花生衣活性組分的應用及包含該花生衣活性組分的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種花生衣活性組分的應用及包含該花生衣活性組分的組合物。所述花生衣活性組分能夠用于制備預防、治療神經退行性疾病的食品和藥品。本發(fā)明還提供了一種組合物，含有花生衣活性組分和Omega-3系列不飽和脂肪酸。本發(fā)明提供了花生衣活性組分的一種新用途，為制備預防、治療老年癡呆癥等神經退行性疾病的食品和藥物提供了新的思路。另外，本發(fā)明提供的組合物中除了含有花生衣活性組分外，還含有omega-3系列不飽和脂肪酸，能更好的改善記憶功能。
【專利說明】花生衣活性組分的應用及包含該花生衣活性組分的組合物
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于食品、藥品用途【技術領域】，尤其涉及一種花生衣活性組分的應用及包含該花生衣活性組分的組合物。
【背景技術】
[0002]隨著全球社會人口的發(fā)展，老年人口的增長是世界性的趨勢，而老年性癡呆的患病率和發(fā)病率也逐漸增高，老年性癡呆不僅是一個醫(yī)學難題，而將成為一個突出的社會問題。目前，全球老年性癡呆患者可能已達1700萬，隨著人口老齡化的進程，老年性癡呆的發(fā)病率已上升為常見死亡原因的第4位,僅次于心腦血管病、癌癥和中風。老年性癡呆在我國也已逐漸成為嚴重威脅老年人健康的頑癥。
[0003]老年性癡呆是指老年期發(fā)生的癡呆，包括阿爾茨海默病(AD，Alzheimer’ sDementia),血管性癡呆(Vascular dementia),混合性癡呆(mixed dementia)和其他原因所致癡呆。阿爾茨海默病的病理學特征表現為腦內大量淀粉樣老年斑(SP)，神經纖維纏結(NFT)及選擇性神經元和突觸缺失，多種神經遞質尤其是乙酰膽堿嚴重下降，相應地形成了以β淀粉樣蛋白(Αβ )、tau蛋白及神經元缺失三大機制研究領域。
[0004]近年來隨著對AD的神經生理、生化、藥理等方面不斷的深入研究，防治AD的藥物開發(fā)研究不斷取得進展。目前對老年癡呆的藥物治療主要是通過抑制乙酰膽堿酯酶(acChE)來提高患者體內的乙酰膽堿水平，即乙酰膽堿酯酶抑制劑，它是臨床上用于治療AD最早最為成熟的一類藥物。目前，對于輕、中度AD患者的治療，經美國FDA批準上市的藥品有4種，他克林(tacrine)、多奈哌齊(donepezil)、利斯的明(Rivastigmine)和加蘭他敏(Galantamine),均為乙酰膽堿酯酶抑制劑。其他的治療藥物如β、Y分泌酶抑制藥，長春胺、尼莫地平等腦代謝調節(jié)劑，還有司來吉林、維生素E等影響自由基代謝的藥物等。
`[0005]目前用于治療AD的藥物品種繁多，適用于不同的作用機制，它們在某種程度上，起到了緩解老年癡呆的作用，但是無論是上市或者在研的藥物，都有一定的毒副作用，目前AD仍為一個沒有辦法根治的頑疾。因此，尋找針對AD病因的新的有效治療藥物和方法，成為當今研究的熱點和難點。在眾多的待選藥物中，我們把目光投向了神經生長因子。
[0006]神經生長因子(NGF)屬于神經營養(yǎng)因子(NTF)家族的成員，維持神經元的數量和存活。NGF對神經系統的正常發(fā)育及功能維持，促進損傷神經的再生與修復具有重要作用。NGF作為一種可能治療AD的有效方法，但目前仍存在下列問題:(I)價格昂貴；(2)相對分子質量大，不能透過血-腦屏障(Blood Brain Barrier, BBB),只可腦室內注射,長期治療存在許多技術問題。因此，尋找擬NGF活性，并且可以通過血腦屏障的小分子化合物即NGF mimics，已經成為了目前的研究熱點。到目前為止，科學家們已經發(fā)現了近百種NGFmimics，可以有效的促進神經細胞增長，部分化合物已經完成了結構修飾或是全合成。目前，NGF mimics已有化合物處于三期臨床階段。
[0007]民以食為天，我國地大物博，果蔬魚肉，山珍海味，十分富饒，人類的生存和繁衍離不開飲食，通過飲食，獲得能量及各種營養(yǎng)以滿足機體的需要。因此，在日常食物中開發(fā)具有藥用價值的成分不僅可以避免藥品的毒副作用，還能夠大大降低藥品的研發(fā)、生產成本。
【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明提供了花生衣活性組分在制備預防、治療神經退行性疾病的食品和藥品中的應用，所述花生衣活性組分通過如下方法制備:取干燥的花生衣，用乙醇和水的混合溶液浸提，收集浸提液，用HP-20樹脂進行吸附，水洗后，用乙醇的水溶液洗脫，收集洗脫液，將洗脫液濃縮、干燥后制得所述花生衣活性組分，該花生衣活性組分中花青素的重量百分比含量大于50%。
[0009]本發(fā)明的研究發(fā)現，花生衣活性組分具有顯著的擬神經生長因子的活性，動物藥理學實驗也證明花生衣活性組分能改善小鼠的學習和記憶功能，因此可將花生衣活性組分作為有效成分，添加藥學或食品可接受的載體，制備預防、治療神經退行性疾病的食品和藥
品O
[0010]所述神經退行性疾病具體可為老年性癡呆。
[0011]所述的食品可接受的載體是指食品領域常規(guī)的載體，例如淀粉、蔗糖、微晶纖維素等填充劑，淀粉漿、羥丙纖維素、明膠、聚乙二醇等粘合劑，硬脂酸鎂、微粉硅膠、聚乙二醇類等濕潤劑，聚山梨脂、卵磷脂等吸收促進劑，伯洛沙姆、脂肪酸山梨坦、聚山梨脂等表面活性劑，另外還可以添加香味劑、甜味劑等其它輔劑。
[0012]所述的藥學可接受的載體可參照現有技術。
[0013]將花生衣活性組分制成藥品后，可以以單位劑量形式給藥，給藥途徑可以為腸道或非腸道。
[0014]藥品的劑型可以是固體制劑、液體制劑或半固體劑型，上述各種劑型可采用現有生產方法進行制備。
[0015]制備花生衣活性組分時，優(yōu)選的，浸提時，乙醇與水的體積比為40:60~80:20，更優(yōu)選為60:40o
[0016]浸提液料比為2:1~1000:1，優(yōu)選為5:1~100:1，更優(yōu)選為16:1。
[0017]浸提的溫度為20~50°C，優(yōu)選為35~45°C，更優(yōu)選為40°C。適宜的溫度有利于有效成分的溶解和擴散，促進其浸出。
[0018]浸提的時間為0.5~48h，優(yōu)選為I~12h。浸提時間過長會使雜質浸出量增加，并容易導致已浸出的花生衣活性成分的水解。
[0019]浸提的次數為I~5次，優(yōu)選為2次。
[0020]浸提兩次時，第一次浸提時，液料比為16:1，浸提時間為lh，第二次浸提的時間為
0.5h0
[0021]本領域人員可以理解，液料比為浸提液的體積(ml)與原料的質量(g)的比。
[0022]浸提、過濾后，可以先將濾液濃縮后再用樹脂吸附，一般濾液濃縮至1/50體積。
[0023]所述HP-20樹脂具體可以為三菱化學的HP-20樹脂。
[0024]洗脫時，以乙醇的水溶液作為洗脫劑，其中乙醇與水的體積比為20:80~80:20，優(yōu)選為40:60o
[0025]為保證洗脫效率，洗脫時，洗脫劑與HP-20樹脂體積比值為1:1~10:1，優(yōu)選為2:1~5:1，更優(yōu)選為2:1。[0026]濃縮可采用常規(guī)的方法進行，濃縮結束后，通常干燥至含水量< 5%。
[0027]本發(fā)明還提供了一種組合物，含有所述的花生衣活性組分和Omega-3系列不飽和脂肪酸。
[0028]Omega-3系列不飽和脂肪酸能夠促進肌肉組織的蛋白質代謝、視覺系統發(fā)育，促進心血管健全，減低心臟病發(fā)作或中風的風險，還能夠降低血漿中膽固醇、甘油三酯，改善高甘油三酯患者的血脂水平，預防糖尿病及降低心血管疾病發(fā)生率；另外，經常服食Omega-3系列不飽和脂肪酸不僅能增強學習能力、記憶力和專注力，亦能舒解壓力及令情緒大為振奮。
[0029]將花生衣活性組分和Omega-3系列不飽和脂肪酸混合對記憶能力的改善效果更加顯著，可用于制備預防、治療老年性癡呆癥等神經退行性疾病的食品和藥品。
[0030]其中，花生衣活性組分可采用前述的制備方法進行制備。
[0031]花生衣活性組分和Omega-3系列不飽和脂肪酸的重量比為1:1~5:1。
[0032]所述omega-3系列不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳五烯酸、二十碳四烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸、十八碳四烯酸和亞麻酸中的至少一種。
[0033]優(yōu)選的，所述omega-3系列不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸。
[0034]與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0035](I)本發(fā)明提供了花生衣活性組分的`一種新用途，花生衣活性組分具有顯著的擬神經生長因子的活性，能夠發(fā)揮預防和治療老年性癡呆癥的作用，為制備預防、治療老年癡呆癥等神經退行性疾病的食品和藥物提供了新的思路。
[0036](2)花生衣活性組分以日常所食的花生的一部分為基本原料，產品安全性高，對人體無毒副作用，且原料來源廣，成本低廉，同時花生衣活性組分的制備方法簡單、快速，大大降低了研發(fā)和生產成本。
[0037](3)本發(fā)明提供組合物中除了含有花生衣活性組分外，還含有omega-3系列不飽和脂肪酸，能更好的改善記憶功能。組合物與其中任何一種的效果比較均有顯著差異。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0038]圖1為48小時后不同處理對PC12細胞神經突起分化影響的顯微照片；
[0039]其中，
[0040]a、0.5%DMS0，陰性對照；
[0041]b、40ng/mL NGF,陽性對照；
[0042]C、0.3ug/mL花生衣活性組分；
[0043]d、lug/mL花生衣活性組分；
[0044]e、3ug/mL花生衣活性組分；
[0045]圖2為24和48小時后花生衣活性組分對PC12細胞的神經突起分化率的影響；
[0046]圖3為花生衣活性組分和二十二碳六烯酸分別或混合使用對小鼠的水迷宮試驗影響結果圖。
【具體實施方式】[0047]下面結合具體實施例進一步闡釋本發(fā)明。
[0048]實施例1花生衣活性組分的制備
[0049](1)將干燥花生衣1000克用16升含60%乙醇的醇水混合溶劑在40°C提取I小時后，過濾，獲得第1次濾液；
[0050](2)殘渣中加入2升含60%乙醇的醇水混合溶劑，在40°C提取30分鐘后，過濾，獲得第2次濾液；
[0051](3)將兩次濾液合并后在40°C減壓濃縮到1/50的體積后用Diaion (三菱化學)HP-20樹脂五升進行吸附，隨后，用15升水洗脫除去糖等物質，用10升含40%的乙醇的水溶液進行洗脫，收集洗脫液；
[0052](4)將洗脫液在40°C減壓濃縮到1/50的體積后，冷凍干燥至含水量為5%，獲得花生衣活性組分115.8克。
[0053]花青素含量的測定:
[0054]采用香草醛-鹽酸法進行定量分析。
[0055]標準曲線:棕色試管中，Iml兒茶素(catechin)標準液(0.1,0.2,0.3mg/ml) (Ac)加入 9.0mL 的 2% 香草醛(vanillin)/ (HCl-MeOH) (2g 香草醛溶解在 100ml HCl-MeOH (I:2，v/v)中)，以水(AO)作為空白?；旌先芤涸?8~22°C下孵育20min后在500nm測量吸光度。根據上述方法，用[(Ac) - (Ao)]值生成兒茶素溶液的標準曲線。
[0056]花生衣活性組分測試:在棕色試管中，Iml的測試溶液(40mg的花生衣活性組分溶于100mL的水中)加入9mL2%香草醛/ (HCl-MeOH)，混合溶液在18~22°C孵育20min后在500nm測量吸光度。
[0057]每個樣品測三次，根據標準曲線計算得到樣品中花青素的含量，從而計算得到本實施例中花生衣活性組分中花青素的含量為56%。
[0058]實施例2花生衣活性組分的體外生物活性
[0059]在神經退行性病變動物模型中，研究發(fā)現神經生長因子具有促進神經生長和神經保護功能，能阻止或減少神經元的退變，一定程度上可阻止老年癡呆癥的進展。由于PC12細胞具有神經細胞的一般特征，在神經生長因子的作用下PC12細胞會停止分裂，長出突起，轉化成神經元樣細胞。因此，利用PC12細胞作為生物活性鑒定系統，篩選具有活性的樣品用于制備預防和治療老年性癡呆的保健食品或藥物具有可靠性。
[0060](1)PC12細胞的培養(yǎng)
[0061]接20 X 1O4個PC12細胞接種于含1Oml DMEM培養(yǎng)基(其中含10%馬血清、5%胎牛血清)培養(yǎng)皿中，37°C，5%C02的培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，兩天后更換一次培養(yǎng)基，再過三天繼代培養(yǎng)；
[0062]用PBS將細胞洗兩次，再加入1Oml PBS于培養(yǎng)皿中，37°C，5%C02的培養(yǎng)箱內培養(yǎng)10分鐘，再轉移到15ml的一次性離心管，離心后血球計數板上計數。
[0063](2)活性測試
[0064]細胞計數后，在24孔細胞培養(yǎng)板中每孔先加入1ml含血清(10%馬血清、5%胎牛血清)的DMEM培養(yǎng)基，每孔接入2 X 1O4個細胞，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時；
[0065]棄去培養(yǎng)基，加入1ml含不同提取物的DMEM溶液(不含血清)，放入37°C，5%C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，以1%DMS0為陰性對照，40ng NGF為陽性對照；
[0066]倒置顯微鏡下每隔24小時，連續(xù)觀察細胞形態(tài)變化，記錄細胞的神經突起分化率，每個視野下約100個細胞，隨機選取3處，并統計作圖分析。
[0067]神經突起分化率:神經突起長于胞體直徑一倍的細胞數目與視野下總細胞數目的比值。
[0068](3)實驗結果
[0069]圖1中a:陰性對照0.5%DMS0 ；b:40ng/ml NGF:陽性對照，圖2中，0.5%DMS0為陰性對照，40ng/mL NGF為陽性對照，花生衣活性組分用0.5%DMS0溶液配成不同濃度。參見圖1、圖2，花生衣活性組分在0.3，1或3μ g/ml的測試濃度下處理PC12細胞，24h、48h后花生衣活性組分均顯示出顯著的擬神經生長因子活性，神經突起分化率在30~60%之間。
[0070]實施例3花生衣活性組分與DHA混合使用對鼠記憶功能的影響
[0071]實驗主要材料:ICR小鼠(8周齡雄鼠)(購于浙江省醫(yī)科院動物中心)。
[0072]實驗操作:花生衣活性組分(10mg/kg)與二十二碳六烯酸(DHA) (5mg/kg)分別或混合灌胃給藥(10mg/kg花生衣活性組分+5mg/kg DHA),每個處理和對照組均為10只小鼠，花生衣活性組分和/或二十二碳六烯酸(DHA)，均以含40%甘油、6%甘油脂肪酸酯的水溶液為溶劑對照組為上述溶劑。每間隔24小時給藥I次，給藥的最大體積為100μ 1，給藥次數為7次。。
[0073]學習記憶及空間記憶功能的檢測-水迷宮試驗。
[0074]水迷宮實驗為測試動物空間記憶能力的行為學實驗，其過程分為訓練和測試兩個階段。前面連續(xù)四天將動物放入水迷宮中，記錄其登上平臺的時間評價動物的學習記憶能力；第五天將平臺撤掉，記錄動物穿越平臺的次數及在放有平臺象限的滯留時間評價動物的學習記憶能力。
[0075]如圖3所示，與對照相比，在水迷宮試驗中，花生衣活性組分給藥能顯著提高ICR小鼠的穿臺次數，DHA 口服 給藥組也能顯著提高ICR小鼠的穿臺次數，最重要的是花生衣活性組分和DHA混合給藥組效果明顯優(yōu)于單獨使用花生衣活性組分或DHA。
【權利要求】
1.花生衣活性組分在制備預防、治療神經退行性疾病的食品和藥品中的應用，所述花生衣活性組分通過如下方法制備:取干燥的花生衣，用乙醇和水的混合溶液浸提，收集浸提液，用HP-20樹脂進行吸附，水洗后，用乙醇的水溶液洗脫，收集洗脫液，將洗脫液濃縮、干燥后制得所述花生衣活性組分，該花生衣活性組分中花青素的重量百分比含量大于50%。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，浸提時，乙醇與水的體積比為40:60~80:20。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，浸提液料比為2:1~1000:1。
4.如權利要求1所述的應用，其特征在于，浸提時間為0.5~48h，浸提溫度為20~50。。。
5.如權利要求1所述的應用，其特征在于，洗脫時，乙醇的水溶液中，乙醇與水的體積比為 20:80 ~80:20o
6.一種組合物，其特征在于，含有如權利要求1~5任一項所述的花生衣活性組分和Omega-3系列不飽和脂肪酸。
7.如權利要求6所述的組合物，其特征在于，花生衣活性組分和Omega-3系列不飽和脂肪酸的重量比為1:1~5:1。
8.如權利要求6所述的組合物，其特征在于，所述omega-3系列不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、二十碳五烯酸、二十碳四烯酸、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸、十八碳四烯酸和亞麻酸中的至少一種。
9.如權利要求6所述的組合物，其特征在于，所述omega-3系列不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸。`
【文檔編號】A23L1/29GK103877144SQ201310159719
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2013年5月2日 優(yōu)先權日:2013年5月2日
【發(fā)明者】戚建華, 森大輔, 向蘭, 木村雄輝 申請人:杭州耐奇睿生物醫(yī)藥科技有限公司, 日本株式會社岐阜紫膠制造所