專利名稱：蠅蚧霉v-5菌株、使用該菌株的害蟲防治方法和含有該菌株的微生物農(nóng)藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蠅蚧霉(Lecanicillium muscarium)V-5菌株、使用該菌株的害蟲防治方法和含有該菌株的微生物農(nóng)藥。本發(fā)明用于環(huán)境友好地、快速和長(zhǎng)時(shí)間地害蟲防治， 特別是在農(nóng)業(yè)和園藝領(lǐng)域中。
背景技術(shù)：
一些絲狀真菌是昆蟲類和螨蟲類的天敵，例如，屬于輪枝菌(Verticillium)屬和白僵菌(Beauveria)屬的天敵絲狀真菌已實(shí)際上用作殺蟲劑。一些在過(guò)去分類為蠟蚧輪枝菌(Verticillium lecanii)的菌株基于分生孢子和瓶梗的形態(tài)學(xué)觀察和β-微管蛋白基因的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析最近已重新分類為蠅蚧霉(Lecanicillium muscarium) 0 結(jié)果，本發(fā)明的菌株和商品名為MYC0TAL的菌株(由K0PPERT制備)重新分類為蠅蚧霉。 專利文獻(xiàn)1公開(kāi)了具有綠色植物表面粘著性能的微生物農(nóng)藥，其包含作為昆蟲病原真菌 (entomopathogenic fungus)的具有對(duì)綠色植物表面的粘著活性的蠟蚧輪枝菌菌株，但是沒(méi)有描述本發(fā)明的菌株。此外，作為殺蟲劑的包含蠅蚧霉的微生物農(nóng)藥，MYC0TAL在市場(chǎng)上是作為蠟蚧輪枝菌可濕性粉劑，但是本發(fā)明菌株的菌落與MYC0TAL中含有的菌株的菌落不同。引用目錄專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1 JP-A-2003-335612

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問(wèn)題本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題是提供一種新的絲狀真菌菌株，所述菌株作為對(duì)環(huán)境安全、速效并且在對(duì)害蟲的卵和幼蟲噴霧處理的情況下殺蟲效果優(yōu)異的微生物農(nóng)藥是有用的。用于解決問(wèn)題的方案為解決上述問(wèn)題的目的，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)比常規(guī)已知的屬于蠅蚧霉的絲狀真菌表現(xiàn)出目標(biāo)害蟲的更高死亡率和可在更短時(shí)間內(nèi)防治目標(biāo)害蟲的本發(fā)明的菌株。即，本發(fā)明涉及蠅蚧霉V-5菌株(保藏編號(hào)FERM BP-11135)、使用該菌株的害蟲防治方法及包含該菌株的微生物農(nóng)藥。(蠅蚧霉v-5菌株的分離和保藏申請(qǐng))本發(fā)明的蠅蚧霉V-5菌株(下文稱為本發(fā)明的菌株)是從日本滋賀縣草津市西涉川2 丁目3番1號(hào)的石原產(chǎn)業(yè)(株)中心研究所(ISHIHARA SANGYO KAISHA, LTD.， CENTRAL RESEARCH INSTITUTE (2-3-1, Nishishibukawa, Kusatsu, Shiga, Japan))溫室中的銀葉粉虱分離的菌株。本發(fā)明的菌株基于其形態(tài)學(xué)性質(zhì)(分生孢子梗上形成有椎形瓶梗的輪生體和在頂端上形成有塊狀的單個(gè)分生孢子，瓶梗長(zhǎng)度為11. 2μπι-34. 3μπι，基部直徑為1. 1 μ m-2. 7 μ m,分生孢子為橢圓或棍棒形并且其大小為1. 4 μ m_3. 4 μ mX 2. 1 μ m-7. 5 μ m， 菌落為白色至淡黃白色，并且沒(méi)有觀察到形成次生瓶梗)和基于微管蛋白基因的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的結(jié)果(通過(guò)PCR擴(kuò)增540bp的DNA片段和通過(guò)HaeIII消化形成360bp 和 180bp 的片段)，根據(jù) R. Zare 和 W. Gams 等人的分類(Nova Hedwigia 73 :1-50,2001) 鑒定為蠅蚧霉。本發(fā)明的菌株在獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心 (National Institute of Advanced Industrial Science andTechnology,International Patent Organism Depositary) (Chuo 6,1-1-1,Higashi,Tsukuba, Ibaraki, Japan) 1蠅蚧霉V-5菌株(保藏編號(hào)FERM BP-11135)并于2009年6月10日被該中心接收。其為具有殺蟲和殺螨作用的絲狀真菌，包含該菌株的微生物農(nóng)藥在防治害蟲方面是有用的。發(fā)明的效果當(dāng)使用本發(fā)明的菌株時(shí)，可顯著有效地防治害蟲。因?yàn)楸景l(fā)明的菌株繁殖能力優(yōu)異，其可確保高細(xì)胞濃度并且還保持優(yōu)異的殺蟲效果。基于此，可以進(jìn)行有效的害蟲防治。 此外，因?yàn)槠浔憩F(xiàn)了對(duì)害蟲卵期的殺蟲效果，所以可以在早期實(shí)施有效的害蟲防治。此外， 因?yàn)楸景l(fā)明使用絲狀真菌，其還具有對(duì)環(huán)境顯著高的安全性并且在需要速效性和持續(xù)效果的防治害蟲的情況下也是有用的。


[圖1]顯示試驗(yàn)例3中本發(fā)明的菌株的菌落的照片。[圖2]顯示試驗(yàn)例3中從MYC0TAL分離的菌株的菌落的照片。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的菌株可通過(guò)將其原樣施用或在任選用水稀釋后作為微生物農(nóng)藥使用。其施用濃度和施用量依賴于不同的條件如害蟲的種類、害蟲的生長(zhǎng)階段和氣候條件等而改變，但是作為每1公畝中本發(fā)明的菌株的孢子數(shù)，施用量通常為5 X IO6個(gè)孢子至5 X IO12個(gè)孢子，優(yōu)選5 X IO7個(gè)孢子至5 X IO11個(gè)孢子。本發(fā)明的菌株可通過(guò)將其制成制劑作為微生物農(nóng)藥使用。在制備制劑的過(guò)程中， 可使用用于配制昆蟲病原菌作為微生物農(nóng)藥的一般方法。如果需要，可通過(guò)與載體(例如， 固體載體和液體載體)、表面活性劑、其他配制佐劑等任意組合配制為粉劑、可濕性粉劑、混懸劑和油懸浮劑(oil flowable)等形態(tài)。其中，優(yōu)選的形態(tài)是最初制成粉劑然后溶解于水以在使用前噴霧的可濕性粉劑。當(dāng)將本發(fā)明的菌株制成可濕性粉劑并通過(guò)用水稀釋而使用時(shí)，在以本發(fā)明的菌株濃度按施用溶液中的孢子數(shù)量計(jì)一般為每Iml為IO2個(gè)孢子至101°個(gè)孢子，優(yōu)選每Iml為IO3個(gè)孢子至IO8個(gè)孢子的方式稀釋可濕性粉劑后施用該菌株。固體載體的實(shí)例包括硅藻土、氫氧化鈣、碳酸鈣、滑石、白炭黑、高嶺土、膨潤(rùn)土、高嶺石、絹云母的混合物、粘土、碳酸鈉、碳酸氫鈉、硫酸鈉、沸石和淀粉。此外，液體載體的實(shí)例包括溶劑如水、甲苯、二甲苯、溶劑石腦油、二噁烷、丙酮、異佛爾酮、甲基異丁基酮、氯苯、 環(huán)己烷、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮和酒精；植物油和礦物油如橄欖油、爪哇木棉油、蓖麻油、棕櫚油、山茶油、椰子油、芝麻油、玉米油、米糠油、花生油、棉籽油、大豆油、菜籽油、亞麻籽油、桐油和液體石蠟；等。表面活性劑的實(shí)例包括陰離子表面活性劑，如脂肪酸鹽、安息香酸鹽、烷基磺化琥珀酸鹽、二烷基磺化琥珀酸鹽、聚羧酸鹽、烷基硫酸酯鹽、烷基硫酸鹽、烷芳基硫酸鹽、烷基二甘醇醚硫酸鹽、硫酸醇酯鹽(salt of alcohol sulfuric acid ester)、烷基磺酸鹽、烷芳基磺酸鹽、芳基磺酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基二苯基醚二磺酸鹽、聚苯乙烯磺酸鹽、烷基磷酸酯鹽、烷芳基磷酸鹽、苯乙烯基芳基磷酸鹽、聚氧乙烯烷基醚硫酸酯鹽、聚氧乙烯烷芳基醚硫酸鹽、聚氧乙烯烷芳基醚硫酸酯鹽、聚氧乙烯烷基醚磷酸鹽、聚氧乙烯烷芳基磷酸酯鹽、 和萘磺酸與福爾馬林的縮合物的鹽；非離子表面活性劑，如失水山梨醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、脂肪酸聚甘油酯、脂肪酸醇聚二醇醚、炔二醇、乙炔醇、氧化烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷芳基醚、聚氧乙烯苯乙烯基芳基醚、聚氧乙烯二醇烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油和聚氧乙烯脂肪酸酯；等。這些表面活性劑可改進(jìn)噴霧時(shí)真菌菌體的可分散性和鋪展性。其他配方佐劑的實(shí)例包括乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、混懸劑、展著劑、滲透劑、殺真菌劑等。乳化劑的實(shí)例包括木質(zhì)素磺酸鹽、藻酸鹽等。分散劑的實(shí)例包括聚乙烯醇、 阿拉伯樹膠、羧甲基纖維素等。穩(wěn)定劑的實(shí)例包括酸性磷酸異丙酯、聚氧乙烯樹脂酸(酯)、 松香酸鹽等。潤(rùn)濕劑的實(shí)例包括二萘基甲烷二磺酸鹽等。在使用本發(fā)明的菌株防治害蟲的方法中，如果需要，使用噴霧器如動(dòng)力噴霧器、肩掛式噴霧器、手動(dòng)噴霧器，通過(guò)將其噴霧至害蟲、害蟲棲息地、待防治害蟲的植物等而施用藥劑。此外，施用中，該藥劑可通過(guò)與不表現(xiàn)出對(duì)天敵絲狀真菌不良影響的其他殺蟲劑和殺螨劑以及肥料、殺菌劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等混合而施用。通過(guò)本發(fā)明的害蟲防治方法而防治的害蟲實(shí)例包括粉虱類，如溫室粉虱 (Trialeurodes vaporariorum) > S, (Bemisia tabaci)禾口 ttt iI^ Ml (Dialeurodes citri)；蟲牙蟲類，如桃蟲牙(Myzus persicae)、棉蟲牙(Aphis gossypii)、甘藍(lán)蟲牙(Brevicoryne brassicae)、爺無(wú)網(wǎng)蟲牙(Aulacorthum solani)、蘿卜蟲牙(Lipaphis erysimi)、大卓戈長(zhǎng)管蟲牙(Macrosiphum euphorbiae)禾口蔥蟲牙(Neotoxoptera formosana)；葉蟲茜類，如相結(jié)全爪螨(Panonychus citri)、蘋果全爪螨(Panonychus ulmi)、二斑葉螨(Tetranychus urticae)禾口神澤氏葉觸(Tetranychus kanzawai)；莉馬類，如花莉馬(Frankliniella intonsa)、西花薊馬(Frankliniella occidentalis)、棕櫚薊馬(Thrips palmi)禾口茶黃薊馬(Scirtothrips dorsalis)；銹螨類，如皮氏刺皮癭螨(Aculops pelekassi)和番茄刺皮癭螨(Aculops lycopersici)；潛葉蟲類，如三葉草斑潛蠅(Liriomyza trifolii)；螟蛾類；甘藍(lán)夜蛾類；天牛類，如馬庫(kù)白星天牛(Anoplophora malasiaca)和菊天牛(Phytoecia rujiventris)；等。要防治的害蟲的優(yōu)選實(shí)例包括粉虱類、薊馬類等。此外，待防治害蟲的植物的實(shí)例包括果樹、如橙樹、蘋果樹、梨樹、桃樹、葡萄樹、無(wú)花果樹和櫻桃果樹；茶樹；蔬菜類，如茄子、黃瓜、西紅柿、菠菜、卷心菜和歐芹；水果類，如草莓、瓜類和西瓜；花樹類，如玫瑰花樹、菊花樹、康乃馨樹、櫻桃樹和山茶花樹；觀葉植物，如秋海棠；等。使用本發(fā)明的菌株作為母株通過(guò)自然突變或誘導(dǎo)突變得到的突變菌株只要其具有與本發(fā)明的菌株相同的特征也包含于本發(fā)明的菌株之內(nèi)。制備這些突變菌株的方法的實(shí)例包括常規(guī)已知的方法，如其中對(duì)母株用誘變劑如紫外線照射和亞硝基胍(NTG)進(jìn)行人工突變處理然后選擇具有優(yōu)異殺蟲效果的菌株的方法。接下來(lái)，描述本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但是本發(fā)明不應(yīng)限制于這些實(shí)施方案。(1) 一種用于防治害蟲的方法，所述方法包括用本發(fā)明的菌株處理害蟲。
(2)根據(jù)⑴中所述的方法，其中所述害蟲是選自由粉虱類、蚜蟲類、葉螨類、薊馬類、銹螨類、潛葉蟲類、螟蛾類、甘藍(lán)夜蛾類和天牛類組成的組的至少一種。(3)根據(jù)⑴中所述的方法，其中所述害蟲是粉虱類。(4)根據(jù)(1)中所述的方法，其中所述害蟲是薊馬類。實(shí)施例試驗(yàn)例1 (對(duì)煙粉虱卵的噴霧試驗(yàn))試驗(yàn)方法(1)將4個(gè)種植有一株葉期黃瓜(品種=Hokushin)的直徑為7cm的盆置于昆蟲箱 (260X340X340mm)中并使B類煙粉虱成蟲產(chǎn)卵7小時(shí)。將其中以該方式產(chǎn)卵的各盆轉(zhuǎn)移至保持在25°C在黑暗條件下的昆蟲室中每天8小時(shí)并靜置以使粉虱生長(zhǎng)。產(chǎn)卵5天(煙粉虱卵期)后，記錄產(chǎn)于黃瓜葉上的卵數(shù)。(2)使用噴霧槍，將已稀釋和調(diào)整至給定濃度的噴霧液體(分生孢子混懸劑，制備后2小時(shí)內(nèi))以每4個(gè)盆中的噴霧水量變?yōu)?0ml的方式一次噴霧至各盆的莖葉部分。噴霧后立即將它們轉(zhuǎn)移至蓋著的塑料容器(保持于100%濕度，底部填充水)中并使其在25°C 在黑暗條件下靜置15小時(shí)。此后，使黃瓜葉在與(1)相同條件下的昆蟲室中靜置。(3)使用立體顯微鏡判斷煙粉虱的生或死以計(jì)算藥液噴霧處理后7天(煙粉虱1 和2齡幼蟲期)、13天(煙粉虱2和3齡幼蟲期)、19天(煙粉虱4齡幼蟲期)和沈天(煙粉虱羽化痕(post-emergence)期)的死亡率。關(guān)于這一點(diǎn)，為了比較，還使用通過(guò)將前述商品名MYC0TAL(由K0PPERT制備)稀釋以得到作為實(shí)際濃度的分生孢子濃度3. OX 106/ml 而制備的噴霧液體來(lái)實(shí)施試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。試驗(yàn)結(jié)果[表 1]
權(quán)利要求
1.一種蠅蚧霉V-5菌株(保藏編號(hào)=FERM BP-11135)。
2.一種用于防治害蟲的方法，其包括用權(quán)利要求1所述的菌株處理害蟲。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述害蟲是選自由粉虱類、蚜蟲類、葉螨類、薊馬類、銹螨類、潛葉蟲類、螟蛾類、甘藍(lán)夜蛾類和天牛類組成的組中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述害蟲是粉虱類。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述害蟲是薊馬類。
6.一種微生物農(nóng)藥，其包含權(quán)利要求1所述的菌株。
全文摘要
需要一種對(duì)環(huán)境安全、速效并且在對(duì)害蟲的卵和幼蟲噴霧處理的情況下殺蟲效果優(yōu)異的微生物農(nóng)藥。本發(fā)明提供一種使用蠅蚧霉V-5菌株(保藏編號(hào)FERM BP-11135)防治至少一種選自由粉虱類、蚜蟲類、葉螨類、薊馬類、銹螨類、潛葉蟲類、螟蛾類、甘藍(lán)夜蛾類和天牛類組成的組的害蟲的方法；和包含所述菌株的微生物農(nóng)藥。
文檔編號(hào)C12N1/14GK102171327SQ20098013139
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2009年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月11日
發(fā)明者加島崇之, 小川宗和, 荒木智史 申請(qǐng)人:石原產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社