專利名稱：用于甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(mrsa)的反應(yīng)培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于檢測甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的反應(yīng)培養(yǎng)基。本發(fā)明還涉及這種培養(yǎng)基的用途以及鑒定MRSA細(xì)菌的方法。
背景技術(shù)：
甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)是金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus)菌株，其特征在于它們對(duì)抗生素甲氧西林的抗性以及對(duì)諸如苯唑西林的相關(guān)抗生素的抗性。MRSA細(xì)菌代表了高百分比的醫(yī)院感染，并且通常產(chǎn)生嚴(yán)重和潛在致死的健康問題。MRSA在患者之間通常經(jīng)由醫(yī)護(hù)人員交叉?zhèn)鞑?，其是非常難以控制的流行性感染。除了合適的治療以外，篩選MRSA的載體并分離受感染的患者構(gòu)成了目前諸如美國醫(yī)療保健流行病學(xué)學(xué)會(huì)(Society for Healthcare Epidemiology of America)的官方組織所推薦的最有效的方法。因此，早期和系統(tǒng)性篩選是重要的?？梢酝ㄟ^各種技術(shù)來檢測MRSA。因此，可以通過分子生物學(xué)技術(shù)來檢測MRSA。在這一方面，可以具體提及申請(qǐng) EP887424。然而，這樣的方法作為常規(guī)測試非常昂貴，并且要求合格的操作人員?？梢允褂贸Ｒ?guī)培養(yǎng)基來檢測金黃色葡萄球菌，例如申請(qǐng)EP13905M所述的培養(yǎng)基。通過特異性凝集測試(Slidex MRSA,bioMerieux)或者通過瓊脂擴(kuò)散法在苯唑西林、頭 包Hf了^1 白勺. Τ" (Comitede 1'Antibiogramme de la SocieteFrancaise de Microbiologie[Antibiogram Committee of the French Society for Microbiology]禾口 Clinical Laboratory Standard hstitute 的推薦)，以額外的步驟檢測 MRSA。還可以在抗生素的存在下，在瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)可能是MRSA的細(xì)菌。這樣的培養(yǎng)基可以是發(fā)色的，由此有助于讀取并檢測MRSA。可以特別地提及申請(qǐng)EP1543147所述的培養(yǎng)基。然而，由于在所述條件下檢測磷酸酯酶活性并不是非常特異性的，因此需要將其與幾種其他酶活性的檢測組合，由此降低了培養(yǎng)基的利用率并增加了成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過提供新型靈敏特異性反應(yīng)培養(yǎng)基來解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，所述反應(yīng)培養(yǎng)基允許分離并快速鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)。本發(fā)明人令人驚奇地證實(shí)，使用包括頭孢菌素與氨基糖苷的抗生素的特定組合， 使得可以獲得用于分離和鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的完美反應(yīng)培養(yǎng)基。在進(jìn)一步描述本發(fā)明之前，為了便于更清楚地理解本發(fā)明而不作為限制給出以下定義。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語“反應(yīng)培養(yǎng)基”表示這樣的培養(yǎng)基,其包含諸如金黃餼葡萄球菌的微生物的存活和/生長所需的所有成分。所述反應(yīng)培養(yǎng)基可以僅是顯示性培養(yǎng)基，或者是培養(yǎng)且顯示性的培養(yǎng)基。在第一種情況中，微生物的培養(yǎng)在接種之前進(jìn)行；在第二種情況中，反應(yīng)培養(yǎng)基也構(gòu)成培養(yǎng)性培養(yǎng)基。所述反應(yīng)培養(yǎng)基可以是固體、半固體或者液體。術(shù)語“固體培養(yǎng)基”是指，例如膠凝化的培養(yǎng)基。優(yōu)選地，本發(fā)明的培養(yǎng)基是膠凝化的培養(yǎng)基。瓊脂是常規(guī)的凝膠劑，在微生物學(xué)中用于培養(yǎng)微生物，但是可使用其他膠凝劑，例如脫乙酰吉蘭糖膠(gelrite)、明膠或瓊脂糖?？缮藤彨@得某些配制品，例如Columbia瓊脂、胰蛋白酶解酪蛋白-大豆瓊脂 (gelose Trypcase-so ja)、MacConkey 王京月旨、Chapman 王京月旨、Sabouraud 王京月旨， Κ者，胃_既手舌地，Handbook of Microbiological Media(CRC Press)中所述的那些。本發(fā)明的反應(yīng)培養(yǎng)基可以包含可能的其他添加劑，例如蛋白胨、一種或多種生長因子、碳水化合物、一種或多種選擇劑、緩沖液、一種或多種膠凝劑等。所述反應(yīng)培養(yǎng)基可以是可即用的液體或凝膠形式，即可即用于接種于試管或燒瓶或培養(yǎng)皿。當(dāng)表現(xiàn)形式為燒瓶中的凝膠時(shí)，優(yōu)選地在倒入培養(yǎng)皿之前進(jìn)行培養(yǎng)基的預(yù)先再生(改變至100°c )。優(yōu)選地，本發(fā)明的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，即包含有利于金黃色葡萄球菌生長的抑制劑的培養(yǎng)基。可以具體地提及氯化鋰(LiCl)、疊氮化鈉(NaN3)、多粘菌素E(Colistine)、 兩性霉素、氨曲南、可利邁仙、氯化鈉(NaCl)、去鐵胺和弧菌抑制化合物0/129。對(duì)于本發(fā)明的目的，酶促或代謝活性的_選自任何底物，其可以被水解以產(chǎn)生允許直接或間接檢測酶促或代謝活性的產(chǎn)物，例如，特別是糖苷酶活性，優(yōu)選葡糖醛酸糖苷酶、葡糖苷酶或半乳糖苷酶活性。所述底物可以是天然或合成底物。底物的代謝導(dǎo)致反應(yīng)培養(yǎng)基或有機(jī)體的細(xì)胞的物理化學(xué)性質(zhì)的改變。這種改變可以通過物理化學(xué)方法來檢測，特別是操作者可視的光學(xué)方法，或者通過光譜、電學(xué)、磁性等裝置來檢測。優(yōu)選地，所述改變是光學(xué)性質(zhì)的改變，例如吸收、熒光或發(fā)光(luminescence)的變化。在本發(fā)明中，術(shù)語“顯色”涵蓋染色，其是可見光譜的光的吸收；或者熒光，其是在一種波長吸收(λ ex)并在更高的波長發(fā)射(λ Μ，λ Μ > λ ex)。對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語發(fā)餼底物表示任何底物，其可以被水解以產(chǎn)生允許肓接或間接檢測酶活性的產(chǎn)物，例如，特別是糖苷酶活性，優(yōu)選α -葡糖苷酶活性、酯酶活性，優(yōu)選磷酸酯酶活性或肽酶活性，優(yōu)選凝固酶活性?？梢跃唧w的提及基于吲哚氧基、黃酮、茜素、吖啶、吩噁嗪、硝基酚、硝基苯胺、萘酚、兒茶酚、羥基喹啉、香豆素或羥基苯基喹啉噁唑-4-酮 (hydroxyphenyl-quinoxazol-4-one)的底物。優(yōu)選地，本發(fā)明所用的底物基于吲哚氧基。作為α-葡糖苷酶底物，可以更具體地提及以下底物5-溴-6-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、二羥基黃酮-α-葡糖苷、3，4_環(huán)己酮七葉苷-α-葡糖苷、8-羥基喹啉-α -葡糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α -葡糖苷、5_溴_4_氯_3_吲哚氧基_Ν_甲基-α-葡糖苷、6-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、5-溴-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、 5-碘-3-吲哚氧基-α -葡糖苷、6-氟-3-吲哚氧基-α -葡糖苷、茜素_ α _葡糖苷、硝基苯基-α -葡糖苷、4-甲基傘形酮-α -葡糖苷、萘酚苯因-α -葡糖苷(naphtholbenzein-a lpha-glucoside)、吲哚氧基-N-甲基-α -葡糖苷、萘基-α -葡糖苷、氨基苯基-α -葡糖苷、二氯氨基苯基-α-葡糖苷。優(yōu)選地，所用的α-葡糖苷酶底物為5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α -葡糖苷或5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α -葡糖苷。作為磷酸酯酶底物，可以更具體地提及以下底物5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯、3，4-環(huán)己酮七葉苷磷酸酯、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基磷酸酯、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基磷酸酯、6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯、5-溴-3-吲哚氧基磷酸酯、5-碘-3-吲哚氧基磷酸酯、6-氟-3-吲哚氧基磷酸酯、硝基苯基磷酸酯、4-甲基傘形酮磷酸酯、吲哚氧基-N-甲基磷酸酯、萘基磷酸酯、ELF97-磷酸酯。優(yōu)選地，所用的磷酸酯酶底物為 6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯。本發(fā)明所用底物可以與其他底物組合，例如糖苷酶、酯酶，特別是磷酸酯酶或磷脂酶、肽酶，并且特別是凝固酶的底物。特別地，所述培養(yǎng)基可以包含兩種α-葡糖苷酶底物。本發(fā)明的底物可以用于寬ρΗ范圍，特別是ρΗ 5. 5-10，優(yōu)選6. 5-9。對(duì)干本發(fā)明的目的，屬干頭孢菌素家族的杭牛素為優(yōu)詵自以下的杭牛素〇第一代頭孢菌素，例如頭孢氨芐、頭孢噻啶、頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢羥氨芐、 頭孢西酮、頭孢曲秦、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢乙腈、cefrodaxine、頭孢替唑。〇第二代頭孢菌素，例如頭孢西丁、頭孢呋辛、頭孢孟多、頭孢克洛、頭孢替坦、頭孢尼西、頭孢替安、氯碳頭孢、頭孢美唑、頭孢丙烯、頭孢雷特、頭孢米諾。〇第三代頭孢菌素，例如頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢磺啶、頭孢曲松、頭孢甲肟、拉氧頭孢、頭孢唑肟、頭孢克肟、頭孢地秦、頭孢他美、頭孢匹胺、頭孢哌酮、頭孢泊肟、頭孢布烯、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢拉宗、頭孢地尼。〇第四代頭孢菌素，例如頭孢吡肟、頭孢匹羅。在本發(fā)明中，屬于頭孢菌素家族的抗生素優(yōu)選為頭孢米諾或頭孢地尼。對(duì)于本發(fā)明的目的，屬于氨基糖苷家族的抗牛素為優(yōu)詵自以下的抗牛素阿米卡星、慶大霉素、異帕米星、卡那霉素、奈替米星、鏈霉素和妥布霉素。在本發(fā)明中，屬于氨基糖苷家族的抗生素優(yōu)選為阿米卡星或卡那霉素。術(shù)語牛物學(xué)樣品表示臨床樣品，其源自支氣管、氣管或肺穿刺樣本、胸液樣本、支氣管肺泡灌洗樣本、痰樣本、血液樣本或肺活檢樣本、或關(guān)節(jié)液樣本或者心包液樣本；生物學(xué)流體或食品樣品，其源自任何類型的食品或表面樣本。因此，所述樣品可以是液體或固體的，以非限制性的方式可以提及血液、血漿、尿液或糞便的臨床樣品，或者來自鼻、會(huì)陰、喉、 皮膚、傷口或腦脊液的樣品，或者食品樣品。因此，術(shù)語“樣品”是指樣本本身(拭子、糞便、食物等)以及由所述樣本而得的微生物菌落(例如在膠凝化的培養(yǎng)基上分離后，或者用所述樣本接種的富集培養(yǎng)液)。在這一方面，本發(fā)明涉及用于檢測和/或鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌 (MRSA)的反應(yīng)培養(yǎng)基，其包含發(fā)色底物；屬于頭孢菌素家族的第一抗生素；和屬于氨基糖苷家族的第二抗生素。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述第一抗生素為頭孢米諾或頭孢地尼。優(yōu)選地， 頭孢米諾濃度為10-35mg/l，優(yōu)選12-28mg/l。優(yōu)選地，頭孢地尼濃度為0. l-lmg/l，優(yōu)選 0. 2-0. 6mg/l。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述第二抗生素為卡那霉素或阿米卡星。優(yōu)選地，卡那霉素濃度為0. 2-1. 5mg/l，優(yōu)選0. 5-1. 25mg/l。優(yōu)選地，阿米卡星濃度為 0. 5-5mg/l，優(yōu)選 1-aiig/l。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢米諾和卡那霉素。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢米諾和阿米卡星。
根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢地尼和卡那霉素。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢地尼和阿米卡星。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述發(fā)色底物允許檢測糖苷酶、酯酶或肽酶活性。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述糖苷酶活性為α-葡糖苷酶活性。所述α-葡糖苷酶活性的底物優(yōu)選為吲哚氧基-α-葡糖苷。優(yōu)選地，所用的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚氧基- α -葡糖苷(Χ-α -葡糖苷)或5_溴_4_氯_3_吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷(Green A-α -葡糖苷)。優(yōu)選地，所述底物在培養(yǎng)基中存在的濃度為0. 01-0. 2g/l，優(yōu)選0. 03-0. 15g/l。事實(shí)上，在這種底物濃度下獲得更好的顯色對(duì)照。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述酯酶活性為磷酸酯酶活性。優(yōu)選地，所用的底物為6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯(粉紅色-磷酸酯)。優(yōu)選地，所述底物存在于培養(yǎng)基中的濃度為0. 05-0. 5g/l，優(yōu)選0. 1-0. 4g/l。事實(shí)上，在這種底物濃度下獲得更好的顯色對(duì)照。根據(jù)本發(fā)明的一具體實(shí)施方案，所述反應(yīng)培養(yǎng)基還包含第二酶底物。優(yōu)選地，所述第二底物為α-葡糖苷酶底物。優(yōu)選地，所述第一底物為α-葡糖苷酶底物，優(yōu)選Χ-α-葡糖苷(5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷)；并且所述第二底物為α-葡糖苷酶底物， 優(yōu)選Green A-α -葡糖苷(5-溴_4_氯_3_吲哚氧基-N-甲基-α -葡糖苷)。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述培養(yǎng)基還包含有利于金黃色葡萄球菌生長的至少一種抑制劑，例如氯化鋰(LiCl)、疊氮化鈉(NaN3)、多粘菌素Ε、兩性霉素、氨曲南、多粘菌素、氯化鈉(NaCl)和去鐵胺。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述培養(yǎng)基還包含抑制劑的混合物，所述混合物包含有利于金黃色葡萄球菌生長的四種抑制劑，所述抑制劑為LiCl、弧菌抑制化合物 0/129、氨曲南和兩性霉素。本發(fā)明還涉及如上文定義的反應(yīng)培養(yǎng)基的體外用途，其用于分離和鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)。本發(fā)明還涉及檢測和/或鑒定生物學(xué)樣品中的甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌 (MRSA)的方法，所述方法包括a)將可能包含甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的生物學(xué)樣品接種于上文所定義的反應(yīng)培養(yǎng)基上；b)進(jìn)行溫育；c)鑒定是MRSA菌落的菌落。所述溫育優(yōu)選在30°C -42°C的溫度下進(jìn)行。MRSA優(yōu)選通過一種或兩種α -葡糖苷酶活性或磷酸酯酶活性來檢測，這使得可以獲得顯色或熒光菌落。其他種的葡萄球菌 (Staphylococcus)看起來是無色的，或者具有不同于金黃色葡萄球菌(S. aureus)菌落的顏色或熒光。步驟a)之前可以進(jìn)行選擇或非選擇培養(yǎng)基中的預(yù)富集步驟。本發(fā)明還涉及用于檢測和/或鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的反應(yīng)培養(yǎng)基，其包含酶促或代謝活性的底物；第一抗生素，其選自頭孢地尼和頭孢米諾；以及第二抗生素，其屬于氨基糖苷家族。優(yōu)選地，頭孢米諾濃度為10_35mg/l，優(yōu)選12_28mg/l。優(yōu)選地，頭孢地尼濃度為 0. 1-lmg/l，優(yōu)選 0. 2-0. 6mg/l。
根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述第二抗生素為卡那霉素或阿米卡星。優(yōu)選地，卡那霉素濃度為0. 2-1. 5mg/l，優(yōu)選0. 5-1. 25mg/l。優(yōu)選地，阿米卡星濃度為 0. 5-5mg/l，優(yōu)選 1-aiig/l。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢米諾和卡那霉素。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢米諾和阿米卡星。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢地尼和卡那霉素。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，兩種抗生素的組合包括頭孢地尼和阿米卡星。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述酶促或代謝活性的底物允許檢測糖苷酶、酯酶或肽酶活性。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述糖苷酶活性為α-葡糖苷酶活性。所述α-葡糖苷酶活性的底物優(yōu)選為吲哚氧基-α-葡糖苷。優(yōu)選地，所用的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚氧基- α -葡糖苷(Χ-α -葡糖苷)或5_溴_4_氯_3_吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷(GreenA-α-葡糖苷)。優(yōu)選地，所述底物存在于培養(yǎng)基中的濃度為0. 01-0. 2g/l，優(yōu)選0. 03-0. 15g/l。事實(shí)上，在這種底物濃度下獲得更好的顯色對(duì)照。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述酯酶活性為磷酸酯酶活性。優(yōu)選地，所用的底物為6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯(粉紅色-磷酸酯)。優(yōu)選地，所述底物存在于培養(yǎng)基中的濃度為0. 05-0. 5g/l，優(yōu)選0. 1-0. 4g/l。事實(shí)上，在這種底物濃度下獲得更好的顯色對(duì)照。根據(jù)本發(fā)明的一具體實(shí)施方案，所述反應(yīng)培養(yǎng)基還包含第二酶底物。優(yōu)選地，所述第二底物為α-葡糖苷酶底物。優(yōu)選地，所述第一底物為α-葡糖苷酶底物，優(yōu)選Χ-α-葡糖苷(5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷)；并且所述第二底物為α-葡糖苷酶底物， 優(yōu)選Green A-α -葡糖苷(5-溴_4_氯_3_吲哚氧基_Ν_甲基-α -葡糖苷)。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述培養(yǎng)基還包含有利于金黃色葡萄球菌生長的至少一種抑制劑，例如氯化鋰(LiCl)、疊氮化鈉(NaN3)、多粘菌素Ε、兩性霉素、氨曲南、多粘菌素(polymixines)、氯化鈉(NaCl)和去鐵胺。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施方案，所述培養(yǎng)基還包含抑制劑的混合物，所述混合物包含有利于金黃色葡萄球菌生長的四種抑制劑，所述抑制劑為LiCl、弧菌抑制化合物 0/129、氨曲南和兩性霉素。本發(fā)明還涉及如上文定義的反應(yīng)培養(yǎng)基的體外用途，其用于分離和鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)。本發(fā)明還涉及檢測和/或鑒定生物學(xué)樣品中的甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌 (MRSA)的方法，所述方法包括a)將可能包含甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的生物學(xué)樣品接種于上文所定義的反應(yīng)培養(yǎng)基上；b)進(jìn)行溫育；c)鑒定 MRSA 菌落。所述溫育優(yōu)選在30°C -42°C的溫度下進(jìn)行。MRSA優(yōu)選通過一種或兩種α-葡糖苷酶活性或磷酸酯酶活性來檢測，這使得可以獲得顯色或熒光菌落。其他種的葡萄球菌看起來是無色的，或者具有不同于金黃色葡萄球菌菌落的顏色或熒光。
步驟a)之前可以進(jìn)行選擇或非選擇培養(yǎng)基中的預(yù)富集步驟。
具體實(shí)施例方式以示例且不宜任何限定的方式給出以下的實(shí)施例。這使得可以更清楚地理解本發(fā)明。實(shí)施例1包含頭孢米諾-卡那霉素抗生素組合和各種發(fā)色底物的MRSA培養(yǎng)基1.制備本發(fā)明的培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)中測試的培養(yǎng)基如下培養(yǎng)基T chromID MRSA 對(duì)照培養(yǎng)基(ref. 43451).培養(yǎng)基A 培養(yǎng)基T ；頭孢西丁由頭孢米諾(Daewoo Chemical, A8060902 ； 16mg/ 1)/卡那霉素(Sigma，ref. K4000 ;lmg/l)抗生素組合代替；發(fā)色底物為粉紅色-磷酸酯 (Biosynth, ref. C—5100 ；0. 25g/l)。培養(yǎng)基B 培養(yǎng)基T ；頭孢西丁由頭孢米諾(16mg/l)/卡那霉素(0. 75mg/l)抗生素組合代替；發(fā)色底物為Χ-α -葡糖苷(Biosynth, Β7230 ；0. 045g/l)和Green Α-α -葡糖苷 (Inalco, ref. 1758-0730)。培養(yǎng)基C 培養(yǎng)基T ；頭孢西丁由頭孢米諾(16mg/l)/卡那霉素(0. 75mg/l)抗生素組合代替；發(fā)色底物為Χ-α -葡糖苷(Biosynth, Β7230 ；0. 045g/l)和Green Α-α -葡糖苷 (Inalco, ref. 1758-0730，0. 08g/l)。2.培養(yǎng)基接種和讀取將金黃色葡萄球菌的各種甲氧西林抗性(MRSA)或甲氧西林敏感性(MSSA)菌株和凝固酶陰性葡萄球菌菌株(CoNS)(全部來自申請(qǐng)人的保藏)懸浮于生理鹽水中，然后根據(jù)四區(qū)劃線法接種在培養(yǎng)基上。將培養(yǎng)皿在37°C下溫育M小時(shí)。接種18h-24h后視覺檢查形成的菌落。3.結(jié)果結(jié)果示于表1。
權(quán)利要求
1.用于檢測和/或鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的反應(yīng)培養(yǎng)基，其包含發(fā)色底物；屬于頭孢菌素家族的第一抗生素；和屬于氨基糖苷家族的第二抗生素。
2.如權(quán)利要求1所述的反應(yīng)培養(yǎng)基，其中所述第一抗生素為頭孢米諾或頭孢地尼。
3.如權(quán)利要求1或2所述的反應(yīng)培養(yǎng)基，其中所述第二抗生素為卡那霉素或阿米卡星。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的反應(yīng)培養(yǎng)基，其中所述發(fā)色底物能夠檢測糖苷酶、 酯酶或肽酶活性。
5.如權(quán)利要求4所述的反應(yīng)培養(yǎng)基，其中所述糖苷酶活性為α-葡糖苷酶活性。
6.如權(quán)利要求5所述的反應(yīng)培養(yǎng)基，其中所述酯酶活性為磷酸酯酶活性。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的反應(yīng)培養(yǎng)基的體外用途，其用于分離和鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)。
8.檢測和/或鑒定生物學(xué)樣品中的甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的方法，所述方法包括a)將可能包含甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的生物學(xué)樣品接種于如權(quán)利要求 1-6中任一項(xiàng)所述的反應(yīng)培養(yǎng)基上；b)進(jìn)行溫育；c)鑒定MRSA菌落。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于檢測和/或鑒定甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)的反應(yīng)培養(yǎng)基，其包含發(fā)色底物；屬于頭孢菌素家族的第一抗生素；和，屬于氨基糖苷家族的第二抗生素。
文檔編號(hào)C12Q1/14GK102482710SQ201080034324
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月13日
發(fā)明者G·贊巴爾迪, J-M·羅什 申請(qǐng)人:生物梅里埃公司