與黃瓜白粉病抗性主效qtl共分離的ssr分子標(biāo)記的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了三個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，分別命名為SSR-N1、SSR-N2和SSR-N3。SSR-N1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；SSR-N2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；SSR-N3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。本發(fā)明的三個(gè)SSR分子標(biāo)記都具有高穩(wěn)定性，可以簡便、快速地應(yīng)用于黃瓜苗期白粉病抗性單株的輔助篩選，為白粉病抗性的分子標(biāo)記輔助育種奠定了基礎(chǔ)，這將大大加快黃瓜白粉病抗性分子育種的進(jìn)程。同時(shí)，這些共分離的分子標(biāo)記也為黃瓜白粉病抗性主效QTL的克隆奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)，具體涉及與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分 子標(biāo)記。

【背景技術(shù)】
[0002] 黃瓜（Cucumis sativus L.)為葫蘆科（Cucurbitaceae)甜瓜屬一年生草本蔓生 攀緣植物。黃瓜作為世界十大重要的蔬菜作物之一，也是我國主栽蔬菜作物之一，占全國蔬 菜面積的10%左右。黃瓜不僅作為重要的蔬菜作物歷來備受育種家的重視，并且黃瓜染色 體數(shù)目較少2n = 2x = 14,基因組較小，特別在2009年，黃瓜基因組的成功測(cè)序?yàn)辄S瓜作為 葫蘆科的模式植物進(jìn)行分子生物學(xué)研究提供了極大便利。
[0003] 在黃瓜生產(chǎn)中，面臨許多疾病的危害，其中白粉病是最為嚴(yán)重的病害之一。黃瓜 白粉病是由專性寄生菌（Podosphaera xanthii)引起的真菌病害，能在整個(gè)黃瓜生育期發(fā) 病，主要危害葉片，嚴(yán)重時(shí)可危害莖蔓，特別是在生長中后期發(fā)病嚴(yán)重，使植株提早拉秧，造 成嚴(yán)重的產(chǎn)量損失。田間施藥，造成農(nóng)藥殘留，影響果實(shí)品質(zhì)，危及食品安全，并且會(huì)污染環(huán) 境。長期施藥還會(huì)促進(jìn)白粉病菌生理小種產(chǎn)生抗性，從而增加防治難度，增加種植戶生產(chǎn) 成本。培育抗病的黃瓜品種是解決白粉病危害的最好方法。常規(guī)的抗病育種耗時(shí)長，需要 經(jīng)過多代雜交和回交過程；病害發(fā)生和環(huán)境條件密切相關(guān)，需要專門的病圃進(jìn)行接種鑒定； 這些都增加了培育黃瓜抗病品種的難度。
[0004] 分子育種可以大大加快育種進(jìn)程，顯著縮短育種周期。現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展， 為抗病育種開辟了新的途徑，利用生物技術(shù)培育抗病品種已成為目前的熱點(diǎn)。分子育種的 前提是獲得相關(guān)性狀的功能基因或與其緊密連鎖的分子標(biāo)記。利用分子標(biāo)記分析體系，在 遺傳群體上鑒定抗病遺傳規(guī)律，同時(shí)結(jié)合分子標(biāo)記遺傳連鎖圖譜，定位和克隆白粉病抗性 基因，研究其功能和抗性的分子調(diào)控機(jī)制，可以為黃瓜抗性基因的分子標(biāo)記輔助育種及分 子設(shè)計(jì)育種提供理論依據(jù)。利用與抗病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，開展分子標(biāo)記輔助選擇 育種，可將多個(gè)抗病基因整合到一個(gè)品種，顯著提高育種效率，縮短育種時(shí)間，而且大幅度 提高了抗病的力度和持久性，這對(duì)于培育出滿足種植者需求的黃瓜抗病新品種具有重要意 義。
[0005] 雖然葫蘆科作物黃瓜白粉病的發(fā)生比較普遍和嚴(yán)重，但是關(guān)于其白粉病抗性基因 定位的研究相對(duì)較薄弱，尚未找到與白粉病抗性基因/QTL共分離的標(biāo)記，更不用說基因的 克隆及抗性分子機(jī)制的研究，目前停留在主效基因/QTL定位的階段。由于諸多報(bào)道表明 黃瓜白粉病抗性由多個(gè)隱性基因控制，研究者對(duì)其進(jìn)行了 QTL的分析。2006年，Sakata等 利用97株黃瓜抗感組合的重組自交系群體，首次定位了黃瓜抗白粉病性狀的QTL ;在4個(gè) 連鎖群上檢測(cè)到6個(gè)與溫度相關(guān)的QTL，其中在LGII上的一個(gè)主效QTL在20°C和26°C下 均表現(xiàn)出抗性。Liu等（2008a)利用黃瓜高感白粉病自交系S94和高抗白粉病自交系S06 構(gòu)建的F 2 : 3家系進(jìn)行了 QTL定位，共檢測(cè)到5個(gè)白粉病抗性QTL，分布于連鎖群1、2、5上， 單個(gè)QTL的貢獻(xiàn)率介于3. 4%?45%之間；還通過這兩親本構(gòu)建的重組自交系共檢測(cè)到4 個(gè)白粉病抗性QTL，分別位于連鎖群1、2、4、6上，單個(gè)QTL的貢獻(xiàn)率介于5. 2%?21. 0%之 間（Liu et al.，2008b)。沈_平（2009)應(yīng)用 ISSR(inter_simple sequence repeats)和 SRAP(sequence_related amplified polymorphism)標(biāo)記技術(shù)，以高感白粉病黃瓜品種D8和 高抗白粉病黃瓜品種JIN5的F2群體檢測(cè)到控制黃瓜白粉病抗性的2個(gè)QTL，均位于第3連 鎖群上，貢獻(xiàn)率為7.6%和13.5%。張圣平等（2011)以1(8(抗?。‐1(18(感?。┙M合的& 和F 2 : 3家系為研究對(duì)象，共檢測(cè)到4個(gè)白粉病抗性的QTL。最近，F(xiàn)ukino等（2013)利用重 組自交系檢測(cè)到9個(gè)QTL，分別位于染色體1、3、4、5、6上，單個(gè)QTL的貢獻(xiàn)率介于5 %?44% 之間，其中4個(gè)位點(diǎn)的效應(yīng)通過剩余雜合體（residual heterozygous lines，RHLs)得到了 證實(shí)。He等（2013)利用F2 : 3家系對(duì)黃瓜下胚軸、子葉和真葉的白粉抗性同時(shí)進(jìn)行了 QTL 分析，結(jié)果在1、3、4、5號(hào)染色體上檢測(cè)到6個(gè)QTL，單個(gè)QTL的貢獻(xiàn)率介于6. 1%?74. 5% 之間；其中2個(gè)主效QTL位于5號(hào)染色體的40 cM的區(qū)間內(nèi)，解釋21. 0-74. 5%的貢獻(xiàn)率， 下胚軸抗性QTL對(duì)黃瓜白粉抗性起到了最重要的作用。
[0006] 上述多數(shù)研究表明，黃瓜對(duì)白粉病的抗性由多個(gè)基因共同作用，而且抗性基因表 現(xiàn)為隱性效應(yīng)，這些因素增加了抗病基因精細(xì)定位和分離的難度。由于黃瓜白粉病對(duì)黃瓜 生產(chǎn)影響很大，對(duì)黃瓜白粉病抗性基因的研究很多，但是目前尚未有該抗病基因克隆和分 子機(jī)制研究的報(bào)道，已獲得的連鎖標(biāo)記遺傳距離較遠(yuǎn)，不利于分子標(biāo)記輔助育種的開展，阻 礙了抗病品種分子育種的進(jìn)程。因此，尋找與黃瓜白粉病抗性基因/QTL緊密連鎖、共分離 的分子標(biāo)記，對(duì)其進(jìn)行精細(xì)定位、分離與克隆，這不但能夠?yàn)槠淇共》肿佑N提供良好的技 術(shù)支撐，也為揭開黃瓜白粉病抗性的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的，在于克服QTL定位難度大的問題，提供三個(gè)與黃瓜白粉病抗性 主效QTL pm5.1共分離的共顯性SSR分子標(biāo)記。本發(fā)明利用BSA(Bulked Segregant Analysis)和QTL定位法，找到一個(gè)控制白粉病抗性的主效QTL。為了精細(xì)定位此主效QTL， 我們構(gòu)建了含主效QTL的染色體片段代換系（Chromosome Segment Substitution Lines, CSSL)及其回交分離群體。通過精細(xì)定位及標(biāo)記的開發(fā)，得到三個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效 QTL共分尚的SSR標(biāo)記，以便分子標(biāo)記輔助育種體系的建立。本發(fā)明的分子標(biāo)記可簡便、快 速、高通量地應(yīng)用于育種實(shí)踐。
[0008] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] -個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，命名為SSR-N1，其核苷酸 序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0010] 上述SSR-N1由上游引物SSR-N1-F和下游引物SSR-N1-R PCR擴(kuò)增得到，所述上游 引物SSR-N1-F的序列為5'-CCACAACAGCAGAAGGCTAACA-3'，所述下游引物SSR-N1-R的序列 為 5' -CCAATGGGTTGATAGAGGGAGA-3'。
[0011] 一個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，命名為SSR-N2，其核苷酸 序列如SEQ ID N0. 2所示。
[0012] 上述SSR-N2由上游引物SSR-N2-F和下游引物SSR-N2-R PCR擴(kuò)增得到，所述上游 引物SSR-N2-F的序列為5' -CTTCATTGTTGATTTCCAGGC-3'，所述下游引物SSR-N2-R的序列 為 5, -TGTTACGACCTATAACCACAAAAT-3，。
[0013] 一個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，命名為SSR-N3，其核苷酸 序列如SEQ IDN0. 3所示。
[0014] 上述SSR-N3由上游引物SSR-N3-F和下游引物SSR-N3-R PCR擴(kuò)增得到，所述上游 引物SSR-N3-F的序列為5'-GAAGATGCATCGAATTGAAACA-3'，所述下游引物SSR-N3-R的序列 為 5' -ATGATGTCCCAACTTATCCAAA-3'。
[0015] 本發(fā)明用BSA和QTL定位法，利用&群體找到一個(gè)控制白粉病抗性的主效QTL。 為了精細(xì)定位此主效QTL，利用不斷回交的方法構(gòu)建了含主效QTL的染色體片段代換系 (Chromosome Segment Substitution Lines，CSSL)及其回交分離群體。通過對(duì)回交分離 群體BC^，BC2F2的抗性鑒定分析，白粉病抗性已變?yōu)閱蚊系聽栆蜃舆z傳，即由單基因控制， 抗性為隱性遺傳。通過精細(xì)定位，抗性基因定位到標(biāo)記UW065021與UW065094之間，物理距 離170kb。通過黃瓜基因組序列，在其中間開發(fā)SSR標(biāo)記，最后得到三個(gè)與黃瓜白粉病抗性 主效QTL共分離的SSR標(biāo)記，分別被命名為SSR-N1，SSR-N2, SSR-N3。本專利發(fā)明的3個(gè)共 分離SSR分子標(biāo)記為共顯性標(biāo)記，能夠區(qū)分純合體和雜合體，將有利于白粉病抗性育種的 分子標(biāo)記輔助體系的建立，可簡便、快速、高通量地應(yīng)用于育種實(shí)踐。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：常規(guī)傳統(tǒng)的抗病育種耗時(shí)長，需要經(jīng) 過多代雜交和回交過程；病害發(fā)生和環(huán)境條件密切相關(guān)，需要專門的病圃進(jìn)行接種鑒定； 這些都增加了培育黃瓜抗病品種的難度。由于白粉病菌為專性寄生菌，抗性鑒定需要接種， 且發(fā)病后植株容易死掉；而且白粉病抗性基因多表現(xiàn)為隱性效應(yīng)，常規(guī)方法回交育種需要 回交一代后再自交一代來確認(rèn)抗性基因的滲入，這些因素都增加了白粉病抗性育種的周期 和難度。本發(fā)明的共分離SSR分子標(biāo)記為共顯性，可在黃瓜苗期鑒定植株，并能夠區(qū)分純合 子和雜合子，回交滲入過程中省去了每代自交的步驟，用分子標(biāo)記來跟蹤抗性基因，既省時(shí) 也準(zhǔn)確，所以可用于黃瓜白粉病抗性的分子標(biāo)記輔助育種，大大加速黃瓜白粉病抗性育種 的進(jìn)程。同時(shí)共分離標(biāo)記也將促進(jìn)白粉病抗性QTL/基因的克隆，從而為揭示白粉病抗性形 成的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1是分子標(biāo)記SSR-N1的聚丙烯酰胺凝膠電泳效果；
[0018] 圖2是分子標(biāo)記SSR-N2的聚丙烯酰胺凝膠電泳效果；
[0019] 圖3是分子標(biāo)記SSR-N3的聚丙烯酰胺凝膠電泳效果。
[0020] 圖中所示，S1001為抗病親本；S05為感病親本；Fi代表兩親本雜交后代；R和S分 別代表BC 2F2回交分離群體中隨機(jī)挑選的抗病和感病植株的檢測(cè)結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 一、黃瓜白粉病抗性主效QTL/基因的鑒定
[0022] 1.群體構(gòu)建與抗性鑒定
[0023] 初步的抗性QTL定位用的是F2群體，抗病親本是S1003,感病親本是S1001，它們 都屬于華北類型的黃瓜自交系。兩親本雜交產(chǎn)生的匕代自交產(chǎn)生F 2代群體。白粉病抗性 鑒定所使用的菌種是從上海交通大學(xué)溫室發(fā)病的黃瓜植株上分離得到的。隨機(jī)選擇148株 F2代個(gè)體在苗期進(jìn)行抗性鑒定。從感病幼苗上采集純化的白粉病菌，用無菌水制成孢子懸 浮液，調(diào)至濃度為1X 105個(gè)· mL'在黃瓜第三片真葉剛展開時(shí)把調(diào)配好的孢子懸浮液均 勻噴到真葉上，以不成水滴狀為準(zhǔn)。接種培養(yǎng)12d后調(diào)查發(fā)病情況。植株的發(fā)病情況根據(jù) Morishita等（2003)劃分為5個(gè)等級(jí)。0級(jí)和1級(jí)視為抗病，2級(jí)以上視為感病。
[0024] 根據(jù)發(fā)病調(diào)查，S1003為高抗，S1001為高感，F(xiàn)i為感病，偏向于感病親本；F2群體 抗病性呈現(xiàn)雙峰分布，且發(fā)病趨勢(shì)偏向于感病，中間類型較少，說明存在隱性的主效基因控 制白粉的抗病性。
[0025] 2. BSA法和QTL分析確定主效基因的染色體位置
[0026] 因此我們采取BSA法先對(duì)抗性主效基因所在的染色體區(qū)域進(jìn)行了分析。從F2分 離群體中分別隨機(jī)選取高抗和高感個(gè)體各10株，建立抗、感基因池。用780對(duì)在染色體上 平均分布的SSR引物對(duì)兩個(gè)親本及兩個(gè)基因池進(jìn)行篩選。
[0027] 551?反應(yīng)體系為基因組0嫩30叩，引物0.2 4 111〇1/1，20(^111〇1/1(1階138,2臟〇1/1 MgC12，lyl 10XPCR reactions buffer，0.5U TaqDNA聚合酶，總反應(yīng)體系為 lOyLPCR擴(kuò) 增程序?yàn)椋?4°C 5min ;35 個(gè)循環(huán)：94°C 30s，55-60°C 30s，72°C 30s ;72°C 5min。擴(kuò)增產(chǎn)物用 6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，電泳緩沖液為1XTBE，45W恒功率，電泳1. 5h-2h。
[0028] 電泳后進(jìn)行銀染。銀染方法為：將帶膠的玻璃板放入固定液中，在搖床上輕輕 搖動(dòng)至指示劑顏色褪去，其中固定液的組成為：冰醋酸、無水乙醇、蒸餾水的體積比為 1 : 10 : 100;用超純水洗lmin-3min;將沖洗后的膠板放入染色液中搖動(dòng)半小時(shí)，其中染 色液的組分為2g/L硝酸銀；將染色后的膠板放入超純水中漂洗5s后放入裝有顯影液的塑 料盒中，輕輕搖動(dòng)至條帶清晰，放入自來水中沖洗3min ;室溫下干燥，干燥后拍照，其中顯 影液是在1L蒸餾水中加入15g NaOH和3ml甲醛混勻得到的。
[0029] 通過BSA篩選，在第五染色體長臂末端的連續(xù)7個(gè)SSR標(biāo)記在池間表現(xiàn)為多態(tài)性， 因此白粉病抗性主效基因位于這個(gè)區(qū)域內(nèi)。為了進(jìn)一步確定抗性主效基因的位置，我們進(jìn) 行了 QTL分析。從黃瓜7條染色體上平均的選擇了 73個(gè)多態(tài)性SSR標(biāo)記對(duì)148株F2代個(gè) 體進(jìn)行了電泳分析。使用JoinMap 3. 0構(gòu)建連鎖圖譜，其中L0D > 5. 0,采用Kosambi函數(shù) 將重組率轉(zhuǎn)化為遺傳圖距。將F2群體單株三個(gè)葉片等級(jí)的均值作為植株抗病的病情指數(shù) 進(jìn)行QTL作圖。QTL分析使用QTL Cartographer 2. 5,采用復(fù)合區(qū)間作圖法（CM)進(jìn)行QTL 作圖。通過QTL分析的結(jié)果，在第五染色體的長臂末端找到一個(gè)主效QTL pm5. 1，這與BSA 法得出的位置吻合，因此我們確定這個(gè)位置存在一個(gè)控制白粉病抗性的主效QTL。
[0030] 二、回交分離群體的構(gòu)建和主效QTL的精細(xì)定位
[0031] 由于親本S1003與S1001都為華北類型黃瓜，親緣關(guān)系近，多態(tài)性標(biāo)記少，因此構(gòu) 建回交分離群體時(shí)采用了高感白粉病的歐洲溫室類型黃瓜自交系S05作為供體親本。結(jié)合 MAS通過多代回交后自交，構(gòu)建了僅主效QTL pm5. 1區(qū)域分離的回交群體BQFpBCA。分 別對(duì)2個(gè)BC^群體（114株，480株）和BC2F2群體（483株）的抗性鑒定，抗、感比例經(jīng)過 卡方分析符合1 : 1和1 : 3,因此，抗性QTL已經(jīng)轉(zhuǎn)化為單孟德爾因子，即單基因控制，且 抗病為隱性遺傳。通過主效QTL區(qū)域已開發(fā)的分子標(biāo)記對(duì)這1074個(gè)單株進(jìn)行連鎖分析，結(jié) 果將抗病基因精細(xì)定位到SSR標(biāo)記UW065021與UW065094之間，物理距離170kb。通過黃瓜 基因組序列，在其中間開發(fā)了 15對(duì)SSR標(biāo)記，結(jié)果只有3對(duì)在親本間有多態(tài)性，即本發(fā)明的 三個(gè)分子標(biāo)記SSR-N1，SSR-N2, SSR-N3。通過群體連鎖分析，最后得出這三個(gè)SSR分子標(biāo)記 與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離，即群體的抗病植株帶型全部和抗病親本帶型一致，而 感病植株帶型全部為感病親本或者Fi的帶型。
[0032] 圖1是分子標(biāo)記SSR-N1的聚丙烯酰胺凝膠電泳效果，圖2是分子標(biāo)記SSR-N2的 聚丙烯酰胺凝膠電泳效果，圖3是分子標(biāo)記SSR-N3的聚丙烯酰胺凝膠電泳效果。
[0033] 序列表 <110>上海交通大學(xué) <120>與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記 <160> 9 <2101 <211>284 <212> DNA <213> 黃瓜（Cacwmii swfL.) <4001 ccacaacagc agaaggctaa cacatagaga gagagagaga gagagagraa gag^pgagt 60 aaatagtgaa gtaaiattaa ^caactgca catcaattca tcacaattga mmmma, 120 aattccatcc atcaagattt aaattcaaac aaaggatgta tatagtggtc acagtatttg 180 agtatacctt cttgttggga gttgacttaa aaggtcaatc ^aaactcca tgaacctctc 240 acaatacaaa atacaagcat tgtctccctc tatcaaccca ttgg 284 <210>2 <21I> 196 <212>DNA <213> H/R (Cucumis sativrn L.) <400> 2 cttcattgtt g 講 ttceagg ?mgwtgMg 棚aagMMW 踢纖g?Ml? g變翁iittu $0 ttaatgtalg tatttgatat gtatatgtgt gtgtgtggag acttttaagt agaagtttat 120 caaatttctc ntaaciaca tectcaacg gttagatgtt gcactaagtg attattttgtg 180 gttataggtc gtaaca 196 <210>3 <2tl>274 <212> DNA <213>^f M. ( Cucumis sativrn L.) <400 3 ga^atgcat cgaattgaaa cattttcatt aagacataca atgacatata ttcgttaaga 60 taacttetM taa^tcgaa gttoggtgta atttgtpga ttgtaaattg ttaaategat 120 tatataatag agttgtcatc gtagtacttc attaaiatta tataatatta atgacagaga 180
[0034] ctaaattgaa atatatatat ataatatoaa gttcaaaatt acaaatcaac atatatattc 240 ccataagata actttggata agttgggaca teat 274 <210>4 <211>22 <212> DNA <2]3>人工序列 <400>4 ccacaacagc ag^gctm ca 22 <210>5 <211>22 <212> DNA <213>人工序列 <400>5 ccaatgggtt gatagaggga ga 22 <210>6 <211>2i <212〉DNA <213>人工序列 <400>6 ctlcattgttgattteeaggc 21 <210 7 <211>24 <212>DNA <213>人工序列 <400 7 t^tacgacc tataaccaca aaat 24 <210 8 <211>22 <212>DNA
[0035] <213>人工序列 <400>8 ga^atgcat cgaattgaaa ca 22 <210>9 <211>22 <212>DNA <213>人工序列 <400> 9 atgatgtccc aacttatcca aa 22
【權(quán)利要求】
1. 一個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，命名為SSR-N1，其核苷酸 序列如SEQ ID NO. 1所示。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分尚的SSR分子標(biāo)記，其特征 在于，所述SSR-N1由上游引物SSR-N1-F和下游引物SSR-N1-R PCR擴(kuò)增得到，所述上游引 物SSR-N1-F的序列為5'-CCACAACAGCAGAAGGCTAACA-3'，所述下游引物SSR-N1-R的序列為 5' -CCAATGGGTTGATAGAGGGAGA-3'。
3. -個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，命名為SSR-N2,其核苷酸 序列如SEQ IDN0. 2所示。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分尚的SSR分子標(biāo)記，其特征 在于，所述SSR-N2由上游引物SSR-N2-F和下游引物SSR-N2-R PCR擴(kuò)增得到，所述上游引 物SSR-N2-F的序列為5' -CTTCATTGTTGATTTCCAGGC-3'，所述下游引物SSR-N2-R的序列為 5' -TGTTACGACCTATAACCACAAAAT-3'。
5. -個(gè)與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分離的SSR分子標(biāo)記，命名為SSR-N3,其核苷酸 序列如SEQ ID NO. 3所示。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的與黃瓜白粉病抗性主效QTL共分尚的SSR分子標(biāo)記，其特征 在于，所述SSR-N3由上游引物SSR-N3-F和下游引物SSR-N3-R PCR擴(kuò)增得到，所述上游引 物SSR-N3-F的序列為5'-GAAGATGCATCGAATTGAAACA-3'，所述下游引物SSR-N3-R的序列為 5' -ATGATGTCCCAACTTATCCAAA-3'。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK104152446SQ201410382306
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月6日
【發(fā)明者】蔡潤, 聶京濤, 潘俊松, 何歡樂, 楊俊俊, 彭佳林 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)