專利名稱：檢測方法
檢測方法本發(fā)明涉及檢測作物種子上存在的農(nóng)藥的方法。尤其是，根據(jù)本發(fā)明的方法可以用來確保作物種子上存在充足量的農(nóng)藥?；谝合嗌V的用于確定柑橘類水果上存在噻菌靈(TBZ)殘余物的方法已知自 J-AOAC-Int. 1996 3月-4月；79(2) :579_82。該方法使用熒光檢測，然而，在熒光分析之前其需要使樣品經(jīng)受冗長且復(fù)雜的液相色譜技術(shù)。本發(fā)明提供一系列相對現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)勢， 包括這樣的能力在種子處理過程期間或之后快速分析種子樣品以確定農(nóng)藥存在并對其定量，不使用液相色譜法。因此，本發(fā)明提供相對現(xiàn)有技術(shù)的顯著改進(jìn)。根據(jù)本發(fā)明，提供檢測液體樣品中存在的殺真菌劑的方法，所述液體樣品在種子處理過程期間或之后提取自種子，包括(a)提供待測試的含水和/或有機(jī)/含水樣品；(b) 對所述樣品進(jìn)行電磁輻射，該電磁輻射的波長足以激發(fā)殺真菌劑包含的熒光團(tuán)；(c)檢測所述樣品中所述熒光團(tuán)的熒光。在具體實施方式
中，待測試的樣品是含水樣品。在又一實施方式中，待測試的樣品是有機(jī)/含水樣品。在又一實施方式中，待測試的樣品是有機(jī)樣品。術(shù)語"種子"如本文所用包括有性種子和其它類型的植物繁殖材料。例如，有性種子一般包括至少胚和種皮，比如禾谷類和豆科植物種子中存在的那些。一般禾谷類包括， 但不限于，玉米，稻小麥，大麥，和高粱。一般豆科植物包括，但不限于，菜豆，豌豆，和花生。 植物繁殖材料包括會繁殖成植物的全部物質(zhì)。已知繁殖材料的一般實例是插條，例如，馬鈴薯種子?？捎糜诒景l(fā)明的有機(jī)溶劑的實例包括乙腈，醇類比如甲醇，乙醇，丙醇，酮類比如丙酮，烴類比如己烷和芳族化合物比如甲苯。如上所述，本發(fā)明還提供這樣的方法，其中所述熒光的檢測使得可以定量所述樣品中的殺真菌劑。如上所述，本發(fā)明還提供這樣的方法，其中激發(fā)所述殺真菌劑包含的熒光團(tuán)的波長是約305nm。在具體實施方式
中所述波長是305nm。如上所述，本發(fā)明還提供這樣的方法，其中被激發(fā)的熒光團(tuán)發(fā)出的熒光信號的波長是約360nm。在又一實施方式中，所述波長是360nm。在所述方法的具體實施方式
中，所述殺真菌劑是噻菌靈。在The British Crop Protection Council 在 2003 出版的 The Pesticide Manual 第十三版中，噻菌靈(TBZ)列為790條。TBZ主要作為用于作物上的殺真菌劑為人所知。令人驚訝地，申請人發(fā)現(xiàn)TBZ的熒光特征能夠用來在種子處理期間及之后計算并定量含有TBZ的殺真菌配制劑的存在和含量。如上所述，本發(fā)明還提供這樣的方法，其中經(jīng)由熒光光譜儀檢測熒光。如上所述，本發(fā)明還提供這樣的方法，其中在種子處理過程期間分析所述種子以確保種子包覆有充足量的殺真菌劑。在具體實施方式
中，在種子處理過程之后分析種子以確認(rèn)種子含有充足量的殺真菌劑。在又一實施方式中，用分析結(jié)果來控制在處理過程期間加至種子農(nóng)藥量。本發(fā)明還提供確定作物種子上存在的殺真菌劑的量的方法，包括(a)在種子處理過程期間，將希望水平的殺真菌劑施用種子；和(b)自種子提取所施用的殺真菌劑；(C) 分析所提取的殺真菌劑中殺真菌劑水平；和(d)基于所提取的殺真菌劑中存在的殺真菌劑水平，推演施用至種子的殺真菌劑水平。本發(fā)明還提供確定作物種子上存在的農(nóng)藥量的方法，包括(a)在種子處理過程期間，將希望水平的一種或多種殺真菌劑加至種子；(b)自種子提取至少一種施用殺真菌劑；(c)分析所提取的殺真菌劑中所述至少一種殺真菌劑的水平；(d)基于所提取的殺真菌劑中存在的所述至少一種殺真菌劑的水平，推演施用至種子的至少一種殺真菌劑的水平； 并且(e)基于施用至種子的至少一種殺真菌劑的推演水平或者所提取的殺真菌劑中存在的所述至少一種殺真菌劑的水平，將施用至種子的全部殺真菌劑的水平進(jìn)行關(guān)聯(lián)。本發(fā)明還提供確定作物種子上存在的農(nóng)藥量的方法，包括(a)在種子處理過程期間，將希望水平的噻菌靈和一種或多種殺真菌劑或殺昆蟲劑加至種子；(b)自種子提取噻菌靈；(c)分析所提取的殺真菌劑中的噻菌靈水平；(d)基于所提取的噻菌靈中存在的噻菌靈的水平，推演施用至種子的噻菌靈水平；并且(e)基于施用至種子的噻菌靈的推演水平或所提取的噻菌靈中存在的噻菌靈的水平，將施用至種子的殺真菌劑和/或殺昆蟲劑的水平進(jìn)行關(guān)聯(lián)。本發(fā)明還提供這樣的設(shè)備，其包括檢測在種子處理過程期間或之后產(chǎn)生的含水樣品中存在的殺真菌劑的檢測機(jī)制，所述設(shè)備包括(a)提供待測試的含水樣品的機(jī)構(gòu)；(b) 對所述樣品進(jìn)行電磁輻射的機(jī)構(gòu)，所述電磁輻射的波長足以激發(fā)所述殺真菌劑包含的熒光團(tuán)；(c)檢測所述樣品中所述熒光團(tuán)的熒光的機(jī)構(gòu)。如上所述，本發(fā)明還提供這樣的設(shè)備，其中所述設(shè)備還包括進(jìn)行確定如上所述的種子中存在的殺真菌劑量方法的機(jī)構(gòu)。本發(fā)明還提供將熒光檢測器用于檢測在種子處理過程期間或之后產(chǎn)生的含水樣品中的殺真菌劑。在具體實施方式
中，所述檢測器是定量檢測器。在又一實施方式中，所述殺真菌劑是噻菌靈。在所述方法的又一實施方式中，激發(fā)所述殺真菌劑包含的熒光團(tuán)的波長是約 305nm。在所述方法的又一實施方式中，激發(fā)熒光團(tuán)發(fā)出的熒光信號的波長是約360nm。在所述方法的又一實施方式中，所述殺真菌劑是噻菌靈。在所述方法的又一實施方式中，所述熒光經(jīng)由熒光光譜儀檢測。本發(fā)明還提供進(jìn)行本發(fā)明方法的便攜式試劑盒。所述試劑盒可以包括下述項目 一個或多個容器，提取流體，超聲儀(例如超聲浴)，稀釋溶液，緩沖溶液，移液管，濾光器， 熒光光譜儀，電源，光源，和/或計算機(jī)。本發(fā)明的優(yōu)選提取流體一般地是有機(jī)溶劑包括，例如乙腈，醇類比如甲醇，乙醇， 丙醇，酮類比如丙酮，烴類比如己烷和芳族化合物比如甲苯。本發(fā)明特別優(yōu)選的提取溶液是甲醇。超聲儀是這樣的裝置，其產(chǎn)生聲音能量，一般是超聲能量，攪動顆粒并促進(jìn)自種子的提取。超聲儀也稱為超聲浴或超聲探頭?？缮藤彽某晝x的一種實例是Branson B1510-MT 型。熒光光譜儀和光源是本領(lǐng)域已知的?？缮藤彽墓庾V儀和光源包括佛羅里達(dá)的 Ocean Optics of Dunedin 生產(chǎn)的那些，比如 Ocean 0pticsPX-2 光源和 USB 4000 熒光檢測ο現(xiàn)參照下述非限制性實施例進(jìn)一步定義本發(fā)明種子處理分析實施例1用如下配方，將700克玉米種子用含有26. 55重量％噻菌靈的商業(yè)種子處理配制劑進(jìn)行處理商業(yè)配制劑2. 95克Beckerwood 彩衣紅色液(Color Coat Red Liquid) 0· 16 克Florite 1085 聚合物0. 45 克水3. 12 克讓種子干燥。通過熒光光譜分析經(jīng)處理種子用噻菌靈(TBZ)單獨處理或用噻菌靈與約0. 1% (IOOOppm)水平的其它殺真菌劑混合處理的已知重量的種子( 4克)加入玻璃容器。加入IOml的0. 05M磷酸緩沖劑(pH 4. 5)，振搖混合物約15分鐘。將IOml甲醇加入混合物，再振搖混合物15分鐘。將混合物的等分試樣過濾通過0.45um濾器。經(jīng)過濾的提取物用0.05M磷酸緩沖劑(pH 4.5)稀釋， 超聲濃度約Ippm的噻菌靈。將含約Ippm TBZ的經(jīng)稀釋的提取物轉(zhuǎn)移至池中，產(chǎn)生TBZ熒光光譜。記錄約360nm處的TBZ熒光強(qiáng)度。溶液中的TBZ濃度由TBZ濃度對照于360nm的 TBZ熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定。實施例2用下述配方，將700克玉米種子用含有26. 55重量％噻菌靈的商業(yè)種子處理配制
劑進(jìn)行處理商業(yè)配制劑0. 82克Beckerwood 彩衣紅色液0. 16 克Florite 1085 聚合物0. 45 克水3. 12 克讓種子干燥。使用描述于實施例1的相同分析方法。結(jié)果通過熒光光譜和液相色譜法(HPLC)分析種子提取物。
權(quán)利要求
1.檢測在液體樣品中殺真菌劑的存在的方法，所述液體樣品提取自在對種子進(jìn)行農(nóng)藥處理期間或之后所產(chǎn)生的樣品，所述方法包括(a)提供待測試的含水樣品和/或有機(jī)/含水樣品，其中該樣品含有提取自種子的殺真菌劑；(b)對樣品進(jìn)行電磁輻射，該電磁輻射的波長足以激發(fā)殺真菌劑包含的熒光團(tuán)；(c)檢測樣品中熒光團(tuán)的熒光。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，還包括基于熒光檢測定量樣品中的殺真菌劑。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述殺真菌劑是噻菌靈。
4.權(quán)利要求3的方法，其中激發(fā)所述殺真菌劑包含的熒光團(tuán)的波長是約305nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中被激發(fā)的熒光團(tuán)所發(fā)出的熒光信號的波長是約360nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述殺真菌劑是噻菌靈。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項的方法，其中所述熒光經(jīng)由熒光光譜儀檢測。
8.確定種子上存在的殺真菌劑的量的方法，所述方法包括(a)在種子處理過程期間，將希望水平的殺真菌劑施用至種子；并且(b)自種子提取所施用的殺真菌劑；(c)分析所提取殺的真菌劑中的殺真菌劑水平；并且(d)基于在所提取的殺真菌劑中存在的殺真菌劑水平，推演施用至種子的殺真菌劑水平。
9.確定種子上存在的殺真菌劑的量的方法，所述方法包括(a)在種子處理過程期間，將希望水平的一種或多種殺真菌劑加至種子；(b)自種子提取至少一種所施用的殺真菌劑；(c)分析所提取的殺真菌劑中所述至少一種殺真菌劑的水平；(d)基于所提取的殺真菌劑中存在的所述至少一種殺真菌劑的水平，推演施用至種子的所述至少一種殺真菌劑的水平；并且(e)基于施用至種子的所述至少一種殺真菌劑的推演水平或者所提取的殺真菌劑中存在的所述至少一種殺真菌劑的水平，將施用至種子的全部殺真菌劑的水平進(jìn)行關(guān)聯(lián)。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述至少一種殺真菌劑是噻菌靈。
11.確定種子上存在的農(nóng)藥的量的方法，所述方法包括(a)在種子處理過程期間，將希望水平的噻菌靈和一種或多種殺真菌劑或殺昆蟲劑加至種子；(b)自種子提取噻菌靈；(c)分析所提取的殺真菌劑中噻菌靈的水平；(d)基于所提取的噻菌靈中存在的噻菌靈的水平，推演施用至種子的噻菌靈水平；并且(e)基于施用至種子的噻菌靈的推演水平或者所提取的噻菌靈中存在的噻菌靈的水平，將施用至種子的殺真菌劑和/或殺昆蟲劑的水平進(jìn)行關(guān)聯(lián)。
12.試劑盒，包括(a)容器；(b)提取溶劑；(c)超聲儀；(d)熒光光譜儀；以及(e)光源。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測在種子上存在的殺真菌劑的方法。尤其是，根據(jù)本發(fā)明的方法可以用來確保種子上存在充足量的殺真菌劑或殺昆蟲劑。在具體的實施方式中，所檢測的殺真菌劑是噻菌靈。
文檔編號C12Q1/16GK102365369SQ201080014714
公開日2012年2月29日 申請日期2010年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月27日
發(fā)明者N·約翰遜, P·博奈特 申請人:先正達(dá)參股股份有限公司