雷公根葉斑病菌的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種菌株的新用途，特別涉及一種雷公根葉斑病菌SJTU59在秸稈降解方面的應(yīng)用。本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59（Leptosphaerulina?chartarum?SJTU59）在秸稈降解方面的應(yīng)用，所述雷公根葉斑病菌SJTU59的保藏編號為CGMCC?No.8105。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59纖維素酶活力較高，對秸稈的降解效率也較高。
【專利說明】雷公根葉斑病菌的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種菌株的新用途，特別涉及一種雷公根葉斑病菌(Leptosphaerulina chartarum SJTU59)在稻桿降解方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]我國是農(nóng)業(yè)大國，每年各類農(nóng)作物秸桿產(chǎn)量在7億噸左右，居世界首位。秸桿主要由纖維素、半纖維素及木質(zhì)素等成分組成，在常溫下性質(zhì)十分穩(wěn)定，降解速度緩慢，所以多數(shù)地區(qū)因為趕農(nóng)時、搶播種等原因出現(xiàn)了焚燒秸桿的現(xiàn)象。大面積秸桿焚燒不僅造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，而且浪費了寶貴的生物資源。
[0003]微生物可以通過分泌纖維素酶(cellulase)等物質(zhì)將秸桿分解成寡糖或單糖，是自然界中碳素轉(zhuǎn)化的主要環(huán)節(jié)。且微生物具有增殖速度快、功能豐富多樣、適應(yīng)性強等特點，利用微生物學(xué)方法降解秸桿具有許多其他方法不可替代的優(yōu)點，應(yīng)用前景十分廣闊。
[0004]目前報道的降解秸桿的微生物主要集中于芽孢桿菌、木霉菌、青霉菌及曲霉菌等菌株，雷公根葉斑病菌產(chǎn)生纖維素酶降解秸桿為首次報道，且纖維素酶活力及對秸桿的降解效率都比較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的在于提供一種雷公根葉斑病菌在降解秸桿方面的應(yīng)用，雷公根葉斑病菌SJTU59能高效降解秸桿。
[0006]本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0007]雷公根葉斑病菌SJTU59 (Leptosphaerulina chartarum SJTU59)在稻桿降解方面的應(yīng)用，所述雷公根葉斑病菌SJTU59的保藏編號為CGMCC N0.8105。
[0008]本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。保藏日期為2013年8月21日，保藏編號為:CGMCC N0.8105。
[0009]本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59屬于真菌界，子囊菌門，座囊菌綱，腔菌目，暗色孢科，小光殼屬，雷公根葉斑病菌種。
[0010]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有以下有益效果:
[0011]本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59纖維素酶活力較高，對秸桿的降解效率也較高?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0012]圖1為本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59產(chǎn)生的纖維素酶的活力曲線圖；
[0013]圖2為被雷公根葉斑病菌SJTU59降解前的培養(yǎng)液的照片；
[0014]圖3為被雷公根葉斑病菌SJTU59降解后的培養(yǎng)液的照片；
[0015]圖4為本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59降解秸桿的干重變化示意圖?！揪唧w實施方式】
[0016]以下結(jié)合實施例，詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0017]實施I雷公根葉斑病菌SJTU59產(chǎn)生的纖維素酶的活力測定
[0018]制備TO培養(yǎng)液:200g 土豆切成Icm2的小塊，煮沸30min，4層紗布過濾后保留上清液，于上清液中加入20g葡萄糖，定容至1000mL,分裝到10個250mL三角瓶中，121 °C高壓蒸汽滅菌21min。
[0019]制備玉米秸桿粉為唯一碳源的培養(yǎng)液:將4g NH4NO3,0.5g K2HPO4,
0.5gMgS04.7Η20，0.5g KCl 和 0.01g FeSO4.7H20 溶于 1000mL 去離子水中，分裝到 20 個250mL三角瓶中，每瓶加入Ig玉米秸桿粉，121°C高壓蒸汽滅菌21min。其中，玉米秸桿粉為粉碎且經(jīng)80目篩過濾后制成的玉米秸桿粉。
[0020]將_80°C保存的雷公根葉斑病菌SJTU59在H)培養(yǎng)液中活化獲取種子菌，菌絲體經(jīng)過無菌紗布過濾，去除大量水分后，以3:50 (W/V)轉(zhuǎn)接到玉米秸桿粉為唯一碳源的培養(yǎng)液中，28°C, 180rpm,培養(yǎng)4天。每天取ImL發(fā)酵液,4°C, 6000prm離心IOmin,吸取上清液即為
纖維素酶液。
[0021]于玻璃試管中加入100 μ L上述獲取的纖維素酶液和1.9mL CMC-Na溶液(pH4.8)，充分混勻，50°C水浴lh。加入3mLDNS (3,5- 二硝基水楊酸)試劑，100°C加熱lOmin，冷卻至室溫。于540nm波長下，檢測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算纖維素酶活力大小。CMC-Na購自國藥集團(tuán)，粘度800-1200pa。CMC-Na溶液(pH4.8)，DNS試劑的配制及葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立參照中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(QB2583-2003 )。
·[0022]結(jié)果顯示:雷公根葉斑病菌SJTU59產(chǎn)生的纖維素酶活力在發(fā)酵第二天達(dá)到平臺期，50°C，ρΗ4.8條件下，最大酶活力為6.383±0.196U/mL (如圖1所示)。
[0023]實施2雷公根葉斑病菌SJTU59對秸桿降解能力的測試
[0024]制備玉米秸桿粉:粉碎且經(jīng)80目篩過濾后制成玉米秸桿粉。
[0025]制備玉米秸桿粉為唯一碳源的培養(yǎng)液:將4g NH4NO3,0.5g K2HPO4,
0.5gMgS04.7Η20，0.5g KCl 和 0.01g FeSO4.7H20 溶于 1000mL 去離子水中，分裝到 20 個250mL三角瓶中，每瓶加入Ig上述的玉米秸桿粉，121 °C高壓蒸汽滅菌21min。
[0026]將實施例1中的種子菌經(jīng)過無菌紗布過濾，去除大量水分后，以3:50 (W/V)轉(zhuǎn)接到玉米秸桿粉為唯一碳源的培養(yǎng)液中，280C，ISOrpm,培養(yǎng)4天。將發(fā)酵4天的培養(yǎng)液過濾，收集玉米秸桿粉，去除菌絲體；反復(fù)洗滌菌絲體，收集其附著的玉米秸桿粉，避免損失。將收集的玉米秸桿粉于70°C烘干12h，測定玉米秸桿粉的重量，計算秸桿粉相對干重及失重率。
[0027]結(jié)果顯示:玉米秸桿粉可以被雷公根葉斑病菌SJTU59大量降解，使培養(yǎng)液顏色變淺，且略有粘稠狀，如圖2、3所示；發(fā)酵4天對秸桿粉的降解率達(dá)42% (如圖4所示)。
[0028]可見，本發(fā)明的雷公根葉斑病菌SJTU59產(chǎn)生的纖維素酶的活力較高，降解秸桿的效率也較高。
[0029]以上公開的僅為本申請的幾個具體實施例，但本申請并非局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員能思之的變化，都應(yīng)落在本申請的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.雷公根葉斑病菌SJTU59 (Leptosphaerulina chartarum SJTU59)在稻桿降解方面的應(yīng)用，所述雷公根葉斑病菌的 保藏編號為CGMCC N0.8105。
【文檔編號】C12R1/645GK103710268SQ201310674652
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】陳捷, 吳瓊, 李雅乾, 李瑩瑩, 高士剛, 余傳金, 王猛, 孫佳楠 申請人:上海交通大學(xué)