專利名稱：用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑及其制備方法和試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用化學試劑，更具體地說，涉及使用14C-UBT(Urea BreathTest，尿素呼氣試驗)來診斷幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染的試劑，其制備方法以及使用該試劑的試劑盒。

背景技術：
幽門螺桿菌是1983年澳大利亞學者羅賓·沃倫(J.Robin Warren)和巴里·馬歇爾(Barry J.Marshall)從一個慢性活動性胃炎患者胃粘膜活檢標本中首先分離到的，他們也因此獲得2005年度“諾貝爾生理學或醫(yī)學獎”。
人是幽門螺桿菌的唯一自然宿主，人群感染率很高，全世界人群感染率高達30～50％。幽門螺桿菌可以導致很多疾病的發(fā)生，因此對它的臨床診斷和治療是非常重要的。
尿素[14C]呼氣試驗是目前國際國內(nèi)普遍采用的幽門螺桿菌診斷方法，由于其無痛苦、無創(chuàng)傷、準確、快速、安全的特點，該方法已是國際上公認的Hp診斷金標準之一。
尿素[14C]呼氣試驗中關鍵步驟是14CO2的吸收和閃爍測量。2007年1月23日，提出的專利申請CN 200710073016公開了一種“診斷幽門螺桿菌的試劑盒”，其至少包括吸收劑、閃爍體、極性溶劑等不同組分。在實際臨床使用時，患者先向吸收劑中吹氣，吹完后交給醫(yī)生。醫(yī)生要將閃爍液和極性溶劑按要求進行配制，再將配制后的溶液加入吸收劑中才能進行測量。
采用這種試劑盒存在的主要問題是使用不便、需要醫(yī)生進行較多的溶液配制和轉移工作，操作步驟多，容易導致意外或較大誤差。
此外，采用這種試劑盒還進一步存在以下問題 1、極性溶劑，如水、甲醇、乙醇等，它們在閃爍測量中有淬滅作用，導致測量效率降低，方法的靈敏度相應降低甚至導致假陰性的出現(xiàn)； 2、使用的如甲醇、乙醇、小分子的烷基苯類物質等具有刺激性氣味、毒性強、易揮發(fā)且易燃易爆； 3、病人使用不安全在實際使用中，會出現(xiàn)病人不了解使用方法而導致的吸收劑誤服事件，而吸收劑中存在的物質可能導致急性或慢性中毒反應； 4、原材料使用量大、生產(chǎn)環(huán)節(jié)較多，不利于降低生產(chǎn)成本。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題在于，針對現(xiàn)有技術的使用不便、需要醫(yī)生進行較多的溶液配制和轉移工作，操作步驟多，容易導致意外或較大誤差的缺陷提供一種操作步驟少，便于醫(yī)生使用的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是構造一種用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，包括下列組分 CO2吸收劑 0.3～0.5毫升； 有機溶劑 2～3毫升； 乳化劑0.7～2毫升； 閃爍體0.01～0.038克。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述CO2吸收劑包括乙醇胺。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述有機溶劑包括直鏈烷基苯。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述乳化劑包括聚山梨酯、壬基聚氧乙烯醚、辛基聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一種。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述乳化劑包括 聚山梨酯0.7～1.1毫升； 脂肪醇聚氧乙烯醚0.1～0.2毫升。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述閃爍體包括 2，5-二苯基噁唑 0.01～0.02克， 1，4-雙(5-苯基-2-噁唑基)0.0001～0.0003克。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述閃爍體包括 2，5-二苯基噁唑0.01～0.036克， 1，4-雙(2-甲基苯乙烯基)苯 0.0005～0.0018克。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述試劑進一步包括酚酞指示劑。
本發(fā)明解決其技術問題采用的另一技術方案是構造一種制備上述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑的方法，包括S1按照上述配方獲取各種原料； S2將閃爍體、有機溶劑和乳化劑混合； S3加入吸收劑。
在本發(fā)明所述方法中，所述步驟S3之前，進一步包括將酚酞指示劑和吸收劑混合并攪拌均勻。
在本發(fā)明所述方法的一個優(yōu)選實施例中，所述步驟S2進一步包括S21、將閃爍體加熱溶解到有機溶劑中，冷卻到室溫后與乳化劑混合并攪拌均勻。
在本發(fā)明所述方法的另一個優(yōu)選實施例中，所述步驟S2進一步包括S22、閃爍體、有機溶劑和乳化劑混合并在常溫下攪拌直至所述閃爍體全部溶解。
本發(fā)明解決其技術問題采用的再一技術方案是構造一種試劑盒，包括尿素[14C]膠囊和吹氣用的導管；其中所述試劑盒進一步包括上述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。
實施本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑、其制備方法和試劑盒，通過將CO2的吸收和閃爍測量所需要的所有物質合并在一起，減少操作步驟，大大方便醫(yī)生的使用。
更進一步地，本發(fā)明未使用有刺激性氣味、毒性強、易揮發(fā)、易燃易爆的化學物質，對醫(yī)生和患者的人身安全和健康、對環(huán)境安全和保護都非常有意義；此外由于不使用強極性溶劑，使測量效率大大提高，同樣實驗條件下，DPM(disintegrations per minute，每分鐘衰變)值可以比現(xiàn)有的檢測試劑盒高30％以上；且對臨床中出現(xiàn)的臨界值附近的弱陽性的判斷有積極作用，可提高測量方法的靈敏度，減少假陰性的出現(xiàn)；再者生產(chǎn)環(huán)節(jié)由多種溶液配制及分裝減少為一種，試劑使用量降低30％左右，有利于生產(chǎn)成本降低，減少對環(huán)境造成的不利影響。

具體實施例方式 為了更好地理解本發(fā)明，下面用實例來詳細說明發(fā)明的技術內(nèi)容，但本發(fā)明的實施方案并不局限于這些實例。
實施例1 稱取0.72g 2，5-二苯基噁唑(以下簡稱PPO)、0.036g 1，4-雙(2-甲基苯乙烯基)苯(以下簡稱bis-MSB)，量取50ml直鏈烷基苯一起放入200ml燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上加熱攪拌下溶解，冷卻至室溫后，加入20ml聚山梨酯乳化劑和4ml脂肪醇聚氧乙烯醚乳化劑，然后攪拌均勻獲得閃爍溶劑。隨后，將0.035g酚酞指示劑加入10ml乙醇胺中，攪拌均勻后備用。
按每閃爍瓶0.4ml乙醇胺和3.5ml閃爍溶劑進行分裝即可得本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。使用時患者用吹氣用導管向閃爍瓶中吹氣，溶液由紅色變?yōu)槿榘咨珪r停止吹氣，輕輕搖勻后直接放入閃爍測量儀上進行測量，根據(jù)測量結果對患者是否感染幽門螺桿菌進行診斷。
本領域技術人員知悉，聚山梨酯又稱吐溫，是為山梨醇脂肪酸酯和環(huán)氧乙烷的縮合物，在一般精細化工店或化學試劑公司分吐溫20，吐溫40，吐溫60，吐溫80。在本發(fā)明中優(yōu)選吐溫60或吐溫80。
在本實施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.4ml，直鏈烷基苯2.36ml，PPO 0.0340g，bis-MSB 0.00170g，聚山梨酯乳化劑0.94ml，脂肪醇聚氧乙烯醚乳化劑0.19ml。
實施例2 稱取0.24gPPO、0.012g bis-MSB，量取40ml直鏈烷基苯一起放入200ml燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上加熱攪拌下溶解，冷卻至室溫后，加入14ml辛基聚氧乙烯醚(又稱曲拉通X-100)然后攪拌均勻獲得閃爍溶劑。
隨后，按每閃爍瓶0.45ml乙醇胺和2.7ml閃爍溶劑進行分裝。使用時患者用吹氣管向閃爍瓶中吹氣3分鐘以上，停止吹氣后輕輕搖勻直接放入閃爍測量儀上進行測量，根據(jù)測量結果對患者是否感染幽門螺桿菌進行診斷。
在本實施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.45ml，直鏈烷基苯2ml，PPO 0.012g，bis-MSB 0.0006g，曲拉通X-1000.7ml。
實施例3 稱取0.25gPPO、0.032g 1，4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯(簡稱POPOP)，量取40ml直鏈烷基苯一起放入200ml燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上加熱攪拌下溶解，冷卻至室溫后，加入20ml壬基聚氧乙烯醚乳化劑，然后攪拌均勻獲得閃爍溶劑。
隨后，按每閃爍瓶0.45ml乙醇胺和3.0ml閃爍溶劑進行分裝。使用時患者用吹氣管向閃爍瓶中吹氣3分鐘以上，停止吹氣后輕輕搖勻直接放入閃爍測量儀上進行測量，根據(jù)測量結果對患者是否感染幽門螺桿菌進行診斷。
在本實施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.45ml，直鏈烷基苯2ml，PPO 0.0125g，POPOP 0.0016g，壬基聚氧乙烯醚乳化劑1ml。
實施例4 稱取0.48gPPO、0.024g bis-MSB，量取40ml直鏈烷基苯和20ml壬基聚氧乙烯醚一起放入200ml燒杯中，置于磁力攪拌器上攪拌直至固體全部溶解。
隨后，按每閃爍瓶0.3ml乙醇胺和3.0ml閃爍溶劑進行分裝。使用時患者用吹氣管向閃爍瓶中吹氣3分鐘以上，停止吹氣后輕輕搖勻直接放入閃爍測量儀上進行測量，根據(jù)測量結果對患者是否感染幽門螺桿菌進行診斷。
在本實施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.3ml，直鏈烷基苯2ml，PPO 0.024g，bis-MSB 0.0012g，壬基聚氧乙烯醚乳化劑1ml。
本領域技術人員知悉，獲得本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑后，可采用多種方法將其與尿素[14C]膠囊和吹氣用的導管一起構造試劑盒，在此就不再對其進行累述了。下面通過對照實驗，說明本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑及其構成的試劑盒的性能。
對照實驗 用本發(fā)明中的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑代替目前的液體閃爍法幽門螺桿菌檢測試劑盒中的集氣劑和閃爍配制液，按如下方法進行對比實驗，考察本方法和現(xiàn)有試劑盒的符合率，為了便于說明，將現(xiàn)有技術中的試劑盒稱為試劑盒A，將本發(fā)明的試劑盒稱為試劑盒B，所述試劑盒B是基于實施例1-3中的試劑制成的。
1、實驗步驟 1)、受試者應在早上空腹時或進食兩小時以后受試。
2)、領取試劑盒A適量。
3)、受試者用約20ml涼飲用水送服試劑盒A中尿素[14C]膠囊一粒后，靜坐25分鐘。
4)、取試劑盒A中CO2集氣劑一瓶打開，用吹氣管向液體中吹氣，當集氣劑由紫紅色變成無色時停止吹氣，若超過3分鐘變色不全亦停止吹氣。
5)、取試劑盒B，將其中的閃爍瓶一瓶并打開，通過吹氣管向液體中吹氣，3分鐘時停止吹氣，或者當溶液從紫紅色變成乳白色時停止吹氣(在含酚酞指示劑的實施例中)。
6)、在試劑盒A中CO2集氣劑瓶中加入4.5ml稀釋閃爍液。
7)、在同一臺液閃儀上測試劑盒A和試劑盒B的DPM。
2、結果計算和陽性判斷 將測得的試劑盒A的DPM減去本底DPM，試劑盒B的DPM減去本底DPM。減本底后的值大于等于200時，可判斷受試者為幽門螺桿菌陽性，否則為陰性。
3、對照試驗結果 用上述方法分三次對312例正常體檢人進行了對照實驗，結果發(fā)現(xiàn)，用試劑盒A檢測和試劑盒B檢測，得到的結果基本一致，根據(jù)本發(fā)明制得的試劑盒B陽性率稍高一點。具體統(tǒng)計結果見下表。

說明根據(jù)實例一二三制得的試劑盒B檢出結果是完全一致的，商用試劑盒A檢出的陽性樣本在實例一二三中可以全部檢出。
在本發(fā)明的其他實施例中，除了采用酚酞指示劑之外，還可選擇其他的pH指示劑，本發(fā)明不受所選pH指示劑的種類的限制。除本發(fā)明中公開的組分外，本發(fā)明的試劑還可包括其他助劑。比如，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，還進一步包括增敏劑和/或甜味劑。所述增敏劑可包括檸檬酸和/或蘋果酸。所述甜味劑可包括安賽蜜和/或阿斯巴甜。
在本發(fā)明的其他優(yōu)選實施例中，也可選用其他有機溶劑，乳化劑，或者將多種乳化劑和有機溶劑混合使用，只要能夠保持上述測量效果即可。
雖然以上描述了本發(fā)明的各種實施例，應當理解，其目的僅在于舉例說明，而沒有限制性。本領域的技術人員知悉，在不離開本發(fā)明的精神和范圍情況下，在形式上和細節(jié)上還可做各種的改變。因此，本發(fā)明的保護范圍不當僅局限于以上描述的任一實施例，而應該依照權利要求及其等同來限定。
權利要求
1.一種用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，包括下列組分
CO2吸收劑 0.3～0.5毫升；
有機溶劑 2～3毫升；
乳化劑0.7～2毫升；
閃爍體0.01～0.038克。
2.根據(jù)權利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述CO2吸收劑包括乙醇胺；所述有機溶劑包括直鏈烷基苯。
3.根據(jù)權利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述乳化劑包括聚山梨酯、壬基聚氧乙烯醚、辛基聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一種。
4.根據(jù)權利要求3所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述乳化劑包括
聚山梨酯0.7～1.1毫升；
脂肪醇聚氧乙烯醚0.1～0.2毫升。
5.根據(jù)權利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述閃爍體包括
2，5-二苯基噁唑0.01～0.02克，
1，4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯 0.0001～0.0003克。
6.根據(jù)權利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述閃爍體包括
2，5-二苯基噁唑0.01～0.036克，
1，4-雙(2-甲基苯乙烯基)苯 0.0005～0.0018克。
7.根據(jù)權利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述試劑進一步包括酚酞指示劑。
8.制備權利要求1-6中任一權利要求所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑的方法，其特征在于，包括
S1按照上述配方獲取各種原料；
S2將閃爍體、有機溶劑和乳化劑混合；
S3加入吸收劑。
9.根據(jù)權利要求8所述方法，其特征在于，所述步驟S3之前，進一步包括將酚酞指示劑和吸收劑混合并攪拌均勻；且
所述步驟S2進一步包括
S21、將閃爍體加熱溶解到有機溶劑中，冷卻到室溫后與乳化劑混合并攪拌均勻，或
S22、將閃爍體、有機溶劑和乳化劑混合并在常溫下攪拌直至所述閃爍體全部溶解。
10.一種試劑盒，包括尿素[14C]膠囊和吹氣用的導管，其特征在于，還包括如權利要求1-7中任一權利要求所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑及其制備方法和試劑盒，其中所述試劑包括，CO2吸收劑0.3～0.5毫升；有機溶劑2～3毫升；乳化劑0.7～2毫升；閃爍體0.01～0.038克。實施本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑、其制備方法和試劑盒，通過將CO2的吸收和閃爍測量所需要的所有物質合并在一起，減少操作步驟，大大方便醫(yī)生的使用。更進一步地，同樣實驗條件下，DPM值可以比現(xiàn)有的檢測試劑盒高30％以上；且對臨床中出現(xiàn)的臨界值附近的弱陽性的判斷有積極作用，可提高測量方法的靈敏度，減少假陰性的出現(xiàn)；再者試劑使用量降低30％左右，有利于生產(chǎn)成本降低，減少對環(huán)境造成的不利影響；且使用更加安全。
文檔編號C12Q1/04GK101724681SQ200910110128
公開日2010年6月9日 申請日期2009年11月6日 優(yōu)先權日2009年11月6日
發(fā)明者沈桂富, 郭春生, 黃晉杰 申請人:深圳市中核海得威生物科技有限公司