專利名稱：并發(fā)的認(rèn)識(shí)/衰弱疾病的診斷方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用免疫試驗(yàn)法診斷患有病毒狀感染史病人嚴(yán)重衰弱狀況、各種認(rèn)識(shí)疾病，特別是(但不限于)慢性疲勞綜合癥的方法，該診斷方法既不依賴于也不會(huì)受到如用臨床觀察結(jié)果、本發(fā)明之前現(xiàn)有技術(shù)中診斷標(biāo)準(zhǔn)所作曲解的支配。
慢性疲勞綜合癥(CFS)，也稱為MyalgicEncephalitis(ME)，是一種在多個(gè)器官中出現(xiàn)疼痛癥狀的嚴(yán)重衰弱疾病。CFS病人具有以過(guò)多產(chǎn)生淋巴因子和細(xì)胞激動(dòng)素為特征的特定免疫機(jī)能障礙，常常有報(bào)導(dǎo)，由于嚴(yán)重衰弱，病人有自殺意識(shí)和行為。
美國(guó)佐治亞州阿特蘭大疾病控制中心建立了作為CFS病況定義標(biāo)準(zhǔn)(Holmes等人“ChronicFatiqueSyndromeAWorkingCaseDefinition”，在AnnalsofInternalMedicine108387-389(1988)發(fā)表)。目前使用診斷CFS的臨床標(biāo)準(zhǔn)常常證明是不可信的，主觀的和對(duì)其解釋在很大程度上是未確定的。本發(fā)明首次提供生化試驗(yàn)或檢測(cè)和一組以前未試驗(yàn)過(guò)的臨床癥狀的證據(jù)。因?yàn)樵S多疾病可能引起一種或多種典型CFS癥狀，所以有意義的是首次鑒定出與這些臨床癥狀相關(guān)和/或引起這些臨床癥狀(僅一種或多種癥狀)的化學(xué)物質(zhì)。
在本發(fā)明之前，生化試驗(yàn)和其他診斷方法被用于排除CFS的診斷，也就是說(shuō)，是一種由排斥試驗(yàn)診斷的疾病，指出不是那種疾病而是這種疾病。
所描述的是一種新的檢驗(yàn)病人的診斷方法，這種病人在病毒狀感染史后患有識(shí)別損傷和/或嚴(yán)重衰弱合并癥，常常會(huì)臥床不起。在病毒狀發(fā)作(發(fā)熱、咽喉炎、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)痛等)后，該典型病人逐漸會(huì)臥床不起，常常得出完全基于臨床診斷的“慢性疲勞綜合癥”。往往醫(yī)師不能區(qū)分原發(fā)性精神病與基于內(nèi)科的器官疾病。該疾病本身可以首先在腦功能或肌骨骼系統(tǒng)機(jī)能障礙(疲勞)方面予以證明。因此，傳統(tǒng)治療可能涉及大量使用抗抑郁藥和安定藥，而本發(fā)明人在這里指出，可以非常可靠地用新申請(qǐng)的、由受體(IL-2r)技術(shù)檢驗(yàn)稱之白細(xì)胞介素-2(IL-2)的淋巴因子追蹤與度量其衰弱。這里，本發(fā)明人提供了大量新的觀測(cè)結(jié)果，其中包括下述事實(shí)衰弱本身不是由于心理學(xué)痛苦，而至少部分是由于一種新的皰疹毒存在，這種病毒稱之HHV-6，以及淋巴因子IL-2水平不正常。
IL-2是一種與許多副反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞激動(dòng)素，曾發(fā)現(xiàn)其中許多副作用類似于CFS的臨床表現(xiàn)。作為此處使用，術(shù)語(yǔ)肌痛腦炎與慢性疲勞綜合癥是可互換使用的。
IL-2是作為一種免疫系統(tǒng)組成部分運(yùn)行的正常人體成分。如果其量不足，則將其人體置于令人畏懼的致病產(chǎn)物如病毒的危險(xiǎn)之中;如果過(guò)多，則導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不適當(dāng)?shù)臋C(jī)能亢進(jìn)。
在某些情況下，IL-2過(guò)度升高也與智能損傷相關(guān)，而智能損傷的特征在于記憶喪失和進(jìn)行綜合智力功能的能力降低。
一個(gè)健康的、CFS陰性的人每毫升血清至多為約537可溶IL-2受體生物單位，大于537生物單位/ml的量則表現(xiàn)出這里報(bào)導(dǎo)的狀況。本發(fā)明人描述新使用的IL-2受體作為方便可靠的指示劑研究認(rèn)識(shí)機(jī)能障礙與身體機(jī)能障礙之間的相互關(guān)系。IL-2r評(píng)價(jià)法能夠說(shuō)明低ADL指標(biāo)如何有可能潛在洞悉疾病恢復(fù)過(guò)程。
本發(fā)明的方法應(yīng)用于因認(rèn)識(shí)損傷、身體衰弱，或者這兩者(具有相似病因)所顯示的、目前由其他醫(yī)學(xué)命名所確定的其他疾病和病況，并且對(duì)這些衰弱作了解釋。
IL-2水平(其蛋白質(zhì)在人體中半衰弱期很短)升高可以由細(xì)胞靶，即可溶的IL-2受體蛋白質(zhì)升高間接測(cè)定。這些IL-2受體蛋白質(zhì)(IL-2)也可稱之p55(“低親合受體”)和p75(“高親合受體”)物質(zhì)，這兩種物質(zhì)是在本發(fā)明范圍之內(nèi)的。
至今，IL-2r決定的研究效用只限于諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎之類的炎癥，事實(shí)上，食品與藥品管理局認(rèn)識(shí)到僅僅限于(并專門地)稀少類型的稱之“毛狀細(xì)胞白血病”白血病的臨床背景中的診斷效用。
這里，我提供疾病中IL-2r診斷效用的新證據(jù)，所述疾病與同新的人體皰疹病毒(稱之HHV-6)繁殖相結(jié)合的新的反轉(zhuǎn)病毒繁殖相關(guān)的。其生成的臨床疾病可能將極度的認(rèn)識(shí)機(jī)能障礙表現(xiàn)與身體衰弱并合起來(lái)，并且常常有持續(xù)不斷的衰退臨床病程。
因此，本發(fā)明的方法能使臨床醫(yī)師將患有慢性疲勞綜合癥的病人與患有嚴(yán)重生理學(xué)衰弱疾病的病人區(qū)分開(kāi)來(lái)。神經(jīng)心理學(xué)疾病的發(fā)病率是CFS的已認(rèn)識(shí)的特征。根據(jù)疾病控制中心(CDC)的CFS準(zhǔn)則和利用構(gòu)造精神病學(xué)探詢，研究人員報(bào)導(dǎo)CFS病人的抑郁頻率非常高，約一半CFS病人在疲勞綜合癥發(fā)作之前經(jīng)受至少一次重的抑郁發(fā)作。Gold等人發(fā)現(xiàn)，CFS病人的嚴(yán)重抑郁和目前嚴(yán)重抑郁發(fā)作持續(xù)時(shí)間比對(duì)照高得多，分別為73%對(duì)22%，42%對(duì)0%。
根據(jù)引證CFS病人并發(fā)和過(guò)去精神病發(fā)病率比其他醫(yī)療病人要高，一些研究人員認(rèn)為，原來(lái)的CFS精神病理學(xué)導(dǎo)致使用原始精神診療方法和對(duì)精神起顯著作用的藥物，這些方法和藥物在這種情況下常常是不合適的。同樣地，經(jīng)受嚴(yán)重心理學(xué)障礙和疾病的病人常常被誤診(未考慮CFS)，并且采用精神治療方法和對(duì)精神起顯著作用的藥物，而不是用有效治療CFS病人的較合適的治療。
現(xiàn)在描述一種新的方法，通過(guò)確定病人體液中非正常量的可溶IL-2受體，決定與隱伏病毒感染相關(guān)的衰弱器官/醫(yī)療狀況和/或認(rèn)識(shí)紊亂的存在。
首次如用KPS和ADL指標(biāo)定量地對(duì)較高水平的病人衰弱提出一種生化說(shuō)明與解釋(下面將更詳細(xì)地說(shuō)明)。本發(fā)明解釋了體格調(diào)查結(jié)果與臨床觀察結(jié)果的數(shù)目與相對(duì)嚴(yán)重程度，其中包括(但不限于)咽炎，淋巴結(jié)腫大，關(guān)節(jié)炎肌肉疼痛，這些在一組滿足慢性疲勞綜合癥標(biāo)準(zhǔn)典型病人中都可看到。
曾常常懷疑衰弱狀況，以前未知病因?qū)W的疾病在本質(zhì)上是原發(fā)性的精神病。本發(fā)明提供鑒定一小組CFS病人的生化/免疫基礎(chǔ)，這小組病人比他們同類病人衰弱更嚴(yán)重。特別是，升高IL-2r的病人可能嚴(yán)重臥床不起，并且按照日常生活活動(dòng)來(lái)看沒(méi)有照顧自己的能力。這個(gè)特別小組的病人具有以淋巴細(xì)胞過(guò)度活躍為特征的炎癥，這是由于慢性與緩慢地釋放IL-2的緣故，反過(guò)來(lái)，它又引起淋巴細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量的IL-2受體。正是該可溶的IL-2受體最好用酶免疫測(cè)定法評(píng)價(jià)。請(qǐng)見(jiàn)Nelson等人US4707443。因此使用可溶的IL-2受體作為身體對(duì)主要影響免疫系統(tǒng)的致病劑或者反映免疫系統(tǒng)不適當(dāng)?shù)男惺箼C(jī)能，導(dǎo)致在肌肉、關(guān)節(jié)和各種組織中炎癥變化的制劑作出反應(yīng)的標(biāo)記物。
本發(fā)明提供一種觀察由隱伏病毒感染引起的病人嚴(yán)重衰弱的新方法，用“巨細(xì)胞”技術(shù)證實(shí)一種隱伏病毒，或幾種隱伏病毒的存在。然而，巨細(xì)胞的生成(作為病毒感染指標(biāo))，RNaseL升高(作為細(xì)胞對(duì)病毒感染的反應(yīng)指標(biāo))，這些測(cè)量工作勞動(dòng)強(qiáng)度都是很大的，涉及昂貴的試劑，并且要得到在臨床上可作出決定的數(shù)據(jù)則延續(xù)很長(zhǎng)的時(shí)間。
與過(guò)去昂貴、勞動(dòng)強(qiáng)度大并常常觀診斷的技術(shù)相比，對(duì)于歸結(jié)于病人臥床不起狀態(tài)和嚴(yán)重衰弱的水平的許多作用來(lái)說(shuō)，IL-2r方法提供一種簡(jiǎn)單精確且基于免疫學(xué)的測(cè)定。
本發(fā)明部分基于在病人血清中或其他病人樣品中可溶的IL-2受體相對(duì)量的評(píng)價(jià)。一般地它是與病人衰弱的程度相關(guān)的，即可溶IL-2受體的相對(duì)量越高，則衰弱程度也越重，醫(yī)師檢查時(shí)身體調(diào)查結(jié)果發(fā)病也越高。
還發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)RNAse L路徑在基線處升高，并且在基線處升高預(yù)示著病人對(duì)諸如Poly IPoly C12U抗病毒治療應(yīng)有反應(yīng)。
Poly IPoly C12U是一類失配的dsRNAs的代表，其dsRNAs為多肌苷酸鹽與多胞苷酸鹽的配合物，其中含有一定比例的尿嘧啶堿基或胍堿基，其比例如1∶5至1∶30。請(qǐng)見(jiàn)US4130641和14024222。在本發(fā)明人的US專利(序號(hào)No07/421596，1989.10.16申請(qǐng))敘述了在治療慢性大腦機(jī)能障礙時(shí)使用Poly IPoly C12U。
正如在這里所指出的，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一個(gè)簡(jiǎn)單試驗(yàn)，當(dāng)病毒試驗(yàn)與RNAseL試驗(yàn)配合時(shí)，IL-2r測(cè)定提供可比較的洞悉衰弱的基礎(chǔ)，因此能比較有效、比較實(shí)際地作出臨床診斷。
正如這里所敘述的，RNaseL測(cè)量系指2-5A/RNaseL路徑的測(cè)量，其中包括2-5A合成酶，其酶催化生物活性2-5A分子的生成，最終可得到可以破壞病毒RNA物質(zhì)的活性RNaseL酶。
本發(fā)明人還觀察到了，病人的癥狀緊接在病毒類感染之后，本發(fā)明提供基于免疫學(xué)的試驗(yàn)，這種試驗(yàn)尤其用于正患病毒感染的病人，并且確實(shí)這樣一種感染的存在趨于證實(shí)該器官，以區(qū)別于該問(wèn)題的心理學(xué)源。因此，活性病毒條件的存在在這類病人中都是普遍的。
升高的IL-2r水平與降低的KPS或身體狀況指標(biāo)之間高度相關(guān)性是特別有價(jià)值的(下面較詳細(xì)地解釋)。典型地，該病人普遍感覺(jué)不適，感到“壞”，并且身體狀況差。
臨床研究與觀察結(jié)果使用兩個(gè)著重考慮的可靠試驗(yàn)確定病人的狀況與行動(dòng)，使用Karnofsky行動(dòng)指標(biāo)與修改的Barthel日常生活活動(dòng)評(píng)價(jià)病人的狀態(tài)及其生活質(zhì)量。評(píng)價(jià)每個(gè)病人，并給每個(gè)病人確定Karnofsky行動(dòng)指標(biāo)(KPS)，這個(gè)指標(biāo)基于研究者(醫(yī)生)臨床觀察結(jié)果與對(duì)病人或其配偶、同伴或管理人詢問(wèn)結(jié)果，需要所述這些人員按照病人嚴(yán)重慢性衰弱照顧病人日常生活。
KPS是對(duì)病人進(jìn)行日常生活活動(dòng)能力的一個(gè)總的評(píng)價(jià)，并且對(duì)有慢性病狀的病人體質(zhì)很敏感，尤其是病人的機(jī)能體質(zhì)下降，例如與諸如艾滋病、各種瘤之類(6、7、8)的嚴(yán)重衰弱相關(guān)的機(jī)能體質(zhì)。在100-0標(biāo)度上，100是正常健康的個(gè)體，無(wú)疾病無(wú)障礙，0是死亡，在Karnofsky行動(dòng)標(biāo)度上指標(biāo)為50或50以下的這些病人與陽(yáng)性IL-1S發(fā)病率很相關(guān)。
第二，為了幫助研究人員總評(píng)價(jià)，曾用修改的Barthel日常生活活動(dòng)(ADL)指標(biāo)記錄病人或護(hù)理者決定病人在日常生活中通常遇到的，進(jìn)行廣泛特定活動(dòng)的能力。曾設(shè)計(jì)原始ADL試驗(yàn)，在一系列十類或模式的基本自理活動(dòng)方面，如吃飯、穿衣、修飾、個(gè)人上廁所和功能活動(dòng)方面，評(píng)價(jià)患有神經(jīng)肌肉或肌肉骨骼疾病病人獨(dú)自料理的能力與進(jìn)步。所確定的指標(biāo)基于病人進(jìn)行特定活動(dòng)的實(shí)際的，不是可能的能力。
ADL數(shù)據(jù)在數(shù)量上將動(dòng)作狀況與生活質(zhì)量分類。每種方法獨(dú)立地評(píng)價(jià)單個(gè)病人在時(shí)間過(guò)程中的進(jìn)步以及病人間的比較。當(dāng)相關(guān)的評(píng)價(jià)與估計(jì)達(dá)到時(shí)，則KPS與ADL結(jié)果之間存在一種相關(guān)性。KPS反映了與病人自己所估計(jì)的自身活動(dòng)水平不相關(guān)的總行為的估計(jì)，其相關(guān)性反映下述事實(shí)在ADL核對(duì)表(請(qǐng)見(jiàn)下面)上病人的回答在決定他們KPS指標(biāo)方面不是主要因素。
ADL包括13個(gè)獨(dú)立的“模式”，并進(jìn)行因子分析(一種統(tǒng)計(jì)分析的類型)以分析13個(gè)獨(dú)立ADL模式與總的ADL指標(biāo)的相對(duì)影響。ADL指標(biāo)是13種乘以20的指標(biāo)平均值。因?yàn)橛形鍌€(gè)水平動(dòng)作在組成模式之內(nèi)，最大指標(biāo)是100，它反映能完全進(jìn)行83個(gè)分離的日常生活活動(dòng)的無(wú)癥狀個(gè)體。增加10個(gè)單位ADL指標(biāo)反映在每13種活動(dòng)模式中平均增加0.5單位能力。還表示病人獨(dú)立進(jìn)行常見(jiàn)日常生活活動(dòng)的能力很大提高。同樣地，增加15個(gè)單位ADL指標(biāo)，反映病人獨(dú)立行動(dòng)能力再提高50%。
可溶的IL-2R測(cè)定-用酶免疫試驗(yàn)測(cè)量可溶性白細(xì)胞介素-2受體sIL-2r血清濃度。在這種“夾層試驗(yàn)”中，其病人樣品首先用已免疫的anti-IL-2受體單克隆抗體培養(yǎng)。然后，將得到的抗體/sIL-2r配合物與第二種anti-IL-2受體單克隆抗體反應(yīng)，這第二種抗體與辣根過(guò)氧物酶(HRP)結(jié)合。病人血清sIL-2r濃度是用比色法分析HRP活性，將樣品的這種活性與sIL-2r標(biāo)準(zhǔn)曲線比較而測(cè)定的，由生產(chǎn)者分析50個(gè)健康供血者(CFS陰性)的樣品得到標(biāo)準(zhǔn)平均值為573生物單位/ml，其標(biāo)準(zhǔn)偏差為173單位/ml。
在基線，在這種隨機(jī)取樣的研究工作中，91個(gè)CSF病人中，有28個(gè)(31%)病人血清的sIL-2r水平升高。此外，22個(gè)病人的sIL-2r水平高于正常水平2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差(即高于919單位/ml)。正如表1所示，有較高水平sIL-2r的病人(離平均值＞1S.D＝＞746單位/ml;離平均值＞2S.D＝＞919單位/ml)與正常水平sIL-2r病人相比在基線處有較低ADL指標(biāo)。
與升高的可溶IL-2受體(sIL-2r)相關(guān)的炎癥病態(tài)包括多肌炎、全身性硬皮病、Bhoet病、硬皮病、全身性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥的HIV病。
第一次用資料證明，在大多數(shù)受治療者(約69%)存在一種新的人體病毒，HHV-6，并且表明病毒存在的量與臨床衰弱量或水平相關(guān)，其后我指出，病毒，連同細(xì)胞激動(dòng)素水平不正常都是與不正常細(xì)胞2-5A/RNAseL路徑響應(yīng)相關(guān)。此后也稱之“細(xì)胞內(nèi)免疫”，以便將細(xì)胞內(nèi)免疫與較常見(jiàn)的(即細(xì)胞外)免疫區(qū)分開(kāi)來(lái)，較常見(jiàn)的免疫如由T細(xì)胞(胸腺細(xì)胞)、B細(xì)胞(骨髓免疫細(xì)胞)或較特殊免疫細(xì)胞，例如NK或所謂的天然殺傷細(xì)胞傳送的。
病毒學(xué)因子-人體皰疹病毒(HHV)感染與免疫機(jī)能障礙狀態(tài)有關(guān)，其中包括與人體免疫缺乏病毒(HIV)病，器官移植后的狀態(tài)的ME相關(guān)的那些免疫機(jī)能障礙狀態(tài)。在基線使用對(duì)于每個(gè)待試驗(yàn)皰疹類抗病人外周血細(xì)胞有特異性的單克隆抗體在研究群體中測(cè)定了HHV感染發(fā)病率。而外周血細(xì)胞首先須短期培養(yǎng)生長(zhǎng)。正如表1所示，最常見(jiàn)的HHV感染是HHV-6，在基線69%病人中探測(cè)出HHV-6。
表2在基線培養(yǎng)的外周單核血細(xì)胞Herpesviridae感染發(fā)病率HHV-6CMVEBVHSV待試驗(yàn)的39393921陽(yáng)性27301%陽(yáng)性69.23%7.69%0%4.76%下一個(gè)最常見(jiàn)的是所看到的CMV，約為研究病人的8%。Krueger和Ablashi教授曾指出，在臨床復(fù)發(fā)中，SLE病人的HHV-6再活化發(fā)病率高(個(gè)人傳染)。在本研究中，利用特異性單克隆抗體與短期培養(yǎng)后的病人外周單核血細(xì)胞(PBMCs)反應(yīng)鑒定HHV-6感染。在受治療者應(yīng)用中，表達(dá)其他HHV成員少得多。
HHV-6反應(yīng)與較低KPS指標(biāo)相關(guān)。正如表2中所示，表現(xiàn)HHV-6(n＝25)的病人于基線KPS(P＝0.009)比未表現(xiàn)HHV-6(n＝12)的病人要低得多，這一點(diǎn)與Kruyer等人的觀察結(jié)果是一致的，即HHV-6再活化可以共同導(dǎo)致某些免疫疾病臨床加重。
表3病人HHV-6為陽(yáng)性的于基線較低KPS指標(biāo)HHV-6n平均值中間值±SD陰性1255.058.0±6.7陽(yáng)性2746.950.0±9.1巨細(xì)胞的生成-病人血清或外周單核細(xì)胞(PMBC)在短期培養(yǎng)中產(chǎn)生巨細(xì)胞的能力，反映出在慢性疲勞綜合癥或ME病人中持續(xù)的病毒再活化。據(jù)報(bào)道巨細(xì)胞含淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或混合的合胞體。在許多ME病人中，巨細(xì)胞常常隨單克隆抗體沾染到HHV-6，還曾報(bào)導(dǎo)在ME中新的HTLV相關(guān)的反轉(zhuǎn)病毒序列。反轉(zhuǎn)病毒也常常與巨細(xì)胞或合胞體生成相關(guān)，并且近來(lái)已從ME病人血清或體液中，而不是從相比較的正常對(duì)照個(gè)體中分離出來(lái)。在所報(bào)導(dǎo)的方案中，在方案登錄之前和研究中止時(shí)，在隱蔽的條件下進(jìn)行過(guò)巨細(xì)胞生成的“巢”研究。
在含地塞米松和白細(xì)胞介素-2的培養(yǎng)基中，用1.8×106制備的PBMC′s(由正常的志愿者得到，并用植物血細(xì)胞凝集素(PHA)和白細(xì)胞介素-2培養(yǎng)48小時(shí)得到)培養(yǎng)數(shù)等份病人血清(0.2ml)達(dá)14-16天。在完成二星期培養(yǎng)后，隨機(jī)選擇八個(gè)不同的地方用顯微鏡(放大倍數(shù)200X)方法研究巨細(xì)胞的存在。巨細(xì)胞直徑確定為至少30微米，利用在中止研究時(shí)得到的由血清產(chǎn)生的巨細(xì)胞數(shù)目相對(duì)于由預(yù)研究基線血清得到的數(shù)目，可決定相應(yīng)研究治療對(duì)巨細(xì)胞生成的相對(duì)效果。
在隱蔽基礎(chǔ)上，對(duì)在基線和24星期生成巨大細(xì)胞的能力分析過(guò)五十八個(gè)病人的血清。在基線，由poly Ipoly C12U(PIPCU)病人(表4)培養(yǎng)的巨細(xì)胞平均數(shù)稍高于由安慰劑病人得到的數(shù)目。
表4在體外培養(yǎng)之后生成的巨細(xì)胞平均數(shù)nPI:PCUn安慰劑基線(±S.D.)1815.11169.50±11.9±9.324星期(±S.D.)185.06167.44±7.1±10.0變化-10.06-2.06在24個(gè)治療星期之后，poly Ipoly C12U病人生成的巨細(xì)胞較安慰劑病人要低，十八個(gè)poly Ipoly C12U病人中有16個(gè)(89%)在24個(gè)治療星期(P＝0.003)之后產(chǎn)生巨細(xì)胞較少，而十六個(gè)安慰劑病人中只有十個(gè)(62%，P＝0.535)產(chǎn)生較少的巨細(xì)胞。
因此，九個(gè)產(chǎn)生基線巨細(xì)胞的poly Ipoly C12U病人在24個(gè)處理星期后轉(zhuǎn)化成陰性，而安慰劑病人僅4個(gè)轉(zhuǎn)化成陰性這些數(shù)據(jù)證明，相對(duì)于基線的安慰劑來(lái)說(shuō)，poly Ipoly C12U處理降低了由ME病人生成的巨細(xì)胞數(shù)目。
在KPS變化與24星期poly Ipoly C12U處理期間，巨細(xì)胞生成趨勢(shì)之間有一種相關(guān)性，這種負(fù)相關(guān)性證明，接受poly Ipoly C12U的病人經(jīng)受動(dòng)作狀態(tài)方面的增加，同時(shí)巨細(xì)胞生成降低。
在臨床試驗(yàn)時(shí)進(jìn)行的體外研究表明，poly Ipoly C12U能有效地阻斷有能生成巨細(xì)胞病人生成巨細(xì)胞。
表5由poly Ipoly C12U體外抑制ME病人巨細(xì)胞的生成平均值學(xué)生t實(shí)驗(yàn)沒(méi)有PI:PCU12.93有PI:PCU0.207表6poly I:poly C12U 抑制巨細(xì)胞的生成降低無(wú)變化增加Wilcoxon 試驗(yàn)1211P=0.0052
RNase-L是一種潛在的核糖核酸酶，它由2′-5′A低聚物活化，并在刺激2-5A/RNase-L路徑的淋巴因子/病毒中代替末端酶促階段。RNasa-L水平作為較寬方案中的部分巢研究測(cè)量過(guò)。曾分析七十六個(gè)病在基線與24個(gè)處理星期后的RNase-L活性。
PMBC′c中末端2-5A路徑介體描述如下制備PBMC提取物。用Eicoll-Hypaque離心法從乙肝素化的全血中分離外圍單核血細(xì)胞，并在NP40溶解緩沖液中制備PBMC提取物[Suhadolinik等人，Biochemistry22，4153-4158(1983)。提取物中蛋白濃度為10-15μg/μl。
細(xì)胞培養(yǎng)-將L929和HL9929(L929的RNaseL-缺失亞克隆)細(xì)胞保持在補(bǔ)充牛血清的Dulbcco改性的Eagle培養(yǎng)基中單層培養(yǎng)[Suhadolinik等人，Biochemistry27，8840-8848(1988)]。由使用中未使用老鼠纖維細(xì)胞干擾素處理的融合培養(yǎng)基制備細(xì)胞提取物(200單位/ml，20h)，并用作RNaseL源。在甘油緩沖液中制備了胞質(zhì)提取物[Wrescher等人，Nature289，414-417(1981)]。
活化的RNaseL-RNaseL(EC3.1.17)是2-5A的確作用物靶，也是2-5A合成酶/RNaseL路經(jīng)的末端酶，核糖體RNA(rRNA)劈裂試驗(yàn)是2-5A的特異性功能試驗(yàn)，并用于測(cè)定有關(guān)研究的PBMC提取物中活化的RNaseL水平。該試驗(yàn)基于下述觀察結(jié)果活化2-5A后，RNaseL將rRNA降解到非常專一的特征性的劈裂產(chǎn)物(SCP)。
制備出HL929細(xì)胞(根據(jù)布達(dá)佩斯條約在美國(guó)馬里蘭RockrilleAmericanTypeCultureCollection于1988.3.10寄存，寄存號(hào)ATCCCRL9659)得取物，并且在無(wú)2-5A情況下用PBMC提取物于30℃培養(yǎng)1小時(shí)。提取總RNA，變性并用1.8%瓊脂糖凝膠電泳分析。極少的凝膠帶有溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶嗡，并且在紫外光下觀看RNA帶。根據(jù)專一劈裂產(chǎn)物(SCP)測(cè)定RNaseL活性，在通過(guò)凝膠照片光密度測(cè)量進(jìn)行定量(以18S和28ArRNA×100除sep生成比表示)。
表7表明，按照SCL-90-R試驗(yàn)中的認(rèn)識(shí)試驗(yàn)測(cè)定，在RNase-L的基線水平與poly Ipoly C12U病人中臨床改善之間存在一重要的預(yù)后的相互關(guān)系。此外，正如表8的9所示，在基線升高RNase水平的病人中RNase-L降低與某些測(cè)量到poly Ipoly C12U的結(jié)果(即ADL改善，認(rèn)識(shí)的改善或ME癥狀緩和)之間有很大的相關(guān)性。表8表示RNase-L≥1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差升高的病人，而表9表示在基線＞2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差升高的病人的結(jié)果。
這些結(jié)果表明，RNase-L水平表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化共同遵循某些臨床改善的參數(shù)，盡管其相關(guān)系數(shù)表明相關(guān)的RNase-L水平在表觀上不是反應(yīng)的主要決定因子。
表7基線RNase-L與臨床反應(yīng)之間的相互關(guān)系
表8RNase-L變化(升高1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差的病人)與臨床反應(yīng)之間的關(guān)系
表9RNase-L變化(升高2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差的病人)與臨床反應(yīng)之間的關(guān)系
已報(bào)導(dǎo)涉及CFS的新反轉(zhuǎn)病毒和皰疹病毒(包括HHV-6)這兩者都是親淋巴性的，并因此可能造成淋巴細(xì)胞相對(duì)減少，如Lloyd等人所敘述(Amer.J.Med.89561-568(1991))。
在基線RNase-L水平與第24星期絕對(duì)淋巴細(xì)胞數(shù)增加之間有重要的關(guān)系，其淋巴細(xì)胞數(shù)增加是與接受poly Ipoly C12U的病人基線比較的，而不是與接受安慰劑的病人比較的。
此外，在基線升高的RNase-L活性且又接受poly Ipoly C12U的病人表明，與在基線沒(méi)有升高RNase-L活性的病人相比，在百分淋巴細(xì)胞數(shù)與絕對(duì)淋巴細(xì)胞數(shù)兩者都有很大的增加。這些結(jié)果與其觀察結(jié)果是一致的，表明與安慰劑組比較，在poly Ipoly C12U處理組于第24星期的淋巴細(xì)胞水平是高得多的。
病毒抗原的免疫螢光分析按下述步驟進(jìn)行如對(duì)巨細(xì)胞生成試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，處理由病人得到的PBMC。PBMC在含植物血細(xì)胞凝集素和白細(xì)胞介素-2(L-2)培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時(shí)，接著在含地塞米松和IL-2的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在14天培養(yǎng)期結(jié)束時(shí)，取一份細(xì)胞離心并懸浮于含50%熱失活胎兒排腸血清的緩慢組織培養(yǎng)基中。將其細(xì)胞轉(zhuǎn)移到顯微鏡載物片上，任其空氣干燥，并用甲醇/丙酮固定。然后，其細(xì)胞用一種anti-HHV-6抗體(NNBHAR1-5;Dr.D.V.Ablashi，NIH)，三種anti-EBV抗體(NewEnglandNuclear，Boston，MA;Cat.No.NEA-9240，NEA-9248，NEA-9247)二種anti-CMB抗體(NewEnglandNuclear，Boston，MA;Cat.No.NEA9221和NEA-9220)或一種含并的anti-HSV1和anti-SHV-2抗體(NewEnglandNuclear，Boston，MA;Cat.No.NEA9259)獨(dú)自培養(yǎng)。其細(xì)胞再用山羊抗鼠異硫氰酸鹽熒光素共軛的抗體(NewEnglandNuclear，Boston，MAM;Cat.No.NEI-524)培養(yǎng)，用熒光顯微鏡探測(cè)免疫熒光。
在24星期時(shí)間里的臨床研究表明在癥狀持續(xù)時(shí)間與病人性別之間沒(méi)有相關(guān)性，無(wú)論病人狀況嚴(yán)重程度如何都如此。衰弱的水平(嚴(yán)重程度)與病人患病的持續(xù)時(shí)間無(wú)關(guān)，相反地，它與IL-2受體水平相關(guān)。IL-2受體評(píng)價(jià)能深刻了解由其他分析不能得到的醫(yī)療衰弱程度。KPS和ADL的變化與實(shí)施工作持續(xù)時(shí)間的所治療病人中VO2max的變化非常相關(guān)。
正如Pearson相關(guān)系數(shù)以及Spearman相關(guān)系數(shù)兩種所表明的，基線處CFS/ME癥狀的持續(xù)時(shí)間與基線處KPS或KPS改善是不相關(guān)的。同樣地，如表10的11所示，基線ADL和ADL改善與CFS/ME癥狀的在先待續(xù)時(shí)間不相關(guān)。因此，用基線處的CDC癥狀持續(xù)時(shí)間作協(xié)變式的ANOVA分析表明，癥狀持續(xù)時(shí)間對(duì)KPS或ADL變化都沒(méi)有很大的影響。ANOVA分析還表明，反應(yīng)的主要效應(yīng)物是poly Ipoly C12U劑量，它是KPS的ADL變化重要效應(yīng)物。
表10基線KPS和基線處CFS癥狀持續(xù)時(shí)間無(wú)相關(guān)性Pearson's相關(guān)系數(shù)-0.0096p=0.928Spearman's相關(guān)系數(shù)0.1133p=0.282KPS變化(1)和基線處CFS/ME癥狀持續(xù)時(shí)間無(wú)相關(guān)性Pearson's相關(guān)系數(shù)全部-0.1326p=0.208PI:PCU(2)-0.1290 p=0.398安慰劑-0.0203p=0.892Spearman's相關(guān)系數(shù)全部-0.0540p=0.609PI:PCU-0.0017p=0.991安慰劑-0.0740p=0.621基線ADL和基線處CFS/ME癥狀持續(xù)時(shí)間無(wú)相關(guān)性Pearson's相關(guān)系數(shù)-0.0891p=0.398Spearman's相關(guān)系數(shù)-0.0521p=0.622KPS變化(1)和基線處CFS/ME癥狀持續(xù)時(shí)間無(wú)相關(guān)性Pearson's相關(guān)系數(shù)全部-0.0166p=0.875PI:PCU(2)-0.0252 p=0.869安慰劑-0.0849p=0.571Spearman's相關(guān)系數(shù)全部-0.0754p=0.475PI:PCU-0.0384p=0.802安慰劑-0.0574p=0.701注(1)與基線相比24個(gè)星期(2)PIPCU＝poly Ipoly C12U
CFS癥狀影響由KPS評(píng)價(jià)的總動(dòng)作狀態(tài)與由ADL評(píng)價(jià)的獨(dú)立行動(dòng)的能力。未治療病人的認(rèn)識(shí)能力降低，如得不到合適治療則會(huì)繼續(xù)降低，認(rèn)識(shí)能力由SCL-90-R自評(píng)價(jià)儀器測(cè)量，其儀器中10項(xiàng)直接與功能相聯(lián)系的CFS有關(guān)系。病人反應(yīng)的SCL-90-R自評(píng)價(jià)試驗(yàn)表明在8個(gè)星期觀察期由每個(gè)癥狀引起減弱的相對(duì)量。每項(xiàng)用單一刻度0、1、2、3和4標(biāo)度，其4表明極端減弱，曾報(bào)導(dǎo)治療病人癥狀減弱和認(rèn)識(shí)能力提高，這與觀察到病人總的行動(dòng)狀況(KPS)改善，和獨(dú)自完成通常遇到的各種作業(yè)的能力(ADL)相關(guān)。
按照臨床研究人員對(duì)病人KPS測(cè)量評(píng)價(jià)病人動(dòng)作，并且盡管由不同小組測(cè)量(由臨床研究人員測(cè)量KPS，由病人或一些其他人員測(cè)量ADL)，但發(fā)現(xiàn)在研究記錄中病人動(dòng)作狀態(tài)ADL的KPS值是相關(guān)的。再者，在用poly Ipoly C12U處理期間，KPS改善與ADL指標(biāo)提高相關(guān)。有很高比例(P＝0.05)已治療的病人隨著增加10個(gè)或10個(gè)以KPS單位而伴隨增加15個(gè)或15個(gè)以上ADL單位。
權(quán)利要求
1.一種診斷病人并發(fā)神經(jīng)認(rèn)識(shí)/身體衰弱疾病的方法，其中包括測(cè)定病人生物樣品中可溶IL-2受體的量，而其量升高是并發(fā)認(rèn)識(shí)/衰弱疾病的征兆。
2.一種區(qū)分病人心理學(xué)疾病與主要器官或內(nèi)科疾病的方法，其病人按照修改的Barthel日常生活活動(dòng)指標(biāo)評(píng)價(jià)進(jìn)行日常生活活動(dòng)能力低，有慢性衰弱或兼有兩者，其方法包括確定病人生物樣品中可溶IL-2受體量，其量增加表明原發(fā)性心理學(xué)疾病不是衰弱的認(rèn)識(shí)功能相對(duì)損失的主要原因。
3.一種診斷患有病毒感染病人并發(fā)神經(jīng)認(rèn)識(shí)/身體衰弱疾病的方法，所述方法包括測(cè)定病人生物樣品中可溶IL-2受體的量，其受體的量不正常，升高是并發(fā)認(rèn)識(shí)/衰弱疾病的征兆。
4.按照權(quán)利要求1、2或3所述的方法，其中可溶IL-2受體的量與病人衰弱程度相關(guān)。
5.按照權(quán)利要求3所述的方法，其中病人患有反轉(zhuǎn)病毒感染。
6.按照權(quán)利要求3所述的方法，其中病人患有人體皰疹病毒感染。
7.按照權(quán)利要求3所述的方法，其中病人患有反轉(zhuǎn)病毒感染與人體皰疹病毒感染。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的方法，其中人體皰疹病毒是HHV-6。
9.按照權(quán)利要求3所述的方法，其中病人病毒感染的證據(jù)在于在病人生物樣品中有巨細(xì)胞。
10.按照權(quán)利要求3或9所述的方法，其中病人在其生物樣品中顯示升高的RNase-L水平。
11.一種診斷在單個(gè)病人同時(shí)并存多樣病毒的細(xì)胞作用的方法，其中包括確定病人生物樣品可溶IL-2受體的量，升高的量表明所述病人中多樣病毒共存。
12.一種確定病人中細(xì)胞激動(dòng)素、淋巴因子或其兩者增加的臨床意義的方法，病人有一種或多種病毒以不正常水平存在，或者一種或多種病毒以不正常速率增加，該方法包括確定病人生物樣品中可溶IL-2受體的量，升高的量表明所述病人中多樣病毒共存。
13.按照權(quán)利要求11或12的方法，其中該病毒是反轉(zhuǎn)病毒、人體皰疹病毒或其兩者。
14.按照權(quán)利要求13所述的方法，其中人體皰疹病毒是HHV-6。
15.對(duì)于按照修改的Barthel日常活動(dòng)指標(biāo)評(píng)價(jià)進(jìn)行日常生活活動(dòng)能力低或有慢性衰弱，或兼有兩者的病人來(lái)說(shuō)，一種在所述病人中提供幾種病毒增加的生物總和的方法，其中包括確定在病人生物樣品中可溶IL-2受體的量，其受體升高的量是所說(shuō)一種或多種狀態(tài)的征兆。
全文摘要
利用可溶白細(xì)胞介素-2受體的存在，一種白細(xì)胞介素-2存在的指示劑作診斷衰弱、昏睡、智力敏度損失、整個(gè)行動(dòng)減弱。一般無(wú)能力照料自己，和診斷慢性疲勞綜合癥的存在與將這些狀態(tài)與心理學(xué)疾病區(qū)別的標(biāo)志。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK1078555SQ9310172
公開(kāi)日1993年11月17日 申請(qǐng)日期1993年1月9日 優(yōu)先權(quán)日1992年1月10日
發(fā)明者W·卡特 申請(qǐng)人:亨姆藥品公司