專利名稱：中國被毛孢菌粉生產(chǎn)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微生物的生產(chǎn)方法，特別涉及一種冬蟲夏草中國被毛孢菌 粉的生產(chǎn)方法。
背景技術：
冬蟲夏草是麟翅目蝙蝠蛾屬的蟲草蝙蝠蛾(Hepialus armoricamus Oberthur)
幼蟲感染中國被毛孢真菌后，在體內(nèi)大量繁殖后形成的蟲菌復合體。中國專利 CN97110448.4公開的中國冬蟲夏草真菌的發(fā)酵生產(chǎn)方法，CN200410101728.X
公開的冬蟲夏草大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)及菌粉加工工藝。上述兩件專利均利用中國被 毛孢菌種利用大型工業(yè)發(fā)酵罐逐級擴大繁殖的四級深層發(fā)酵方法生產(chǎn)出菌粉， 其缺點是沿用了抗生素發(fā)酵模式，菌粉中培養(yǎng)基的化學物質(zhì)易殘留，環(huán)節(jié)復雜， 污染機率大，設備投資大，風險大，生產(chǎn)周期長，得率低。 一直以來，本領域 技術人員從未考慮過不采用四級液體深層發(fā)酵生產(chǎn)冬蟲夏草菌粉的方法，比如 固體培養(yǎng)、液體靜止培養(yǎng)或固液聯(lián)合靜止培養(yǎng)以縮短生產(chǎn)周期、降低投資風險、 提高生產(chǎn)得率，而且技術人員對此種思路認為完全否定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足和上述技術偏見，提供一種完全不同 于以往生產(chǎn)冬蟲夏草中國被毛孢生產(chǎn)菌粉的新方法。
本發(fā)明所需的菌種為中國被毛孢(Hirsutella sinensis Liu，Guo,Yu et Zeng)。 現(xiàn)保存在中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號 CGMCCNo.2126，包藏日期2007年8月6日。
本發(fā)明的技術解決方案是通過以下方法來實現(xiàn)的 一種中國被毛孢菌粉的 生產(chǎn)方法包括如下歩驟首先，將谷類10 50%、豆類0 10%、水50 70%按重量百分比配比后置 入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的1/5 4/5，在120 13(TC、 0.15Mpa條件 下滅菌20 40分鐘，接入占培養(yǎng)基重量1% 4%的中國被毛孢菌種在0 14°C 條件下培養(yǎng)2 5天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；
其次，在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量20 40%的液體培養(yǎng)基，該培 養(yǎng)基按重量百分比計蛋91 100%、奶0 0.9%、馬鈴薯0 0.9%、胡蘿卜汁0 1.9%在0 14"C條件下培養(yǎng)3 8天；
最后，將培養(yǎng)物取出、千燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
優(yōu)選步驟是步驟一將谷類20 40%、豆類0 6%、水55 65%按重量 百分比配比后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的2/5 4/5，在122 128"C、 0.15Mpa條件下滅菌25 35分鐘，接入占培養(yǎng)基重量2% 4%的中國被毛孢菌 種在3 1(TC條件下培養(yǎng)3 4天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；
歩驟二在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量25 35%的液體培養(yǎng)基，該 培養(yǎng)基按重量百分比計蛋93 98°/。、奶0.3 0.6%、馬鈴薯0.3 0.6%、胡蘿卜 汁0.5 1.5%在5 10。C條件下培養(yǎng)4 7天；
步驟三將培養(yǎng)物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。 '最好采用的步驤是步驟一將谷類30%、豆類5%、水65%按重量百分比 配比后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的3/5，在125°C、 0.15Mpa條件 下滅菌27分鐘，接入占培養(yǎng)基重量3%的中國被毛孢菌種在6"C條件下培養(yǎng)3 天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；
步驟二在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量30%的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng) 基按重量百分比計蛋98%、奶0.5%、馬鈴薯0.5%、胡蘿卜汁1%在8"條件下 培養(yǎng)5天；
歩驟三將培養(yǎng)物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
還可直接將谷類20 50%、豆類0 20%、水50 70°/。按重量百分比配比后 置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的1/5 4/5，在120 130°C、 0.15Mpa 條件下滅菌20 40分鐘，接入占培養(yǎng)基重量1% 4%的中國被毛孢菌種在0 14。C條件下培養(yǎng)10 20天后取出培養(yǎng)物干燥、粉碎可得中國被毛孢菌粉也可將培養(yǎng)基按重量百分比計蛋91 100%、奶0 0.9"/。、馬鈴薯0 0.9%、 胡蘿卜汁0 1.9%、蛋白胨0 9%在120 130°C、 0.15Mpa條件下滅菌20 40 分鐘，接入占培養(yǎng)基重量1% 4%的0 1fC條件下培養(yǎng)7 10天；
上述步驟一培養(yǎng)基中的水可用液體奶或含糖、蛋白質(zhì)的液體代替，其中糖 占液體總重量的1 10%，蛋白質(zhì)占1 20%。
上述中國被毛孢菌粉的專用培養(yǎng)容器，最好采用食用級耐高溫材質(zhì)的容器 (包括瓶塞)，瓶底直徑最好大于等于瓶口直徑。
上述方法及培養(yǎng)容器還可用于冬蟲夏草擬青霉、頭孢菌及其他伴生菌粉的 生產(chǎn)。
本發(fā)明的效果是發(fā)酵周期短，工藝簡單、無化學殘留、污染機率小、設
備投資小、成本低、無風險、得率高達40 50%。
具體實施例方式
實施例1
將10g小麥、10g大豆分別破碎過10目篩并與80g水按重量百分比配比 混合后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的1/5，在120°C、 0.15Mpa條件 下滅菌40分鐘，接入4g中國被毛孢菌種在O'C條件下培養(yǎng)3天即可在培養(yǎng)基表 面長滿白色菌絲；然后在該長滿白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加40g的液體培養(yǎng)基， 該培養(yǎng)基按重量百分比計雞蛋(全蛋)40g在14。C條件下培養(yǎng)3天；取出培養(yǎng) 物干燥、粉碎即得70g中國被毛孢菌粉。
實施例2
將50g稻谷破碎過20目篩并與50g牛奶按重量百分比配比后置入培養(yǎng)容 器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的2/5，在122'C、 0.15Mpa條件下滅菌25分鐘，接 入lg中國被毛孢菌種在3。C條件下培養(yǎng)2天即可在培養(yǎng)基表面長滿白色菌絲； 然后在該長滿白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加占20g的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重 量百分比計鴨蛋(全蛋)18.2g、蛋白胨1.8g混合配制，在0。C條件下培養(yǎng)4天； 取出培養(yǎng)物干燥、粉碎即得48g中國被毛孢菌粉。
實施例3將20g玉米、6g蠶豆分別破碎過10目篩并與74g的蛋白質(zhì)+糖的水溶液 (1%的糖和10%的蛋白質(zhì)水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養(yǎng)容器，培 養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的3/5，在128°C、 0.15Mpa條件下滅菌27分鐘，接入3g 中國被毛孢菌種在6"C條件下培養(yǎng)3天即可在培養(yǎng)基表面長滿白色菌絲；然后在 該長滿白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加30g的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比 將雞蛋(全蛋)27.3g、奶0.27g，馬鈴薯0.27g，胡蘿卜汁0.57g，蛋白胨1.59g 混合配制，在5"C條件下培養(yǎng)4天；取出培養(yǎng)物干燥、粉碎即得55g中國被毛孢 菌粉。
實施例4
將40g小米、5g綠豆分別破碎過10目篩并與55§蛋白質(zhì)+糖的水溶液(20% 的糖和1%的蛋白質(zhì)水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占 培養(yǎng)容器體積的4/5，在125匸、0.15Mpa條件下滅菌35分鐘，接入2g中國被 毛孢菌種在l(TC條件下培養(yǎng)2天即可在培養(yǎng)基表面長滿白色菌絲；然后在該長 滿白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加35g的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比將雞 蛋(全蛋)33g、奶0.105g，馬鈴薯0.105g,胡蘿卜汁0.14g，蛋白胨2.1g混合 配制，在1(TC條件下培養(yǎng)3天；取出培養(yǎng)物干燥、粉碎即得60g中國被毛孢菌 粉。
實施例5
將30g高粱、5g豌豆分別破碎過10目篩并與65g蛋白質(zhì)+糖的水溶液(10。/。 的糖和5%的蛋白質(zhì)水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占 培養(yǎng)容器體積的1/5，在130。C、 0.15Mpa條件下滅菌20分鐘，接入4g中國被 毛孢菌種在14'C條件下培養(yǎng)2天即可在培養(yǎng)基表面長滿白色菌絲；然后在該長 滿白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加25g的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比將雞 蛋(全蛋)24g、奶0.15g，馬鈴薯0.15g，胡蘿卜汁0.375g，蛋白胨0.325g混合 配制，在8X:條件下培養(yǎng)4天；取出培養(yǎng)物干燥、粉碎即得51g中國被毛孢菌粉。
實施例6
將32g小麥、8g赤豆分別破碎過10目篩并與6(^蛋白質(zhì)+糖的水溶液(5% 的糖和3%的蛋白質(zhì)水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的3/5，在125'C、 0.15Mpa條件下滅菌27分鐘，接入3g中國被 毛孢菌種在6"C條件下培養(yǎng)3天即可在培養(yǎng)基表面長滿白色菌絲；然后在該長滿 白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加38g的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比將雞蛋 (全蛋)36.86g、奶0.152g，馬鈴薯0.152g，胡蘿卜汁0.456g，蛋白胨0.38g混 合配制，在8"C條件下培養(yǎng)4天；取出培養(yǎng)物干燥、粉碎即得66g中國被毛孢菌 粉。
實施例7
將27g稻谷、3g蠶豆分別破碎過10目篩并與70g蛋白質(zhì)+糖的水溶液(15n/。 的糖和7%的蛋白質(zhì)水溶液)按重量百分比配比混合后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占 培養(yǎng)容器體積的2/5，在127'C、 0.15Mpa條件下滅菌26分鐘，接入2.5g中國被 毛孢菌種在13"C條件下培養(yǎng)2天即可在培養(yǎng)基表面長滿白色菌絲；然后在該長 滿白色菌絲的培養(yǎng)容器中補加28g的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比將雞 蛋(全蛋)27.44g、奶0.084g，馬鈴薯0.084g，胡蘿卜汁0.112g，蛋白胨0.28g 混合配制，在13。C條件下培養(yǎng)3天；取出培養(yǎng)物干燥、粉碎即得62g中國被毛 孢菌粉。
實施例8
將谷類10g、豆類20g、水70g按重量百分比配比后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基 占培養(yǎng)容器體積的1/5，在12(TC、 0.15Mpa條件下滅菌40分鐘，接入lg中國 被毛孢菌種在O'C條件下培養(yǎng)20天后取出培養(yǎng)物干燥、粉碎可得41g中國被毛 孢菌粉。
實施例9
將谷類30g、豆類10g、 15%的糖和7%的蛋白質(zhì)水溶液60g按重量百分比配 比后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的3/5，在125'C、 0.15Mpa條件下 滅菌30分鐘，接入3g中國被毛孢菌種在8"C條件下培養(yǎng)15天后取出培養(yǎng)物干 燥、粉碎可得45g中國被毛孢菌粉。
實施例10
將谷類50g、 5%的糖和3%的蛋白質(zhì)水溶液50g按重量百分比配比后置入培 養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的4/5，在130°C、 0.15Mpa條件下滅菌20分鐘，接入4g中國被毛孢菌種在14。C條件下培養(yǎng)10天后取出培養(yǎng)物干燥、粉碎可得
50g中國被毛孢菌粉。
將按重量百分比計100g全蛋攪拌均勻后裝入玻璃容器中用濾紙封口，在 130°C、 0.15Mpa條件下滅菌20分鐘，接入4g中國被毛孢菌種0。C條件下培養(yǎng)7 天后取出培養(yǎng)物干燥、粉碎可得50g中國被毛孢菌粉。 .
實施例12
將按重量百分比計91g全蛋攪拌均勻后裝入玻璃容器中，再加入9g蛋白胨 用濾紙封口，在12(TC、 0.15Mpa條件下滅菌40分鐘，接入lg中國被毛孢菌種 14"C條件下培養(yǎng)9天后取出培養(yǎng)物干燥、粉碎可得45g中國被毛孢菌粉。
實施例13
將按重量百分比計97.7g全蛋攪拌均勻后裝入玻璃容器中，再加入0.9g牛 奶、0.9g馬鈴薯、1.9g蛋白胨用濾紙封口，在130°C、 0.15Mpa條件下滅菌30
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得40g中國被毛孢菌粉。
權利要求
1、一種中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟步驟一將谷類10～50％、豆類0～10％、水50～80％按重量百分比配比后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的1/5～4/5，在120～130℃、0.15Mpa條件下滅菌20～40分鐘，接入占培養(yǎng)基重量1～4％的中國被毛孢菌種在0～14℃條件下培養(yǎng)2～3天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；步驟二在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量20～40％的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比計蛋91～100％、奶0～0.9％、馬鈴薯0～0.9％、胡蘿卜汁0～1.9％、蛋白胨0～9％在0～14℃條件下培養(yǎng)3～4天；步驟三將培養(yǎng)物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
2、 根據(jù)權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟步驟一將谷類20 40%、豆類0 6%、水55 74%按重量百分比配比后 置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的2/5 4/5，在122 128°C、 0.15Mpa 條件下滅菌25 35分鐘，接入占培養(yǎng)基重量2% 4%的中國被毛孢菌種在3 l(TC條件下培養(yǎng)2 3天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；步驟二在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量25 35%的液體培養(yǎng)基，該 培養(yǎng)基按重量百分比計蛋93 98%、奶0.3 0.6%、馬鈴薯0.3 0.6%、胡蘿卜 汁0.4 1.5%、蛋白胨1 6%在5 1(TC條件下培養(yǎng)3 4天；步驟三將培養(yǎng)物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
3、 根據(jù)權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟步驟一將谷類30%、豆類5%、水65%按重量百分比配比后置入培養(yǎng)容器， 培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的3/5，在125"C、 0.15Mpa條件下滅菌27分鐘，接入占 培養(yǎng)基重量3%的中國被毛孢菌種在6"C條件下培養(yǎng)3天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；步驟二在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量30%的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng) 基按重量百分比計蛋97°/。、奶0.4%、馬鈴薯0.4%、胡蘿卜汁1.2%、蛋白胨1% 在8。C條件下培養(yǎng)3天；步驟三將，物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。
4、 根據(jù)權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于所述中國 被毛菌種經(jīng)步驟一培養(yǎng)后取出、千燥、粉碎即可得中國被毛孢菌粉，也可直接 用步驟二培養(yǎng)后取出、干燥、粉碎即可得中國被毛孢菌粉。
5、 根據(jù)權利要求l所述中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于所述步驟一中的水可用液體奶或含糖、蛋白質(zhì)的液體代替。
6、 根據(jù)權利要求3所述中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法，其特征在于所述培養(yǎng) 基中含糖、蛋白質(zhì)的液體，其中糖占液體總重量的1 10%，蛋白質(zhì)占1 20%。
7、 根據(jù)權利要求1所述一種中國被毛孢菌粉的專用培養(yǎng)容器，其特征在于， 容器為食用級耐高溫材質(zhì)制備，瓶底直徑大于等于瓶口直徑，瓶塞為具有透氣 性的食用級耐高溫材質(zhì)制備。
8、 上述方法及培養(yǎng)容器還可用于冬蟲夏草擬青霉、頭孢菌及其他伴生菌粉 的生產(chǎn)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種微生物的生產(chǎn)方法，特別涉及一種冬蟲夏草中國被毛孢菌粉的生產(chǎn)方法。本發(fā)明包括如下步驟將谷類10～50％、豆類0～10％、水50～70％按重量百分比配比后置入培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基占培養(yǎng)容器體積的1/5～4/5，接入占培養(yǎng)基重量1％～4％的中國被毛孢菌種在0～14℃條件下培養(yǎng)2～5天培養(yǎng)基表面長滿菌絲；在培養(yǎng)容器中補加占上述培養(yǎng)基重量20～40％的液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基按重量百分比計蛋91～100％、奶0～0.9％、馬鈴薯0～0.9％、胡蘿卜汁0～1.9％在0～14℃條件下培養(yǎng)3～8天；最后，將培養(yǎng)物取出、干燥、粉碎即得中國被毛孢菌粉。本發(fā)明的效果是發(fā)酵周期短，工藝簡單、無化學殘留、污染幾率小、設備投資小、成本低、無風險、得率高達40～50％。
文檔編號C12M1/24GK101423799SQ20081014778
公開日2009年5月6日 申請日期2008年11月29日 優(yōu)先權日2008年11月29日
發(fā)明者張玉業(yè), 李樹志, 李桂全, 峰 涂, 陳永鳳 申請人:峰 涂