專利名稱：：一種微生物發(fā)酵制備有效霉烯胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種微生物產(chǎn)酸克雷伯氏菌(X/eZwW/aox少toc")CCTCCNo:M205091發(fā)酵制備有效霉烯胺的方法。(二)背景才支術(shù)本發(fā)明涉及的有效霉烯胺，英文名為valienamine,其結(jié)構(gòu)式如下(Chem.Rev.2003,103:1955-1977)。HOH2COHvalienamine有效霉烯胺，又稱井岡霉烯胺，其化學(xué)名(lS,2S,3S,4R)-l-氨基-5-(羥甲基)環(huán)己-5-烯-2,3，4-三元醇；分子式為C7H13N04,重要的基團(tuán)有一個(gè)伯氨基(-NH2)，一個(gè)碳碳雙鍵(CK:),一個(gè)羥甲基(-CH2OH),三個(gè)羥基(-OH)。其鹽酸鹽(C7HuN04'HCl)的[ag為+68.6。(lN-HCl)，五乙酸鹽(CnH23N09)的熔點(diǎn)為95°C,|a￡3為+30.2。(CHCl3),遇茚三酮顯色反應(yīng)。有效霉烯胺是一種較強(qiáng)的糖苦酶抑制劑，同時(shí)也是很多其他糖苦酶抑制劑的核心結(jié)構(gòu)，可以用于合成有效霉醇胺(valiolamine)和伏格列波灃唐(voglibose)，具有良好的應(yīng)用前景。生產(chǎn)有效霉烯胺的方法主要有以下幾種(1)以有效霉素(validamycins)[井岡霉素(Jinggangmycins)]，有效霉亞基胺[井岡霉亞基胺(validoxylamine)]及其衍生物為原料制備有效霉烯胺。有效霉素是一種高效、安全的農(nóng)用抗生素，是由有效霉烯胺、有效霉胺和P-D-葡萄糖等結(jié)構(gòu)組成。4①微生物裂解有效霉素制備有效霉烯胺微生物有F/"voZ^cfen'wm■s"acc/z"rcp/./ww、尸sew(iomowas(iem.fri/FcaMS等,見表l。以、有戔文審素4,為底物，通過發(fā)酵、細(xì)胞催化等技術(shù)，分解有效霉素得到有效霉烯胺，是目前工業(yè)化生產(chǎn)有效霉烯胺的方法之一。表l:降解有效霉素專利菌種匯總菌種專利平2-26957(1982)、平2-2598F/"vo^Ce〃'謂sacc/z"ra/7M應(yīng)IFO13984平2-26957、平2-2598平2-26957平2-26957Q;鄉(xiāng)/ag"Aep"rtnaIFO12017平2-26957C^啤/agafe/an>7"ATCC13125平2-26957/^ar/w"IFO14087平2-26957尸/avoZac&n'w/wsacc^arc^/n'/w/wn,sp.平2-2598^7avo/ac/en'w附s^cc/^rop/i/wmFERM-P平2-2598F/avo6ac^m'簡(jiǎn)sacc/zarop/n7鵬NO.5707平2-2598IFO12664(ATCC4718)平6-69380々ratom'簡(jiǎn)ia血toc妙I(lǐng)FO13258(ATCC13332)平6-69380爿graZ""enwmi^&^""erIFO13259(ATCC13333)平6-69380^gro6ac&rZwwJflAo6ac^rIFO13532(ATCC19358)平6-69380々ra6""en'讓ia金6a"erIFO13533(ATCC25235)平6-69380^4gro6ac/^n'wm/t/w^/^c/e/wIFO3058平6-69380Z^n9p/n7asubsp,awaen^wesIFO13282平6-69380Jera卿way/y^哪/zz7"subsp./^rapM"IFO13286平6-69380^4，歸was/^npMasubsp,pn9加/,'caIF013287平6-693805爿erawowoy;Mnc加asubsp.c謂'ceIFO13288平6-69380^m腳"oysa/附ow/"V/asubsp.w/附ow/c/c/aIFO12659平6-693805fe朋的p/iomoMosma/frop/u7/aCCTCCNo.M204024ZL200410017516.3尸Mwc/蘭owwywomsre"ceCCTCCNo.M205098ZL200510061363.7爿歸ge腦/?？?/CCTCCNo.M205095ZL200510061364.1②NBS(N-Bromosuccinimide)試劑裂解法制備，利用NBS試劑，可以斷裂有效霉亞基胺或其衍生物中的C-N鍵，得到有效霉烯胺，另外還會(huì)生成一些環(huán)己酮類物質(zhì)，裂解液成分較為復(fù)雜，可通過離子交換等方法分離得到有效霉烯胺，但目前沒有工業(yè)化生產(chǎn)的報(bào)道。(2)以阿卡波糖和/或其衍生物為原料制備有效霉烯胺阿卡波糖用于治療糖尿病的一種藥物，從阿卡波糖的結(jié)構(gòu)可以看出，阿卡波糖主要由麥芽糖和有效霉烯胺組成。韓國(guó)HURYUL，etal.申請(qǐng)的專利WO2004108657和WO2004000782報(bào)道了用三氟乙酸(TFA)或固體酸水解阿卡波糖或其衍生物制備有效霉烯胺。也可以用^L生物裂解阿卡波糖或其衍生物制備有效霉烯胺。(3)化學(xué)合成法制備，自從1972年分離得到有效霉烯胺以來，出現(xiàn)了許多化學(xué)合成有效霉烯胺的方法，但是通過化學(xué)合成的大部分是外消旋體，并且收率較低，是目前工業(yè)生產(chǎn)有效霉烯胺的方法之一。(4)從吸7jC鏈審菌(5^eptow少c"/^grojcop/ci^)發(fā)酵液中提耳又，吸水鏈霉菌在發(fā)酵合成有效霉素的過程中，會(huì)生成少量的前體物質(zhì)有效霉烯胺。因此，通過離子交換的方法可以從有效霉素的發(fā)酵液中提取分離得到有效霉烯胺。但是發(fā)酵液中有效霉烯胺的濃度很低，提取難度較大，無工業(yè)生產(chǎn)的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種利用新的菌種——克雷伯氏菌屬(A7efc/e//a)的產(chǎn)6酸克雷伯氏菌(K/^wW/flCCTCCNo:M205091發(fā)酵生產(chǎn)有步文霉烯胺的方法。與已有文獻(xiàn)報(bào)道的裂解井岡霉素生產(chǎn)有效霉烯胺菌種均不同。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是產(chǎn)酸克雷伯氏菌(尺/eZw/e〃aCCTCCNo:M205091樣i生物發(fā)酵制備有效霉烯胺的方法，所述方法包括將CCTCCNo:M205091接種至添加有有效霉素的適用于產(chǎn)酸克雷伯氏菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于2537"C下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)72192小時(shí)，發(fā)酵液經(jīng)分離純化得到所述有效霉烯胺；所述有效霉素在發(fā)酵培養(yǎng)基中的起始濃度為550g/L。所述的微生物菌抹屬于克雷伯氏菌屬(K/eZwW/a)的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(K/e6wW/ao矽toca)，己于2005年8月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCCNo.M205091，已在在先申請(qǐng)CN200510060638.5進(jìn)4亍了詳細(xì)描述。發(fā)酵培養(yǎng)基為常規(guī)適用于產(chǎn)酸克雷伯氏菌的發(fā)酵培養(yǎng)基添加有效霉素得到。所述培養(yǎng)基除了含有效霉素外，還可以含有一些可以被上述菌抹利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)?？梢陨倭刻砹?。的碳源有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、糊精、淀粉、甘油等；可以作為氮源的有肉汁、酵母膏、干酵母、大豆粉、玉米漿、蛋白胨、尿素、氨鹽(硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、醋酸胺等)等；無機(jī)鹽類有Na、K、Ca、Mg等金屬鹽類、磷酸鹽或醋酸鹽等。培養(yǎng)基中合理配入上述微生物能利用的碳源、氮源和無機(jī)鹽等。液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)均可，但是大量工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)，液體培養(yǎng)基較為合適?？刹捎门囵B(yǎng)方式有靜置培養(yǎng)、搖動(dòng)培養(yǎng)或通風(fēng)攪拌培養(yǎng)等，大量生產(chǎn)有效霉烯胺時(shí)宜采用深層通風(fēng)攪拌培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)基中主要成分為有效霉素，其它組分為可以被本發(fā)明的新的微生物利用的碳源、氮源、無機(jī)鹽等，本發(fā)明中所用發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下有效霉素550g/L，葡萄糖l20g/L,蛋白胨l10g/L，酵母粉110g/L,MgSO40.1lg/L,溶劑為水，pH6.08.0。所述分離純化可按本領(lǐng)域常規(guī)方法操作，本發(fā)明中所述方法如下發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)酵液去除菌體，得到清液用大孔弱酸性陽離子交換樹脂進(jìn)行離子交換，以氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，濃縮液用強(qiáng)磁^性層析樹脂進(jìn)行層析，以水為洗脫劑，收集只含有有效霉烯胺的部分，冷凍干燥，得到所述有效霉烯胺。本發(fā)明用產(chǎn)酸克雷伯氏菌(XfeZwW/aox_ytora)CCTCCNo.M205091分解培養(yǎng)基中的底物有效霉素生產(chǎn)有效霉烯胺，其方法有(1)利用該微生物發(fā)酵分解底物有效霉素制備有效霉烯胺菌種CCTCCNo.M205091經(jīng)過活化，接入上述滅菌的種子培養(yǎng)基培養(yǎng)制成種子液，將種子液接入到上述配制滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)發(fā)酵。種子培養(yǎng)的控制條件如下培養(yǎng)溫度25。C37。C,培養(yǎng)時(shí)間24h48h,pH值接近中性為好，在通風(fēng)攪拌或振蕩條件下進(jìn)行為佳；發(fā)酵培養(yǎng)的控制條件溫度25。C37。C，發(fā)酵時(shí)間為72h192h,pH值接近中性為好，在通風(fēng)攪拌或振蕩條件下進(jìn)行為佳。有效霉烯胺為易溶于水的堿性物質(zhì)，因而可以采用水溶性堿性物質(zhì)的分離、精制方法，例如離子交換樹脂、活性炭、多孔高聚物，葡聚糖凝膠、離子交換劑等進(jìn)行吸附后解吸、層析等。分離過程如下將含有有效霉烯胺的發(fā)酵液或細(xì)胞催化反應(yīng)液離心或過濾除去菌體,再將上清液或?yàn)V液用大孔弱酸陽離子交換樹脂進(jìn)行離子交換，用氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，濃縮液用強(qiáng)石威性層析杉于脂進(jìn)行層析，用水作為洗脫劑，收集只含有有效霉烯胺的部分，冷凍干燥，得到成品。產(chǎn)物有效霉烯胺采用HPLC檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)[Journalof8ChromatographyB,824(2005)41-347]。先配制書t生化反應(yīng)液在N,N-(N,N-二曱基曱酰胺)(DMF)的溶液中加入1.0%的對(duì)硝基氟苯和1.5%的三乙胺；流動(dòng)相的配制乙腈200ml,加入純凈水配成1000ml,然后超聲脫氣。取發(fā)酵液1.0ml，將水分蒸干,加入衍生化反應(yīng)液2.0ml,加入流動(dòng)相8.0ml稀釋，超聲5min,100。C沸水中反應(yīng)30min，即為待測(cè)樣品。然后進(jìn)行液相分析，色譜柱HypersilODS25u(250x4.6cm),流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為398nm,進(jìn)樣量20jiL。具體的，所述方法如下(1)CCTCCNo:M205091接種至種子培養(yǎng)基，2537°C、通風(fēng)攪拌或震蕩下培養(yǎng)2448小時(shí)，得到種子液；所述種子培養(yǎng)基組成如下葡萄糖1040g/L,蛋白胨520g/L,酵母膏110g/L，MgSO40.1~lg/L,溶劑為水，pH6.08.0;(2)將種子液以體積比5~10%接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，30~37°C、通風(fēng)攪拌或震蕩下培養(yǎng)100150小時(shí)，得到發(fā)酵液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下有效霉素550g/L,葡萄糖l20g/L，蛋白胨1~10g/L,酵母粉l10g/L,MgS040.11g/L,溶劑為水，pH6.08.0;(3)發(fā)酵液離心或過濾去除菌體，取上清液或?yàn)V液用大孔弱酸性陽離子交換樹脂進(jìn)行離子交換，以氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，濃縮液用強(qiáng)堿性層析樹脂進(jìn)行層析，以水為洗脫劑，收集只含有有效霉烯胺的部分，冷凍干燥，得到所述有效霉烯胺。優(yōu)選的，所述步驟(1)中種子培養(yǎng)基組成如下葡萄糖10-15g/L,蛋白胨1020g/L,酵母膏510g/L,MgSO40.31g/L，溶劑為水，pH7.58.0。優(yōu)選的，所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下有效霉素1520g/L，9葡萄糖510g/L,蛋白胨l5g/L,酵母粉25g/L,MgSO40.3lg/L，溶劑為水，pH7.5~8.0。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在利用本發(fā)明方法，得到發(fā)酵液中有效霉烯胺濃度較高，后續(xù)提取簡(jiǎn)單方便，便于工業(yè)化生產(chǎn)。(四)附圖"i兌明圖1為發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間對(duì)發(fā)酵結(jié)果的影響。(五)具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1:分別配制種子培養(yǎng)基A、B、C、D,其培養(yǎng)基組成如下A、葡萄糖40g/L，蛋白胨5g/L,酵母膏10g/L,MgS040.1g/L,自來水配制，pH7.0。B、葡萄糖10g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏l(xiāng)g/L,MgS04lg/L,自來水配制，pH8.0。C、葡萄糖15g/L，蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L，MgSO40.3g/L，自來水配制，pH7.5。D、葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L,酵母膏15g/L,MgS045g/L,自來水配制，pH6.0。配制發(fā)酵培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基組成如下有效霉素15g/L,葡萄糖5g/L,蛋白胨5g/L，酵母粉2g/L,MgSO40.3g/L,用自來水配制，pH7.5。分別將以上配制好的A、B、C、D種子培養(yǎng)基以100mL每份倒入250mL三角瓶，滅菌。冷卻室溫后分別接菌種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(尺/^wW/ao"toca)CCTCCNo.M205091到A、B、C、D種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。10培養(yǎng)溫度30°C,搖床轉(zhuǎn)速200rpm,培養(yǎng)時(shí)間36h,得到A、B、C、D種子液。將以上配制好的發(fā)酵培養(yǎng)基以lOOmL每份倒入250mL三角瓶，滅菌，冷卻室溫。分別接入以上制得的種子液10mL。在30。C和搖床轉(zhuǎn)速200rpm的條件下發(fā)酵120h,取樣用HPLC分析發(fā)酵液中有效霉烯胺的含量，得到的結(jié)果如表l。表l:不同種子培養(yǎng)基的發(fā)酵情況<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>收集上述發(fā)酵液，離心分離除去菌體，上清液上柱(Dl13樹脂，NH/),進(jìn)行離子交換，用蒸餾水洗滌后，再用0.5mol/L的氨水洗脫，減壓濃縮，再將濃縮液上柱層析(Dowex1x2,OIT)，用蒸餾水洗脫，用HPLC方法進(jìn)行分析，分段收集洗脫液，收集只含有有效霉烯胺的部分，然后進(jìn)行真空冷凍干燥。得到有效霉烯胺固體。實(shí)施例2:配制種子培養(yǎng)，其培養(yǎng)基組成如下葡萄糖15g/L,蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L，MgSO40.3g/L,自來水配制，pH7.0。分別配制發(fā)酵培養(yǎng)基a、b、c、d,其培養(yǎng)基組成如下A:有效霉素5g/L,葡萄糖20g/L,蛋白胨10g/L,酵母粉10g/L，MgS04O.lg/L,自來水配制，pH7.0。B:有效霉素20g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨1g/L,酵母粉5g/L,MgS041g/L,自來水配制，pH8.0。C:有效霉素50g/L,葡萄糖1g/L,蛋白胨10g/L,酵母粉1g/L,MgS040.1g/L,自來水配制，pH6.0。D:有效霉素15g/L,葡萄糖5g/L,蛋白胨5g/L,酵母粉2g/L,MgS040.3g/L%，用自來水配制，pH7.5。將以上配制好的種子培養(yǎng)基以lOOmL每份倒入250mL三角瓶，滅菌。冷卻室溫后分別接菌種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(K/eZwW/ao;^toca)CCTCCNo.M205091到種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度30°C,搖床轉(zhuǎn)速200卬m,培養(yǎng)時(shí)間36h,得到種子液。分別將以上配制好的a、b、c、d發(fā)酵培養(yǎng)基以100mL每份倒入250mL三角瓶，滅菌，冷卻室溫，得到a、b、c、d發(fā)酵培養(yǎng)基；分別接入以上制得的種子液8mL。在3CTC和搖床轉(zhuǎn)速200rpm的條件下發(fā)酵120h,取樣用HPLC分析發(fā)酵液中有效霉烯胺的含量，得到的結(jié)果如表2。表2:不同發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵情況發(fā)酵培養(yǎng)基8bcd發(fā)酵液中有效霉烯胺的含量(嗎/ml)9811452301230實(shí)施例3:溫度對(duì)發(fā)酵結(jié)果的影響配制種子培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基組成如下葡萄糖15g/L,蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L,MgSO40.3g/L,自來水配制，pH7.5。配制發(fā)酵培養(yǎng)基,其培養(yǎng)基組成如下有效霉素15g/L,葡萄糖5g/L,蛋白胨5g/L,酵母4分2g/L，MgSO40.3g/L，用自來水配制，pH7.5。分別將以上配制好的種子培養(yǎng)基以100mL每份倒入250mL三角瓶，滅菌。冷卻室溫后分別菌種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(《/efo/e/fe)CCTCCNo.M205091到種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度30°C,搖床轉(zhuǎn)速200rpm,培養(yǎng)時(shí)間36h,得到種子液。12將以上配制好的發(fā)酵培養(yǎng)基以lOOmL每份倒入250mL三角瓶，滅菌，冷卻室溫。接入以上制得的種子液10mL。在不同溫度條件下進(jìn)行發(fā)酵(25。C、30°C、37°C)、搖床轉(zhuǎn)速200rpm，發(fā)酵時(shí)間120h,取樣用HPLC分析發(fā)酵液中有效霉烯胺的含量，得到的結(jié)果如表l表3:不同溫度條件下的發(fā)酵情況溫度253037發(fā)酵液中有效霉烯胺的含量(昭/ml)3501230864實(shí)施例4:配制種子培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基組成如下葡萄糖15g/L,蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L,MgSO40.3g/L,自來水配制，pH7.5。配制發(fā)酵培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基組成如下有效霉素15g/L，葡萄糖5g/L,蛋白胨5g/L,酵母粉2g/L,MgSO40.3g/L，用自來水配制，pH7.5。分別將以上配制好的種子培養(yǎng)基以100mL每份倒入250mL,滅菌。冷卻室溫后分別接菌種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(《MwW/aox_ytoca)CCTCCNo.M205091到種子培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度30°C，搖床轉(zhuǎn)速200rpm,培養(yǎng)時(shí)間36h，得到種子液。將以上配制好的發(fā)酵培養(yǎng)基以lOOmL每份倒入250mL三角瓶，滅菌，冷卻室溫。接入以上制得的種子液10mL進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵溫度30°C,搖床轉(zhuǎn)速200rpm。在不同的發(fā)酵時(shí)間取樣，用HPLC分析發(fā)酵液中有效霉烯胺的含量，得到的結(jié)果見圖1。由圖1可知，發(fā)酵時(shí)間以100150h為宜，最佳為120~125h。1權(quán)利要求1.產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)CCTCCNoM205091微生物發(fā)酵制備有效霉烯胺的方法，所述方法包括將CCTCCNoM205091接種至添加有有效霉素的適用于產(chǎn)酸克雷伯氏菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25～37℃下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)72～192小時(shí)，發(fā)酵液經(jīng)分離純化得到所述有效霉烯胺；所述有效霉素在發(fā)酵培養(yǎng)基中的起始濃度為5～50g/L。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下有效霉素550g/L,葡萄糖l20g/L，蛋白胨l10g/L,酵母粉l10g/L,MgSO40.1~lg/L,溶劑為水，pH6.0~8.0。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下(1)CCTCCNo:M205091接種至種子培養(yǎng)基，25~37°C、通風(fēng)攪拌或震蕩下培養(yǎng)2448小時(shí)，得到種子液；所述種子培養(yǎng)基組成如下葡萄糖1040g/L，蛋白胨520g/L，酵母膏l(xiāng)~10g/L,MgSO40.1lg/L，溶劑為水，pH6.08.0;(2)將種子液以體積比5~10%接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，30~37°C、通風(fēng)攪拌或震蕩下培養(yǎng)100150小時(shí)，得到發(fā)酵液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下有效霉素5~50g/L,葡萄糖l20g/L,蛋白胨110g/L,酵母粉l10g/L，MgSO40.1lg/L,溶劑為水，pH6.08.0;(3)發(fā)酵液離心或過濾去除菌體，取上清液或?yàn)V液用大孔弱酸性陽離子交換樹脂進(jìn)行離子交換，以氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，濃縮液用強(qiáng)^f咸性層析樹脂進(jìn)行層析，以水為洗脫劑，收集只含有有效霉烯胺的部分，冷凍干燥，得到所述有效霉烯胺。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟(l)中種子培養(yǎng)基組成如下葡萄糖1015g/L,蛋白胨10~20g/L，酵母膏510g/L,MgS040.3lg/L,溶劑為水，pH7.5~8.0。5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下有效霉素1520g/L，葡萄糖510g/L，蛋白胨l5g/L,酵母4分25g/L,MgSO40.3lg/L,溶劑為水，pH7.5~8.0。全文摘要本發(fā)明提供了一種利用克雷伯氏菌屬(Klebsiella)的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)CCTCCNoM205091發(fā)酵生產(chǎn)有效霉烯胺的方法。所述方法包括將CCTCCNoM205091接種至添加有有效霉素的適用于產(chǎn)酸克雷伯氏菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25～37℃下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)72～192小時(shí)，發(fā)酵液經(jīng)分離純化得到所述有效霉烯胺；所述有效霉素在發(fā)酵培養(yǎng)基中的起始濃度為5～50g/L。文檔編號(hào)C12P13/00GK101492702SQ200810162418公開日2009年7月29日申請(qǐng)日期2008年11月24日優(yōu)先權(quán)日2008年11月24日發(fā)明者沈寅初,王遠(yuǎn)山,薛亞平,鄭裕國(guó),陳小龍申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)