專利名稱：一種脫膠菌株的篩選方法及其篩選出的脫膠菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，更具體的說(shuō)是涉及一種脫膠菌株的篩選方法，還涉及利 用該方法篩選出的一種脫膠菌株。
背景技術(shù)：
苧麻，別名白葉苧麻，多年生宿根性草本植物，是中國(guó)特有的以紡織為主要用途的 農(nóng)作物，其單纖維長(zhǎng)、強(qiáng)度大，吸濕和散濕快，熱傳導(dǎo)性能好，脫膠后潔白有絲光，可以純紡， 也可和棉、絲、毛、化纖等混紡，是重要的紡織纖維作物。苧麻中含有大量雜質(zhì)，其中以多糖膠狀物質(zhì)為主，紡紗前要求將韌皮中絕大部分 膠質(zhì)去除，并使苧麻的單纖維相互分離，這一過(guò)程稱為脫膠。傳統(tǒng)的脫膠工藝采用化學(xué)脫膠 法，即燒堿蒸煮的脫膠方法，該方法污染嚴(yán)重、能耗高、對(duì)纖維有損傷，已不再適應(yīng)現(xiàn)代工業(yè) 生產(chǎn)的要求。隨著科學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代紡織工業(yè)的的發(fā)展，出現(xiàn)了一種新的脫膠工藝，即生物脫膠。 生物脫膠主要是利用微生物產(chǎn)生的果膠酶、半纖維素酶等分解植物韌皮纖維中的果膠、半 纖維素等物質(zhì)，但不損傷纖維素結(jié)構(gòu)，具有反應(yīng)條件溫和、節(jié)水節(jié)能、污染少等優(yōu)點(diǎn)。苧麻生 物脫膠一般包括酶脫膠和菌脫膠兩種方式。酶脫膠是直接利用脫膠酶制劑或者脫膠菌株產(chǎn) 生的酶作用于苧麻上，利用酶的生物活性，降解苧麻纖維外包裹的膠質(zhì)復(fù)合體，從而使纖維 分離出來(lái)；菌脫膠是把經(jīng)過(guò)篩選的脫膠菌株接種到生苧麻上，以苧麻上的膠質(zhì)為營(yíng)養(yǎng)源，讓 脫膠菌在生苧麻上大量繁殖，在脫膠菌繁殖過(guò)程中，分泌出脫膠酶分解膠質(zhì)，使高分子量的 果膠及半纖維素等大分子分解成小分子物質(zhì)而溶于水中。但是，不論哪種生物脫膠方式都 與脫膠菌密切相關(guān)，脫膠菌的特性直接影響著脫膠過(guò)程的變化和最終脫膠效果，因此在生 物脫膠中，菌株的篩選是最重要的環(huán)節(jié)。目前研究脫膠菌的篩選方法的報(bào)道較多，主要是兩種方法，第一種是采用果膠配 制培養(yǎng)基(見吳麗艷等，亞麻脫膠菌的分離、篩選和鑒定，云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 2007,29(4) :419-423)，該方法能較快地獲得能分解果膠的菌株，但因?yàn)槁轭惖哪z質(zhì)中不 只有果膠，還有半纖維素等物質(zhì)，因此這種方法會(huì)局限脫膠菌的篩選范圍，導(dǎo)致某些脫膠菌 不能獲得。第二種方法主要是采用麻類直接進(jìn)行篩選，例如用劍麻葉篩選脫膠菌株(見 陳青等，劍麻生物制漿脫膠菌株的篩選與鑒定及初步應(yīng)用，農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2008，24(6) 277-281)；采用以苧麻粉為唯一碳源的平板培養(yǎng)基進(jìn)行脫膠菌的篩選(陳楊棟等，苧麻 微生物脫膠菌株篩選及脫膠效果評(píng)價(jià)紡織學(xué)報(bào)，2010，31 (5) 69-72)；用大麻莖篩選脫膠 菌株(見彭源德等，大麻快速脫膠菌株的選育與脫膠性能鑒定，紡織學(xué)報(bào)，2007，28 (12) 65-68)。這種方法能篩選到以麻為營(yíng)養(yǎng)的各類菌株，包括了能分解果膠、半纖維素和纖維素 等成分的菌株，但是在麻類脫膠中分解纖維素的菌株會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷麻類纖維的品質(zhì)，因此通 過(guò)這種方法所獲得的菌株并不都適用于生物脫膠。針對(duì)上述問(wèn)題，我國(guó)目前已經(jīng)篩選出一些適用于生物脫膠的菌株，如中國(guó)專利 CN85104285中公布的一種脫膠菌B. Subtilis A2—5 ；中國(guó)專利CN1371990公布的一種產(chǎn)生韌皮纖維脫膠酶的菌株B. Subtilis No. 13 ；中國(guó)專利CN85103481公布的一種細(xì)菌化 學(xué)聯(lián)合脫膠技術(shù)，該技術(shù)利用誘變菌株枯草芽孢桿菌T66進(jìn)行生物脫膠。但是，中國(guó)專利 CN85104285中菌株培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，需24h左右；中國(guó)專利CN1371990中的脫膠耗時(shí)比較長(zhǎng)， 其中一、二級(jí)種子培養(yǎng)時(shí)間均為8-14h，產(chǎn)酶發(fā)酵時(shí)間12-18h，脫膠酶液適當(dāng)處理后再進(jìn)行 原麻脫膠需要2-6h ；而中國(guó)專利CN85103481中的脫膠率僅為69%左右。從上述內(nèi)容可知， 國(guó)內(nèi)目前篩選到的脫膠菌株較多，但大多存在因培養(yǎng)發(fā)酵時(shí)間較長(zhǎng)而導(dǎo)致生產(chǎn)周期長(zhǎng)的缺 點(diǎn)，并且部分菌株脫膠率較低、脫膠速度較慢，制約了生物脫膠在生產(chǎn)中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種脫膠菌株的篩選純化方法，該方法以苧麻 汁為唯一有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行篩選，可快速獲得分解苧麻膠質(zhì)成分的菌株。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種脫膠菌株，該菌株培養(yǎng)周期短、脫膠速度快。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種脫膠菌株的篩選純化方法，包括以下步驟步驟1、將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養(yǎng)基中恒溫振 蕩培養(yǎng)，所述富集培養(yǎng)基包含3-10%苧麻、0. 5-1. 5%蛋白胨、0. 1-0. 5%牛肉膏、0. 3-1. 0% NaCl，其余成分為水；步驟2、將步驟1培養(yǎng)后的培養(yǎng)物涂布在初篩培養(yǎng)基上恒溫培養(yǎng)，將在初篩培養(yǎng) 基上產(chǎn)生水解圈的菌落進(jìn)行純化，所述初篩培養(yǎng)基包含5-10%苧麻、0. 01-0. 08% K2HPO4, 0. 03-0. 1% NH4Cl和1. 5-2. 5%瓊脂，其余成分為水；步驟3、將步驟2純化后的菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)15_24h測(cè)定菌株 脫膠率，脫膠率大于80 %的菌株為篩選出的目的菌株，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含8-15g生苧麻、 0. 01-0. 08% K2HPO4 和 0. 03-0. 1% NH4Cl,其余成分為水。在復(fù)篩時(shí)，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組即步驟3所述；對(duì)照組即復(fù)篩培養(yǎng)基中不 接種菌株，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5889-86中測(cè)含膠率的方法測(cè)定對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的含膠率，分 別記為Gtl和G1,脫膠率為Gr。按公式Gr = I-G1ZG0計(jì)算得出脫膠率。其中，步驟1所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24_48h。其中，步驟2所述培養(yǎng)為在35°C恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24_48h。其中，步驟3所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速180rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)。優(yōu)選地，所述富集培養(yǎng)基包含5%苧麻、蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5% NaCl，其 余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將5g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸 騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 3g牛 肉膏、Ig蛋白胨、0. 5g NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。優(yōu)選地，所述初篩培養(yǎng)基包含8%苧麻汁、0. 03% K2HPO4、0. 05% NH4Cl和2%瓊月旨， 其余成分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將8g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待 沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl、2g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。優(yōu)選地，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含IOg生苧麻、0. 03% K2HPO4和0. 05% NH4Cl,其余成分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl，溶液定容至100ml，然后加入
IOg生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。本發(fā)明所述篩選方法利用苧麻汁為篩選培養(yǎng)基的主要成分，苧麻汁是原麻在沸水 中蒸煮時(shí)苧麻膠脫落到水溶液中而形成的，所以苧麻汁的主要成分是苧麻中的各類膠質(zhì)物 質(zhì)，基本不含纖維素。因此，利用以苧麻汁為唯一有機(jī)物的培養(yǎng)基來(lái)篩選脫膠菌株，能克服 現(xiàn)有篩選方法中所篩菌株損傷麻類纖維素和限制脫膠菌株篩選范圍的問(wèn)題，提高脫膠菌株 篩選的效率。本發(fā)明還提供一種脫膠菌株，該菌株利用本發(fā)明所述篩選方法從腐爛菜堆中篩選 分離所得，所述脫膠菌株已于2010年7月12日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址為武 漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)內(nèi)，保藏編號(hào)為CCTCCNO :M 2010174。本發(fā)明所述脫膠菌株在培養(yǎng)基pH值小于4或大于10時(shí)無(wú)菌落長(zhǎng)出，最適生長(zhǎng)pH 值為6. 5-7. 5，最適生長(zhǎng)溫度為35°C _37°C，該菌株繁殖速度快，10_12h進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期。本發(fā)明所述脫膠菌株果膠水解實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性，纖維素分解實(shí)驗(yàn)呈陰性，表明該菌株 能夠分解果膠，但不會(huì)對(duì)纖維素造成損傷；在糖類發(fā)酵實(shí)驗(yàn)中，該菌株可利用可溶性淀粉、 葡萄糖、乳糖、蔗糖和麥芽糖做唯一性碳源生長(zhǎng)；在其他生理生化檢測(cè)中，該菌株接觸酶、 VP測(cè)定呈陽(yáng)性，能水解淀粉，液化明膠，不產(chǎn)脲酶，能利用丙二酸和檸檬酸鹽，不產(chǎn)生熒光色 素，甲基紅實(shí)驗(yàn)呈陰性，可氧化分解乙酸。本發(fā)明所述脫膠菌株的16S rDNA序列與果膠桿菌的16S rDNA序列同源性大于 99%，表明該菌株屬果膠桿菌屬。同時(shí)，本發(fā)明所述菌株在接種到苧麻上后8h，脫膠率就已 達(dá)90%以上。本發(fā)明所述篩選方法以苧麻汁為唯一有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行篩選，能快速獲得分解苧 麻膠質(zhì)成分的菌株，不損傷苧麻纖維素成分，且菌株的脫膠率高，具有工業(yè)應(yīng)用性。此外，本 發(fā)明所述脫膠菌株培養(yǎng)周期短，脫膠速度快，脫膠率高，能夠應(yīng)用于生物脫膠領(lǐng)域。生物保藏說(shuō)明分類命名果膠桿菌RJ6，Pectobacterium sp. RJ6.于2010年7月12日保藏在 中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址為武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC NO =M 2010174。


圖1示本發(fā)明所述脫膠菌株掃描電鏡圖，放大倍數(shù)為8000倍。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明公開了一種脫膠菌株的篩選方法及其篩選出的脫膠菌株，本領(lǐng)域技術(shù)人員 可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì) 本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述篩選方法及 脫膠菌株已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和 范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。依照本發(fā)明，一種脫膠菌株的篩選方法，包括以下步驟
步驟1、將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養(yǎng)基中恒溫振 蕩培養(yǎng)，所述富集培養(yǎng)基包含3-10%苧麻、0. 5-1. 5%蛋白胨、0. 1-0. 5%牛肉膏、0. 3-1. 0% NaCl，其余成分為水；步驟2、將步驟1培養(yǎng)后的培養(yǎng)物涂布在初篩培養(yǎng)基上恒溫培養(yǎng)，將在初篩培養(yǎng) 基上產(chǎn)生水解圈的菌落進(jìn)行純化，所述初篩培養(yǎng)基包含5-10%苧麻、0. 01-0. 08% K2HPO4, 0. 03-0. 1% NH4Cl和1. 5-2. 5%瓊脂，其余成分為水；步驟3、將步驟2純化后的菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)15_24h測(cè)定菌株 脫膠率，脫膠率大于80 %的菌株為篩選出的目的菌株，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含8-15g生苧麻、 0. 01-0. 08% K2HPO4 和 0. 03-0. 1% NH4Cl,其余成分為水。其中，步驟1所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24_48h。其中，步驟2所述培養(yǎng)為在35°C恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24_48h。其中，步驟3所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速180rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)。優(yōu)選地，所述富集培養(yǎng)基包含5%苧麻、蛋白胨、0.3%牛肉膏、0.5% NaCl，其 余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將5g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸 騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 3g牛 肉膏、Ig蛋白胨、0. 5g NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。優(yōu)選地，所述初篩培養(yǎng)基包含8%苧麻汁、0. 03% K2HPO4、0. 05% NH4Cl和2%瓊月旨， 其余成分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將8g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待 沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl、2g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。優(yōu)選地，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含IOg生苧麻、0. 03% K2HPO4和0. 05% NH4Cl,其余成 分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl，溶液定容至100ml，然后加入
IOg生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。采用本發(fā)明所述篩選方法可從包含有果膠桿菌、腸桿菌或芽孢桿菌的樣品中篩選 出分解苧麻膠質(zhì)成分的菌株，菌株在接種到苧麻上后8_24h，脫膠率均已大于80%，表明本 方法具有工業(yè)應(yīng)用性。本發(fā)明還提供一種脫膠菌株，該菌株利用本發(fā)明所述篩選方法從腐爛菜堆中篩選 分離所得。本發(fā)明所述脫膠菌株在培養(yǎng)基pH值小于4或大于10時(shí)無(wú)菌落長(zhǎng)出，最適生長(zhǎng)pH 值為6. 5-7. 5，培養(yǎng)溫度為50°C時(shí)有少量菌落產(chǎn)生，最適生長(zhǎng)溫度為35°C _37°C，該菌株繁 殖速度快，10-12h進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期。本發(fā)明所述脫膠菌株果膠水解實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性，纖維素分解實(shí)驗(yàn)呈陰性，表明該菌株 能夠分解果膠，但不會(huì)對(duì)纖維素造成損傷；在糖類發(fā)酵實(shí)驗(yàn)中，該菌株可利用可溶性淀粉、 葡萄糖、乳糖、蔗糖和麥芽糖做唯一性碳源生長(zhǎng)；在其他生理生化檢測(cè)中，該菌株接觸酶、 VP測(cè)定呈陽(yáng)性，能水解淀粉，液化明膠，不產(chǎn)脲酶，能利用丙二酸和檸檬酸鹽，不產(chǎn)生熒光色 素，甲基紅實(shí)驗(yàn)呈陰性，可氧化分解乙酸。
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16S rDNA是目前細(xì)菌分類鑒定的“公認(rèn)尺子”，通用的方法是把菌種的16S rDNA序 列與數(shù)據(jù)庫(kù)Genbank中的所有序列相比較，一般相似性高于98%以上可認(rèn)為是一個(gè)屬。本 發(fā)明所述脫膠菌株的16S rDNA序列與果膠桿菌的16S rDNA序列同源性大于99%，表明該 菌株屬果膠桿菌屬。同時(shí)，本發(fā)明所述菌株在接種到苧麻上后8h，脫膠率達(dá)到91%，表明本 發(fā)明所述脫膠菌株具有很高的脫膠效率。。
下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)施例1 利用本發(fā)明所述篩選方法篩選本發(fā)明所述脫膠菌株(1)富集培養(yǎng)將Ig腐爛菜樣(包括白菜、胡蘿卜、西紅柿等多種腐爛蔬菜)加入裝有20ml無(wú)菌 水的200ml三角瓶中，加入無(wú)菌玻璃珠，在150rpm搖床中振蕩20min。吸取IOml振蕩后的 溶液，加入IOOml富集培養(yǎng)基中，置于35°C、轉(zhuǎn)速170rpm的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)48h。富集培養(yǎng) 基5%苧麻、蛋白胨、0. 3%牛肉膏、0. 5% NaCl，其余成分為水。富集培養(yǎng)基的制備將5g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待沸 騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 3g牛 肉膏、Ig蛋白胨、0. 5g NaCl，溶液定容至100ml，大量制備富集培養(yǎng)基均參照此比例。(2)初篩將富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)物稀釋，涂布在以苧麻汁為唯一有機(jī)物的初篩培養(yǎng)基平板 上，在35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落作為初篩的結(jié)果。 初篩培養(yǎng)基苧麻8%、K2HPO4 0. 03%, NH4Cl 0. 05%、瓊脂2%，其余組分為水。初篩培養(yǎng)基的制備將8g生苧麻剪成Icm左右長(zhǎng)的小段，加水在電爐上加熱，待 沸騰后，改用小火熬煮，當(dāng)杯內(nèi)苧麻變軟，溶液變成棕黃色后，把苧麻撈出，然后加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl、2g瓊脂，溶液定容至100ml，大量制備初篩培養(yǎng)基均參照此比例。(3)純化將初篩出來(lái)的菌株，于肉湯培養(yǎng)基平板上劃線，置于35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h， 重復(fù)劃線培養(yǎng)三次以上，如連續(xù)多次在顯微鏡下觀察到形態(tài)單一的菌體則認(rèn)為菌株已純 化。(4)復(fù)篩將純化的菌株進(jìn)行苧麻脫膠，在滅菌后的復(fù)篩培養(yǎng)基中接種菌株，在35°C、轉(zhuǎn)速 ISOrpm恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)24h測(cè)定菌株的脫膠率，脫膠率大于80%的菌株為篩選 出的目的菌株，從脫膠率大于80%的菌株中挑取脫膠率最高的一株作為最優(yōu)的目的菌株。 復(fù)篩培養(yǎng)基生苧麻10g、K2HPO4O. 03%, NH4Cl 0. 05%，其余組分為水。復(fù)篩培養(yǎng)基的制備加入0. 03g K2HP04、0. 05gNH4Cl，溶液定容至100ml，然后加入 IOg生苧麻，大量制備復(fù)篩培養(yǎng)基均參照此比例。實(shí)施例2 本發(fā)明所述脫膠菌株16S rDNA序列分析將實(shí)施例1中篩選出的菌株命名為RJ6，送至中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行保 藏，同時(shí)送至上海生物工程有限公司測(cè)序，所用測(cè)序儀為ABI-PRISM3730，測(cè)序試劑為 BigDyeterminator v3. 1，所得 16S rDNA 序列如 SEQ ID NO 1 所示。將RJ6的16S rDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有序列進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示與果 膠桿菌的16S rDNA序列同源性大于99%，16S rDNA是目前細(xì)菌分類鑒定的“公認(rèn)尺子”，一般相似性高于98%以上可認(rèn)為是一個(gè)屬，故本發(fā)明所述脫膠菌株RJ6屬果膠桿菌屬。所述脫膠菌株RJ6已于2010年7月12日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址 為武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)內(nèi)，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M2010174，分類命名果膠桿菌， Pectobacterium sp. 0實(shí)施例3 本發(fā)明所述脫膠菌株形態(tài)特征將本發(fā)明所述脫膠菌株RJ6于有機(jī)物瓊脂平板上在不同PH值和培養(yǎng)溫度下恒溫 培養(yǎng)24-48h，結(jié)果顯示RJ6在培養(yǎng)基pH值小于4或大于10時(shí)無(wú)菌落長(zhǎng)出，最適生長(zhǎng)pH值 為6. 5-7. 5，培養(yǎng)溫度為50°C時(shí)有少量菌落產(chǎn)生，最適生長(zhǎng)溫度為35°C _37°C。在最適pH 值和培養(yǎng)溫度下，該菌株繁殖速度快，10-12h進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期。取本發(fā)明所述脫膠菌株RJ6菌樣進(jìn)行相應(yīng)處理后用電子掃描顯微鏡觀察RJ6細(xì)胞 生長(zhǎng)形態(tài)特征，結(jié)果參見圖1。RJ6形態(tài)特征為菌落圓隆形凸起，乳白色或淺黃色，不透明， 表面光滑，濕潤(rùn)有光澤，邊緣整齊，培養(yǎng)36h后菌落直徑達(dá)3-5mm。細(xì)胞短桿狀，兩端鈍圓，大 小為(0. 4-0. 5 μ mX 1. 1-1. 8 μ m)，革蘭氏染色陰性，有鞭毛，無(wú)芽孢，不產(chǎn)生色素。實(shí)施例4 本發(fā)明所述脫膠菌株生理生化特征依照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》等有關(guān)內(nèi)容對(duì)本發(fā)明所述脫膠菌株RJ6進(jìn)行生理 生化相關(guān)測(cè)定，結(jié)果參見表1。表1本發(fā)明所述脫膠菌株RJ6生理生化檢測(cè)
權(quán)利要求
一種脫膠菌株的篩選方法，包括以下步驟步驟1、將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述富集培養(yǎng)基包含3 10％苧麻、0.5 1.5％蛋白胨、0.1 0.5％牛肉膏、0.3 1.0％NaCl，其余成分為水；步驟2、將步驟1培養(yǎng)后的培養(yǎng)物涂布在初篩培養(yǎng)基上培養(yǎng)，將在初篩培養(yǎng)基上產(chǎn)生水解圈的菌落進(jìn)行純化，所述初篩培養(yǎng)基包含5 10％苧麻、0.01 0.08％K2HPO4、0.03 0.1％NH4Cl和1.5 2.5％瓊脂，其余成分為水；步驟3、將步驟2純化后的菌株接種到復(fù)篩培養(yǎng)基培養(yǎng)15 24h測(cè)定菌株脫膠率，脫膠率大于80％的菌株為篩選出的目的菌株，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含8 15g生苧麻、0.01 0.08％K2HPO4和0.03 0.1％NH4Cl，其余成分為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，所述富集培養(yǎng)基包含5%苧麻、1 %蛋白 胨、0. 3%牛肉膏、0. 5% NaCl，其余成分為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，所述初篩培養(yǎng)基包含8%苧麻、0.03% Κ2ΗΡ04、0. 05% NH4Cl和2%瓊脂，其余成分為水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，所述復(fù)篩培養(yǎng)基包含IOg生苧麻、 0. 03% K2HPO4 和 0. 05% NH4Cl，其余成分為水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，步驟1所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速170rpm 的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24-48h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，步驟2所述培養(yǎng)為在35°C恒溫?fù)u床中 培養(yǎng) 24-48h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述篩選方法，其特征在于，步驟3所述培養(yǎng)為在35°C、轉(zhuǎn)速ISOrpm 的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)。
8.一種脫膠菌株，其特征在于，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M2010174o
9.權(quán)利要求8所述脫膠菌株在生物脫膠中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體公開了一種脫膠菌株的篩選方法，還公開了一種利用該方法篩選出的脫膠菌株，所述脫膠菌株保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NOM 2010174。本發(fā)明所述脫膠菌株從腐爛菜堆中篩選分離所得，該菌株培養(yǎng)周期短、脫膠速度快，脫膠率高，可應(yīng)用于生物脫膠領(lǐng)域。本發(fā)明所述脫膠菌株的篩選方法以苧麻汁為唯一有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行篩選，能快速、重復(fù)獲得分解苧麻膠質(zhì)成分的菌株，不損傷苧麻纖維素成分，且菌株的脫膠率高，具有工業(yè)應(yīng)用性。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101948788SQ20101027463
公開日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月3日
發(fā)明者倉(cāng)道平, 曾曉希, 楊政 申請(qǐng)人:湖南潤(rùn)久科技有限公司