑石粉、明膠、阿拉伯膠、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。當組合物是膠囊劑時，可采用任何常規(guī)包封技術，例如在硬明膠膠囊殼中采用前述載體。組合物是明膠殼軟膠囊時，可將適于制備分散體或混懸劑的任何常規(guī)藥物載體裝入明膠軟膠囊殼中，所述載體例如水性樹膠、纖維素、硅酸鹽或油類。
典型的非腸道組合物包括化合物或其鹽的無菌水性或非水性載體溶液或混懸液，任選含有非腸道可接受的油，例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油。
典型的吸入劑組合物是可以干粉或氣霧劑形式給藥的溶液、混懸液或乳劑，所述氣霧劑可采用例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷為常規(guī)噴射劑。
典型的栓劑包括以該途徑給藥時具有活性的式(I)化合物或其藥用鹽，以及粘合劑和/或潤滑劑，例如聚合乙二醇、明膠、可可脂或其他低熔點的植物蠟或脂肪或其合成的類似物。
典型的皮膚和經(jīng)皮制劑包括常規(guī)水性或非水性載體，例如乳膏、軟膏、洗劑或糊劑，或者是含藥的硬膏劑、貼劑或膜劑。
優(yōu)選組合物是適于單劑量給藥的單位劑型，例如片劑、膠囊劑或計量氣霧劑。
當按照本發(fā)明給藥本發(fā)明化合物時，不應出現(xiàn)不能接受的毒理學效應。
通過下列試驗，證明了式(I)化合物的生物學活性(I)鈣受體抑制劑的測定通過測量試驗化合物在穩(wěn)定表達人鈣受體的HEK293 4.0-7細胞中阻止細胞外Ca2+引發(fā)的胞內(nèi)Ca2+提高的IC50，測定鈣拮抗化合物活性。按Rogers等，J.Bone Miner.Res.10增刊1S483，1995(在此引用作為參考)所述，構建HEK293 4.0-7細胞。通過將細胞外Ca2+從1mM提高到1.75mM，引發(fā)胞內(nèi)Ca2+的增加。用一種熒光鈣指示劑fluo-3測量胞內(nèi)Ca2+。
方法如下1.在5％CO295％空氣、37℃下，將細胞維持在T-150燒瓶中的選擇培養(yǎng)基(DMEM，加有10％胎牛血清和200μg/mL潮霉素B)中，生長高至90％融合。
2.傾去培養(yǎng)基，將細胞單層用保持在37℃的磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)洗滌2次。第二次洗滌后，加入6mL的0-02％EDTA的PBS溶液，于37℃保溫4分鐘。保溫后，通過溫和攪拌使細胞分散。
3.合并2或3瓶細胞并將其沉淀(100×g)。將細胞沉淀再懸浮在10-15mL的SPF-PCB+中，并經(jīng)離心再次沉淀。這種洗滌進行2次。
無硫酸鹽和磷酸鹽的甲狀旁腺細胞緩沖液(SPF-PCB)含有20mM Na-Hepes，pH7.4，126mM NaCl，5mM KCl，和1mM MgCl2。配制SPF-PCB并于4℃貯藏。在使用當天，向SPF-PCB中加入1mg/mL的D-葡萄糖和1mMCaCl2，然后分成兩部分。向一部分中加入5mg/mL牛血清白蛋白(BSA；V部分，ICN)(SPF-PCB+)。該緩沖液用于洗滌、上樣和維持細胞。無BSA部分用來稀釋比色杯中的所述細胞以用于測定熒光。
4.將細胞沉淀再懸浮在含有2.2μM fluo-3(Molecular Probes)的10mLSPF-PCB+中，室溫下保溫35分鐘。
5.保溫后，經(jīng)離心沉淀細胞。將產(chǎn)生的沉淀用SPF-PCB+洗滌。洗滌后將細胞再懸浮在SPF-PCB+中，密度為1-2×106細胞/mL。
6.為了記錄熒光信號，將300uL細胞懸浮液用含有1mM CaCl2和1mg/mL D-葡萄糖的SPF緩沖液(1.2mL)稀釋。于37℃恒定攪拌下，用分光熒光計進行熒光測定。激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為485nm和535nm。為了校正熒光信號，加入洋地黃皂苷(5mg/mL的乙醇溶液)以獲得F最大，通過加入Tris-EGTA(2.5M Tris-Base，0.3M EGTA)測得表觀F最小。用以下公式計算胞內(nèi)鈣的濃度胞內(nèi)鈣＝(F-F最小/F最大)×Kd；其中Kd＝400nM7.為了測定試驗化合物的潛在鈣拮抗活性，將細胞與待試化合物(或作為對照的載體)一起保溫90秒，然后將細胞外Ca2+濃度從1提高至2mM。檢測鈣拮抗化合物阻止細胞外Ca2+引發(fā)的胞內(nèi)Ca2+濃度提高的能力(為濃度依賴性方式)。
一般而言，在鈣受體抑制劑測定中IC50值較低的那些化合物是更優(yōu)選的化合物。IC50值高于50μM的化合物被認為是無活性的。優(yōu)選的化合物是IC50值為10μM或更低的化合物，更優(yōu)選其IC50值為1μM的化合物，最優(yōu)選的化合物的IC50值為0.1μM或更低。
(II)鈣受體結合測定在T180組織培養(yǎng)瓶中，將經(jīng)人甲狀旁腺鈣受體(″HuPCaR″)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK293 4.0-7細胞擴大試驗。通過在含有1μM亮抑酶肽、0.04μM胃蛋白酶抑制劑和1mM PMSF的蛋白酶抑制劑混合物存在下，在緩沖液(50mMTris-HCl pH7.4，1mM EDTA，3mM MgCl2)中通過polytron勻化或玻璃douncing，獲得質(zhì)膜。將等分的膜速凍并于-80℃貯藏。將3H標記的化合物進行放射性標記(放射比活為44 Ci/mmole)等分，貯藏于液氮中供放射化學穩(wěn)定性分析。
典型的反應混合物含有在勻漿緩沖液中的2nM3H化合物((R，R)-N-4′-甲基氧-t-3-3′-甲基-1′-乙基苯基-1-(1-萘基)乙胺)、或3H化合物(R)-N-[2-羥基-3-(3-氯-2-氰基苯氧基)丙基]-1，1-二甲基-2-(4-甲氧苯基)乙胺4-10μg膜，所述緩沖液含有0.1％明膠和10％EtOH，反應體積為0.5mL。在12×75聚乙烯試管中冰水浴下進行保溫。向每個試管中加入25uL待試樣品的100％EtOH溶液，然后加入400uL冷的保溫緩沖液和25uL 40nM3H化合物的100％EtOH溶液，終濃度為2nM。通過加入50uL 80-200μg/mL HEK2934.0-7膜(在保溫緩沖液中稀釋)，啟動結合反應，于4℃保溫30分鐘。洗滌緩沖液為含有0.1％PEI的50mM Tris-HCl。通過加入100倍過量的未標記同源配體測定非特異性結合，一般為總結合的20％。采用1％PEI預處理的GF/C濾器，經(jīng)Brandel Harvestor快速過濾，中止結合反應。將濾器置于閃爍流體中，并通過液體閃爍技術評價放射活性。
實施例采用Bruker AM 250或Bruker AC 400分光計，分別在250或400MHz記錄核磁共振譜。CDCl3為氚氯仿，DMSO-d6為六氘二甲亞砜，和CD3OD為四氘甲醇?；瘜W位移以在離內(nèi)標物四甲基硅烷的低磁場百萬分之幾(即ppm)記錄(●)。NMR數(shù)據(jù)的縮寫如下s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，dd＝雙雙峰，dt＝雙三重峰，app＝表觀的，br＝寬峰。J表示測定的NMR偶合常數(shù)(赫茲)。采用Perkin-Elmer 683紅外光譜儀記錄連續(xù)波長紅外(IR)光譜，采用Nicolet Impact 400 D紅外光譜儀記錄傅立葉變換紅外光譜(FTIR)。以傳輸方式記錄IR和FTIR光譜，以倒數(shù)波數(shù)(cm-1)記錄譜帶位置。使用快速原子轟擊(FAB)或電噴霧(ES)電離技術，在VG 70 FE，PE SyxAPI III或VG ZAB HF儀器上記錄質(zhì)譜。使用Perkin-Elmer 240C元素分析儀進行元素分析。采用Thomas-Hoover熔點儀測定熔點(未校正)。所有溫度為攝氏溫度。
Analtech Silica Gel GF和E.Merck Silica Gel 60 F-254薄層板用于薄層色譜法。在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅膠上進行快速和重力色譜。分析和制備HPLC采用Rainin或Beckman色譜儀進行。ODS是指十八烷基甲硅烷基衍生的硅膠色譜載體。5μ Apex ODS代表標示粒徑5μ的十八烷基甲硅烷基衍生的硅膠色譜載體(Jones Chromatography生產(chǎn)，Littleton，Colorado)。YMC ODS-AQO為ODS色譜載體(YMC有限公司的注冊商標，Kyoto，日本)。PRP-1為苯乙烯-二乙烯苯共聚物色譜載體(Hamilton公司的注冊商標，Reno，Nevada)。Celite是含有經(jīng)酸洗的硅藻土的助濾劑(Manville公司的注冊商標，Denver，Colorado)。
上面描述了通用方法，下面將描述化合物的合成實施例1制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺)a)5-(4-氰基-3-氟-苯基)-煙酸乙酯于80℃，將在DMF中的2-氟-4-溴代芐腈溶液用醋酸鉀、bispinacolatoboronate(1.1當量)和催化劑PdCl2(dppf)加熱處理2小時。反應混合物冷卻至室溫，一起加入4-溴代煙酸(1當量)、新鮮催化劑和2MNa2CO3，所得混合物于80℃攪拌18小時。除去溶劑，剩余物用4N HCl/二氧雜環(huán)己烷在回流乙醇中處理18小時。蒸發(fā)反應物，乙酸乙酯中的剩余物用NaHCO3(水溶液)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥和蒸發(fā)，得到5-(4-氰基-3-氟-苯基)-煙酸乙酯。
b)5-(4-氰基-3-羥基-苯基)-煙酸乙酯將在MeCN中的實施例1a制得的5-(4-氰基-3-氟-苯基)-煙酸乙酯、醋酸鉀(2當量)和18-冠醚-6醚(2當量)混合物回流加熱36小時。冷卻混合物，加入碳酸鈉水溶液并于室溫下攪拌過夜?；旌衔镉靡颐演腿?棄去)。水性層用1N HCl中和，用EtOAc萃取，經(jīng)MgSO4干燥并濃縮。經(jīng)快速柱色譜法純化得到5-(4-氰基-3-羥基-苯基)-煙酸乙酯。
c)5-(4-氰基-3-R-環(huán)氧乙烷基甲氧基-苯基)-煙酸乙酯將在丙酮中的實施例1b制得5-(4-氰基-3-羥基-苯基)-煙酸乙酯(1當量)、碳酸鉀(2當量)和R-縮水甘油基-3-硝基苯磺酸酯(1當量)的混合物回流加熱24小時。冷卻混合物，濃縮，溶于水中，并用乙酸乙酯萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，得到5-(4-氰基-3-R-環(huán)氧乙烷基甲氧基-苯基)-煙酸乙酯。
d)N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例1c制得的5-(4-氰基-3-R-環(huán)氧乙烷基甲氧基-苯基)-煙酸乙酯(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺(1.1當量)混合物回流加熱48小時冷卻?；旌衔铮瑵饪s，溶于水中，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，并用快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺。
實施例2制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例1d得到化合物的溶液中加入2.5N NaOH(水溶液)。所得溶液于室溫下攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水，用2N HCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺二鹽酸鹽。
實施例3制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例1c得到化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時。冷卻混合物，濃縮，溶于水，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，MgSO4干燥，濃縮，并經(jīng)用快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺。
實施例4制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例3的化合物溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)。所得溶液于室溫攪拌18小時。濃縮混合物，溶于水，用2NHCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺。
實施例5制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例1c化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水中，用CH2Cl2萃取，有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺。
實施例6制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例5化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)，并于室溫攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水中，用2N HCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4(甲氧基苯基)乙胺。
實施例7制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺a)6-(4-氰基-3-R-環(huán)氧乙烷基甲氧基-苯基)-吡啶-2-羧酸乙酯用6-溴代吡啶羧酸代替實施例1a的4-溴代煙酸，按實施例1a-c的方法制備6-(4-氰基-3-R-環(huán)氧乙烷基甲氧基-苯基)-吡啶-2-羧酸乙酯。
b)N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例7b化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時。混合物冷卻，濃縮，溶于水中，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，并用快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺。
實施例8制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例7b化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)。所得溶液于室溫攪拌18小時。混合物濃縮，溶于水，用2NHCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺二鹽酸鹽。
實施例9制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例7b化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水中，CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，并用快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺。
實施例10制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺在攪拌下向二氧雜環(huán)己烷中實施例9化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)。所得溶液于室溫攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水中，用2N HCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺。
實施例11制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例7b化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水中，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，并用快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺。
實施例12制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例11化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)。所得溶液于室溫攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水，用2NHCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺。
實施例13制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺a)2-溴-3-甲氧基-吡啶于0℃，將在THF中的2-溴-3-羥基-吡啶(1當量，Aldrich Chemical公司)的溶液用NaH(1當量)處理30分鐘。加入甲基碘(1當量)并攪拌18小時。蒸發(fā)反應混合物，剩余物加入乙酸乙酯中，用5％Na2CO3(水溶液)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥和蒸發(fā)，得到2-溴-3-甲氧基-嘧啶。
b)3-甲氧基-吡啶-2-腈于120℃，將在DMSO中的實施例13a所得2-溴-3-甲氧基-吡啶溶液用NaCN處理18小時。蒸發(fā)反應混合物，剩余物加入乙酸乙酯中，用5％Na2CO3(水溶液)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥和蒸發(fā)，得到3-甲氧基-吡啶-2-腈。
c)6-溴-3-甲氧基-吡啶-2-腈將在CCl4中的實施例13b的3-甲氧基-吡啶-2-腈溶液用N-溴代琥珀酰亞胺(1當量)和催化劑2，2-偶氮二異丁腈處理，并回流加熱18小時。蒸發(fā)反應混合物，剩余物加入乙酸乙酯中，用5％Na2CO3(水溶液)、5％Na2S2O3(水溶液)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥和蒸發(fā)，得到6-溴-3-甲氧基-吡啶-2-腈。
d)4-(6-氰基-5-甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯將在甲苯中的實施例13c所得6-溴-3-甲氧基-吡啶-2-腈溶液用2MNa2CO3(水溶液)、4-羧基苯基硼酸(1當量)、乙醇和催化劑(Ph3P)4Pd)處理，并于80℃加熱18小時。蒸發(fā)反應混合物，剩余物溶于含有在二氧雜環(huán)己烷中4N HCl的乙醇，并回流加熱18小時。蒸發(fā)反應混合物，剩余物加入乙酸乙酯中，用5％Na2CO3(水溶液)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥和蒸發(fā)，得到4-(6-氰基-5-甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯。
e)4-(6-氰基-5-羥基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯將在可力丁中的實施例13d所得4-(6-氰基-5-甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯溶液用LiI處理，并于120℃加熱24小時。蒸發(fā)反應混合物，剩余物加入水中，并用1N HCI中和。收集所得沉淀并干燥，得到4-(6-氰基-5-羥基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯。
f)4-(6-氰基-5-環(huán)氧乙烷基甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯將在丙酮中的實施例13e所得化合物(1當量)、碳酸鉀(2當量)和R-縮水甘油基-3-硝基苯磺酸酯(1當量)的混合物回流加熱24小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水中并用乙酸乙酯萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，和濃縮，得到4-(6-氰基-5-環(huán)氧乙烷基甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲酸乙酯。
g)N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例13f化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水中，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮并用快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺。
實施例14制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例13g化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)，并于室溫攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水，用2N HCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基2-(5-氯代噻吩基)乙胺。
實施例15制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例13e化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺。
實施例16制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷的實施例15所得化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)。所得溶液于室溫攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水中，用2N HCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺。
實施例17制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺將在二氧雜環(huán)己烷中的實施例13e化合物(1當量)、高氯酸鋰(1當量)和1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺(1.1當量)的混合物回流加熱48小時?；旌衔锢鋮s，濃縮，溶于水中，用CH2Cl2萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，經(jīng)快速柱色譜法純化，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4(甲氧基苯基)乙胺。
實施例18制備N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺在攪拌下向在二氧雜環(huán)己烷中的實施例5化合物的溶液中加入2.5NNaOH(水溶液)。所得溶液于室溫攪拌18小時?；旌衔餄饪s，溶于水，用2NHCl酸化至pH＝4，得到N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺。
實施例19非腸道制劑在加熱下將適量式(I)化合物溶于聚乙二醇中，制得供非腸道給藥的藥物組合物。然后，用注射用水將該溶液稀釋(至100ml)。溶液通過0.22微米薄膜濾器過濾滅菌，并熔封于無菌容器中。
本說明書中引用的所有出版物，包括但不限于專利或?qū)＠暾?，均在此引用作為參考，就好象每一出版物均特定和獨立地被引入作為參考?br> 權利要求
1.具有下式(I)結構的化合物或其藥用鹽 其中A代表環(huán)I上的含有1或2個N的C或N；D代表環(huán)II上的含有1或2個N的C或N，所述環(huán)II在4或5位上與環(huán)I連接；X選自CN、NO2、Cl、F、和H；當A是C時，Y選自Cl、F、Br、I和H；當D是C時，Q選自H、R1、SO2R1′，R1C(O)OR′、四唑、CH2OH、COH、SO2NR1′R1″、C(O)NR1′R1″、和NR1SO2R1′，其中R1獨立地選自鍵、氫、C1-4烷基和任選取代的烷基，R1′和R1″獨立地選自氫、C1-4烷基，和任選取代的烷基，或者R1′和R1″一起形成3-7元任選取代的雜環(huán)；Ar是苯基或萘基，其是未取代的或取代的，雜芳基或稠雜芳基，此類雜環(huán)可含有N、O或S并可以是芳香的、二氫或四氫的、未取代的或取代的。
2.權利要求1的化合物，選自N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-乙基羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[5-羧基]-3-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-乙基羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-5-[[3-羧基]-2-吡啶基]苯氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(5-氯代噻吩基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]]-1，1-二甲基-2-(茚滿-2-基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-乙基羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；N-[(2R)-羥基-3-[[2-氰基-4-[[4-羧基]苯基]-3-吡啶基氧基]丙基]]-1，1-二甲基-4-(甲氧基苯基)乙胺；
3.拮抗鈣受體的方法，包括將有效量的權利要求1的化合物給藥有此需要的受治療者。
4.治療以異常骨或礦物質(zhì)體內(nèi)平衡為特征的疾病或病癥的方法，包括將有效量的權利要求1的化合物給藥有此需要的受治療者。
5.權利要求4的方法，其中骨或礦物質(zhì)疾病或病癥選自骨肉瘤、牙周疾病、骨折愈合、骨關節(jié)炎、關節(jié)置換術、類風濕性關節(jié)炎、Paget病、體液性高鈣血癥、惡性腫瘤和骨質(zhì)疏松癥。
6.權利要求5的方法，其中骨或礦物質(zhì)疾病或病癥是骨質(zhì)疏松癥。
7.權利要求6的方法，其中所述化合物與抗吸收劑共同給藥。
8.權利要求7的方法，其中抗再吸收劑選自雌激素、1,25(OH)2維生素D3、降血鈣素、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、玻璃體結合蛋白受體拮抗劑、V-H+-ATPase抑制劑、src SH2拮抗劑、二膦酸鹽和組織蛋白酶K抑制劑。
9.提高血清甲狀旁腺水平的方法，包括將有效量的權利要求1的化合物給藥有此需要的受治療者。
10.權利要求9的方法，其中所述化合物與抗吸收劑共同給藥。
11.權利要求10的方法，其中抗吸收劑選自雌激素、1,25(OH)2維生素D3、降血鈣素、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、玻璃體結合蛋白受體拮抗劑、V-H+-ATPase抑制劑、src SH2拮抗劑、二膦酸鹽和組織蛋白酶K抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了新型鈣拮抗化合物及其應用方法。
文檔編號A61K31/4436GK1582275SQ01813116
公開日2005年2月16日 申請日期2001年7月16日 優(yōu)先權日2000年7月21日
發(fā)明者普拉迪普·K·巴特內(nèi)格, 詹姆斯·F·卡拉漢, 安派羅·M·拉戈 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司