一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，該方法包括以下步驟：⑴將新鮮西蘭花的食用部分花枝脫水后烘至恒重并粉碎，得到西蘭花干粉；⑵將新收獲的芥籽粉碎后真空抽濾除雜，得到粗酶液；⑶向所述西蘭花干粉中加入所述粗酶液，攪拌均勻，經(jīng)酶解、超聲波振蕩提取，得到提取液，該提取液過篩除渣，得到濾液；濾液經(jīng)真空抽濾即得蘿卜硫素粗提液；⑷將蘿卜硫素粗提液真空濃縮后得到蘿卜硫素粗提水溶液；⑸向蘿卜硫素粗提水溶液中加乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯相，該乙酸乙酯相真空濃縮至膏狀，然后洗脫再真空濃縮至膏狀，即得膏狀蘿卜硫素粗提物；⑹膏狀蘿卜硫素粗提物經(jīng)冷凍干燥至恒重，即得純度為1%~15%的蘿卜硫素粗品。本發(fā)明簡單、高效，成本低。
【專利說明】—種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取純化天然產(chǎn)物中有效成分的方法，尤其涉及一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]長期以來，人們一直把蔬菜視為人體維生素和微量元素的重要來源。近年來，國內(nèi)外學者研究發(fā)現(xiàn)十字花科蔬菜中存在的一些化合物具有抗癌活性，尤其是富含胡蘿卜素的蔬菜，如:胡蘿卜、西蘭花、椰菜和菠菜等。已有實驗證明西蘭花ibroccolf)含有豐富的抗癌物質(zhì)蘿卜硫素，能夠減低對老鼠胸部腫瘤的形成，阻止致癌物質(zhì)的活動，預(yù)防白血病的發(fā)生。
[0003]蘿卜硫素是葡萄糖萊菔子苷(它是芥子油苷，即硫代葡萄糖苷的一種)經(jīng)黑芥子硫酸苷酶酶解或酸水解產(chǎn)生的異硫氰酸鹽衍生物，相對分子質(zhì)量為177.29，分子式C6H11S2NO15蘿卜硫素是活力 最強的一類異硫氰酸鹽，是迄今為止蔬菜中發(fā)現(xiàn)的最強的抗癌成分，因而蘿卜硫素具有很高的研究價值和廣闊的市場開發(fā)前景。而目前蘿卜硫素的主要來源是從西蘭花種子中提取，每公斤 種子4000多元，原料成本過高，不利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。蘿卜硫素的人工合成已有研究，但目前還不能大量生產(chǎn)，其次合成的蘿卜硫素為消旋體，功能減弱，并具有一定的毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單、高效的從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮西蘭花的食用部分花枝于75-85°C下脫水0.5-1.5小時，然后在55飛5°C下烘至恒重，得到西蘭花干物質(zhì)；所述西蘭花干物質(zhì)粉碎至40飛0目后得到西蘭花干粉；
⑵將新收獲的芥籽粉碎至4(-60目，得到芥籽粉；所述芥籽粉中加入蒸餾水，經(jīng)超聲波振蕩l(T30min后真空抽濾除雜，得到粗酶液；
⑶向所述西蘭花干粉 中加入所述粗 酶液，攪拌均勻，35°C酶解0.5-1.5h，再加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，經(jīng)超聲波振蕩提取l0-60min，然后靜置l0-60min，(期間每隔5分鐘攪動I次)，得到提取液，該提取液過30目篩，除去提取物殘渣，得到濾液；所述濾液經(jīng)真空抽濾除去雜質(zhì)后，即得蘿卜硫素粗提液；
⑷將所述蘿卜硫素粗提液先于45-55°C真空濃縮，除去大部分乙醇，再于60-70°C真空濃縮，除盡乙醇，得到蘿卜硫素粗提水溶液；
(5)向所述蘿卜硫素粗提水溶液中 加入乙酸乙酯萃取2-3次，得乙酸乙酯相，該乙酸乙酯相于40-60°C真空濃縮至膏狀，然后用甲醇溶解洗脫，再于30-50°C真空濃縮至膏狀，即得膏狀蘿卜硫素粗提物；(6)所述膏狀蘿卜硫素粗提物經(jīng)冷凍干燥至恒重，即得純度為1°/15%的蘿卜硫素粗品。
[0006]所述步驟⑵中芥籽粉與蒸懼水的比例為I g:40 mL-60 mL。
[0007]所述步驟⑵和所述步驟⑶中的超聲波振蕩條件均是指功率為50(T800W，溫度為25 -35。。。
[0008]所述步驟⑶中的西蘭花干粉與粗酶液的比例為I g:5 mL-15 mL。
[0009]所述步驟⑷和所述步驟(5)中真空濃縮的條件均是指真空度為-0.06MPa-—0.08MPa。
[0010]所述步驟(5)中蘿卜硫素粗提水溶液與乙酸乙酯的比例為I mL:1 mL-3 mL。
[0011]所述步驟(6)中的冷凍干燥條件是指先對材料預(yù)凍，待溫度達到-35--45°C時，用真空泵抽真空，待壓力達到25-35 Pa，開啟加熱；從_351:至(TC，每5°C為一個階段，每階段控溫加熱f 2h，最后在5°C控溫加熱2-4h即可。
[0012]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
1、本發(fā)明利用乙醇進行有機法結(jié)合超聲波提取，乙酸乙酯萃取，因此，不但工藝流程短，技術(shù)條件要求簡單，而且污染源少，提取與萃取劑絕大部分回收，很少排出。
[0013]2、本發(fā)明通過添加外源芥籽酶，促進細胞內(nèi)相關(guān)酶促反應(yīng)的發(fā)生，提高蘿卜硫素含量，提高生產(chǎn)效率。
[0014]3、本發(fā)明由于原料充欲和便宜，每公斤西蘭花只有幾元，脫水干品也只有幾十元，且該原料生產(chǎn)基地面積大，產(chǎn)量高，因此，成本低。
【具體實施方式】
[0015]實施例1 一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮西蘭花的食用部分花枝于75°C下脫水1.5小時，然后在55°C下烘至恒重，得到西蘭花干物質(zhì)；西蘭花干物質(zhì)粉碎至40目后得到西蘭花干粉。
[0016]⑵將新收獲的芥籽粉碎至40目，得到芥籽粉；芥籽粉中加入蒸餾水，在功率為500W、溫度為25°C的條件下經(jīng)超聲波振蕩30min后真空抽濾除雜，得到粗酶液。
[0017]其中:芥籽粉與蒸餾水的比例為I g:40 mL。
[0018]⑶向西蘭花干粉中加入粗酶液，攪拌均勻，35°C酶解0.5h，再加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，在功率為500W、溫度為25°C的條件下經(jīng)超聲波振蕩提取60min，然后靜置60min，(期間每隔5分鐘攪動I次)，得到提取液，該提取液過30目篩，除去提取物殘渣，得到濾液；濾液經(jīng)真空抽濾除去雜質(zhì)后，即得蘿卜硫素粗提液。
[0019]其中:西蘭花干粉與粗酶液的比例為I g:5 mL。
[0020]⑷將蘿卜硫素粗提液先于45°C真空濃縮，除去大部分乙醇，再于60°C真空濃縮，除盡乙醇，得到蘿卜硫素粗提水溶液。
[0021]其中:真空濃縮的條件均是指真空度為-0.06MPa。
[0022](5)向蘿卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2-3次，得乙酸乙酯相，該乙酸乙酯相于40°C真空濃縮至膏狀，然后用甲醇溶解洗脫，再于30°C真空濃縮至膏狀，即得膏狀蘿卜硫素粗提物。
[0023]其中:真空濃縮的條件均是指真空度為-0.06MPa。
[0024]蘿卜硫素粗提水溶液與乙酸乙酯的比例為I mL:1 mL。[0025](6)膏狀蘿卜硫素粗提物經(jīng)冷凍干燥至恒重，即得純度為1%的蘿卜硫素粗品。
[0026]其中:冷凍干燥條件是指先對材料預(yù)凍，待溫度達到-35?_45°C時，用真空泵抽真空，待壓力達到25?35 Pa，開啟加熱；從_35°C至0°C，每5°C為一個階段，每階段控溫加熱I?2h，最后在5°C控溫加熱2?4h即可。
[0027]實施例2 —種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮西蘭花的食用部分花枝于85°C下脫水0.5小時，然后在65°C下烘至恒重，得到西蘭花干物質(zhì)；西蘭花干物質(zhì)粉碎至60目后得到西蘭花干粉。
[0028]⑵將新收獲的芥籽粉碎至60目，得到芥籽粉；芥籽粉中加入蒸餾水，在功率為800W、溫度為35°C的條件下經(jīng)超聲波振蕩IOmin后真空抽濾除雜，得到粗酶液。
[0029]其中:芥籽粉與蒸餾水的比例為I g:60 mL。
[0030]⑶向西蘭花干粉中加入粗酶液，攪拌均勻，35°C酶解1.5h，再加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，在功率為800W、溫度為35°C的條件下經(jīng)超聲波振蕩提取lOmin，然后靜置lOmin，(期間每隔5分鐘攪動I次)，得到提取液，該提取液過30目篩，除去提取物殘渣，得到濾液；濾液經(jīng)真空抽濾除去雜質(zhì)后，即得蘿卜硫素粗提液。
[0031]其中:西蘭花干粉與粗酶液的比例為I g:15 mL。
[0032]⑷將蘿卜硫素粗提液先于55°C真空濃縮，除去大部分乙醇，再于70°C真空濃縮，除盡乙醇，得到蘿卜硫素粗提水溶液。
[0033]其中:真空濃縮的條件均是指真空度為-0.08MPa。
[0034](5)向蘿卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2?3次，得乙酸乙酯相，該乙酸乙酯相于60°C真空濃縮至膏狀，然后用甲醇溶解洗脫，再于50°C真空濃縮至膏狀，即得膏狀蘿卜硫素粗提物。
[0035]其中:真空濃縮的條件均是指真空度為-0.0SMPa0
[0036]蘿卜硫素粗提水溶液與乙酸乙酯的比例為I mL:3 mL。
[0037](6)膏狀蘿卜硫素粗提物經(jīng)冷凍干燥至恒重，即得純度為15%的蘿卜硫素粗品。
[0038]其中:冷凍干燥條件同實施例1。
[0039]實施例3 —種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮西蘭花的食用部分花枝于80°C下脫水1.0小時，然后在60°C下烘至恒重，得到西蘭花干物質(zhì)；西蘭花干物質(zhì)粉碎至50目后得到西蘭花干粉。
[0040]⑵將新收獲的芥籽粉碎至50目，得到芥籽粉；芥籽粉中加入蒸餾水，在功率為650W、溫度為30°C的條件下經(jīng)超聲波振蕩20min后真空抽濾除雜，得到粗酶液。
[0041]其中:芥籽粉與蒸餾水的比例為I g:50 mL。
[0042]⑶向西蘭花干粉中加入粗酶液，攪拌均勻，35°C酶解1.0h，再加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，在功率為56500W、溫度為30°C的條件下經(jīng)超聲波振蕩提取35min，然后靜置35min，(期間每隔5分鐘攪動I次)，得到提取液，該提取液過30目篩，除去提取物殘渣，得到濾液；濾液經(jīng)真空抽濾除去雜質(zhì)后，即得蘿卜硫素粗提液。
[0043]其中:西蘭花干粉與粗酶液的比例為I g:10 mL。
[0044]⑷將蘿卜硫素粗提液先于50°C真空濃縮，除去大部分乙醇，再于65°C真空濃縮，除盡乙醇，得到蘿卜硫素粗提水溶液。
[0045]其中:真空濃縮的條件均是指真空度為-0.07MPa。[0046](5)向蘿卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2?3次，得乙酸乙酯相，該乙酸乙酯相于50°C真空濃縮至膏狀，然后用甲醇溶解洗脫，再于40°C真空濃縮至膏狀，即得膏狀蘿卜硫素粗提物。
[0047]其中:真空濃縮的條件均是指真空度為-0.07MPa。
[0048]蘿卜硫素粗提水溶液與乙酸乙酯的比例為I mL:2 mL。
[0049](6)膏狀蘿卜硫素粗提物經(jīng)冷凍干燥至恒重，即得純度為8%的蘿卜硫素粗品。
[0050]其中:冷凍干燥.條件是指同實施例1。
【權(quán)利要求】
1.一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，包括以下步驟:⑴將新鮮西蘭花的食用部分花枝于75-85°c下脫水0.5-1.5小時，然后在55飛5°C下烘至恒重，得到西蘭花干物質(zhì)；所述西蘭花干物質(zhì)粉碎至40飛0目后得到西蘭花干粉；⑵將新收獲的芥籽粉碎至40飛0目，得到芥籽粉；所述芥籽粉中加入蒸餾水，經(jīng)超聲波振蕩l(T30min后真空抽濾除雜，得到粗酶液；⑶向所述西蘭花干粉中加入所述粗酶液，攪拌均勻，35°C酶解0.5-1.5h，再加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，經(jīng)超聲波振蕩提取l(T60min，然后靜置l(T60min，(期間每隔5分鐘攪動I次)，得到提取液，該提取液過30目篩，除去提取物殘渣，得到濾液；所述濾液經(jīng)真空抽濾除去雜質(zhì)后，即得蘿卜硫素粗提液；⑷將所述蘿卜硫素粗提液先于45飛5°C真空濃縮，除去大部分乙醇，再于6(T70°C真空濃縮，除盡乙醇，得到蘿卜硫素粗提水溶液；(5)向所述蘿卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2-3次，得乙酸乙酯相，該乙酸乙酯相于4(T60°C真空濃縮至膏狀，然后用甲醇溶解洗脫，再于3(T50°C真空濃縮至膏狀，即得膏狀蘿卜硫素粗提物；(6)所述膏狀蘿卜硫素粗提物經(jīng)冷凍干燥至恒重，即得純度為1°/15%的蘿卜硫素粗品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，其特征在于:所述步驟(2)中芥籽粉與蒸餾水的比例為I g:40 mL-60 mL。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，其特征在于:所述步驟⑵和所述步驟⑶中的超聲波振蕩條件均是指功率為50(T800W，溫度為25-35°C。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，其特征在于:所述步驟⑶中的西蘭花干粉與粗酶液的比例為I g:5 mL-15 mL。
5.如權(quán)利要求1所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，其特征在于:所述步驟⑷和所述步驟(5)中真空濃縮的條件均是指真空度為-0.06MPa- -0.08MPa。
6.如權(quán)利要求1所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，其特征在于:所述步驟(5)中蘿卜硫素粗提水溶液與乙酸乙酯的比例為ImL:1 mL-3 mL。
7.如權(quán)利要求1所述的一種從西蘭花中提取蘿卜硫素的方法，其特征在于:所述步驟(6)中的冷凍干燥條件是指先對材料預(yù)凍，待溫度達到-35-_45°C時，用真空泵抽真空，待壓力達到25-35 Pa，開啟加熱；從_35°C至0°C，每5°C為一個階段，每階段控溫加熱l-2h，最后在5°C控溫加熱2-4h即可。
【文檔編號】C12P13/00GK103436565SQ201310408729
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月10日
【發(fā)明者】李勝, 唐斌, 周文政, 馬紹英, 張品南, 劉會杰, 趙生琴, 時振振, 蘇李維 申請人:甘肅農(nóng)業(yè)大學, 蘭州匯通生物科技有限公司, 甘肅順意生物科技有限公司