專利名稱：一種聯(lián)產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種聯(lián)產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶的方法。
背景技術(shù)：
纖維素、半纖維素和木質(zhì)素相互交織而構(gòu)成了植物細胞壁的主要成分，其是天然
纖維素原料的主要成分，其一般組成比例為4 : 3 : 3。木聚糖是植物半纖維素的重要組成
部分，其主要成分是D-木糖，木聚糖酶(Xylanase， EC3. 2. 1.8)是一類重要的水解酶，主要 以內(nèi)切方式作用于木聚糖酶主鏈上的P-l，4-木糖苷鍵。水解產(chǎn)物主要為不同聚合度的低 聚糖和木糖，同化木糖的酵母菌可以把木糖轉(zhuǎn)化成酒精。目前國內(nèi)燃料酒精的生產(chǎn)主要原 料來自于糧食，而目前糧食短缺問題已經(jīng)是國際性問題，糧食短缺問題的解決迫在眉睫。高 活性、低成本的木聚糖酶生產(chǎn)技術(shù)目前還未得到解決。 纖維素酶是一個多酶體系，由多個組分組成。按底物特異性可將纖維素酶分成 以下組分外切P-l，4-葡聚糖酶(exo-l3-l，4-glucanase)、內(nèi)切-P-l，4-葡聚糖酶 (vendo-P -l，4-glucanase， EG) (EC3. 2. 1. 4) 、 P _1，4_葡糖糖苷酶(P _1，4-glucanase， BG) (EC3.2. 1.21)。目前國內(nèi)外生產(chǎn)纖維素酶有固體和液體兩種方法，固體發(fā)酵設(shè)備投資 少，但占地面積大、生產(chǎn)穩(wěn)定性差、易染雜菌、技術(shù)難掌握。而液體發(fā)酵具有生產(chǎn)穩(wěn)定性高、 技術(shù)易掌握、便于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，但是目前主要利用價格昂貴的微晶纖維素作為誘導(dǎo) 物進行纖維素酶生產(chǎn)，成本較高。含天然纖維素類物質(zhì)如玉米芯、麥秸直接作為原料效果不 理想，這些物質(zhì)用于生產(chǎn)木聚糖酶后，其半纖維素物質(zhì)木聚糖被大量分解，其致密結(jié)構(gòu)遭到 破壞，纖維素部分被暴露出來，再經(jīng)烘干粉碎后容易被產(chǎn)纖維素酶菌利用，可代替價格昂貴 的微晶纖維素作為誘導(dǎo)物進行纖維素酶液體生產(chǎn)，大大降低生產(chǎn)成本，有利于大規(guī)模工業(yè) 化生產(chǎn)。其研究有助于我國非糧食能源領(lǐng)域迅速發(fā)展，解決目前世界糧食短缺、能源危機等 重大國際問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種聯(lián)產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶的方法；特別是提供一種利用 微生物生產(chǎn)出高酶活的木聚糖酶，再利用木聚糖酶發(fā)酵渣子聯(lián)產(chǎn)纖維素酶，降低生產(chǎn)成本 且適合工業(yè)大生產(chǎn)的方法。
其具體技術(shù)方案為 —種聯(lián)產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶的方法，利用農(nóng)作物秸稈或木材加工廢棄物作為培 養(yǎng)基中的碳源，經(jīng)滅菌、接種、固體發(fā)酵、提取、干燥的過程，制取木聚糖粗酶；然后利用木聚 糖酶渣子作為碳源，經(jīng)滅菌、接種、液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶；所述木聚糖酶渣子為上述制得 的木聚糖酶粗酶經(jīng)提取木聚糖酶后剩下的廢棄物。 本發(fā)明以廢棄物木聚糖酶渣子替代微晶纖維素作為誘導(dǎo)物，進行液體發(fā)酵生產(chǎn)纖 維素酶。木聚糖酶渣子是木聚糖酶粗酶經(jīng)提取木聚糖酶后剩下的廢棄物，由于天然纖維素 類物質(zhì)如玉米芯、麥秸作為原料用于生產(chǎn)木聚糖酶后，其半纖維素物質(zhì)木聚糖被大量分解，其致密結(jié)構(gòu)遭到破壞，纖維素部分被暴露出來，再經(jīng)烘干粉碎后容易被產(chǎn)纖維素酶菌利用， 可代替價格昂貴的微晶纖維素作為誘導(dǎo)物進行纖維素酶液體生產(chǎn)，大大降低生產(chǎn)成本，便 于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。 本發(fā)明的方法，其中所述農(nóng)作物秸稈為麥草、稻草、玉米秸稈、小麥秸稈或玉米芯。
本發(fā)明的方法，固體發(fā)酵制取木聚糖粗酶時，培養(yǎng)基中除碳源外，還包括無機鹽溶 液，并控制50 70重量％的含水量。 本發(fā)明的方法，發(fā)酵制取木聚糖粗酶時，采用機械攪拌接種、固體盤式發(fā)酵的方 式。機械攪拌接種替代手工接種大大節(jié)省人力，既低成本又提高混合均勻度。固體盤式發(fā) 酵替代固體發(fā)酵罐發(fā)酵，消毒滅菌徹底，局部染菌易處理，減小染菌帶來的損失。
本發(fā)明的方法，固體發(fā)酵制取木聚糖粗酶時，木聚糖酶發(fā)酵用的種子是用PDA培 養(yǎng)基試管斜面上的孢子接1000mL麩曲瓶擴培一次，用400mL無菌水洗下作為固體發(fā)酵的種 子。麩曲瓶固體培養(yǎng)基與固體發(fā)酵培養(yǎng)基相同。纖維素酶發(fā)酵用的種子是用PDA培養(yǎng)基試 管斜面上的孢子接500mL搖瓶培養(yǎng)的液體種子。 固體發(fā)酵培養(yǎng)基為農(nóng)作物秸稈或木材加工廢棄物20 30重量％ ;麩皮9 10 重量％ ;硫酸銨1. 8 2. 5重量％ ;尿素0. 9 1. 2重量％ ;硫酸鎂0. 3 0. 4重量％ ;磷酸
二氫鉀0. 35 0. 5重量％;其余為水；pH5. 5。優(yōu)選為農(nóng)作物秸稈或木材加工廢棄物21%;
麩皮9% ;硫酸銨1. 8% ;尿素0. 9% ;硫酸鎂0. 3% ;磷酸二氫鉀0. 35% ;水67% ;pH5. 5。
本發(fā)明的方法，在利用農(nóng)作物秸稈作為碳源時，秸稈要經(jīng)過粉碎、過2 5mm孔徑 的篩子。 本發(fā)明的方法，其中木聚糖酶固體發(fā)酵周期為4 6天。 本發(fā)明的方法，木聚糖酶固體發(fā)酵擴大生產(chǎn)時將天然纖維素類物質(zhì)如玉米芯、稻 草、麥秸稈、玉米秸稈等用粉碎機粉碎，過2 5mm孔徑篩子作為碳源，再加入麩皮或玉米 粉、硫酸銨、尿素、硫酸鎂等輔料，加水用混合機攪拌均勻，裝入lmXlmXO. lm的大方盤裝 中，每盤5 10kg，分層裝入滅菌柜中，12rC高壓滅菌40min。滅菌后物料冷卻至35°C，用 麩曲瓶種子接種，接種量為5 10X，分層放入培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上，3(TC下靜態(tài)培養(yǎng)4天。 期間在培養(yǎng)至20小時用無菌水噴灑澆水一次，水濕透培養(yǎng)基為宜，在培養(yǎng)期間待培養(yǎng)基即 將發(fā)熱即停止加熱，使其自然生長。待兩天后，3(TC恒溫繼續(xù)培養(yǎng)1 2天即可。將培養(yǎng)好 的酶經(jīng)過洗脫、壓濾、過離子柱純化、噴霧干燥制成酶粉。 本發(fā)明的方法，在利用木聚糖酶渣子作為碳源發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶時，搖瓶種子培
養(yǎng)基為葡萄糖1. 5% ;硫酸鎂0. 1% ;磷酸二氫鉀0. 5% ;玉米漿0. 5% ;氯化鈣0. 1% ;酵母
粉1. 5% ;硫酸銨0. 6% ;pH4. 5。搖瓶種子培養(yǎng)周期為24h，培養(yǎng)溫度為28°C。 初始液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各物質(zhì)的重量百分比為木聚糖酶渣子1. 5-2. 0%;葡萄糖
0. 2-0.3% ;玉米槳1.0-1.5% ;酵母粉1.0-1.5% ;麩皮O. 5-0.8% ;氯化f丐O. 05-0. 1% ;
pH4.0 6.0;發(fā)酵后期液體補料培養(yǎng)基中各物質(zhì)的重量百分比為木聚糖酶渣子
4. 0-5.0% ;乳糖7-8% ;酵母粉2. 0-2.5% ;磷酸二氫鉀0. 5-0.6% ;硫酸鎂O. 1-0.2% ; Tween-800. 2-0. 3% ;硫酸銨0. 2-0. 3% ;氯化f丐0. 5-1. 0% ;pH4. 0 6. 0。 本發(fā)明的方法，在利用木聚糖酶渣子作為碳源發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶時，木聚糖酶渣 子要經(jīng)烘干、粉碎、過200目篩子。 本發(fā)明的方法，液體發(fā)酵時，液體發(fā)酵培養(yǎng)基裝量為50 55 %，發(fā)酵溫度為
428°C 30。C，通氣量為1 : 0. 5 l.O，罐壓O. 05MPa，發(fā)酵時間為96 144小時，DO控制 在30 60，開始補料時間為48 60小時。 本發(fā)明中，固體發(fā)酵生產(chǎn)木聚糖酶所用的菌種是產(chǎn)木聚糖酶的黑曲霉工業(yè)菌株或 基因工程黑曲霉菌株。液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶所用的菌種是產(chǎn)纖維素酶的里氏木霉工業(yè)菌 株或基因工程里氏木霉菌株。 本發(fā)明中，木聚糖酶的測定方法是用0. 2g木聚糖作為底物，加0. 9mL pH4. 8檸檬 酸緩沖液，再加0. lmL粗酶稀釋液，5(TC恒溫水浴搖床反應(yīng)30min，用3， 5- 二硝基水楊酸法 測定生成的還原糖，以木糖為標準糖，以每分鐘生成1 P mol還原糖所需的酶量定義成一個 木聚糖酶酶活力單位(IU)。檸檬酸緩沖液為21g無水檸檬酸、7.8g氫氧化鈉加蒸餾水定容 至2L，pH為4. 8。發(fā)酵好的固體酶用檸檬酸緩沖液以一定的稀釋倍數(shù)稀釋浸泡過夜即得粗 酶液。 還原糖測定方法采用DNS法，以木糖為標準。
固體培養(yǎng)基水分測定水分測定儀測定。 纖維素酶的測定方法用0. lg濾紙作為底物，加0. 9mL pH4. 8檸檬酸緩沖液，再加 0. lmL粗酶離心上清液，5(TC恒溫水浴搖床反應(yīng)30min，用3， 5- 二硝基水楊酸法測定生成的 還原糖，以葡萄糖為標準糖，以每分鐘生成1 P mol還原糖所需的酶量定義成一個纖維素酶 酶活力單位(IU)。液體發(fā)酵好的醪液離心取上清液即為粗酶液。檸檬酸緩沖液為21g無水 檸檬酸、7. 8g氫氧化鈉加蒸餾水定容至2L， pH為4. 8。
還原糖測定方法采用DNS法，以葡萄糖為標準。
上述技術(shù)方案具有如下優(yōu)點 (1)本發(fā)明的生產(chǎn)木聚糖酶的方法是以農(nóng)業(yè)廢棄物秸稈如麥草、玉米芯、稻草以及 木材加工廢料如木屑等作為主要原料生產(chǎn)木聚糖酶，其生產(chǎn)成本低廉，工藝簡單，易操作， 生產(chǎn)的木聚糖酶活力高，有利于秸稈酶技術(shù)的工業(yè)化推廣。 (2)本發(fā)明的聯(lián)產(chǎn)纖維素酶的方法是利用上述制作的木聚糖酶提取后剩下的廢渣 子替代高價格的微晶纖維素作為誘導(dǎo)物，進行液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶，大大降低生產(chǎn)成本， 便于該技術(shù)的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的推廣。 (3)上述固體發(fā)酵得到的木聚糖酶的酶活可達8000IU/g(折固體干基)；聯(lián)產(chǎn)發(fā)酵 得到的纖維素酶的酶活可達50-60IU/mL。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明的具體實施方式
作進一步詳細描述。以下實施例用于 說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
—、固體發(fā)酵生產(chǎn)木聚糖酶
實施例1 : 種子擴大培養(yǎng)基在麩曲瓶中制作，種子培養(yǎng)基為農(nóng)作物秸稈20%、麩皮20%、硫 酸銨2. 5%、尿素1.2%、硫酸鎂0. 4%、磷酸二氫鉀0. 5%，水55. 4%， pH5. 5。 121。C消毒 40min，黑曲霉(CGMCC3. 3147)斜面種子接種，混合均勻，3(TC下靜態(tài)培養(yǎng)5 10天。
實施例2 : 固體發(fā)酵培養(yǎng)基玉米芯30 % 、麩皮10 % 、硫酸銨2. 5 % 、尿素1. 2 % 、硫酸鎂
50.4%、磷酸二氫鉀0. 5%jjC55.4%、pH5. 5。固體發(fā)酵培養(yǎng)基用lmXlmXO. lm的大方盤裝 料10kg，蓋蓋子，12rC消毒40min，晾涼后接種，接種量為5 % ，用混合機混合接種，分裝每 盤5 6kg， 3(TC下培養(yǎng)，靜態(tài)4 6天。木聚糖酶活力達到7000IU/g(折固體干基)。
實施例3 : 固體發(fā)酵培養(yǎng)基稻草粉3 0 % 、麩皮10 % 、硫酸銨2. 5 % 、尿素1. 2 % 、硫酸鎂 0.4%、磷酸二氫鉀0. 5X、水55.4X、pH5. 5。固體發(fā)酵培養(yǎng)基用lmXlmXO. lm的大方盤裝 料10kg，蓋蓋子，12rC消毒40min，晾涼后接種，接種量為5% ，用混合機混合接種，分裝每 盤5 6kg， 3(TC下培養(yǎng)，靜態(tài)4 6天。木聚糖酶活力達到6000IU/g(折固體干基)。
實施例4 : 固體發(fā)酵培養(yǎng)基木屑30%、麩皮10%、硫酸銨2. 5%、尿素1. 2%、硫酸鎂0. 4%、 磷酸二氫鉀O. 5%、水55. 4%、pH5. 5。固體發(fā)酵培養(yǎng)基用lmXlmXO. lm的大方盤裝料10kg， 蓋蓋子，12rC消毒40min，晾涼后接種，接種量為5%，用混合機混合接種，分裝每盤5 6kg， 3(TC下培養(yǎng)，靜態(tài)4 6天。木聚糖酶活力達到7000IU/g(折固體干基)。
實施例5 : 固體發(fā)酵培養(yǎng)基玉米芯21 % 、麩皮9 % 、硫酸銨1. 8 % 、尿素0. 9 % 、硫酸鎂 0. 3%、磷酸二氫鉀0. 35%jjC66.65%、pH5. 5。固體發(fā)酵培養(yǎng)基用lmXlmXO. lm的大方盤 裝料10kg，蓋蓋子，12rC消毒40min，晾涼后接種，接種量為5 % ，用混合機混合接種，分裝 每盤5 6kg， 3(TC下培養(yǎng)，第一天給培養(yǎng)基澆水保濕，此后繼續(xù)靜態(tài)3 4天。木聚糖酶活 力達到8000IU/g(折固體干基)。 將培養(yǎng)好的酶經(jīng)過洗脫、壓濾、過離子柱純化、噴霧干燥制成酶粉。
實施例6 : 固體發(fā)酵培養(yǎng)基麥草粉21 % 、麩皮9 % 、硫酸銨1. 8 % 、尿素0. 9 % 、硫酸鎂 0. 3%、磷酸二氫鉀0. 35%jjC66.65%、pH5. 5。固體發(fā)酵培養(yǎng)基用lmXlmXO. lm的大方盤 裝料10kg，蓋蓋子，12rC消毒40min，晾涼后接種，接種量為5 % ，用混合機混合接種，分裝 每盤5 6kg， 3(TC下培養(yǎng)，第一天給培養(yǎng)基澆水保濕，此后繼續(xù)靜態(tài)3 4天。木聚糖酶活 力達到8000IU/g(折固體干基)。
二 、液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶
實施例7 : 搖瓶種子培養(yǎng)基的配制葡萄糖1.5%、硫酸鎂0. 1%、磷酸二氫鉀0.5%、玉米 漿O. 5%、氯化鈣0. 1%、酵母粉1. 5%、硫酸銨0. 6%，其余為水，pH4. 5，500mL三角瓶裝量 150mL/瓶，121。C消毒30min。 PDA試管斜面中取里氏木霉(CICC13052)孢子接一環(huán)接入三角瓶中，放入搖床 220r/min，30。C培養(yǎng)24h。
實施例8 : 纖維素酶液體培養(yǎng)基木聚糖酶渣子1.5%、葡萄糖0.2%、玉米漿1.0%、酵母粉 1.0%、麩皮0.5%、氯化鈣0.05%，其余為水，pH4. 5。 液體補料培養(yǎng)基中各物質(zhì)的重量百分比為木聚糖酶渣子4.0%、乳糖8%、磷酸 二氫鉀0.5%、酵母粉2 % 、硫酸鎂0.1%、 Tween-800. 2 % 、硫酸銨0.2%、氯化f丐0. 5 % ，其 余為水，pH4. 5。
6
液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基裝量為55X，發(fā)酵溫度為28t: 3(rC，通氣量為1 : 0. 5
1. 0，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min，罐壓0. 05MPa，發(fā)酵時間為144小時，DO控制在30 60，開始補料 時間為60小時，補料量為罐子體積的15%，補料時間為80小時。纖維素酶活力達30IU/g。
實施例9 : 纖維素酶液體培養(yǎng)基木聚糖酶渣子1.5%、葡萄糖0.2%、玉米漿1.0%、酵母粉 1.0%、麩皮0.5%、氯化鈣0.05%，其余為水，pH4. 5。 液體補料培養(yǎng)基木聚糖酶渣子4. 0%、乳糖8. 0%、磷酸二氫鉀0. 5%、酵母粉
2. 0%、硫酸鎂0. 1 %、 Tween-800. 2%、硫酸銨0. 2%、氯化鈣0. 5%，其余為水，pH4. 5。
液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基裝量為50X，發(fā)酵溫度為28t: 3(rC，通氣量為1 : 0. 5 1. 0，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min，罐壓0. 05MPa，發(fā)酵時間為144小時，DO控制在30 60，開始補料 時間為48小時，補料量為罐子體積的20%，補料時間為90小時。纖維素酶活力達50IU/g。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
一種聯(lián)產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶的方法，其特征在于，利用農(nóng)作物秸稈或木材加工廢棄物作為培養(yǎng)基中的碳源，經(jīng)滅菌、接種、固體發(fā)酵、提取、干燥的過程，制取木聚糖粗酶；然后利用木聚糖酶渣子作為碳源，經(jīng)滅菌、接種、液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶；所述木聚糖酶渣子為上述制得的木聚糖酶粗酶經(jīng)提取木聚糖酶后剩下的廢棄物。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述農(nóng)作物秸稈為麥草、稻草、玉米秸稈、小麥秸稈或玉米芯。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，固體發(fā)酵制取木聚糖粗酶時，培養(yǎng)基中除碳源外，還包括無機鹽溶液，并控制50 70重量％的含水量。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，固體發(fā)酵制取木聚糖粗酶時，采用機械攪拌接種、固體盤式發(fā)酵的方式。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，固體發(fā)酵制取木聚糖粗酶時，發(fā)酵培養(yǎng)基為農(nóng)作物秸稈或木材加工廢棄物20 30重量％ ;麩皮9 10重量％ ;硫酸銨1. 8 2. 5重量％ ;尿素0. 9 1. 2重量％ ;硫酸鎂0. 3 0. 4重量％ ;磷酸二氫鉀0. 35 0. 5重量％ ;其余為水；pH5. 5。
6. 如權(quán)利要求l-5任一項所述的方法，其特征在于，在利用農(nóng)作物秸稈作為碳源時，秸稈要經(jīng)過粉碎、過2 5mm孔徑的篩子。
7. 如權(quán)利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，木聚糖酶固體發(fā)酵周期為4 6天。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在利用木聚糖酶渣子作為碳源發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶時，初始液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各物質(zhì)的重量百分比為木聚糖酶渣子1. 5 2. 0% ;葡萄糖0. 2 0. 3% ;玉米槳1. 0 1. 5% ;酵母粉1. 0 1. 5% ;麩皮0. 5 0. 8 % ;氯化牽丐0. 05 0. 1%;PH4. 0 6. 0 ;發(fā)酵后期液體補料培養(yǎng)基中各物質(zhì)的重量百分比為木聚糖酶渣子4. 0 5. 0% ;乳糖7 8% ;酵母粉2. 0 2. 5% ;磷酸二氫鉀0. 5 0. 6% ;硫酸鎂0. 1 0. 2%;Tween-80 0. 2 0. 3%;硫酸銨0. 2 0. 3%;氯化牽丐0. 5 1. 0%;pH4. 0 6. 0。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，在利用木聚糖酶渣子作為碳源發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶時，木聚糖酶渣子要經(jīng)烘干、粉碎、過200目篩子。
10. 如權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，液體發(fā)酵時，液體發(fā)酵培養(yǎng)基裝量為50 55%，發(fā)酵溫度為28°C 3(TC，通氣量為1 : 0. 5 1. 0，罐壓0. 05MPa，發(fā)酵時間為96 144小時，DO控制在30 60，開始補料時間為48 60小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種聯(lián)產(chǎn)木聚糖酶和纖維素酶的方法，利用農(nóng)作物秸稈或木材加工廢棄物作為培養(yǎng)基中的碳源，經(jīng)滅菌、接種、固體發(fā)酵、提取、干燥的過程，制取木聚糖粗酶；然后利用木聚糖酶渣子作為碳源，經(jīng)滅菌、接種、液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶；所述木聚糖酶渣子為上述制得的木聚糖酶粗酶經(jīng)提取木聚糖酶后剩下的廢棄物。本發(fā)明能夠在生產(chǎn)木聚糖酶的同時，利用木聚糖酶提取后剩下的廢渣子替代高價格的微晶纖維素作為誘導(dǎo)物，進行液體發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶，大大降低生產(chǎn)成本，便于該技術(shù)的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的推廣。
文檔編號C12R1/685GK101705217SQ20091021015
公開日2010年5月12日 申請日期2009年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月29日
發(fā)明者尚海濤, 李榮杰, 穆曉玲, 薛培儉 申請人:安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司