專利名稱：一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物病害防治和生物農(nóng)藥領(lǐng)域，尤其是一種防治魔芋軟腐病的魔芋生防復(fù)合菌劑的制備及使用方法。
背景技術(shù)：
魔芋(Amorphophalluskonjac)為天南星科(Araceae)魔芋屬(AmorphophallusBlume)多年生草本植物,富含葡甘露聚糖(konjac glucomannan,KGM)。魔芋葡甘露聚糖廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥保健、工業(yè)材料等領(lǐng)域，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是一種很有發(fā)展前景的產(chǎn)品。它不僅有降糖、降脂、消腫解毒、抗炎抑菌、化痰等功能，對(duì)便秘、高血壓、高血脂、動(dòng)脈硬化、冠心病、糖尿病、肺寒、腸癌、食道癌等也有較好或特殊的療效；其加工產(chǎn)品具有改善現(xiàn)代人的飲食結(jié)構(gòu)、醫(yī)藥保健、工業(yè)應(yīng)用等效能而倍受青睞，具有潛力巨大的國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)。然而，魔芋種植產(chǎn)量受到軟腐病、白絹病等病害的嚴(yán)重影響，其中，以魔芋軟腐病發(fā)生范圍最廣、危害最大、最難防治。魔芋軟腐病是一種細(xì)菌性病害，該病害可導(dǎo)致魔芋種植產(chǎn)量損失30%-50%，重者絕收，嚴(yán)重制約魔芋產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。微生物菌劑又稱微生物肥料，是指由一種或數(shù)種有益微生物、培養(yǎng)基質(zhì)和添加劑配制而成的生物性肥料，通常也叫菌劑或菌肥。它可改善土壤肥力；促進(jìn)難溶性礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)釋放；協(xié)助作物吸收養(yǎng)分；減少或降低植物病蟲害的發(fā)生，增強(qiáng)植物抗性；改善作物品質(zhì)；提高作物產(chǎn)量等。微生物菌劑是節(jié)省資源、環(huán)境友好、符合可持續(xù)發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)要求的新型肥料，世界各國(guó)政府和學(xué)者對(duì)微生物肥料的研究與應(yīng)用都予以高度重視
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備及使用方法，對(duì)魔芋有明顯的促生作用和防治軟腐病的效果，對(duì)開發(fā)新的魔芋生防復(fù)合菌劑有較大的價(jià)值。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，該方法包括以下步驟:I)培養(yǎng)基的制備:分別制備LB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基以及高氏一號(hào)培養(yǎng)基；2)將固氮細(xì)菌Gl和魔芋內(nèi)生拮抗細(xì)菌N8用LB培養(yǎng)基活化后，分別接種于LB培養(yǎng)基中，于37°C、180r/min培養(yǎng)I天，調(diào)整兩種發(fā)酵液活菌數(shù)約IO8個(gè)/mL ；3)將解磷真菌Pl用PDA培養(yǎng)基活化后，再接入相同的PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)孢子，用無菌水沖洗孢子，調(diào)整孢子懸液中孢子數(shù)約IO8個(gè)/mL ；4)將拮抗放線菌SJK18用高氏一號(hào)培養(yǎng)基活化后,再接入相同的高氏一號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)孢子，用無菌水沖洗孢子，調(diào)整孢子懸液中孢子數(shù)約IO8個(gè)/mL ；5)將上述步驟2)、3)和4)制備的各發(fā)酵液和孢子懸液等體積混合，即制得本發(fā)明所述的魔芋生防復(fù)合菌劑。步驟I)中LB培養(yǎng)基的配方為:酵母膏5g/L，NaC15g/L，蛋白胨10g/L，pH值7.0。
步驟I)中PDA培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水IOOOmL, pH 值 6.8 7.0。步驟I)中高氏一號(hào)培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉20g，NaCl0.5g，KNO3Ig,MgSO4.7Η200.5g, K2HPO40.5g, FeSO4.7Η200.0lg，瓊脂 15g，蒸餾水 1000mL，pH 值 7.2 7.4。一種上述魔芋生防復(fù)合菌劑的使用方法，將該魔芋生防復(fù)合菌劑用于魔芋植株的澆灌。每棵魔芋植株施用魔芋生防復(fù)合菌劑的用量為100ml。本發(fā)明制備的魔芋生防復(fù)合菌劑的對(duì)魔芋軟腐病的防病效果的試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，可見魔芋生防復(fù)合菌劑對(duì)魔芋有明顯的防治軟腐病效果。本發(fā)明制備的魔芋生防復(fù)合菌劑的對(duì)魔芋球莖的增重效果的試驗(yàn)結(jié)果如表3所示，對(duì)魔芋植株的根數(shù)、根長(zhǎng)和株高的促生試驗(yàn)結(jié)果如表I所示，可見魔芋生防復(fù)合菌劑對(duì)魔芋有明顯的促生效果。本發(fā)明提供的一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備及使用方法，以固氮細(xì)菌、解磷真菌、魔芋內(nèi)生軟腐病拮抗細(xì)菌和魔芋軟腐病拮抗鏈霉菌制備成魔芋生防復(fù)合菌劑，它對(duì)魔芋有明顯的促生作用和防治軟腐病的效果，為開發(fā)新的魔芋生防菌劑提供技術(shù)支撐。


下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明:圖1為測(cè)定魔芋葡甘露聚糖含量時(shí)所繪制的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖。
具體實(shí)施例方式一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，該方法包括以下步驟:I)培養(yǎng)基的制備:分別制備LB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基以及高氏一號(hào)培養(yǎng)基；2)將固氮細(xì)菌Gl和魔芋內(nèi)生拮抗細(xì)菌N8用LB培養(yǎng)基活化后，分別接種于LB培養(yǎng)基中，于37°C、180r/min培養(yǎng)I天，調(diào)整兩種發(fā)酵液活菌數(shù)約IO8個(gè)/mL ；3)將解磷真菌Pl用PDA培養(yǎng)基活化后，再接入相同的PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)孢子，用無菌水沖洗孢子，調(diào)整孢子懸液中孢子數(shù)約IO8個(gè)/mL ；4)將拮抗放線菌SJK18用高氏一號(hào)培養(yǎng)基活化后,再接入相同的高氏一號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)孢子，用無菌水沖洗孢子，調(diào)整孢子懸液中孢子數(shù)約IO8個(gè)/mL ；5)將上述步驟2)、3)和4)制備的各發(fā)酵液和孢子懸液等體積混合，即制得本發(fā)明所述的魔芋生防復(fù)合菌劑。步驟I)中LB培養(yǎng)基的配方為:酵母膏5g/L，NaC15g/L，蛋白胨10g/L，pH值7.0。步驟I)中PDA培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水IOOOmL, pH 值 6.8 7.0。步驟I)中高氏一號(hào)培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉20g，NaCl0.5g，KNO3Ig,MgSO4.7Η200.5g, K2HPO40.5g, FeSO4.7Η200.0lg，瓊脂 15g，蒸餾水 1000mL，pH 值 7.2 7.4。一種上述魔芋生防復(fù)合菌劑的使用方法，將該魔芋生防復(fù)合菌劑用于魔芋植株的澆灌。每棵魔芋植株施用魔芋生防復(fù)合菌劑的用量為100ml。
魔芋種芋為花魔芋，每個(gè)約重6.5g。盆栽用土為連作魔芋4年的土壤，第4年種植的魔芋病情指數(shù)為70.0%。盆栽位于室外有樹蔭處，每盆(花盆規(guī)格為口徑X底徑X高=120mmX IOOmmX 110mm)種I棵魔芋。種植后，其中23盆各澆灌復(fù)合菌劑IOOmL,另23盆澆灌等量水作空白對(duì)照，共46盆。全過程未加任何肥料，逢表土干燥即澆水。本發(fā)明制備的魔芋生防復(fù)合菌劑對(duì)魔芋植株的根數(shù)、根長(zhǎng)和株高的促生應(yīng)用過程如下:待魔芋葉子充分展開后，各處理隨機(jī)取3盆健康的魔芋，連根帶土拔出整株魔芋，用水沖洗掉泥土，分別記錄魔芋根數(shù)、根長(zhǎng)和株高?？瞻滋幚淼哪в?，其根數(shù)為16.7，根長(zhǎng)為2L 3cm，株高為24.1cm ;而以復(fù)合菌劑處理的魔芋，其根數(shù)為TL 3，根長(zhǎng)為25.3cm，株高為32.0cm，與空白對(duì)照相比，分別增加了 63.47%、18.78%和32.78%，結(jié)果如表I所示。表I魔芋生防復(fù)合菌劑對(duì)魔芋植株的根數(shù)、根長(zhǎng)和株高的促生應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟: O培養(yǎng)基的制備:分別制備LB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基以及高氏一號(hào)培養(yǎng)基； 2)將固氮細(xì)菌Gl和魔芋內(nèi)生拮抗細(xì)菌N8用LB培養(yǎng)基活化后，分別接種于LB培養(yǎng)基中，于37°C、180r/min培養(yǎng)I天，調(diào)整兩種發(fā)酵液活菌數(shù)約IO8個(gè)/mL ； 3)將解磷真菌Pl用PDA培養(yǎng)基活化后，再接入相同的PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)孢子，用無菌水沖洗孢子，調(diào)整孢子懸液中孢子數(shù)約IO8個(gè)/mL ； 4)將拮抗放線菌SJK18用高氏一號(hào)培養(yǎng)基活化后,再接入相同的高氏一號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)孢子，用無菌水沖洗孢子，調(diào)整孢子懸液中孢子數(shù)約IO8個(gè)/mL ； 5)將上述步驟2)、3)和4)制備的各發(fā)酵液和孢子懸液等體積混合，即制得本發(fā)明所述的魔芋生防復(fù)合菌劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于步驟I)中LB培養(yǎng)基的配方為:酵母膏5g/L，NaC15g/L，蛋白胨10g/L，pH值7.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于步驟I)中PDA培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，pH值6.8 7.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于步驟I)中高氏一號(hào)培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉 20g，NaCl0.5g，KNO3Ig, MgSO4.7H200.5g，K2HPO40.5g，F(xiàn)eSO4.7H200.0lg,瓊脂 15g，蒸餾水 IOOOmL, pH 值 7.2 7.4。
5.一種上述魔芋生防復(fù)合菌劑的使用方法，其特征在于:將該魔芋生防復(fù)合菌劑用于魔芋植株的澆灌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的魔芋生防復(fù)合菌劑的使用方法，其特征在于:每棵魔芋植株施用魔芋生防復(fù)合菌劑的用量為100ml。
全文摘要
一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備方法，該方法包括以下步驟1)培養(yǎng)基的制備；2)用固氮細(xì)菌G1和魔芋內(nèi)生拮抗細(xì)菌N8制備發(fā)酵液；3)用解磷真菌P1制備孢子懸液；4)用拮抗放線菌SJK18制備孢子懸液；5)將上述各發(fā)酵液和孢子懸液等量混合，即制得魔芋生防復(fù)合菌劑。一種上述魔芋生防復(fù)合菌劑的使用方法，將該魔芋生防復(fù)合菌劑用于魔芋植株的澆灌。本發(fā)明提供的一種魔芋生防復(fù)合菌劑的制備及使用方法，以固氮細(xì)菌、解磷真菌、魔芋內(nèi)生軟腐病拮抗細(xì)菌和魔芋軟腐病拮抗鏈霉菌制備成魔芋生防復(fù)合菌劑，它對(duì)魔芋有明顯的促生作用和防治軟腐病的效果，為開發(fā)新的魔芋生防菌劑提供技術(shù)支撐。
文檔編號(hào)C12R1/645GK103222485SQ20131011442
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月2日
發(fā)明者樂超銀, 葉晶龍, 潘虹, 程海麗, 雷珍珍, 廖甜甜, 望慧星, 陳云, 許克靜, 陳磊 申請(qǐng)人:三峽大學(xué)