專(zhuān)利名稱(chēng)：一種人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞株，尤其涉及一種人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
骨巨細(xì)胞瘤(giant cell tumor of bone,簡(jiǎn)稱(chēng)GCT)是一種常見(jiàn)的原發(fā)性骨腫瘤，占原發(fā)骨腫瘤的20%。一般認(rèn)為它屬良性，曾被稱(chēng)為“良性骨巨細(xì)胞瘤(Blood- good)”。但是按良性腫瘤常規(guī)方法治療后卻容易復(fù)發(fā)，近年來(lái)它被放在良、惡性之間的位置，屬中間性(Intermediate)或侵襲性(Aggressive)腫瘤。骨巨細(xì)胞瘤病因不明，有幾種不同說(shuō)法。骨巨細(xì)胞瘤主要組織成分為類(lèi)似破骨細(xì)胞的巨細(xì)胞和比較瘦小的梭形或圓形的基質(zhì)細(xì)胞。由于巨細(xì)胞很象破骨細(xì)胞，英國(guó)學(xué)者Stewart稱(chēng)之為“破骨細(xì)胞瘤”。不過(guò)多數(shù)人認(rèn)為基細(xì)胞(Stroma cell)是主要的,可能來(lái)自未分化結(jié)締組織細(xì)胞(Undif ferentiated con-nectivetissue cell)。也有人認(rèn)為基細(xì)胞來(lái)自未分化中胚細(xì)胞(Undifferen tiated mesenchymalcell)，并轉(zhuǎn)化成巨細(xì)胞。又有人認(rèn)為它們屬內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源。還有人將之歸屬纖維組織細(xì)胞 (Fibroushistiocytic cell)來(lái)源。骨巨細(xì)胞瘤生物學(xué)行為復(fù)雜，多變。GCT具有明顯的局部侵襲性，復(fù)發(fā)率高，并可發(fā)生轉(zhuǎn)移骨巨細(xì)胞瘤。目前治療方法主要以手術(shù)治療為主，采用切刮術(shù)加滅活處理，植入自體或異體松質(zhì)骨或骨水泥，但易復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率達(dá)40 70%。而廣泛的擴(kuò)大切除或節(jié)段截除術(shù)將嚴(yán)重影響患者肢體功能，且同樣具有相對(duì)較高的復(fù)發(fā)率(10%左右)。再加上對(duì)化療無(wú)效，放療后也易肉瘤變，所以GCT的治療一直比較棘手，醫(yī)生能選擇的治療方法也少之又少。加快GCT在基礎(chǔ)及臨床上的研究勢(shì)在必行。目前,在細(xì)胞水平上對(duì)骨巨細(xì)胞瘤的研究主要是通過(guò)臨床活體標(biāo)本培養(yǎng)出原代細(xì)胞再加以研究，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道也比較少。而對(duì)于骨巨細(xì)胞瘤特別是惡性骨巨細(xì)胞瘤這種稀有的腫瘤，臨床活體標(biāo)本是很難得到的，再加上原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)很有限傳代后就會(huì)死亡或失去原有的特征，這大大限制了對(duì)骨巨細(xì)胞瘤的研究.目前，布達(dá)佩斯條約國(guó)際確認(rèn)的培養(yǎng)物保藏單位還沒(méi)有收錄骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株。建立GCT細(xì)胞株的相關(guān)文獻(xiàn)也僅有1993年來(lái)自日本的一篇(Establishment of a Cell Line from a Human Giant Cell Tumor of Bone),且文獻(xiàn)中所提到的細(xì)胞株CG-I現(xiàn)在已無(wú)法得到。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株為人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WF，保藏編號(hào)為CCTCC NO. C2012101，于2012年9月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CCTCCJi址武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué))。所述人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可作為研究骨巨細(xì)胞瘤發(fā)生、骨巨細(xì)胞瘤發(fā)展或骨巨細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移的細(xì)胞模型。所述人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可用于建立骨巨細(xì)胞瘤動(dòng)物模型。所述人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可應(yīng)用于篩選和/或研制
治療骨巨細(xì)胞瘤藥物。本發(fā)明提供的人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF可以用于在細(xì)胞水平上研究骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機(jī)理，建立骨巨細(xì)胞瘤動(dòng)物模型，并將其作為靶標(biāo)篩選或研制抗癌藥物。


圖I為本發(fā)明人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF細(xì)胞在顯微鏡下觀察的細(xì)胞形態(tài)圖。
具體實(shí)施例方式下面參照附圖，結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述的人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101進(jìn)行詳細(xì)的介紹和描述，以更好的理解本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。下述實(shí)施例中的方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法。I.骨巨細(xì)胞瘤標(biāo)本的獲得
本發(fā)明的骨巨細(xì)胞瘤標(biāo)本來(lái)自于一骨巨細(xì)胞瘤患者，該患者為男性，35歲，進(jìn)行右股骨上段骨巨細(xì)胞瘤切除手術(shù)。從手術(shù)切除標(biāo)本中選取活性良好腫瘤組織數(shù)塊作為本發(fā)明的骨巨細(xì)胞瘤標(biāo)本。2.原代培養(yǎng)
采用組織塊貼壁法進(jìn)行骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)，使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37°C，CO2濃度為5%，飽和濕度下培養(yǎng)，直至培養(yǎng)皿中的細(xì)胞長(zhǎng)至80%左右。3.傳代培養(yǎng)
采用細(xì)胞消化法進(jìn)行骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞的傳代培養(yǎng)將原代培養(yǎng)的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液棄去，加入O. 25%胰酶溶液，使充分浸潤(rùn)；肉眼觀察細(xì)胞層，當(dāng)見(jiàn)到出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)，棄去胰酶溶液，并加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，穩(wěn)定傳代至第五代后，得到骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株。將得到的骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株命名為人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF，并于2012年9月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱(chēng)0^0，地址武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué))，保藏編號(hào)為 CCTCC NO. C2012101。在顯微鏡下觀察獲得的人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF細(xì)胞形態(tài)，結(jié)果如圖I所示，細(xì)胞呈梭型，類(lèi)似于骨巨細(xì)胞瘤中基質(zhì)細(xì)胞的形狀。人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF的倍增時(shí)間約為48小時(shí)。人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF的細(xì)胞周期中各期間所占周期時(shí)間的比例為=Gtl和G1 60%，
S17%，G2和M 23%，其中Gtl休眠期，G1為DNA合成前期，S為DNA合成期，G2為DNA合成后期，M為分裂期。人骨巨細(xì)胞瘤GCT-WF可以用于研究骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機(jī)理，建立骨巨細(xì)胞瘤動(dòng)物模型，并將其作為靶標(biāo)篩選或研制抗癌藥物。以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和 修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WF，其特征在于，所述細(xì)胞株保藏編號(hào)為CCTCCNO.C2012101。
2.權(quán)利要求I所述人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在建立骨巨細(xì)胞瘤發(fā)生、骨巨細(xì)胞瘤發(fā)展或骨巨細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移的細(xì)胞模型中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求I所述人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在建立骨巨細(xì)胞瘤動(dòng)物模型中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求I所述人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在篩選治療骨巨細(xì)胞瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，該人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株為人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞株GCT-WFCCTCCNO.C2012101，可以用于在細(xì)胞水平上研究骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機(jī)理，建立骨巨細(xì)胞瘤動(dòng)物模型，并將其作為靶標(biāo)篩選抗癌藥物。
文檔編號(hào)C12N5/09GK102943065SQ20121046758
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月19日
發(fā)明者華瑩奇, 蔡鄭東, 尹飛, 孫偉, 王卓瑩, 鄭龍坡, 曾輝, 孫夢(mèng)熊 申請(qǐng)人:上海市第十人民醫(yī)院