專利名稱：耐高溫釀酒酵母及其分離培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及釀酒酵母及分離培養(yǎng)方法，具體涉及一種耐高溫釀酒酵母及其分離培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
芝麻香型白酒以糧食為原料，大曲、麩曲等為糖化發(fā)酵劑，利用自然界微生物開放式發(fā)酵，霉菌、酵母、細(xì)菌協(xié)同作用，融入醬香堆積工藝優(yōu)勢，形成具有獨(dú)特風(fēng)格的白酒。一 般芝麻香型白酒麩曲采用細(xì)菌、酵母、霉菌等多菌種純培養(yǎng)后混合應(yīng)用于釀酒生產(chǎn)，微生物菌種的性能對芝麻香型酒的品質(zhì)具有重要的影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種耐高溫釀酒酵母及其分離培養(yǎng)方法，通知該分離培養(yǎng)方法篩選出一種耐高溫且發(fā)酵性能、產(chǎn)酯能力較好的酵母，提高芝麻香型白酒的質(zhì)量與產(chǎn)量。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該釀酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是從濃香型發(fā)酵酒醅中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為CGMCC No. 5511。所述釀酒酵母240的分離培養(yǎng)方法是取濃香型釀酒窖池中已發(fā)酵15-20天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液1.01^，放入盛有91^無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 —3、10 —4、10 —5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養(yǎng)皿中，倒入融化保溫的培養(yǎng)基25 mL，搖勻待凝固后放入培養(yǎng)箱于28°C _32°C倒置培養(yǎng)2_3天；其中，培養(yǎng)基由12° BX麥芽汁中加入其質(zhì)量1%的瓊脂粉組成；挑取培養(yǎng)皿內(nèi)形態(tài)規(guī)則的菌落，在固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，進(jìn)行多次反復(fù)的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面?zhèn)溆?；?jīng)菌種鑒定后，對釀酒酵母進(jìn)行耐溫試驗(yàn)，取一株活力較強(qiáng)釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。本發(fā)明獲得的菌種與實(shí)驗(yàn)室保藏的酵母菌株進(jìn)行性能對比試驗(yàn)，通過發(fā)酵性能對比試驗(yàn)，結(jié)果表明該菌株耐溫性能較好，在45°C溫度下依然能夠保持良好的發(fā)酵性能，而且具有較好的發(fā)酵性能和酯化能力，用該菌種生產(chǎn)的麩曲用于芝麻香型白酒生產(chǎn)對提高自產(chǎn)酒的優(yōu)質(zhì)品率及出酒率具有重要的意義。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)解決方案，這些實(shí)施例不能理解為是對技術(shù)解決方案的限制。實(shí)施例I :依以下步驟分離培養(yǎng)釀酒酵母240取濃香型釀酒窖池中已發(fā)酵15天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 — 3、10 —4、10 — 5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養(yǎng)皿中，倒入融化保溫的培養(yǎng)基25 mL，搖勻待凝固后放入培養(yǎng)箱于28°C倒置培養(yǎng)3天，每個稀釋度同時做3個平行；其中，培養(yǎng)基由12° BX麥芽汁中加入其質(zhì)量1%的瓊脂粉組成；挑取培養(yǎng)皿內(nèi)形態(tài)規(guī)則的菌落，在固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，進(jìn)行多次反復(fù)的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面?zhèn)溆?；?jīng)菌種鑒定后共有3株釀酒酵母，進(jìn)行耐溫試驗(yàn)，獲得一株活力較強(qiáng)釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。實(shí)施例2 :依以下步驟分離培養(yǎng)釀酒酵母240
取濃香型釀酒窖池中已發(fā)酵18天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 — 3、10 —4、10 — 5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養(yǎng)皿中，倒入融化保溫的培養(yǎng)基25 mL，搖勻待凝固后放入培養(yǎng)箱于30°C倒置培養(yǎng)2. 5天，每個稀釋度同時做3個平行；其中，培養(yǎng)基由12° BX麥芽汁中加入其質(zhì)量1%的瓊脂粉組成；挑取培養(yǎng)皿內(nèi)形態(tài)規(guī)則的菌落，在固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，進(jìn)行多次反復(fù)的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面?zhèn)溆?；?jīng)菌種鑒定后共有3株釀酒酵母，進(jìn)行耐溫試驗(yàn)，獲得一株活力較強(qiáng)釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。實(shí)施例3 :依以下步驟分離培養(yǎng)釀酒酵母240
取濃香型釀酒窖池中已發(fā)酵20天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 — 3、10 —4、10 — 5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養(yǎng)皿中，倒入融化保溫的培養(yǎng)基25 mL，搖勻待凝固后放入培養(yǎng)箱于32°C倒置培養(yǎng)2天，每個稀釋度同時做3個平行；其中，培養(yǎng)基由12° BX麥芽汁中加入其質(zhì)量1%的瓊脂粉組成；挑取培養(yǎng)皿內(nèi)形態(tài)規(guī)則的菌落，在固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，進(jìn)行多次反復(fù)的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面?zhèn)溆?；?jīng)菌種鑒定后共有3株釀酒酵母，進(jìn)行耐溫試驗(yàn)后獲得一株活力較強(qiáng)釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。實(shí)施例4 :菌種優(yōu)化對比試驗(yàn)
將上述實(shí)施例1-3獲得的釀酒酵母240與實(shí)驗(yàn)室保藏的自編號的五株釀酒酵母207、102、JP、NN、AW001進(jìn)行對比，將酵母菌接入到12° BX的麥芽汁培養(yǎng)基中，于不同溫度250C、30°C、35°C、40°C、45°C恒溫培養(yǎng)，對比釀酒酵母的發(fā)酵性能，測定酵母的發(fā)酵力、酒精度、總酸和總酯，確定酵母的發(fā)酵性能指標(biāo)。⑴不同溫度下發(fā)酵過程CO2失重量對比 表I 25°C發(fā)酵
權(quán)利要求
1.耐高溫釀酒酵母，其特征在于該釀酒酵母240Saccharomyces cerevisiae菌株是從濃香型發(fā)酵酒醅中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為=CGMCC No. 5511。
2.耐高溫釀酒酵母的分離培養(yǎng)方法，其特征在于分離培養(yǎng)方法包括以下步驟取濃香型釀酒窖池中已發(fā)酵15-20天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 —3、10 —4、10 —5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養(yǎng)皿中，倒入融化保溫的培養(yǎng)基25 mL,搖勻待凝固后放入培養(yǎng)箱于28°C -32°C倒置培養(yǎng)2-3天；其中，培養(yǎng)基由12° BX麥芽汁中加入其質(zhì)量1%的瓊脂粉組成；挑取培養(yǎng)皿內(nèi)形態(tài)規(guī)則的菌落，在固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，進(jìn)行多次反復(fù)的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面?zhèn)溆?；?jīng)菌種鑒定后，對釀酒酵母進(jìn)行耐溫試驗(yàn)，取一株活力較強(qiáng)釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種耐高溫釀酒酵母及其分離培養(yǎng)方法，通過本發(fā)明的分離培養(yǎng)方法獲得的釀酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是從濃香型發(fā)酵酒醅中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為CGMCCNo.5511。本發(fā)明的分離培養(yǎng)方法工藝簡單，獲得的釀酒酵母240耐高溫，且發(fā)酵性能、產(chǎn)酯能力較好，適應(yīng)能力強(qiáng)，易培養(yǎng)，提高芝麻香釀酒質(zhì)量和產(chǎn)量。
文檔編號C12R1/865GK102634464SQ20121005966
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者吳建峰, 孫瑩, 季方, 楊艷 申請人:江蘇今世緣酒業(yè)股份有限公司