專利名稱：C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測試劑盒，確切講是一種用于檢測?；蜇i或羊以及相關(guān)?；蜇i或羊的產(chǎn)品是否感染C型口蹄疫病毒的試劑盒。
背景技術(shù)：
口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是一種由口蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus,FMDV)引起的危害牛、豬、羊等偶蹄動物的嚴(yán)重的急性熱性高度接觸性傳染病。由于其傳播速度快，不易控制和消滅，嚴(yán)重危害世界動物貿(mào)易，被世界衛(wèi)生組織列為必須上報傳染病之一。口蹄疫病毒屬于微核糖核酸病毒科(picornaviridas)中的口蹄疫病毒屬(aphthavirus)。共包括 A、C、O、Asia I、SAT I、SAT II 及 SAT III 型 7 個血清型，各血清型之間無交叉保護力。FMDV的病毒粒子直徑20-25nm，為正二十面體結(jié)構(gòu)，近似圓形；基因組為全長8，500 (nt)的正鏈RNA,包括一個開放閱讀框(open reading frame, 0RF), 5’-非編碼區(qū)(5，-Untraslated Region, 5，-UTR)和 3，-非編碼區(qū)(3，-Untraslated Region,3’ _UTR);0RF編碼病毒多聚蛋白，依賴于自身編碼的蛋白酶(L、2A、3C)及少數(shù)的宿主因子，在經(jīng)過3級裂解后，形成4種病毒結(jié)構(gòu)蛋白(VP4、VP2、VP3和VPl)和9種非結(jié)構(gòu)蛋白(Lab、Lb、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D);四種結(jié)構(gòu)蛋白各60分子構(gòu)成病毒顆粒，VPl靠近由五個原粒組成病毒表面的小洞，VP2和VP3位于遠(yuǎn)端，VP4則完全位于衣殼里面。盡管目前國內(nèi)外對口蹄疫的病原學(xué)、血清分型、診斷做了大量的研究，但口蹄疫病毒幾乎遍及世界各地，口蹄疫對偶蹄類經(jīng)濟動物的威脅眾所周知，它的發(fā)病率和造成的經(jīng)濟至今仍為各類傳染病之首。為了確定口蹄疫是否在某一地區(qū)存在，檢測動物血清抗體的方法并非完全可靠，還必須通過通過病原學(xué)檢測以確診病原的存在。一般檢測方法為生物學(xué)實驗、血清型診斷技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)等診斷技術(shù)，但是這些方法有的敏感性不高、有的特異性不強、有的檢出率較低，即使病毒分離技術(shù)被認(rèn)為是檢測口蹄疫的金標(biāo)準(zhǔn)，但其確認(rèn)結(jié)果至少需要7天，檢測周期太長，并且這些技術(shù)普遍費用太高，存在二次散毒的隱患，一般基層很難開展此項工作。C型口蹄疫在我國周邊亞洲地區(qū)具有流行史，對我國威脅較大。因此我們實驗室利用在60年代從前蘇聯(lián)引進的C型口蹄疫毒株建立了一種快速診斷C型口蹄疫的診斷技術(shù)，完成對C型口蹄疫病毒的診斷和監(jiān)控，對于防止其傳入我國具有重要的戰(zhàn)略意義。中國發(fā)明專利200810034124. 6公開一種用于檢測0型口蹄疫病毒的LAMP試劑盒，該試劑盒由包含有六條LAMP引物的LAMP反應(yīng)液構(gòu)成的檢測體系構(gòu)成。由于該專利的試劑盒中有六條引物，因此其制造成本與使用成本相對較大。其次，該專利使用中需要定時定量儀器，這使其應(yīng)用受到很大限制。第三，使用該專利檢測時只能得到兩條電泳條帶，這影響其檢測靈敏度，并易造成檢測結(jié)果識別的困難
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種可克服現(xiàn)有技術(shù)不足，能進行快速、簡便檢測，具有較高靈敏度和更好經(jīng)濟性能的可檢測出被檢測牛或豬或羊，或牛或豬或羊的產(chǎn)品是否感染C型口蹄疫病毒的試劑盒。本發(fā)明的C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒中包括有兩對LAMP弓丨物，這兩對弓I物分別是 SEQl、SEQ2、SEQ3 和 SEQ4,即
表I本發(fā)明的試劑盒中的引物
權(quán)利要求
1.C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒，其特征在于試劑盒中包括有兩對LAMP引物，這兩對引物分別是SEQ1、SEQ2、SEQ3和SEQ4。
2.權(quán)利要求I所述的C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒，其特征在于試劑盒中還有dNTP，Bst 聚合酶，AMV 反轉(zhuǎn)錄酶，2x 緩沖液(Tris-HCL，KCL, MgSO4, (NH4)2SO4, Tween-20,Betains, dNTPs。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于檢測?；蜇i或羊以及相關(guān)?；蜇i或羊的產(chǎn)品是否感染C型口蹄疫病毒的試劑盒。本發(fā)明的C型口蹄疫病毒快速檢測試劑盒中包括有兩對LAMP引物，這兩對引物分別是SEQ1、SEQ2、SEQ3和SEQ4。用本發(fā)明的試劑盒進行檢測，具有方便、及時、快捷的優(yōu)點，并且有較高的檢測靈敏度，同時在具體的檢測過程中只需用普通的水浴鍋或熱源即可。
文檔編號C12Q1/68GK102776294SQ20121022168
公開日2012年11月14日 申請日期2012年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月30日
發(fā)明者丁耀忠, 劉永生, 周建華, 張 杰, 陳豪泰, 馬麗娜 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所