一種脂肪酶催化苯海因制備n-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?br> 【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲酰基苯甘氨酸的方法，所述方法為：以內(nèi)消旋苯海因為原料，以異丙醇為溶劑，以脂肪酶為催化劑，于含殼聚糖的緩沖液中構成pH值為6.4～6.8的反應體系，在40～50℃條件下進行攪拌反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得N-氨甲?；礁拾彼?；本發(fā)明以脂肪酶作為水解酶，殼聚糖與脂肪酶共存，使脂肪酶在介質(zhì)pH值6.4～6.8范圍有良好的水解活性，N-氨甲?；礁拾彼岬漠a(chǎn)率達原料量的41.0～49.5%；本發(fā)明方法不僅環(huán)境污染小，產(chǎn)物純度高，生產(chǎn)成低，而且具有工業(yè)化應用價值。
【專利說明】一種脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?-)【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種N-氨甲酰基苯甘氨酸的制備方法，特別涉及一種脂肪酶催化水解苯海因制備N-氨甲酰基苯甘氨酸的方法。
(二)【背景技術】
[0002]苯海因作為原料，以海因酶水解其酰胺鍵制備N-氨甲?；礁拾彼?，技術已比較成熟，國內(nèi)外不僅有大量的研究報道，而且也有工業(yè)化實際應用，是生產(chǎn)苯甘氨酸的關鍵工藝步驟，N-氨甲?；礁拾彼嵋彩顷P鍵中間體。該技術工藝過程對環(huán)境影響較小，產(chǎn)品純度高，有發(fā)展前景。但是，該技術存在的主要缺點是海因酶生產(chǎn)成本高，從而在經(jīng)濟效益上比較差，實際工業(yè)生產(chǎn)困難。為此，降低其生產(chǎn)成本是迫切需解決的問題。
(三)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的是降低苯海因酶法水解酰胺鍵制備N-氨甲?；礁拾彼岬慕?jīng)濟成本，以脂肪酶替代海因酶，水解苯海因的酰胺鍵得到N-氨甲?；礁拾彼?，脂肪酶的生產(chǎn)成本大大低于海因酶，來源廣泛,可明顯降低經(jīng)濟成本。 [0004]本發(fā)明采用的技術方案是:
[0005]本發(fā)明提供一種脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?，所述方法為:以內(nèi)消旋苯海因為原料，以異丙醇為溶劑，以脂肪酶為催化劑，于含殼聚糖的緩沖液中構成pH值為6.4~6.8的反應體系，在40~50°C條件下進行攪拌反應(優(yōu)選200~300rpm下進行攪拌)，反應完成后，將反應液分離純化，獲得N-氨甲?；礁拾彼?；所述含殼聚糖的緩沖液是將殼聚糖與體積濃度1%的乙酸水溶液混合成殼聚糖質(zhì)量濃度2.5~3.6mg/ml的殼聚糖溶液后，調(diào)節(jié)PH值至5.6~6.2，然后再加入終濃度均為0.025mol/L的磷酸一氫鈉和磷酸二氫鈉，攪拌均勻，制成含殼聚糖的緩沖液；所述脂肪酶的用量為1200~2150U/L反應體系,所述內(nèi)消旋苯海因的初始濃度為7.0~8.8g/L反應體系，所述異丙醇的體積終濃度為49~62%，所述含殼聚糖的緩沖液的用量以殼聚糖的質(zhì)量計為0.8~2.0g/L反應體系O
[0006]進一步，優(yōu)選所述脂肪酶為豬胰脂肪酶(活性為2500U/g)或假絲酵母脂肪酶(活性為 5000U/g)。
[0007]進一步，優(yōu)選所述殼聚糖的脫乙酰度大于90% (優(yōu)選91.5%~92.1%)。
[0008]進一步，優(yōu)選所述轉(zhuǎn)化反應時間為52~60小時，轉(zhuǎn)化反應結束后，以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的pH5.2醋酸-醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量來測定產(chǎn)物轉(zhuǎn)化量。
[0009]進一步，優(yōu)選所述脂肪酶的用量為1500-1700U/L反應體系，所述內(nèi)消旋苯海因的初始濃度為7.7-7.9g/L反應體系，所述異丙醇的體積終濃度為55-57%，所述含殼聚糖的緩沖液的用量以殼聚糖的質(zhì)量計為1.0-1.8g/L反應體系。[0010] 進一步，優(yōu)選所述反應液分離純化的方法為:反應結束后，將反應液在0.1大氣壓下50°C真空回收異丙醇，獲得濃縮液，向濃縮液中加入石油醚進行萃取，靜置分層后，取石油醚層以體積濃度30%的乙醇水溶液進行萃取，取乙醇水溶液相，在0.1大氣壓下50°C真空回收乙醇并干燥，得到N-氨甲?；礁拾彼帷?br> [0011]更進一步，本發(fā)明所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲酰基苯甘氨酸的方法推薦按如下步驟進行:(I)將內(nèi)消旋苯海因溶于異丙醇中，制成內(nèi)消旋苯海因溶液；(2)將殼聚糖與體積濃度1%的乙酸水溶液混合成殼聚糖的質(zhì)量濃度2.5~3.6mg/ml的殼聚糖溶液后，用1.0M濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至5.6~6.2，然后再加入終濃度均為
0.025mol/L的磷酸一氫鈉和磷酸二氫鈉，攪拌均勻，制成含殼聚糖的緩沖液，再將脂肪酶與含殼聚糖的緩沖液混合制成脂肪酶混合液；(3)然后將步驟(1)制備的內(nèi)消旋苯海因溶液與步驟(2)制備的脂肪酶混合液混合均勻后，用1.0M濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至
6.4~6.8，構成反應體系，在40~50°C、200~300rpm條件下進行攪拌反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得N-氨甲酰基苯甘氨酸；所述殼聚糖的脫乙酰度大于90% ;所述脂肪酶的用量為1500~1700U/L反應體系(優(yōu)選1600U/L)，所述內(nèi)消旋苯海因的初始濃度為
7.7~7.9g/L反應體系(優(yōu)選7.8g/L反應體系)，所述異丙醇的體積終濃度為55~57%(優(yōu)選56%)，所述含殼聚糖的緩沖液的用量以殼聚糖的質(zhì)量計為1.0~1.8g/L反應體系(優(yōu)選
1.3g/L);所述脂肪酶為豬胰脂肪酶或假絲酵母脂肪酶。
[0012]以苯海因為原料酶法制備N-氨甲?；礁拾彼幔哂协h(huán)境污染小，產(chǎn)物純度高的優(yōu)點。
[0013]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在:本發(fā)明以脂肪酶作為水解酶，以堿性多糖一殼聚糖與脂肪酶共存來調(diào)節(jié)脂肪酶的適宜水解PH值，使脂肪酶在介質(zhì)pH值
6.4~6.8范圍有良好的水解活性，豬胰脂肪酶對N-氨甲?；礁拾彼岬漠a(chǎn)率達原料量的49.0~49.5%，假絲酵母脂肪酶對N-氨甲?；礁拾彼岬漠a(chǎn)率達原料量的41.0~41.5% ；本發(fā)明方法不僅保持了環(huán)境污染小，產(chǎn)物純度高的優(yōu)點，而且脂肪酶來源廣，價格低，工業(yè)生產(chǎn)成熟，使該工藝的生產(chǎn)成本明顯降低，具有工業(yè)化應用價值。同時也拓寬了脂肪酶的應用范圍。
(四)【具體實施方式】
[0014]下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此:
[0015]本發(fā)明殼聚糖購自浙江金殼生物化學有限公司，豬胰脂肪酶購自上海億欣生物有限公司，異丙醇購自杭州雙林化工試劑廠，內(nèi)消旋苯海因購自湖北麻城騰飛生物科技有限公司，假絲酵母脂肪酶購自北京開泰新世紀生物有限公司。
[0016]實施例1:
[0017](I)取99ml蒸餾水，加入1.0ml化學純的醋酸，配成1.0%體積濃度的醋酸水溶液。在醋酸水溶液中加入0.3克脫乙酰度92.1%的殼聚糖(購自浙江金殼生物化學有限公司)，攪拌至殼聚糖完全溶解，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為5.9，制成含殼聚糖的緩沖液。將酶活為2500U/克的豬胰脂肪酶(購自上海億欣生物有限公司)0.15克加入含殼聚糖的緩沖液中，攪拌均勻，再以90轉(zhuǎn)/分鐘攪拌15分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在130ml化學純異丙醇(購自杭州雙林化工試劑廠)中加入1.8克內(nèi)消旋苯海因(購自湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的脂肪酶混合液混合均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.6，構成總體積233ml的反應體系，在水浴中保持45°C，以300轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應56小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的pH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，即有0.89克N-氨甲?；礁拾彼嵘?，反應產(chǎn)率49.4%。
[0018]反應液232ml在0.1大氣壓下50°C真空回收異丙醇，回收完成后加入100mL石油醚萃取15分鐘，靜止分層后，分離出石油醚，以體積濃度30%的乙醇水溶液90ml萃取15分鐘，分離出乙醇水溶液相，在0.1大氣壓下50°C真空回收乙醇并干燥，得到N-氨甲?；礁拾彼?.72克，收率80.9%ο
[0019]實施例2:
[0020](I)取99ml蒸餾水，加入1.0ml化學純的醋酸，配成1.0%體積濃度的醋酸水溶液。在醋酸水溶液中加入0.36克脫乙酰度91.7%的殼聚糖(購自浙江金殼生物化學有限公司)，攪拌至殼聚糖完全溶解，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用 1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為5.6，制成含殼聚糖的緩沖液。將酶活為2500單位/克的豬胰脂肪酶(購自上海億欣生物有限公司)0.12克加入含殼聚糖的緩沖液，攪拌均勻，再以100轉(zhuǎn)/分鐘攪拌15分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在100mL化學純異丙醇(購自杭州雙林化工試劑廠)中配入1.4克內(nèi)消旋苯海因(湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的脂肪酶混合液混合均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.4，構成總體積203ml的反應體系,在水浴中保持40°C，以200轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應52小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的pH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫300C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，即有
0.69克N-氨甲?；礁拾彼嵘?，反應產(chǎn)率49.3%。
[0021]反應液202ml在0.1大氣壓下50°C真空回收異丙醇，回收完成后加入100mL石油醚萃取15分鐘，靜止分層后，分離出石油醚，以體積濃度30%的乙醇水溶液90ml萃取15分鐘，分離出乙醇水溶液相，在0.1大氣壓下50°C真空回收乙醇并干燥，得到N-氨甲?；礁拾彼?.55克，收率79.7%。
[0022]實施例3:
[0023](I)取99ml蒸餾水，加入1.0ml化學純的醋酸，配成1.0%體積濃度的醋酸水溶液。在醋酸水溶液中加入0.26克脫乙酰度91.5%的殼聚糖(浙江金殼生物化學有限公司)，攪拌至殼聚糖完全溶解，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用
1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為6.2，制成含殼聚糖的緩沖液。將酶活為2500單位/克的豬胰脂肪酶(上海億欣生物有限公司)0.13克加入聚糖緩沖液，攪拌均勻，再以90轉(zhuǎn)/分鐘攪拌20分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在160ml化學純異丙醇(杭州雙林化工試劑廠)中配入2.0克內(nèi)消旋苯海因(湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的殼聚糖混合液混合均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH值至6.8，構成總體積263ml的反應體系，在水浴中保持50°C，以250轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應60小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的PH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，即有0.98克N-氨甲?；礁拾彼嵘?，產(chǎn)率49.0%。
[0024]反應液262ml在0.1大氣壓下50°C真空回收異丙醇，回收完成后加入100mL石油醚萃取15分鐘，靜止分層后，分離出石油醚，以體積濃度30%的乙醇水溶液90ml萃取15分鐘，分離出乙醇水溶液相，在0.1大氣壓下50°C真空回收乙醇并干燥，得到N-氨甲?；礁拾彼?.79克，收率80.6%。
[0025]實施例4:
[0026](I)取99ml蒸餾水，加入1.0ml化學純的醋酸，配成1.0%體積濃度的醋酸水溶液。在醋酸水溶液中加入0.3克脫乙酰度92.1%的殼聚糖(浙江金殼生物化學有限公司)，攪拌至殼聚糖完全溶解，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為5.9，制成含殼聚糖的緩沖液。將酶活為5000單位/克的假絲酵母脂肪酶(北京開泰新世紀生物有限公司)0.10克配入殼聚糖緩沖液，攪拌均勻，再以90轉(zhuǎn)/分鐘攪拌20分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在130ml化學純異丙醇(杭州雙林化工試劑廠)中配入2.0克內(nèi)消旋苯海因(湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的脂肪酶混合液混合均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，構成總體積233ml的反應體系，在水浴中保持45°C，以300轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應60小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的pH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，即有0.82克N-氨甲?；礁拾彼嵘桑a(chǎn)率41.0%。
[0027]反應液232ml在0.1大氣壓下50°C真空回收異丙醇，回收完成后加入100mL石油醚萃取15分鐘，靜止分層后，分離出石油醚，以體積濃度30%的乙醇水溶液90ml萃取15分鐘，分離出乙醇水溶液相，在0.1大氣壓下50°C真空回收乙醇并干燥，得到N-氨甲?；礁拾彼?.66克，收率80.5%。
[0028]對比例I
[0029] 取100mL蒸餾水，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)殼聚糖溶液的pH值為5.9，制成緩沖液。將酶活為2500U/克的豬胰脂肪酶(購自上海億欣生物有限公司)0.15克加入緩沖液，攪拌均勻，再以90轉(zhuǎn)/分鐘攪拌15分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在130ml化學純異丙醇(購自杭州雙林化工試劑廠)中加入1.8克內(nèi)消旋苯海因(購自湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的脂肪酶混合液混合均勻，用l.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.6，構成總體積232ml的反應體系,在水浴中保持45°C，以300轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應56小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的pH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，即有0.42克N-氨甲?；礁拾彼嵘?，反應產(chǎn)率23.3%。[0030]對比例2:
[0031](I)取100mL蒸餾水，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為5.9，制成緩沖液。將酶活為5000單位/克的假絲酵母脂肪酶(北京開泰新世紀生物有限公司)0.10克配入緩沖液，攪拌均勻，再以90轉(zhuǎn)/分鐘攪拌20分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在130ml化學純異丙醇(杭州雙林化工試劑廠)中配入2.0克內(nèi)消旋苯海因(湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的脂肪酶混合液混合均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，構成總體積232ml的反應體系,在水浴中保持45°C,以300轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應60小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的PH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，計有0.39克N-氨甲?；礁拾彼嵘?，產(chǎn)率19.5%。
[0032]對比例3:
[0033](I)取99ml蒸餾水，加入1.0ml化學純的醋酸，配成1.0%體積濃度的醋酸水溶液。在醋酸水溶液中加入0.3克脫乙酰度92.1%的殼聚糖(購自浙江金殼生物化學有限公司)，攪拌至殼聚糖完全溶解，配入0.36克磷酸一氫鈉和0.30克磷酸二氫鈉，攪拌溶解均勻，用
1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)殼聚糖溶液的pH值為5.9，制成含殼聚糖的緩沖液。將酶活為3000U/克的青霉脂肪酶(北京開泰新世紀生物有限公司)0.15克加入殼聚糖緩沖液，攪拌均勻，再以90轉(zhuǎn)/分鐘攪拌15分鐘，制成脂肪酶混合液。(2)在130ml化學純異丙醇(購自杭州雙林化工試劑廠)中加入1.8克內(nèi)消旋苯海因(購自湖北麻城騰飛生物科技有限公司)，溶解 均勻，制成苯海因溶液。(3)將苯海因溶液與步驟(1)制備的脂肪酶混合液混合均勻，用1.0mol/L濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.6，構成總體積233ml的反應體系，在水浴中保持45°C，以300轉(zhuǎn)/分機械攪拌，反應56小時終止。以液相色譜法(色譜條件:C18柱，體積比99:1的pH5.2醋酸:醋酸鈉緩沖液和甲醇為流動相，流速0.5毫升/分鐘，柱溫30°C，進樣量5微升，紫外光檢測器，波長254nm)檢測反應液，苯海因為標準品定量，即有0.19克N-氨甲?；礁拾彼嵘桑磻a(chǎn)率10.6%。
【權利要求】
1.一種脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲酰基苯甘氨酸的方法，其特征在于所述方法為:以內(nèi)消旋苯海因為原料，以異丙醇為溶劑，以脂肪酶為催化劑，于含殼聚糖的緩沖液中構成pH值為6.4~6.8的反應體系，在40~50°C條件下進行攪拌反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得N-氨甲酰基苯甘氨酸；所述含殼聚糖的緩沖液是將殼聚糖與體積濃度1%的乙酸水溶液混合成殼聚糖質(zhì)量濃度2.5~3.6mg/ml的殼聚糖溶液后，調(diào)節(jié)pH值至5.6~6.2，然后再加入終濃度均為0.025mol/L的磷酸一氫鈉和磷酸二氫鈉，攪拌均勻，獲得含殼聚糖的緩沖液；所述脂肪酶的用量為1200~2150U/L反應體系，所述內(nèi)消旋苯海因的初始濃度為7.0~8.8g/L反應體系，所述異丙醇的體積終濃度為49~62%，所述含殼聚糖的緩沖液的用量以殼聚糖的質(zhì)量計為0.8~2.0g/L反應體系。
2.如權利要求1所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?，其特征在于所述脂肪酶為豬胰脂肪酶或假絲酵母脂肪酶。
3.如權利要求1所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?，其特征在于所述殼聚糖的脫乙酰度大于90%。
4.如權利要求1所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲酰基苯甘氨酸的方法，其特征在于所述催化反應時間為52~60小時。
5.如權利要求1所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?，其特征在于所述脂肪酶的用量為1500~1700U/L反應體系，所述內(nèi)消旋苯海因的初始濃度為7.7~7.9g/L反應體系，所述異丙醇的體積終濃度為55-57%，所述含殼聚糖的緩沖液的用量以殼聚糖的質(zhì)量計為1.0~1.8g/L反應體系。
6.如權利要求1所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒?，其特征在于所述方法按如下步驟進行:(1)將內(nèi)消旋苯海因溶于異丙醇中，制成內(nèi)消旋苯海因溶液；(2)將殼聚糖與體積濃度1%的乙酸水溶液混合成殼聚糖的質(zhì)量濃度2.5~3.6mg/ml的殼聚糖溶液后用1.0M濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至5.6~6.2，然后再加入終濃度均為0.025mol/L的磷酸一氫鈉和磷酸二氫鈉，攪拌均勻，制成含殼聚糖的緩沖液，再將脂肪酶與含殼聚糖的緩沖液混合制成脂肪酶混合液；(3)然后將步驟(1)制備的內(nèi)消旋苯海因溶液與步驟(2)制備的脂肪酶混合液混合均勻后用1.0M濃度的氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至6.4~6.8，構成反應體系，在40~50°C、200~300rpm條件下進行攪拌反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得N-氨甲?；礁拾彼?；所述殼聚糖的脫乙酰度大于90% ;所述脂肪酶的用量為1500~1700U/L反應體系，所述內(nèi)消旋苯海因的初始濃度為7.7~7.9g/L反應體系，所述異丙醇的體積終濃度為55~57%，所述含殼聚糖的緩沖液的用量以殼聚糖的質(zhì)量計為1.0~1.8g/L反應體系；所述脂肪酶為豬胰脂肪酶或假絲酵母脂肪酶。
7.如權利要求1或6所述脂肪酶催化苯海因制備N-氨甲?；礁拾彼岬姆椒ǎ涮卣髟谟谒龇磻悍蛛x純化的方法為:反應結束后，將反應液在0.1大氣壓下50°C真空回收異丙醇，獲得濃縮液，向濃縮液中加入石油醚進行萃取，靜置分層后，取石油醚層以體積濃度30%的乙醇水溶液進行萃取，取乙醇水溶液相，在0.1大氣壓下50°C真空回收乙醇并干燥，得到N-氨甲?；礁拾彼?。
【文檔編號】C12P13/04GK103981228SQ201410126571
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年3月31日 優(yōu)先權日:2014年3月31日
【發(fā)明者】錢俊青, 宋大威 申請人:浙江工業(yè)大學