本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，尤其涉及一種柑普茶提取物的制備方法及其在減肥降糖和抑菌方面的用途。

背景技術(shù)：

1、隨著生活水平的提高和飲食的不規(guī)律，肥胖疾病發(fā)生的越來越普遍。本領(lǐng)域已知，肥胖會引起高血壓、高血脂、2型糖尿病和心臟病等并發(fā)癥。而胰脂肪酶是膳食脂肪消化吸收的關(guān)鍵酶，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是碳水化合物消化的關(guān)鍵酶，因此抑制這三種消化酶的活性能有效控制肥胖。此外，肥胖還會引起免疫系統(tǒng)的減弱，引起致病菌的侵入和腸道菌群的失調(diào)，引發(fā)由大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等造成的腸道外感染和腹瀉等癥狀等，因此抑制這兩種有害細菌的活性能有效防治腸道感染和腹瀉疾病。

2、普洱茶主要產(chǎn)于我國云南省的普洱和西雙版納等地，是以地理標志范圍內(nèi)的云南大葉種曬青茶為原料，經(jīng)過特殊加工制成，具有獨特品質(zhì)的黑茶。陳年普洱茶陳香、陳色、陳韻，在一定貯藏年限內(nèi)越陳越香，具有降血脂、降血壓、抗氧化等保健功效。

3、新會陳皮是新會柑果皮經(jīng)曬干或焙干后的陳年貯存品，具有藥食同源的特點，也是中國著名的地理標志產(chǎn)品，具有理氣調(diào)中、健脾和胃、燥濕化痰、消積化滯之功效。

4、柑普茶是將普洱茶填入挖空果肉的新會柑中，經(jīng)過烘焙、陳化加工而成的一種茶。新會柑的清醇果香味和普洱茶的醇厚甘香味完美結(jié)合，讓柑皮(即陳皮)與茶葉相互吸收精華，形成了風味獨特、口感一絕的柑普茶。其保健作用兼具柑皮的理氣調(diào)中、健脾和胃、燥濕化痰、消積化滯以及普洱的降脂、降壓、抗氧化功效，深受大眾的喜愛。

5、據(jù)茶網(wǎng)報道，柑普茶內(nèi)茶(普洱茶)和柑普茶外茶(陳皮)比例為3:1時，其口感和色澤最優(yōu)。但對不同內(nèi)外茶比例的柑普茶具體在減肥降糖和抑菌方面有何種作用，目前并未有相關(guān)文獻報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是將內(nèi)部普洱茶和外部陳皮設置成不同的比例，從對三種消化酶和兩種有害菌的活性方面來評價其最優(yōu)比例，包括在胰脂肪酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶活性抑制方面和對大腸桿菌(e.coli?w3110)和金黃色葡萄球菌(s.aureusatcc?29213)活性抑制方面的應用。還包括在制備抑制這三種消化酶活性和這兩種有害細菌活性產(chǎn)品中的應用。進而給人們的日常飲茶、保健養(yǎng)生、疾病治療等提供嶄新的思路和更專業(yè)、有效的參考。

2、本發(fā)明為了實現(xiàn)上述目的采用如下技術(shù)方案。

3、本發(fā)明提供了一種不同內(nèi)外茶比例的柑普茶提取物在減肥降糖方面的應用，所述內(nèi)茶為普洱茶，所述外茶為陳皮，所述內(nèi)外茶的質(zhì)量比為4～5:1。

4、所述普洱茶提取物的制備方法為：按照1:18～22的液料比在85～95℃下、超聲浸提25～35min，每10min攪拌一次，浸提三次，趁熱過濾，合并濾液，5000rpm離心10～12min，濾液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至400ml，冷凍干燥，得到柑普茶提取物，并保存于-80℃。

5、進一步的，所述應用為抑制消化酶活性方面的應用。

6、進一步的，所述消化酶為胰脂肪酶、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶。

7、進一步的，所述消化酶為胰脂肪酶，所述內(nèi)外茶的質(zhì)量比為4:1。

8、所述胰脂肪酶可以將硝基苯酚棕櫚酸酯(pnpp)水解為對硝基苯酚(pnp)，pnp在堿性條件下呈黃色，在405nm處有最大吸收波長。因此，可利用胰脂肪酶的該種水解性能測定吸光度，進而測得胰脂肪酶的活力。

9、所述pnp吸光度的測量方法為：在離心管中依次加入25～35μltris-hcl緩沖液，45～55μl胰脂肪酶，15～25μl不同濃度的茶樣，在恒溫培養(yǎng)箱中35～38℃預熱8～13min，加入90～110μl的pnpp，反應25～35min。

10、所述胰脂肪酶活性抑制率的計算公式為：

11、胰脂肪酶活性抑制率(％)＝[1-(a樣-a樣空)/(a陰-a陰空)]×100。

12、進一步的，所述消化酶為α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶，所述內(nèi)外茶的質(zhì)量比為5:1。

13、所述α-淀粉酶可以水解2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麥芽糖苷(gal-g2-α-cnp)，產(chǎn)生2-氯-4-硝基苯酚(cnp)和麥芽三糖兩種物質(zhì)，cnp是一種在水溶液中顯黃色，在405nm有最大的吸收波長的著色劑，因此可通過測定cnp在405nm處的吸光度，從而測得α-淀粉酶的活力。

14、所述cnp吸光度的測量方法為：在離心管中加入磷酸緩沖液25～35μl，胰α-淀粉酶45～55μl，不同濃度的樣品溶液15～25μl，在恒溫培養(yǎng)箱37℃預熱8～12min，加入gal-g2-α-cnp?100μl，反應2～5min。

15、所述α-淀粉酶活性抑制率的計算公式為：

16、α-淀粉酶活性抑制率(％)＝[1-(a樣-a樣空)/(a陰-a陰空)]×100。

17、所述α-葡萄糖苷酶可將對-硝基苯酚-α-d-葡萄糖苷(pnpg)水解，并釋放出對-硝基苯酚(pnp)。因此，也可利用α-葡萄糖苷酶的該種水解性能測定吸光度，進而測得α-葡萄糖苷酶的活力。

18、所述pnp吸光度的測量方法為：在離心管中加入不同濃度的比例茶樣45～55μl，酶溶液45～55μl，再加45～55μl磷酸緩沖液，放入恒溫搖床內(nèi)37℃孵育3～8min，再每孔加入100μlpnpg，搖床混勻后37℃孵育18～23min，最后每孔加100μlna2co3終止反應，室溫下靜止1min放入多功能酶標儀405nm處測定吸光值。

19、所述α-葡萄糖苷酶活性抑制率的計算公式為：

20、α-葡萄糖苷酶活性抑制率(％)＝[1-(a樣-a樣空)/(a陰-a陰空)]×100。

21、本發(fā)明還提供了一種不同內(nèi)外茶比例的柑普茶提取物在抑菌方面的應用，所述應用為在有害細菌活性抑制方面的應用，所述內(nèi)茶為普洱茶，所述外茶為陳皮，所述內(nèi)外茶的質(zhì)量比為4～5:1。

22、進一步的，所述細菌為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。

23、進一步的，所述內(nèi)外茶的質(zhì)量比為5:1。

24、所述有害細菌的相關(guān)測定指標包括：不同比例茶樣對兩種菌的抑菌圈影響、兩種菌的最小抑菌濃度(mic)以及不同比例茶樣對兩種菌生長曲線的影響。

25、所述指標的測定根據(jù)常規(guī)菌類培養(yǎng)試驗步驟進行即可。

26、本發(fā)明還提供了一種不同內(nèi)外茶質(zhì)量比柑普茶提取物在制備減肥降糖和抑菌產(chǎn)品中的應用。

27、本發(fā)明的有益效果在于：

28、(1)本發(fā)明將柑普茶中陳皮和普洱茶的質(zhì)量比設置為1:4，在抑制脂肪酶活性方面獲得的ic50最低；本發(fā)明將柑普茶中陳皮和普洱茶的質(zhì)量比設置為1:5，在抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性方面獲得的ic50最低；皆顯著低于一般設置比例1:3在這三種酶活性方面ic50值。因此，4:1柑普茶內(nèi)外茶的質(zhì)量比設置，降脂效果最好；5:1柑普茶內(nèi)外茶的質(zhì)量比設置，降糖效果最好；4～5:1柑普茶內(nèi)外茶的質(zhì)量比設置，尤其適宜需要降脂減糖的減肥人群。

29、(2)本發(fā)明將柑普茶中陳皮和普洱茶的質(zhì)量比設置為1:4～5，在抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌活性方面效果最為顯著；而且對大腸桿菌的抑制活性要高于金黃色葡萄球菌，其中1:4組、1:5組的效果要高于1:3組，其中1:5組的效果最好。因此，4～5:1柑普茶內(nèi)外茶的質(zhì)量比設置，尤其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌引發(fā)的腸道疾病療效最好。

30、(3)本發(fā)明通過研究柑普茶不同內(nèi)外茶比例對三種消化酶及兩種有害菌活性的影響作用，分別得出了能夠降脂降糖和能夠治療細菌性腸道疾病的針對性茶飲治療方案。以及在制備抑制上述三種消化酶活性和兩種有害細菌活性產(chǎn)品中的應用等。為人們在日常飲茶、保健養(yǎng)生、疾病治療等方面提供了新思路，能夠為人們提供更加專業(yè)、有效的參考意見。