一株在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌及其篩選方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌，其特征在于，所述聚磷菌的保藏號(hào)為CCTCC?NO:M2014140。本發(fā)明的菌株是利用低溫富集培養(yǎng)及稀釋混合平板法從巢湖底泥中篩選得到的一種在低溫下能高效除磷的聚磷菌，在8℃下仍能在厭氧時(shí)有效吸收廢水中的碳源轉(zhuǎn)化為聚β-羥基烷酸鹽，同時(shí)釋放胞內(nèi)儲(chǔ)存的多聚磷酸鹽，從中獲得能量；在好氧時(shí)氧化胞內(nèi)的聚β-羥基烷酸鹽產(chǎn)生能量，并大量地從廢水中攝磷，以多聚磷酸鹽的形式加以積累。本發(fā)明菌株具有廣泛的溫度適應(yīng)性，在8-30℃內(nèi)都有較好的聚磷效果，可用于冬季或低溫條件下的廢水處理。
【專利說明】一株在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌及其篩選方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一株在低溫下仍具有較高除磷效果的聚磷菌及其篩選方法和應(yīng)用，屬于環(huán)境微生物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]水污染問題是世界各國普遍面臨的重要問題，而這一問題在我國這樣一個(gè)發(fā)展中國家猶為嚴(yán)重。近幾十年來，我國人口急劇增長，城市化步伐加快，城市污水排放量日益增多，水體污染現(xiàn)狀十分嚴(yán)重，且有明顯惡化的趨勢。隨著水污染的日益加劇，水體的富營養(yǎng)化問題越來越突出。近十年以來，我國富營養(yǎng)化水體的比例從50%增長到55%，同時(shí)貧營養(yǎng)化水體比例從3.2%降到0.53%。水體富營養(yǎng)化會(huì)引起藻類的大量繁殖，導(dǎo)致赤潮或水華現(xiàn)象的發(fā)生，降低水體的透明度，影響水質(zhì)；藻類大量繁殖還會(huì)消耗水體中的溶解氧，影響其他水生生物的生存，破壞水生生態(tài)平衡；同時(shí)部分藻類會(huì)向水體中釋放有毒物質(zhì)，危害其他生物及人體健康。自然水體富營養(yǎng)化的主要原因是含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)，特別是氮磷等元素的廢水被注入江河湖泊中。在眾多元素中，磷含量的超標(biāo)被認(rèn)為是導(dǎo)致水體富營養(yǎng)化的關(guān)鍵因素之一。因此，如何高效、經(jīng)濟(jì)的除磷已經(jīng)成為目前水污染防治領(lǐng)域的重要研究方向。
[0003]生物除磷技術(shù)是 目前國際上廣泛應(yīng)用的除磷方法，其優(yōu)點(diǎn)是可以避免化學(xué)除磷方法中產(chǎn)生的大量化學(xué)污泥，減少污泥膨脹現(xiàn)象，節(jié)約能源、運(yùn)行費(fèi)用較低，且有利于磷的回收。生物除磷主要是由一類被稱為聚磷菌(Poly-phosphate Accumulating Organisms,PAOs)的微生物來完成的，這類微生物均屬于異養(yǎng)型細(xì)菌。其核心是利用聚磷菌在厭氧條件下釋放磷和在好氧條件下對磷的過量吸收的特點(diǎn)，并且好氧條件下吸收的磷比厭氧條件下釋放的磷多，從而使得廢水中的磷得以去除。一般細(xì)菌體內(nèi)的含磷量只有細(xì)胞干重的2%左右，而聚磷菌在好氧條件下可以超量地將廢水中的磷吸入體內(nèi)，使磷含量超過10%，甚至可達(dá)到30%。近年來，人們對微生物除磷技術(shù)進(jìn)行了深入的研究，并設(shè)計(jì)了多種除磷工藝。
[0004]然而在冬季或寒冷地區(qū)等低溫條件下，生物除磷的效果顯著下降。這主要是因?yàn)樵谏锍字衅鹬饕饔玫闹袦鼐哿拙?phosphorus accumulation organism, PAOs)在低溫條件下的生長代謝處于抑制狀態(tài)，而低溫PAOs在正常溫度下比中溫PAOs少，代謝速率慢，很難在自然狀態(tài)下形成優(yōu)勢菌群。因此，要實(shí)現(xiàn)低溫條件下有效除磷，不能僅僅從研發(fā)工藝以及運(yùn)行調(diào)整等方面研究，還必須從微生物學(xué)的角度研究探討低溫生物除磷的可行性。
[0005]近年來，人們對低溫聚磷菌進(jìn)行了一定研究，主要是通過溫度梯度馴化，從中溫聚磷菌中篩選在低溫仍具有聚磷效能的菌株。然而此類細(xì)菌及其除磷特性的研究都處于初級(jí)階段，沒有快捷的培養(yǎng)馴化方式，也沒有系統(tǒng)的鑒定方法。探明低溫聚磷菌的種屬及特性，明確它們的除磷條件，將有助于廢水除磷工藝的研究、開發(fā)和應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對以上問題，本發(fā)明的目的是提供一株在低溫下仍具有較高除磷效果的聚磷菌。該細(xì)菌具有廣泛的溫度適應(yīng)性，同時(shí)能有效地利用各種碳源。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該菌的篩選方法和應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的菌株是利用低溫富集培養(yǎng)及稀釋混合平板法從巢湖底泥中篩選得到的一種在低溫下能高效除磷的聚磷菌，在8°C下仍能在厭氧時(shí)有效吸收廢水中的碳源轉(zhuǎn)化為聚β -羥基烷酸鹽，同時(shí)釋放胞內(nèi)儲(chǔ)存的多聚磷酸鹽，從中獲得能量；在好氧時(shí)氧化胞內(nèi)的聚β_羥基烷酸鹽產(chǎn)生能量，并大量地從廢水中攝磷，以多聚磷酸鹽的形式加以積累。
[0008]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0009]本發(fā)明目的之一在于提供一株在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌，所述聚磷菌的保藏號(hào)為 CCTCC Ν0:Μ2014140ο
[0010]本發(fā)明另一目的在于提供一種篩選在低溫下具有較高除磷效果聚磷菌的方法，其特點(diǎn)在于，所述方法包括如下步驟:
[0011](I)分別配制培養(yǎng)基Α、Β和C:
[0012]培養(yǎng)基A為菌株分離、純化、保藏培養(yǎng)基，其組成為:每升培養(yǎng)基A包含蛋白胨IOg,牛肉膏5g，氯化鈉5g，瓊脂19g，其余為水，調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2，
[0013]培養(yǎng)基B為預(yù)培 養(yǎng)基，其組成為:每升培養(yǎng)基B包含乙酸鈉2g，Na2HP0446mg,NH4Cl 152.8mg, CaCl28.3mg, MgS0482mg, K2SO417.83mg, HEPES7g，微量元素 2mL，其余為水，調(diào)節(jié) pH 至 7.0-7.2 ；
[0014]培養(yǎng)基C為富磷培養(yǎng)基，其組成為:每升培養(yǎng)基C包含乙酸鈉lg，MgS0482mg,FeS043.7mg，CaCl260mg，(NH4)2SO40.2g，牛肉膏 0.22g，K2HP0474mg，微量元素 2mL，其余為水，調(diào)節(jié) pH 至 7.0-7.2 ；
[0015]所述微量元素的組成為:每升微量元素包含F(xiàn)eCl30.9g, H3BO3150mg, CuS0430mg,KI180mg, MnCl260mg, ZnS04120mg, CoCl2140mg, Na2Mo0460mg,乙二胺四乙酸 IOg,其余為水；
[0016](2)富集培養(yǎng)
[0017]取活性污泥0.5g加到IOOmL無菌水中于6°C— 10°C振蕩培養(yǎng)24h，取IOmL振蕩培養(yǎng)后的混合液轉(zhuǎn)接到IOOmL磷濃度為5mg/L的培養(yǎng)基A中，5-9°C富集培養(yǎng)，每培養(yǎng)2d轉(zhuǎn)接一次，每轉(zhuǎn)接一次培養(yǎng)基A中的磷濃度提高5mg/L，共轉(zhuǎn)接4次，富集培養(yǎng)8d，得到富集培養(yǎng)液；
[0018](3)分離純化
[0019]將所述富集培養(yǎng)液至稀釋度達(dá)到10_6，吸取0.5ml稀釋液于分離純化平板中，在40 0C- 42°C下與培養(yǎng)基A混合，凝固后倒置，于8°C恒溫培養(yǎng)出菌落；挑取所述平板上的單菌落在平板上進(jìn)行多次劃線純化，至顯微觀察顯示無雜菌，即得到純化菌株；
[0020](3)篩選
[0021]將所述純化菌株接種于裝有IOOmL培養(yǎng)基B的錐形瓶中，在130r/min，8°C下振蕩培養(yǎng)24h，得預(yù)培養(yǎng)液，將所述預(yù)培養(yǎng)液按10%轉(zhuǎn)接到裝有IOOmL培養(yǎng)基C的錐形瓶中，在130r/min，8°C下振蕩培養(yǎng)2d ;其中先厭氧培養(yǎng)24h再好氧培養(yǎng)24h ;培養(yǎng)完成后取培養(yǎng)液10000r/min離心10min取上清液，測定上清液的總磷濃度，考察菌株對總磷的去除率，從而篩選出的在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌。[0022]本發(fā)明篩選方法可以篩選出本發(fā)明保藏的菌株，但不限于僅用于篩選本發(fā)明菌株，還可用于其它在低溫下具有較高除磷效果聚磷菌的篩選。
[0023]本發(fā)明的另一目的在于聚磷菌在廢水處理中的應(yīng)用。
[0024]本發(fā)明聚磷菌16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0025]本發(fā)明的菌株具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0026](I)本發(fā)明菌株具有廣泛的溫度適應(yīng)性，在8_30°C內(nèi)都有較好的聚磷效果，可用于冬季或低溫條件下的廢水處理。
[0027](2)本發(fā)明菌株具有非常高的除磷活性，該菌株在培養(yǎng)48h后，除磷率達(dá)到94.5，可用于天然水體生態(tài)改造或原位修復(fù)。[0028]本發(fā)明菌株是2012年10月由發(fā)明人從巢湖底泥中篩選獲得，經(jīng)鑒定，屬于假單胞菌屬，是一株熒光假單胞菌，命名為假單胞菌D6Pseud0m0nas SP.D6,已在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏地址:中國武漢武漢大學(xué)；保藏日期為2014年4月20日；保藏編號(hào)為CCTCC N0:M2014140o
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1是本發(fā)明菌株在不同溫度下培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)基的OD值及除磷率。
[0030]圖2是本發(fā)明菌株在不同碳源培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)基的OD值及除磷率。
[0031]圖3是本發(fā)明菌株在不同pH值培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)基的OD值及除磷率。
[0032]圖4是本發(fā)明菌株在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的OD值及除磷率實(shí)時(shí)檢測結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0033]下面通過附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0034]實(shí)施例1本發(fā)明菌株的分離篩選及鑒定:
[0035](I)培養(yǎng)基
[0036]培養(yǎng)基A:每升培養(yǎng)基含蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化鈉5g，瓊脂19g ;余量為水；ρΗ7.0-7.2。
[0037]培養(yǎng)基A用于菌株分離、純化、保藏.[0038]培養(yǎng)基B:每升培養(yǎng)基含乙酸鈉(碳源)2g，Na2HP0446mg, NH4Cl 152.8mg，CaCl28.3mg, MgS0482mg, K2SO417.83mg, HEPES7g，微量元素 2mL ;余量為水，pH7.0-7.2。
[0039]培養(yǎng)基B用于菌株的預(yù)培養(yǎng)基。
[0040]培養(yǎng)基C:每升培養(yǎng)基含乙酸鈉(碳源)lg, MgS0482mg, FeS043.7mg, CaCl260mg,(NH4)2SO40.2g，牛肉膏 0.22g，K2HP0474mg，微量元素 2mL ;余量為水；pH7.0-7.2。
[0041]培養(yǎng)基C用于菌株的富磷培養(yǎng)。
[0042]D、微量元素組成(g/L):每升培養(yǎng)基含 FeCl30.9g，H3BO3150mg, CuS0430mg,KI180mg, MnCl260mg, ZnS04120mg, CoCl2140mg, Na2Mo0460mg,乙二胺四乙酸 10g。
[0043]上述培養(yǎng)基使用前，121 °C，滅菌20分鐘。
[0044](2)熒光假單胞菌D6菌株的分離、純化及篩選:
[0045]在低溫條件下進(jìn)行富集培養(yǎng)。取巢湖底泥0.5g加到IOOmL無菌水中，8°C下振蕩培養(yǎng)24h，取IOmL混合液轉(zhuǎn)接到IOOmL加入磷至磷濃度達(dá)到5mg/L牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中低溫富集培養(yǎng)。每培養(yǎng)2d轉(zhuǎn)接一次，每轉(zhuǎn)接一次牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中的磷濃度提高5mg/L,共轉(zhuǎn)接4次，富集培養(yǎng)8d，富集得到聚磷能力較強(qiáng)的菌株。
[0046]采用混合稀釋平板法和平板劃線法進(jìn)行分離純化。用移液槍吸取0.5ml富集培養(yǎng)液于裝有4.5ml無菌水的試管中，混勻，依此類推。最終使富集培養(yǎng)液的稀釋度達(dá)到10_6。吸取稀釋后的稀釋液，以每塊平板0.5ml的量，與40°C左右分離培養(yǎng)基混合，放置于超凈工作臺(tái)使其凝固。之后將平板倒置，放入8°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
[0047]挑取單菌落，并對挑取的單菌株在平板上進(jìn)行多次劃線純化，至顯微觀察顯示無雜菌為止，此時(shí)可認(rèn)為菌株純化完畢。
[0048]將所得的純化菌株接種于裝有IOOmL預(yù)培養(yǎng)基的錐形瓶中，在130r/min，8°C下振蕩培養(yǎng)24h。將預(yù)培養(yǎng)液按10%轉(zhuǎn)接到裝有IOOmL富磷培養(yǎng)基的錐形瓶中，在130r/min，8°C下振蕩培養(yǎng)2d。培養(yǎng)過程中，前24h厭氧培養(yǎng)，厭氧條件通過橡膠塞封口，用滅過菌的針筒抽取瓶中空氣再注入高純氮?dú)膺_(dá)到。培養(yǎng)的后24h好氧培養(yǎng)，是在超凈工作臺(tái)中將橡膠塞換為透氣膜，使氧氣進(jìn)入。培養(yǎng)完成后取培養(yǎng)液10000r/min離心10min取上清液，測定總磷濃度，考察菌株對總磷的去除率，篩選出的高效的聚磷菌即本發(fā)明中的熒光假單胞菌D6，接種至斜面培養(yǎng)基保存。
[0049](3)熒光假單胞菌D6的菌落形態(tài)特征:
[0050]在培養(yǎng)基A上培 養(yǎng)2天后菌落乳白色、呈規(guī)則圓形、中間凸起、邊緣不透明、有光澤。
[0051](4) 16SrDNA 的分子鑒定
[0052]實(shí)驗(yàn)方法:從菌株D6的斜面上挑取菌體，加至含100 μ L雙蒸水的離心管中，旋渦混勻，熱裂解菌懸液，以基因組DNA為模板擴(kuò)增16SrDNA。
[0053]正向引物為7F: 5 ’ -CAGAGTTTGATCCTGGCT-3 ’ ；
[0054]反向引物為1540R:5’ -AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’。
[0055]擴(kuò)增反應(yīng)體系為:DNA模板0.5 μ L, 5 X Buffer緩沖液2.5 μ L, dNTPl μ L,正反引物各 0.5 μ L,酶 0.2 μ L，雙蒸水 19.8 μ L。
[0056]反應(yīng)條件為:98°C 預(yù)變性 3min, 98 °C 25sec, 55 °C 25sec, 72 °C lmin, 30 個(gè)循環(huán)，72°C延長IOmin后4°C保存。
[0057]用1%瓊脂糖凝膠對菌株的16SrDNA擴(kuò)增產(chǎn)物做電泳檢測，驗(yàn)證后切下膠條，采用DNA凝膠回收試劑盒純化PCR產(chǎn)物。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物委托上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測序。
[0058](5) 16SrDNA序列分析與系統(tǒng)發(fā)育分析:
[0059]測序后得到D6菌株的16SrDNA長度為1451bp的序列，提交到NCBI Genbank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Blast比對,發(fā)現(xiàn)菌株D6與Pseudomonas f Iuorescens的進(jìn)化距離最為接近，確定其為假單胞菌屬，初步認(rèn)定其為突光假單胞菌，命名為Pseudomonas fluorescens D6。
[0060]D6 菌株 16SrDNA 序列如 SEQ ID NO:1 所示。
[0061]實(shí)施例2本發(fā)明菌株的最佳除磷條件
[0062]1、用本發(fā)明保藏的菌株培養(yǎng)獲得的種子液按體積比1:10接種于培養(yǎng)基C中，分別在8 °C、I (TC、15 °C、20°C、25 °C、30°C下振蕩培養(yǎng)48h，其中先厭氧培養(yǎng)24h，再好氧培養(yǎng)24h，48h后檢測培養(yǎng)基C的OD值及除磷率，檢測結(jié)果如圖1所示。由圖1結(jié)果可知，本發(fā)明菌株具有廣泛的溫度適應(yīng)性，在8-30°C內(nèi)都有較好的聚磷效果，可用于冬季或低溫條件下的廢水處理。
[0063]2、用本發(fā)明保藏的菌株培養(yǎng)獲得的種子液按體積比1:10接種于不同碳源的富磷培養(yǎng)基中，在20°C振蕩培養(yǎng)48h，其中先厭氧培養(yǎng)24h，再好氧培養(yǎng)24h，48h后檢測培養(yǎng)基C的OD值及除磷率，檢測結(jié)果如圖2所示。上述不同碳源的富磷培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基C，以等含碳量葡萄糖替代培養(yǎng)基C中乙酸鈉所得到的培養(yǎng)基Cl，以等含碳量果糖替代培養(yǎng)基C中乙酸鈉所得到的培養(yǎng)基C2，以等含碳量蔗糖替代培養(yǎng)基C中乙酸鈉所得到的培養(yǎng)基C3，以等含碳量乳糖替代培養(yǎng)基C中乙酸鈉所得到的培養(yǎng)基C4 ；以等含碳量淀粉替代培養(yǎng)基C中乙酸鈉所得到的培養(yǎng)基C5。由圖2結(jié)果可知，本發(fā)明菌株能很好的利用各種碳源，最適碳源為乙酸鈉。
[0064]3、用本發(fā)明保藏的菌株培養(yǎng)獲得的種子液按體積比1:10接種于不同pH值的培養(yǎng)基中，在20°C下振蕩培養(yǎng)48h，其中先厭氧培養(yǎng)24h，再好氧培養(yǎng)24h，48h后檢測培養(yǎng)基C的OD值及除磷率，檢測結(jié)果如圖3所示。上述不同不同pH值的培養(yǎng)基分別指:培養(yǎng)基C ;培養(yǎng)基C6:成分與培養(yǎng)基C相同，pH5.0 ;培養(yǎng)基C7:成分與培養(yǎng)基C相同，pH6.0 ;培養(yǎng)基C8:成分與培養(yǎng)基C相同，pH8.0 ;培養(yǎng)基C9:成分與培養(yǎng)基C相同，pH9.0 ;培養(yǎng)基ClO:成分與培養(yǎng)基C相同，ρΗΙΟ.Ο ;培養(yǎng)基Cll:成分與培養(yǎng)基C相同，pHll.0 ;由圖3結(jié)果可知，本發(fā)明菌株在pH7-9的范圍內(nèi)，具有很強(qiáng)的除磷活性。[0065]4、用本發(fā)明保藏的菌株培養(yǎng)獲得的種子液按體積比1:10接種于培養(yǎng)基C中，20°C下振蕩培養(yǎng)48h，其中先厭氧培養(yǎng)36h，再好氧培養(yǎng)12h，整個(gè)培養(yǎng)過程中的實(shí)時(shí)OD值及除磷率如圖4所示，48h后除磷率達(dá)到94.5%。
[0066]
【權(quán)利要求】
1.一株在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌，其特征在于，所述聚磷菌的保藏號(hào)為CCTCC N0:M2014140o
2.一種篩選在低溫下具有較高除磷效果聚磷菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: (1)分別配制培養(yǎng)基A、B和C: 培養(yǎng)基A為菌株分離、純化、保藏培養(yǎng)基，其組成為:每升培養(yǎng)基A包含蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化鈉5g，瓊脂19g，其余為水，調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2， 培養(yǎng)基B為預(yù)培養(yǎng)基 ，其組成為:每升培養(yǎng)基B包含乙酸鈉2g，Na2HP0446mg,NH4Cl 152.8mg, CaCl28.3mg, MgS0482mg, K2SO417.83mg, HEPES7g，微量元素 2mL，其余為水，調(diào)節(jié) pH 至 7.0-7.2 ； 培養(yǎng)基C為富磷培養(yǎng)基，其組成為:每升培養(yǎng)基C包含乙酸鈉lg，MgS0482mg,FeS043.7mg，CaCl260mg，(NH4)2SO40.2g，牛肉膏 0.22g，K2HP0474mg，微量元素 2mL，其余為水，調(diào)節(jié) pH 至 7.0-7.2 ； 所述微量元素的組成為:每升微量元素包含F(xiàn)eCl30.9g, H3BO3150mg, CuS0430mg,KI180mg, MnCl260mg, ZnS04120mg, CoCl2140mg, Na2Mo0460mg,乙二胺四乙酸 IOg,其余為水； (2)富集培養(yǎng) 取活性污泥0.5g加到IOOmL無菌水中于6°C — 10°C振蕩培養(yǎng)24h，取IOmL振蕩培養(yǎng)后的混合液轉(zhuǎn)接到IOOmL磷濃度為5mg/L的培養(yǎng)基A中，5-9°C富集培養(yǎng)，每培養(yǎng)2d轉(zhuǎn)接一次，每轉(zhuǎn)接一次培養(yǎng)基A中的磷濃度提高5mg/L，共轉(zhuǎn)接4次，富集培養(yǎng)8d，得到富集培養(yǎng)液； (3)分離純化 將所述富集培養(yǎng)液至稀釋度達(dá)到10_6，吸取0.5ml稀釋液于分離純化平板中，在40°C —42°C下與培養(yǎng)基A混合，凝固后倒置，于8°C恒溫培養(yǎng)出菌落；挑取所述平板上的單菌落在平板上進(jìn)行多次劃線純化，至顯微觀察顯示無雜菌，即得到純化菌株； (3)篩選 將所述純化菌株接種于裝有IOOmL培養(yǎng)基B的錐形瓶中，在130r/min，8°C下振蕩培養(yǎng)24h，得預(yù)培養(yǎng)液，將所述預(yù)培養(yǎng)液按10%轉(zhuǎn)接到裝有IOOmL培養(yǎng)基C的錐形瓶中，在130r/min，8°C下振蕩培養(yǎng)2d ;其中先厭氧培養(yǎng)24h再好氧培養(yǎng)24h ;培養(yǎng)完成后取培養(yǎng)液10000r/min離心10min取上清液，測定上清液的總磷濃度，考察菌株對總磷的去除率，從而篩選出的在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌。
3.權(quán)利要求1所述聚磷菌在廢水處理中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一株在低溫下具有較高除磷效果的聚磷菌，其特征在于，所述聚磷菌16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK103952365SQ201410214084
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月19日
【發(fā)明者】王寧, 邵嘯, 吳涓, 李玉成, 畢瀟 申請人:安徽大學(xué)