屠宰廠廢水養(yǎng)殖球等鞭金藻和異膠藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用屠宰廠廢水養(yǎng)殖海洋單胞藻的方法。利用屠宰廠廢水養(yǎng)殖藻類，變廢為寶，既處理了廢水，又得到了用途極大的單胞藻產(chǎn)品，一舉兩得；我在以屠宰廠廢水為基本原料的培養(yǎng)基中加入了酵母膏，葡萄糖，L-谷氨酸，土壤抽出液，S3維生素溶液等成分，并通過充氣管向藻液充入混合氣體，營養(yǎng)更加全面、均衡，單胞藻生長速度大大提高，產(chǎn)量提高240％；而且，與傳統(tǒng)的單種培養(yǎng)相比，兩種單胞藻混合培養(yǎng)有利于發(fā)揮不同單胞藻營養(yǎng)需求的差異和互利共生作用，優(yōu)勢互補，相互促進，更加充分地利用營養(yǎng)鹽，更加高效地吸收光能，減少了營養(yǎng)鹽的損失，單胞藻產(chǎn)量和經(jīng)濟效益大大提高。
【專利說明】屠宰廠廢水養(yǎng)殖球等鞭金藻和異膠藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于海洋單胞藻養(yǎng)殖領(lǐng)域，涉及一種利用屠宰廠廢水養(yǎng)殖海洋單胞藻的方法，尤其涉及一種利用屠宰廠廢水混合養(yǎng)殖球等鞭金藻和異膠藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]屠宰廢水是一種高濃度有機廢水，是我國最大有機污染源之一。隨著經(jīng)濟發(fā)展和人民生活水平的提高，肉類加工業(yè)將有更大發(fā)展，因而屠宰廢水污染有不斷加劇趨勢。據(jù)調(diào)查，我國生豬日宰量50-5000頭的屠宰場已有600多家，每年排放廢水20億噸左右，占全國工業(yè)廢水排放量6%。屠宰過程中排放廢水含有大量血污、油脂、毛、內(nèi)臟雜物、未消化食物及糞便等，并帶有令人不適的血紅色及血腥味，且含有大腸菌、糞便鏈球菌等致病菌，威脅人體健康。廢水具有濃度變化大、有機物含量高特點，如果不經(jīng)處理直接排放，大量懸浮物和有機物將會迅速消耗水體溶解氧，惡化水質(zhì)，影響生活和生產(chǎn)用水，同時致病菌進入水體，成為傳染病源。因此，屠宰廢水治理對保護環(huán)境和人類健康十分重要。根據(jù)屠宰廢水可生化性強的特點，目前多采用生物方法治理，常用的活性污泥法有:完全混合曝氣法、延時曝氣法、射流曝氣法、深井曝氣法，常用的生物膜法有:生物轉(zhuǎn)盤、生物濾池及生物接觸氧化法?；瘜W絮凝法常用絮凝劑有:鐵鹽、鋁鹽及聚合硫酸鐵、堿式氯化鋁。但單獨使用一種方法處理都不能達到排放要求，即使是較好的加壓生化法，COD去除率也只能達到80%左右，而采用屠宰廢水養(yǎng)殖單胞藻則是一條理想的方法，對C0D、SS、NH3-N的平均去除率分別可達98^^96^^99%,既能處理廢水，又得到了有重要餌料價值的單胞藻產(chǎn)品，一舉兩得。
[0003]球等鞭金藻Isochrysis galbana是一種分布廣泛的海洋浮游單細胞藻類,屬金藻門，金藻綱，等鞭金藻目，等鞭金藻科，等鞭金藻屬。因其個體小、繁殖快、營養(yǎng)豐富、運動速度適中，又不含纖維質(zhì)細胞壁，易被貝類幼蟲捕捉、吞食和消化，因而是海產(chǎn)經(jīng)濟動物櫛孔扇貝、馬糞海膽、日本對蝦、牡蠣、文蛤、貽貝、舌鰨、銀鮫、鮑魚、梭子蟹等多種名貴海產(chǎn)經(jīng)濟動物良好餌料。近來又報道，球等鞭金藻富含n-3多不飽和脂肪酸，尤其富含DHA和EPA，具有生產(chǎn)DHA和EPA的潛力。EPA和DHA具有防治心腦血管疾病、促進大腦發(fā)育等重要生理功效。該藻在海洋中營浮游生活，屬低溫品系，經(jīng)過_8°C冰凍后，還能復蘇，適宜水溫0-27°C，最適13-18°C;適宜鹽度10-35，最適15-30 ;適宜光照強度3000-30000Lux ;適宜pH6_10 ;營二分裂法繁殖，縱向分裂。正常情況下5小時分裂I次；生活于透明度較大、溫度較低、有機質(zhì)含量低的水體。
[0004]異膠藻Hdterogloea sp.是一種海洋單胞藻,適應性強,繁殖迅速,容易培養(yǎng)。屬黃藻門，黃藻綱，異囊藻目，異囊藻科，異膠藻屬，是紫貽貝、泥蚶、雜色蛤及扇貝幼體最佳餌料。細胞長橢圓形，一側(cè)生黃綠色素體占細胞大部分，無蛋白核。細胞長4-5.5微米，寬
2.5-4微米，二分裂繁 殖；鹽度13-31范圍正常繁殖，最適鹽度20-29 ;適溫范圍8_35°C，最適 15-330C ;適宜光照強度 1000-8000Lux, ρΗ7.5-8.2。
[0005]球等鞭金藻和異膠藻培養(yǎng)傳統(tǒng)上使用f/2培養(yǎng)基并使用開放水泥池培養(yǎng)，藻細胞倍增時間長，生長速度慢，投資大，產(chǎn)量低，容易污染，操作麻煩。使用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基并使用簡易光生物反應器培養(yǎng)球等鞭金藻和異膠藻細胞不飽和脂肪酸含量高，成本低，不易污染，易于操作，大大降低了工作量，而且我在培養(yǎng)基中增加了牛肉浸膏，蛋白胨，酵母膏，葡萄糖，L-谷氨酸，瓊脂，可溶性淀粉，海泥抽取液，土壤抽出液，S3維生素溶液等成分，有機肥和無機肥混合搭配使用，營養(yǎng)更加全面、均衡，球等鞭金藻和異膠藻生長速度大幅度提高，培養(yǎng)周期縮短，產(chǎn)量提高240 %。而且，與傳統(tǒng)的單種培養(yǎng)相比，混合培養(yǎng)有利于發(fā)揮兩種單胞藻營養(yǎng)需求的差異和互利共生作用，優(yōu)勢互補，相互促進，更加充分地利用營養(yǎng)鹽，更加高效地吸收光能，減少了營養(yǎng)鹽的損失，提高了經(jīng)濟效益。
[0006]有益結(jié)果:利用屠宰廠廢水養(yǎng)殖藻類，變廢為寶，既處理了廢水，又得到了有重要餌料價值的單胞藻產(chǎn)品，一舉兩得；我在以屠宰廠廢水為基本原料的培養(yǎng)基中加入了牛肉浸膏，蛋白胨，酵母膏，葡萄糖，L-谷氨酸，瓊脂，可溶性淀粉，海泥抽取液，土壤抽出液，S3維生素溶液等成分，并通過充氣管向藻液充入空氣、純二氧化碳、氨氣、甲烷組成的混合氣體，營養(yǎng)更加全面、均衡，單胞藻生長速度大大提高，產(chǎn)量提高240% ;傳統(tǒng)的光生物反應器照明用的燈都是置于反應器外部，現(xiàn)在我將燈置于反應器內(nèi)部，減少了光程和光線穿過反應器玻璃壁造成的光能的損耗，提高了光能利用效率；而且傳統(tǒng)的水龍頭是安置在反應器的側(cè)壁上，制作麻煩，成本高，向外排放藻液時放不干凈，總有殘存；現(xiàn)在我將它安置在底部，藻液排放徹底、干凈，幾乎沒有殘留，操作也很方便。而且，與傳統(tǒng)的單種培養(yǎng)相比，兩種單胞藻混合培養(yǎng)有利于發(fā)揮不同單胞藻營養(yǎng)需求的差異和互利共生作用，優(yōu)勢互補，相互促進，更加充分地利用營養(yǎng)鹽，更加高效地吸收光能，減少了營養(yǎng)鹽的損失，單胞藻產(chǎn)量和經(jīng)濟效益大大提高。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種利用屠宰廠廢水養(yǎng)殖球等鞭金藻和異膠藻的培養(yǎng)基，配方如下:
[0008]屠宰廠廢水50毫升，牛肉浸膏1.0克，蛋白胨1.5克，酵母膏0.5克，葡萄糖2.0克，L-谷氨酸0.1克，瓊脂1.5克，可溶性淀粉1.2克，NH4N0315毫克，NaN034毫克，尿素3毫克，KH2PO4L 5毫克，雞糞浸出液2.5毫升，兔糞浸出液1.8毫升，海泥抽取液1.5毫升，土壤抽出液1.2毫升，S3維生素溶液1.0毫升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000毫升；
[0009]其中S3維生素溶液配方:硫胺素鹽酸鹽50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸鈣10毫克，對氨安息香酸1.0克，維生素H0.1克，肌醇0.5克，葉酸0.2微克，胸間氮苯0.3克，蒸餾水1000毫升；
[0010]一種等鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)方法，具體步驟如下:
[0011 ] 培養(yǎng)容器為圓柱形有機玻璃反應器，柱高90厘米，直徑30厘米，壁厚5毫米，頂部有一蓋子，蓋子上有3個孔，一個孔插入充氣管，另一個孔插入排氣管，中間一個孔插入導線，導線末端連著一個100瓦的節(jié)能燈。底部按著一個水龍頭，將反應器洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，用漏斗裝入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基至水深55厘米，充氣混合5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的球等鞭金藻和異膠藻藻液分別進行接種，先接種球等鞭金藻，接種密度8X104cell/mL，再接種異膠藻，接種密度15X 104cell/mL ;瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長，頂端露出瓶口 7-10厘米，下端插入較深，離瓶底5厘米，用以充氣；另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細，直徑6毫米；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:氨氣:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ;充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可；室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫，最佳溫度23±2°C，節(jié)能燈照射，光照強度6000-10000Lux，光/暗周期為16L/8D，即光照16小時，黑暗8小時；培養(yǎng)至第6天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養(yǎng)基至水深60厘米，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第9天，球等鞭金藻和異膠藻密度分別增加至100X IO4ceIVmL和4000X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，從底部的水龍頭放出藻液，將反應器洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養(yǎng)；
[0012]所述中藥消毒液:由以下重量比的物質(zhì)組成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材:板藍根30~50份、柴胡15~25份、薄荷15~25份、桅子5~15份、艾葉5~15份。中藥消毒液制作方法:將新鮮板藍根、柴胡、薄荷葉、艾葉、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用。用托盤天平分別稱取烘干并粉碎的板藍根120克，柴胡60克，薄荷葉60克，艾葉30克，山桅果30克，置于三角燒瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為復方中藥消毒液，密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰禮備用。
[0013]優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘；
[0014]優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘； [0015]優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘；使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘；消毒完畢后再進行藻類培養(yǎng)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為利用屠宰廠廢水養(yǎng)殖海洋單胞藻的方法圖。其中附圖標記為:1充氣管2光生物反應器3藻液4水龍頭5節(jié)能燈6排氣管。
【具體實施方式】
[0017]I)預處理:屠宰廠廢水用于養(yǎng)藻前需要進行預處理，方法是:先用80目的銅篩過濾，除去碎肉、骨渣、血塊、豬毛、脂肪等較大塊固形物，后將污水引入長30米、寬15米、深
0.8米的水泥池中，池子呈東西走向，以接受更多的陽光照射；水深保持在65厘米；按每立方米污水加入50克生石灰的量均勻潑灑生石灰(生石灰最好預先按I公斤加入5升純水的量在塑料桶中溶解、稀釋、攪拌均勻，再全池潑灑)，隔30分鐘，再按每立方米污水加入10克的量全池潑灑明礬(明礬最好預先按100克加2升純水的量在塑料桶中溶解、稀釋并攪拌均勻，再全池潑灑)，然后用耙子攪動或充氣攪拌45分鐘，使石灰和明礬充分溶解、混合并與污水中有機物充分發(fā)生化學反應，然后自然沉淀、發(fā)酵、曝光72小時，撇去水面漂浮物，勿攪動池底，取中上層的污水，煮沸5分鐘，冷卻，裝入不透光的黑色塑料桶中，密封，4°C冰箱或冷庫，保存，備用。[0018]2)接種用的等鞭金藻和異膠藻預先進行提純(本領(lǐng)域常規(guī)方法，只要可實現(xiàn)提純即可，例如索氏提取法)，以確保接種時藻種處于指數(shù)生長期；
[0019]3)各種營養(yǎng)鹽要按配方中提供的順序加入，以免發(fā)生化學反應；
[0020]4)各種營養(yǎng)鹽特別是S3維生素溶液均需預先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存?zhèn)溆?，放置時間不要超過60天；
[0021]5)全部營養(yǎng)鹽加完后要充氣混合15分鐘，使營養(yǎng)鹽混合均勻后再接種；
[0022]6)海泥抽取液制備方法:取比較肥沃又不於黑的海泥，以1份泥加5份淡水，充分攪拌均勻，靜置1-2分鐘，取上層泥漿于鋁鍋中，按每1000毫升泥漿加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸10分鐘。煮時需不斷攪拌均勻，煮后靜置、冷卻、沉淀24小時，取上清液，置于4 °C冰箱保存，備用；
[0023]7)雞糞浸出液制備方法:把干雞糞、青草、豆餅、米糠、穎殼(五谷雜糧的外殼)和腐殖土按60: 10: 12: 15: 2: I的重量比例混合，攪拌均勻，裝入缸內(nèi)密閉進行發(fā)酵，30天后，倒出，在干凈水泥地上，攤成薄層，晾干48小時，后取2公斤，置于塑料水桶，加自來水10公斤，攪拌均勻，用200目篩絹過濾，將清液煮沸5分鐘，冷卻，靜置24小時，取上清液，裝入試劑瓶，貼上標簽，置于4°C冰箱，備用。
[0024]8)兔糞浸出液制備方法:將兔糞與青菜、蘿卜、水草、樹葉等青飼料按3:1重量比例，再加入0.5%的食鹽和5%水混勻，裝入缸或水泥池壓實，上面加2-3厘米厚的麩皮，以利保溫，然后用塑料膜密封，發(fā)酵15天，后取出置于干凈水泥地上，攤成薄層，陽光下暴曬3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸餾水，充分攪勻，靜置，48小時后200目篩絹過濾，取濾液加熱、煮沸15分鐘，殺死其中的細菌、霉菌、病毒等，冷卻，沉淀48小時，取上清液，即得兔糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，貼上標簽，置于4°C冰箱備用；
[0025]9) 土壤抽出液制備方法:到樹林中取松散、富含有機質(zhì)的上層土壤I公斤，加自來水5升，煮沸20分鐘，將泥漿倒入燒杯中，靜置24小時，后吸取上清液，倒入三角燒瓶中，加棉花塞，煮沸15分鐘，冷卻，靜置沉淀12小時，取上清液即得土壤抽出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，貼上標簽，置于4°C冰箱備用；
[0026]10)所用化學藥品純度均需化學純級別；
[0027]11) 一種球等鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)高產(chǎn)培養(yǎng)基，其配方如下:
[0028]屠宰廠廢水50毫升，牛肉浸膏1.0-1.5克，蛋白胨1.5-2.0克，酵母膏0.5克，葡萄糖2.0克，L-谷氨酸0.1克，瓊脂1.5克，可溶性淀粉1.2克，NH4NO315毫克，NaN034毫克，尿素3暈克,KH2PO4L 5暈克，雞糞浸出液2.5毫升，兔糞浸出液1.8毫升，海泥抽取液1.5暈升，土壤抽出液1.2毫升，S3維生素溶液1.0毫升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000毫升；
[0029]其中S3維生素溶液配方:硫胺素鹽酸鹽50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸鈣10毫克，對氨安息香酸1.0克，維生素H0.1克，肌醇0.5克，葉酸0.2微克，胸間氮苯0.3克，純水1000毫升；
[0030]12) 一種球等鞭金藻和異膠藻混合高產(chǎn)培養(yǎng)方法，具體步驟如下:
[0031 ] 培養(yǎng)容器為圓柱形有機玻璃反應器，柱高90厘米，直徑30厘米，壁厚5毫米，頂部有一蓋子，蓋子上有3個孔，一個孔插入充氣管，另一個孔插入排氣管，中間一個孔插入導線，導線末端連著一 個100瓦的節(jié)能燈。底部按著一個水龍頭，將反應器洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，100X 104cell/mL和4000X IO4CelΙ/mL，停止培養(yǎng)，從底部的水龍頭放出藻液，將反應器洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后進入下一輪培養(yǎng)；
[0032]所述中藥消毒液:由以下重量比的物質(zhì)組成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材:板藍根30~50份、柴胡15~25份、薄荷15~25份、桅子5~15份、艾葉5~15份。中藥消毒液制作方法:將新鮮板藍根、柴胡、薄荷葉、艾葉、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用。用托盤天平分別稱取烘干并粉碎的板藍根120克，柴胡60克，薄荷葉60克，艾葉30克，山桅果30克，置于三角燒瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為復方中藥消毒液，密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱或冷庫備用。
[0033]14)優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0034]優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘；
[0035]優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘；
[0036]優(yōu)選地，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘；使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘；消毒完畢后再進行藻類培養(yǎng)。
[0037]15)次氯酸鈉消毒法消毒海水方法是:1立方米海水中加入漂白粉200-300克，使海水中有效氯含量達到10-20mg/L，充氣8-12小時后，用硫代硫酸鈉中和余氯。硫代硫酸鈉量由余氯的多少來確定，直到滴入淀粉碘化鉀液不變色為止；
[0038]16)應預先準備三塊長方體狀的木塊，用于支撐光生物反應器，相當于反應器的三條腿；木塊的大小是20厘米X 15厘米X 10厘米；放置反應器的地面應平整、堅硬、干凈，最好是水泥面。
[0039]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實施例技術(shù)方案的精神和范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種利用屠宰廠廢水混合養(yǎng)殖球等鞭金藻和異膠藻的培養(yǎng)基，其特征在于配方如下: 屠宰廠廢水50毫升，牛肉浸膏1.0克，蛋白胨1.5克，酵母膏0.5克，葡萄糖2.0克，L-谷氨酸0.1克，瓊脂1.5克，可溶性淀粉1.2克，NH4NO315毫克，NaN034毫克，尿素3毫克，KH2PO4L 5毫克，雞糞浸出液2.5毫升，兔糞浸出液1.8毫升，海泥抽取液1.5毫升，土壤抽出液1.2毫升，S3維生素溶液1.0毫升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000毫升， 其中S3維生素溶液配方:硫胺素鹽酸鹽50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸鈣10毫克，對氨安息香酸1.0克，維生素H0.1克，肌醇0.5克，葉酸0.2微克，胸間氮苯0.3克，蒸餾水1000毫升。
2.一種球等鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)方法，其特征在于具體步驟如下: 培養(yǎng)容器為圓柱形有機玻璃反應器，柱高90厘米，直徑30厘米，壁厚5毫米，頂部有一蓋子，蓋子上有3個孔，一個孔插入充氣管，另一個孔插入排氣管，中間一個孔插入導線，導線末端連著一個100瓦的節(jié)能燈，底部按著一個水龍頭，將反應器洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，用漏斗裝入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基至水深55厘米，充氣混合5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的球等鞭金藻和異膠藻藻液分別進行接種，先接種球等鞭金藻，接種密度8X 104cell/mL,再接種異膠藻,接種密度15X 104cell/mL ;瓶口插入兩根干凈玻璃管,一根較長，頂端露出瓶口 7-10厘米，下端插入較深，離瓶底5厘米，用以充氣，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細，直徑6毫米，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端 用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是(空氣:純二氧化碳:氨氣:甲烷)=92%: 6%: 1%: 1% ;充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫，最佳溫度23±2°C，節(jié)能燈照射，光照強度6000-10000LUX，光/暗周期為16L/8D，即光照16小時，黑暗8小時，培養(yǎng)至第6天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮的權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基至水深60厘米，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第9天,球等鞭金藻和異膠藻密度分別增加至100X 104cell/mL和4000 X IO4Cell/mL，停止培養(yǎng)，從底部的水龍頭放出藻液，將反應器洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養(yǎng)； 所述中藥消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材:板藍根30~50份、柴胡15~25份、薄荷15~25份、桅子5~15份、艾葉5~15份，中藥消毒液制作方法:將新鮮板藍根、柴胡、薄荷葉、艾葉、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用，用托盤天平分別稱取烘干并粉碎的板藍根120克，柴胡60克，薄荷葉60克，艾葉30克，山桅果30克，置于三角燒瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液，即為復方中藥消毒液，密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰禮備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種球鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)方法,其特征在于,對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種球鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)方法,其特征在于，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種球鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)方法,其特征在于，對選用的所述的反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種球鞭金藻和異膠藻混合培養(yǎng)方法,其特征在于,對選用的所述的反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養(yǎng)。
【文檔編號】C12R1/89GK103966100SQ201410222836
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】王培磊 申請人:臨沂大學