一種α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因及其應(yīng)用；涉及一種從源自于浸麻類芽孢桿菌提取的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因、編碼酶、載體、工程菌及應(yīng)用。本發(fā)明α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因可與表達(dá)載體連接構(gòu)建得到含有該基因的表達(dá)重組質(zhì)粒(pET-20b(+)/cgt)，再轉(zhuǎn)化至大腸桿菌E.coil?BL21中，獲得重組大腸桿菌，該重組大腸桿菌可以分泌表達(dá)重組淀粉環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，以淀粉、糖原、寡聚糖等葡萄糖聚合物為底物，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備環(huán)糊精。
【專利說明】一種α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從源自于浸麻類芽孢桿菌提取的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(CGTase)基因、編碼酶、載體、工程菌及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(EC2.4.1.19，CGTase)是糖基水解酶α -淀粉酶家族(家族13)的重要成員，它是一種關(guān)鍵的胞外表達(dá)酶，該酶能將淀粉或者淀粉衍生物通過環(huán)化反應(yīng)生成環(huán)糊精(簡(jiǎn)稱CGT)。根據(jù)D-呋喃葡萄糖單元個(gè)數(shù)，環(huán)糊精中最常用的有α-、β-、
gamma-環(huán)糊精二種,其對(duì)應(yīng)的環(huán)糊精匍萄糖基轉(zhuǎn)移酶也具有二類:α-、β-、gamma-CGTasesο
[0003]環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶是一種多功能型酶，它能催化四種不同的反應(yīng):三種轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)(歧化反應(yīng)、環(huán)化反應(yīng)和偶合反應(yīng))和水解反應(yīng)。環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在表觀上顯示出外切型主要是由于采用低分子量或者高度支化的淀粉或者糊精作為底物，這些底物比高分子量的直鏈淀粉更容易發(fā)生反應(yīng)。環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶通過環(huán)化反應(yīng)利用淀粉生產(chǎn)環(huán)糊精，作為工業(yè)應(yīng)用的基礎(chǔ)，同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生一定量的極限糊精，這種極限糊精可應(yīng)用于造紙工業(yè)中的表面施膠和涂布，施膠或涂布液中加入極限糊精能顯著改善紙張的書寫性能。
[0004]產(chǎn)生環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的微生物種類眾多，現(xiàn)在工業(yè)上生產(chǎn)環(huán)糊精所使用的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶是來自芽孢桿菌屬，包括:1)好氧嗜溫細(xì)菌，如P.macerans，B.megaterium, B.cereus, B.0hbensis, Klebsiella pneumoniae, K.0xytoca 等；2)好氧嗜熱細(xì)菌，如 B.stearothermophiIus 等；3)厭氧嗜熱細(xì)菌，如:T.thermosulfurigenes 等；
4)好氧嗜堿細(xì)菌,如:B.circulans, Bacillus sp., B.clarkii等；5)好氧嗜鹽細(xì)菌，如:B.halophilus等。環(huán)糊精的工業(yè)化生產(chǎn)均采用酶法合成，但由于野生菌株的產(chǎn)酶能力普遍較低，CGT的產(chǎn)量遠(yuǎn)不能滿足環(huán)糊精工業(yè)化生產(chǎn)的要求，同時(shí)由于轉(zhuǎn)化率低、提純制備以及分離困難等原因?qū)е颅h(huán)糊精生產(chǎn)成本太高，其應(yīng)用受到了很大限制。為了有效降低環(huán)糊精的生產(chǎn)成本，大幅度提高CGT產(chǎn)量起著至關(guān)重要的作用。
[0005]由于環(huán)糊精分子具有獨(dú)特的疏水空腔結(jié)構(gòu)，能包含疏水性客體分子，從而改變客體分子的溶解度、穩(wěn)定性等物理化學(xué)性質(zhì)，因此在食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、紡織、環(huán)保、化妝品、生物技術(shù)和分析化學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。但是，CGT在E.coli中表達(dá)產(chǎn)物大多是以不溶性包涵體形式存在，而這種包涵體的活化需要復(fù)雜的過程，這些都不利于重組CGT的工業(yè)化生產(chǎn)。為了克服野生菌株較低CGT酶生產(chǎn)能力，有關(guān)CGT酶基因在大腸桿菌(Escherichiacoli)中的表達(dá)成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。因此，采用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)CGT越來越得到重視，構(gòu)建高效胞外表達(dá)的基因工程菌有著重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供一種α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因及其應(yīng)用，目的是提供一種軟化類芽抱桿菌(Paenibacillus macerans) JFB05-01的ct _環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(CGTase)基因、含有該基因的重組載體、該重組載體轉(zhuǎn)化得到的重組基因工程菌，以及其在制備重組環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用，環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶制備環(huán)糊精的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0008]本發(fā)明提供一種來源于軟化類芽孢桿菌(Paenibacillus macerans)的α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因，所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示，該酶可催化從淀粉出發(fā)制備環(huán)糊精。
[0009]所述α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因可用于構(gòu)建能夠生物催化淀粉制備環(huán)糊精的基因工程菌，以提聞環(huán)糊精的廣量。
[0010]本發(fā)明提供一種由所述α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因編碼的α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶。
[0011]所述SEQ ID NO:1所示核苷酸序列編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO: 2所示。
[0012]任何對(duì)SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中氨基酸進(jìn)行缺失、插入或替換的處理獲得的多肽片段或其變體，只要其與SEQ ID NO:2所示氨基酸序列具有95%以上同源性，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0013]本發(fā)明涉及含所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的重組載體，及用所述重組載體轉(zhuǎn)化得到的重組基因工程菌。
[0014]本發(fā)明以蛋白酶K-酌.抽提法所得到Paenibacillus macerans基因組DNA (大約2061bp)為模板，根據(jù)NCBI報(bào)道的環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因(GenBank accessionn0.AF047363.1)，設(shè)計(jì)了具有兩個(gè)酶切位點(diǎn)(Nco I和EcoR I)的特異性引物:引物I (5’_CCATATGTCCATGGATTCACCCGATACGAGC-3，)和引物 2( 5，-CTCGAGAGAATTCGGATTTTGCCAGTCCAC-3，)，通過PCR擴(kuò)增得到α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因，接著將擴(kuò)增的不含自身信號(hào)肽的α-CGT酶基因與pMD18-T載體連接并轉(zhuǎn)化宿主Ε.coil JM109,采用藍(lán)白斑篩選后將陽性菌株在含有100 μ g/mL氨芐青霉素(Amp)的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，提取質(zhì)粒并采用酶切電泳和測(cè)序鑒定。
[0015]由于P.macerans a -CGT酶基因內(nèi)部含有一個(gè)NcoI位點(diǎn)，本發(fā)明為了進(jìn)一步將基因亞克隆到表達(dá)載體，以質(zhì)粒pMD18-T simple/cgt為模板,設(shè)計(jì)一對(duì)互補(bǔ)引物(正向引物3:5，-CAATGTGGGTCCCACaATGGGCCAGCCG-3’和反向引物 4:5’-CGGCTGGCCCATtGTGGGACCCACATTG-3’)，采用一步PCR法突變a -CGT酶基因中的NcoI位點(diǎn)，但不改變氨基酸序列。將PCR產(chǎn)物用DpnI處理后轉(zhuǎn)化到宿主Ε.coli JM109中，挑取單克隆在含有100 μ g/mL Amp的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，提取質(zhì)粒并采用酶切電泳鑒定。將已突變NcoI位點(diǎn)的質(zhì)粒pMD18-Tsimple/cgt通過NcoI和EcoRI雙酶切后回收目的片段，再與通過同樣酶切處理的含有PelB信號(hào)肽和His-tag的質(zhì)粒pET_20b (+)用T4DNA連接酶連接；連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化E.coliJM109,挑取單克隆在含有100 μ g/mL Amp的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，提取質(zhì)粒并采用酶切電泳和測(cè)序。
[0016]本發(fā)明將α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因同表達(dá)載體pET_20b(+)連接，構(gòu)建了含有α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的胞外表達(dá)重組質(zhì)粒pET-20b(+)/cgt。將胞內(nèi)表達(dá)重組質(zhì)粒pET-20b (+) /cgt轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21菌株中，獲得含有重組質(zhì)粒pET_20b (+) /cgt的重組菌 E.coli BL21/pET_cgt。 [0017]本發(fā)明還涉及α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因在制備重組α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用，具體為:構(gòu)建含有所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的重組載體，將所述重組載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，獲得的重組基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)(通常以IPTG為誘導(dǎo)劑)，培養(yǎng)液經(jīng)過離心得到含有重組α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的上清液。
[0018]本發(fā)明還涉及一種含所述α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在制備環(huán)糊精中的應(yīng)用，所述應(yīng)用為:以含α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的重組基因工程菌經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)經(jīng)離心獲得的發(fā)酵上清液為酶源，以可溶性淀粉為底物，于ΡΗ3~11緩沖液的反應(yīng)體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，在10~70°C條件下轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，獲得的轉(zhuǎn)化反應(yīng)液即為含環(huán)糊精的混合液，利用甲基橙法測(cè)定a-CGT酶活；將混合液分離純化，獲得環(huán)糊精。
[0019]進(jìn)一步，所述酶源按如下步驟制備:將來源于軟化類芽孢桿菌(Paenibacillusmacerans)的SEQ ID NO:1所示α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因構(gòu)建載體，再將載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得的重組基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)過離心得到含有重組α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的上清液，具體為將含有胞內(nèi)表達(dá)重組質(zhì)粒pET_20b (+) /cgt的重組大腸桿菌BL21/pET-20b(+)/cgt接種至含有100 μ g/ml氨芐青霉素抗性的LB液體培養(yǎng)基，在37°C培養(yǎng)12h，再以1%接種量(v/v)接種到新鮮的含有100μ g/ml氨芐青霉素抗性的LB液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)至菌體濃度0D_約0.6左右，再向LB液體培養(yǎng)基加入終濃度為
0.5mM的IPTG，25°C誘導(dǎo)培養(yǎng)90h后，將培養(yǎng)液在4°C、10，OOOrpm離心20min，收集上清液，即獲得含有α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的上清液，即含有胞外表達(dá)重組質(zhì)粒的重組大腸桿菌 BL21/pET-20b (+)/cgt 發(fā)酵上清液。
[0020]本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在:本發(fā)明提供了一種來源于(Paenibacillusmacerans) JFB05-01的α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因，該α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因可與表達(dá)載體連接構(gòu)建得到含該基因的表達(dá)重組質(zhì)粒pET-20b (+) /cgt,再轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中，獲得重組大腸桿菌，該重組大腸桿菌含有重組α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，可以利用重組大腸桿菌離心后的發(fā)酵液上清液為酶源，以可溶性淀粉為底物，進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備環(huán)糊精。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1為克隆載體pMD18_T simple/cgt物理圖譜；
[0022]圖2為pET_20b (+) /cgt重組質(zhì)粒物理圖譜；
[0023]圖3為α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因PCR擴(kuò)增低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠(argrose)電泳圖；其中，泳道I為利用引物I和引物2擴(kuò)增得到的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因片段，泳道 M 為 DL2000DNA Marker ；
[0024]圖4陽性重組質(zhì)粒pMD18-T simple/cgtl的酶切結(jié)構(gòu)圖；其中，泳道M為DL2000DNA Marker ;泳道I為重組質(zhì)粒pMD18_T simple/cgtl的酶切圖譜；
[0025]圖5陽性重組質(zhì)粒pMD18-T simple/cgt2的酶切結(jié)構(gòu)圖；其中，泳道M為DL2000DNA Marker ;泳道I為重組質(zhì)粒pMD18_T simple/cgtl的酶切圖譜；
[0026]圖6陽性重組質(zhì)粒pET_20b (+)/cgt的酶切結(jié)構(gòu)圖；泳道M為DL2000DNAMarker ；泳道I為重組質(zhì)粒pET-20b (+)/cgt的酶切圖譜；
[0027]圖7為α -環(huán)糊 精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶SDS-PAGE圖:泳道M為蛋白質(zhì)分子量Marker，泳道 2 為 IPTG 誘導(dǎo)的 E.coli BL21/pET_20b (+)/cgt。【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。
[0029]實(shí)施例1: α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆
[0030]用蛋白酶K-酹抽提法提取軟化類芽孢桿菌(Paenibacillus macerans)菌體的總基因組 DNA，以該基因組 DNA 為模板，在引物 I (5，-CCATATGTCCATGGATTCACCCGATACGAGC-3，)和引物 2 (5，-CTCGAGAGAATTCGGATTTTGCCAGTCCAC-3> )的作用下進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，PCR 反應(yīng)體系各組分加入量(總體積 50μ L):10XTaq DNA Polymerase Buf fer5 μ L (Mg2+) ,IOmM dNTPmixture (dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP 各 2.5mM) 5 μ L，濃度為 10 μ M 的克隆引物 1、引物 2 各I μ L，基因組DNAl μ L，Taq DNA聚合酶0.25 μ L，加入無核酸水至50 μ L。
[0031]采用Biorad的PCR儀，PCR反應(yīng)條件為:預(yù)變性94°C 4min,然后進(jìn)入溫度循環(huán)940C 30s, 550C 30s，72°C 2min，共 35 個(gè)循環(huán)，最后 72°C延伸 lOmin，終止溫度為 8°C。
[0032]取10 μ L PCR反應(yīng)液用0.9%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果見圖3所示。從圖3中看出，在2000bp左右出現(xiàn)明顯條帶。切膠回收該片段并純化，直接同T載體進(jìn)行連接，得到克隆重組質(zhì)粒PMD18-T simple/cgtl ο將該重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌JM109中，利用籃白斑篩選系統(tǒng)進(jìn)行篩選，隨機(jī)挑取白色克隆測(cè)序，利用軟件分析測(cè)序結(jié)果，結(jié)果表明:經(jīng)引物I和引物2擴(kuò)增到的核苷酸序列長(zhǎng)度為2061bp。
[0033]實(shí)施例2: α -環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的獲得
[0034]用蛋白酶K-酌.抽提法提取軟化類芽孢桿菌(Paenibacillus macerans) JFB05-01菌體的總基因組DNA，以該基因組DNA為模板，在引物3:5’ -CAATGTGGGTCCCACaATGGGCCAGCCG-3 ’ 和引物 4:5 ’ -CGGCTGGCCCATtGTGGGACCCACATTG-3，)的作用下進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系各組分加入量(總體積 50 μ L): 10 X Taq DNA Polymerase Buffer5 μ L (Mg2+), IOmMdNTP mixture (dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP 各 2.5mM)5 μ L，濃度為 10 μ M 的引物 3、引物 4 各I μ L，模板DNAl μ L，Taq DNA聚合酶0.25 μ L，加入無核酸水至50 μ L。
[0035]采用Biorad的PCR儀，PCR反應(yīng)條件為:預(yù)變性94°C 4min,然后進(jìn)入溫度循環(huán)940C 30s, 550C 30s,72°C 6min，共 35 個(gè)循環(huán)，最后 72°C延伸 6min，終止溫度為 8V。
[0036]取10 μ L PCR反應(yīng)液用0.9%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果見圖3所示，從圖4可以看出，在2000bp處出現(xiàn)明顯特異性條帶。切膠回收該片段并純化。在T4DNA連接酶作用下將該片段同T載體進(jìn)行連接，得到克隆重組質(zhì)粒pMD18-T simple/cgt2。將該重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌JM109中，利用籃白斑篩選系統(tǒng)進(jìn)行篩選，隨機(jī)挑取白色克隆測(cè)序，利用軟件分析測(cè)序結(jié)果，結(jié)果表明:經(jīng)引物3和引物4擴(kuò)增到的核苷酸序列長(zhǎng)度為2061bp，其核苷酸序列為如下SEQ ID NO:1所示，該序列編碼一個(gè)完整的開放閱讀框:
[0037]I ATGGCATCTC CAGACACGAG CGTTGATAAC AAAGTGAATT TTTCCACCGA CGTTATCTAC
[0038]61 CAGATTGTCA CCGACCGCTT CGCGGACGGT GATCGCACCA ACAACCCGGC AGGCGATGCA
[0039]121 TTCTCTGGCG ACCGTTCCAA CCTGAAGCTG TACTTCGGTG GCGATTGGCA GGGCATCATC
[0040]181 GATAAAATCA ACGATGGTTA TCTGACCGGT ATGGGCGTCA CTGCACTGTG GATTTCCCM
[0041]241 CCGGTGGAGA ACATCACCTC TGTCATCAAG TATTCCGGTG TAAACAACAC CTCCTATCAC
[0042]301 GGTTATTGGG CACGTGATTT CAAACAGACC AATGACGCAT TCGGTGACTT CGCCGATTTT
[0043]361 CAGAATCTGA TTGACACTGC CCATGCGCAC AATATCAAAG TGGTMTTGA TTTCGCACCT
【權(quán)利要求】
1.一種α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因，其特征在于所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示。
2.一種由權(quán)利要求1所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因編碼的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶。
3.如權(quán)利要求2所述的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，其特征在于所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列為SEQ ID NO:2所示。
4.一種含權(quán)利要求1所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的重組載體。
5.一種由權(quán)利要求4所述重組載體轉(zhuǎn)化得到的重組基因工程菌。
6.一種權(quán)利要求1所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因在制備重組α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于:將含所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因構(gòu)建載體，再將載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得的重組基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)過離心得到含有重組α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的上清液。
8.一種含權(quán)利要求1所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在制備環(huán)糊精中的應(yīng)用，其特征在于:以含α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的重組基因工程菌經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)經(jīng)離心獲得的發(fā)酵上清液為酶源，以淀粉為底物，于ρΗ3~11緩沖液的反應(yīng)體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，在10~70°C條件下轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，獲得的轉(zhuǎn)化反應(yīng)液即為含環(huán)糊精的混合液，將混合液分 離純化，獲得環(huán)糊精。
9.如權(quán)利要求8所述α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶在制備環(huán)糊精中的應(yīng)用，其特征在于所述底物為淀粉、糖原、寡聚糖等葡萄糖聚合物。
【文檔編號(hào)】C12P19/04GK103789329SQ201410083578
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年3月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月9日
【發(fā)明者】楊軼囡 申請(qǐng)人:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)