專利名稱:一種強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能的配合飼料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種飼料，涉及一種新型的功能性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料，具體涉及一種強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能的配合飼料。
背景技術(shù)：
原代培養(yǎng)的魚類腸道粘膜細(xì)胞、肝臟細(xì)胞作為一個(gè)實(shí)驗(yàn)材料(平臺(tái))在基礎(chǔ)理論研究、新型藥物篩選、新型飼料添加劑研究等眾多研究領(lǐng)域得到廣泛性的使用，與活體動(dòng)物(魚類)相比較，具有研究周期短、實(shí)驗(yàn)條件容易控制、可以實(shí)現(xiàn)批量性的規(guī)模性實(shí)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，且使用原代培養(yǎng)細(xì)胞較使用細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的技術(shù)難度降低、實(shí)驗(yàn)成本降低，也更接近于魚體自身生理?xiàng)l件。
原代腸道粘膜細(xì)胞、肝臟細(xì)胞的來源是直接從實(shí)驗(yàn)魚的腸道粘膜、肝胰臟進(jìn)行分離后、進(jìn)行增殖培養(yǎng)，用于提供細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)的材料魚一般來自于養(yǎng)殖池塘、或可控環(huán)境條·件下養(yǎng)殖的魚類。因此，實(shí)驗(yàn)魚的健康狀態(tài)、尤其是腸道和干胰臟的生理健康狀態(tài)就尤為重要，在實(shí)際養(yǎng)殖條件下，飼料物質(zhì)、環(huán)境條件等多種因素可能影響到實(shí)驗(yàn)材料魚的腸道、肝胰臟的生理健康狀態(tài)，例如飼料脂肪氧化產(chǎn)物、飼料霉菌毒素、重金屬等可能引腸道粘膜、肝胰臟的細(xì)胞損傷，起進(jìn)而影響到分離的腸道粘膜細(xì)胞、肝細(xì)胞的質(zhì)量和細(xì)胞的生理狀態(tài)；同時(shí)，實(shí)驗(yàn)研究的可重復(fù)性也要求不同實(shí)驗(yàn)批次的實(shí)驗(yàn)材料魚的條件要基本一致。這就要求對(duì)提供腸道粘膜細(xì)胞、肝細(xì)胞分離的實(shí)驗(yàn)材料魚需要經(jīng)過一段時(shí)間的強(qiáng)化飼養(yǎng)①對(duì)可能有的腸道粘膜、肝胰臟損傷進(jìn)行適度的修復(fù)；②對(duì)腸道粘膜、肝胰臟生理功能進(jìn)行適度的強(qiáng)化作用，調(diào)整分離細(xì)胞的生理狀態(tài)；③對(duì)不同生理健康狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行同一條件下的強(qiáng)化培育，達(dá)到相近的生理狀態(tài)。
實(shí)驗(yàn)魚從養(yǎng)殖場(chǎng)的池塘購(gòu)買運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，會(huì)有較大程度的應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)，由于生產(chǎn)性配合飼料的安全性一般不高、養(yǎng)殖池塘的環(huán)境條件較差，魚體生理健康狀態(tài)一般不是很理想，部分魚體的腸道粘膜、肝胰臟有一定程度的損傷。這些狀況的存在需要對(duì)實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行一定時(shí)期的強(qiáng)化培育，對(duì)腸道粘膜、肝胰臟的損傷進(jìn)行快速修復(fù)，對(duì)魚體整理生理健康進(jìn)行快速修復(fù)和強(qiáng)化。
實(shí)驗(yàn)材料魚的強(qiáng)化培育除了水域環(huán)境條件如水溫、溶解氧、酸堿度等環(huán)境因素外，重要的是飼料。飼料是養(yǎng)殖魚類的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、能量物質(zhì)的來源。強(qiáng)化培育實(shí)驗(yàn)材料魚的飼料需要專用的功能性的新型飼料，主要條件是在保障實(shí)驗(yàn)魚正常營(yíng)養(yǎng)需要、營(yíng)養(yǎng)平衡的基礎(chǔ)上，能夠?qū)δc道粘膜、肝胰臟損傷進(jìn)行有效修復(fù)，對(duì)腸道粘膜細(xì)胞、肝胰臟的細(xì)胞生理和功能作用進(jìn)行強(qiáng)化培育，同時(shí)，由于動(dòng)物具有生理性的腸道-肝臟生理軸，也需要對(duì)腸-肝軸進(jìn)行適當(dāng)?shù)纳砉δ苄詮?qiáng)化調(diào)理。
但是現(xiàn)有技術(shù)中的配合飼料無法同時(shí)滿足上述需求，例如公開號(hào)為CN101731474 A200910264707. 2的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公布說明書公開了一種驅(qū)蟲保健型草魚飼料，包括魚粉、豆柏、菜柏、棉柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣，還包括南瓜籽、沸石粉、膨潤(rùn)土、DL-肉堿；并且，以重量百分比計(jì)，上述成分的配比為魚粉2 6%，南瓜籽3 8%，豆柏6 8%,菜柏15 30%，棉柏10 30%，小麥10 20%，米糠5 12%，磷酸二氫鈣I. 5 2%，沸石粉I. 5 2%，膨潤(rùn)土 I 2%，DL-肉堿O. 02%。采用本發(fā)明的飼料，可提高草魚對(duì)飼料的利用率，從而提高了養(yǎng)殖效益，有效防止了草魚脂肪肝的形成，有效防止了絳蟲在草魚腸道的寄生。
因此，需要配制一種配合飼料能夠強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能的配合飼料。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能的配合飼料，包括魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、米糠柏、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤(rùn)土、DL肉毒堿、豆油，還包括維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料、熊脫氧膽酸、牛磺酸、谷氨酰胺、酵母培養(yǎng)物；其中，所述魚粉為秘魯魚粉；所述維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料中；其中，按照質(zhì)量百分比，上述成分的配比為
秘魯魚粉10 15% ;豆柏10 15% ;菜籽柏10 18% ;棉籽柏10 16% ;小麥15 20. 73% ;米糠8 10% ;米糠柏4 6% ;磷酸二氫鈣I. 8 2% ;沸石粉I. 5 2% ;膨潤(rùn)土 I. 5 2%，豆油2 3% ;維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料1% ;熊脫氧膽酸O. 005 O. 010% ;?；撬酧. 005 O. 010% ;谷氨酰胺O. I O. 2% ；DL肉毒堿O. 100 O. 150% ;酵母培養(yǎng)物O. 500 O. 650%。
上述配合飼料的制備方法包括以下步驟
I)將所有的飼料原料粉碎到60目以上；
2)秘魯魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤(rùn)土、維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料先使用混合機(jī)混合均勻，得到混合物A ；
3)熊脫氧膽酸、?；撬帷⒐劝滨０?、肉毒堿、酵母培養(yǎng)物先與米糠柏混合均勻，再與步驟2)所得混合物A進(jìn)行混合；最后加入豆油進(jìn)行混合；
4)混合均勻后使用飼料制粒機(jī)加工成直徑I. 5mm或2. 0mm、或2. 5mm不同規(guī)格的
顆粒，顆粒的直徑與長(zhǎng)度比保持在I : 2左右；冷卻、風(fēng)干，雙層塑料袋封口包裝，4°C保存?zhèn)溆谩?br>上述配合飼料的使用方法包括以下步驟
I)實(shí)驗(yàn)材料魚一般養(yǎng)殖在可以控制溫度、可增氧的室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中，水溫可以保持在24 28°C、溶解氧4 7mg/L，所述養(yǎng)殖系統(tǒng)在使用之前7天進(jìn)行常規(guī)消毒；實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)入養(yǎng)殖系統(tǒng)之前要進(jìn)行常規(guī)的消毒處理；
2)飼料投喂采用人工投喂的方法，每天按照魚體體重的2 4%的重量稱取強(qiáng)化飼料，分早、中、晚三次進(jìn)行投喂，投喂量根據(jù)實(shí)驗(yàn)魚的攝食情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以在30min內(nèi)全部攝食完投喂的飼料為準(zhǔn)進(jìn)行飽食投喂；
一般使用本發(fā)明所述飼料2 3周就可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)魚分離腸道粘膜細(xì)胞、肝細(xì)胞的要求。
上述配合飼料的使用效果評(píng)價(jià)方法包括以下步驟
使用本發(fā)明飼料養(yǎng)殖2 3周后，對(duì)實(shí)驗(yàn)魚的生理健康狀態(tài)進(jìn)行鑒定常規(guī)觀察魚體活動(dòng)能力、體表顏色、體表粘液等項(xiàng)目；解剖觀察腸道粘膜、肝胰臟的形態(tài)、色澤、組織形態(tài)的完整性；測(cè)定血清中轉(zhuǎn)氨酶活力、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、低密度脂蛋白、球蛋白、D乳酸、二胺氧化酶活力、細(xì)菌總數(shù)等指標(biāo)，確定肝胰臟、腸道通透性和魚體血液內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性等健康指標(biāo)。
由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)
I、本發(fā)明的配合飼料在考慮營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)上，還組合了適宜作用劑量的以下成分促進(jìn)腸道粘膜細(xì)胞生長(zhǎng)、損傷修復(fù)的因子-谷氨酰胺、酵母培養(yǎng)物；有利于腸道有益微生物生長(zhǎng)和微生態(tài)平衡的因子酵母培養(yǎng)物；有利于干胰臟脂肪代謝、保護(hù)干胰臟生理功能的因子DL肉毒堿、牛磺酸；有利于生理性腸道-干胰臟軸膽汁循環(huán)的因子熊脫氧膽酸、?；撬?。利用這種飼料養(yǎng)殖的實(shí)驗(yàn)材料魚，作為腸道粘膜細(xì)胞、肝臟細(xì)胞的分離和原代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)材料魚，可以獲得健康的腸道粘膜細(xì)胞和健康的肝臟細(xì)胞，且實(shí)驗(yàn)材料魚的生理?xiàng)l件保持一致，腸道粘膜細(xì)胞、肝臟細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性很好。 2、本發(fā)明的配合飼料營(yíng)養(yǎng)平衡性好、含有功能性生理調(diào)節(jié)物質(zhì)實(shí)驗(yàn)魚從養(yǎng)殖場(chǎng)的池塘購(gòu)買運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，會(huì)有較大程度的應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)，由于生產(chǎn)性配合飼料的安全性一般不高、養(yǎng)殖池塘的環(huán)境條件較差，魚體生理健康狀態(tài)一般不是很理想，部分魚體的腸道粘膜、肝胰臟有一定程度的損傷。采用本發(fā)明的配合飼料克服上述困難，對(duì)實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行一定時(shí)期的強(qiáng)化培育，對(duì)腸道粘膜、肝胰臟的損傷進(jìn)行快速修復(fù)，對(duì)魚體整理生理健康進(jìn)行快速修復(fù)和強(qiáng)化，從而得到理想的實(shí)驗(yàn)材料魚。
3、采用本發(fā)明的配合飼料可以使實(shí)驗(yàn)魚的腸道粘膜細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，由于本發(fā)明飼料中的牛磺酸、谷氨酰胺、酵母培養(yǎng)物有利于腸道粘膜細(xì)胞的生長(zhǎng)、損傷修復(fù)，同時(shí)促進(jìn)腸道有益微生物的生長(zhǎng)。使用本發(fā)明飼料可以對(duì)損傷的腸道組織結(jié)構(gòu)、生理性功能進(jìn)行有效的、快速的修復(fù)，并腸道粘膜細(xì)胞具有特殊的增強(qiáng)作用。
4、養(yǎng)殖魚類容易出現(xiàn)脂肪性肝胰臟疾病，同時(shí)，由于現(xiàn)有的飼料配方中營(yíng)養(yǎng)素的評(píng)合格問題、油脂氧化產(chǎn)物、霉菌毒素等容易導(dǎo)致肝胰臟器質(zhì)性損傷，所以，對(duì)來源于實(shí)際養(yǎng)殖池塘的魚類都會(huì)存在一定的肝胰臟生理健康問題。由于本發(fā)明組合了合適劑量的對(duì)肝胰臟損傷修復(fù)、對(duì)脂肪肝治療有效的因子牛磺酸、熊脫氧膽酸、DL肉毒堿，因此，能夠?qū)Ω我扰K損傷進(jìn)行有效修復(fù)，對(duì)肝胰臟的細(xì)胞生理和功能作用進(jìn)行強(qiáng)化培育。


圖I為原代培養(yǎng)20h的草魚腸道粘膜細(xì)胞(X 100)；
圖2為原代培養(yǎng)192h的草魚肝細(xì)胞(X 200)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述
實(shí)施例一
I)按照質(zhì)量比，取進(jìn)口魚粉14. 74% ;豆柏10% ;菜籽柏18% ;棉籽柏16% ;小麥20% ；米糠8% ;米糠柏4% ;磷酸二氫鈣2% ;沸石粉2% ;膨潤(rùn)土 I. 5%，豆油2% ;維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料1% ;熊脫氧膽酸O. 005% ;?；撬酧. 005% ;谷氨酰胺O. 1% ；DL肉毒堿O. 150% ;酵母培養(yǎng)物O. 500%。將所有的飼料原料粉碎到60目以上；
2)魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤(rùn)土、維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料先使用混合機(jī)混合均勻，得到混合物A ；
上述技術(shù)方案中，所述秘魯魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤(rùn)土、維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料均為常規(guī)飼料原料，可以在國(guó)內(nèi)飼料原料貿(mào)易商或加工工廠購(gòu)得，其中，所述維生素包括VA，VD3，VK3 VE, VB1,VB2，VB6，VB12，VC，泛酸鈣，煙酸，葉酸和肌醇，所述礦物質(zhì)包括銅Cu，錳Mn，鋅Zn，碘I，硒Se，鈷Co，美Mg，鉀K共8種元素。
3)熊脫氧膽酸、?；撬帷⒐劝滨０?、肉毒堿、酵母培養(yǎng)物先與米糠柏混合均勻，再與步驟2)所得混合物A進(jìn)行混合；最后加入豆油進(jìn)行混合；
上述技術(shù)方案中，所述熊脫氧膽酸、?；撬釣獒t(yī)藥原料；所述谷氨酰胺為生化產(chǎn)品；肉毒堿購(gòu)自北京桑普生化技術(shù)有限公司，酵母培養(yǎng)物購(gòu)自美 國(guó)達(dá)農(nóng)威深圳公司，先與米糠柏為飼料原料。
4)混合均勻后使用飼料制粒機(jī)加工成直徑I. 5mm或2. 0mm、或2. 5mm不同規(guī)格的
顆粒，顆粒的直徑與長(zhǎng)度比保持在I : 2左右；冷卻、風(fēng)干，雙層塑料袋封口包裝，4°C保存?zhèn)溆谩?br>5)將實(shí)驗(yàn)材料魚(草魚、鯽魚、團(tuán)頭魴)養(yǎng)殖在可以控制溫度、可增氧的室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中，水溫可以保持在24 28°C、溶解氧4 7mg/L,所述養(yǎng)殖系統(tǒng)在使用之前7天進(jìn)行常規(guī)消毒；實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)入養(yǎng)殖系統(tǒng)之前要進(jìn)行常規(guī)的消毒處理；
6)飼料投喂采用人工投喂的方法，每天按照魚體體重的2 4%的重量稱取強(qiáng)化飼料，分早、中、晚三次進(jìn)行投喂，投喂量根據(jù)實(shí)驗(yàn)魚的攝食情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以在30min內(nèi)全部攝食完投喂的飼料為準(zhǔn)進(jìn)行飽食投喂；
7)使用上述飼料2周后實(shí)驗(yàn)魚血清檢測(cè)指標(biāo)的變化，比較試驗(yàn)前后血清指標(biāo)的變化，結(jié)果顯示均達(dá)到實(shí)驗(yàn)材料魚的要求，顯示出本發(fā)明飼料良好的對(duì)魚體健康、對(duì)腸道粘膜和肝胰臟具有良好的強(qiáng)化、修復(fù)功能作用，具體數(shù)據(jù)參加下表
表I實(shí)驗(yàn)魚(草魚)各項(xiàng)指數(shù)試驗(yàn)前后的變化
_期I試驗(yàn)前I試驗(yàn)后
缽璗 g..'g120 115 120 118 | 119
總膽紅-素 UinolfL_ 9.2 TJ 0.9 0.9 ] 1.2
天門冬氨_氨暴_移_ DL412 141 134 IJg | 145
兩基轉(zhuǎn)移150 Ti 65 55 μ 5
_性__ r/L_ 146 59_ TE_ It j 75
谷氨S胺轉(zhuǎn)移SI I L3_ I_ I_ I 卜―
凰 mtrol/L _ SJ_ 18.2 9_ TM_JjJ_
oiittol/Ll_ S-I 2.7 1.7 1.5 13.P
顧圖疇 pibioI/L_ 4.09 481 4.02 3.33 j 3.62
甘油三_ wwol/L__3.9 7.5__SJ_ 2.4 ] 4.4 —
蠤備度—蛋白 P 腿ol/L__1.72 I.l 1.63 I.i l j 0-89
.....nimol/L.............................................................................................I0.fi.......................[￠:31 1...0:0 [0:4.......................—...
表2實(shí)驗(yàn)魚(團(tuán)頭魴)各項(xiàng)指數(shù)試驗(yàn)前后的變化
權(quán)利要求
1. 一種強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能的配合飼料，其特征在于，由魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、米糠柏、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤(rùn)土、DL肉毒堿、豆油，維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料、熊脫氧膽酸、?；撬帷⒐劝滨０?、酵母培養(yǎng)物構(gòu)成；所述魚粉為秘魯魚粉；其中，按照質(zhì)量百分比，上述成分的配比為 秘魯魚粉10 15% ;豆柏10 15% ;菜籽柏10 18% ;棉籽柏10 16% ;小麥15 ·20. 73% ;米糠8 10% ;米糠柏4 6% ;磷酸二氫鈣I. 8 2% ;沸石粉I. 5 2% ;膨潤(rùn)土·I.5 2%，豆油2 3% ;維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料1% ;熊脫氧膽酸0. 005 0. 010% ;?；撬帷?.005 0. 010% ;谷氨酰胺0. I 0. 2% ；DL肉毒堿0. 100 0. 150% ;酵母培養(yǎng)物0. 500 ·0.650%。
專利摘要
本發(fā)明屬于一種飼料，具體涉及一種強(qiáng)化魚類腸道粘膜和肝胰臟細(xì)胞生理功能的配合飼料，包括魚粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕、小麥、米糠、米糠粕、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤(rùn)土、DL肉毒堿、豆油，還包括維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料、熊脫氧膽酸、?；撬帷⒐劝滨０?、酵母培養(yǎng)物。利用這種飼料養(yǎng)殖的實(shí)驗(yàn)材料魚，作為腸道粘膜細(xì)胞、肝臟細(xì)胞的分離和原代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)材料魚，可以獲得健康的腸道粘膜細(xì)胞和健康的肝臟細(xì)胞，且實(shí)驗(yàn)材料魚的生理?xiàng)l件保持一致，腸道粘膜細(xì)胞、肝臟細(xì)胞分離與原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性很好。
文檔編號(hào)A23K1/18GKCN102067955 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 201010585756
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2010年12月13日
發(fā)明者葉元土, 蔡春芳, 張寶彤, 姚仕彬, 秦杰 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan