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具有磷酸二酯主鏈的免疫刺激性單鏈核糖核酸的制作方法

文檔序號:432887閱讀:356來源:國知局
專利名稱:具有磷酸二酯主鏈的免疫刺激性單鏈核糖核酸的制作方法
具有磷酸二酯主鏈的免疫刺激性單鏈核糖核酸
背景技術(shù)
因?yàn)樗陆还J(rèn)的作為治療劑的可能性,核糖核酸(RNA)最近已 經(jīng)成為強(qiáng)烈關(guān)注的焦點(diǎn)。最近已經(jīng)報道,例如,某些序列特異性的雙 鏈RNA,通常長度為大約21-23個核苷酸,可在稱為RNA干擾(RNAi) 或翻譯后基因沉默的方法中,以選擇性方式用于沉默基因表達(dá)。用于 這種RNA干擾的雙鏈RNA包括,尤其是,所謂的短干擾RNA(siRM)。 Hannon GJ. (2002) A^wre 418: 244-51。相反,最近還報道,序列 非特異性的雙鏈RNA可以誘導(dǎo)免疫刺激作用,通過Tol 1樣受體3 (TLR3) 發(fā)揮作用。Alexopoulou L.等(2001) ^"ure 413: 732-8。此外, 最近也已報道,某些單鏈RM,通常包括鳥嘌呤核苷(G)和尿嘧啶核 苷(U),而且特別地包括某些序列基序,也是免疫刺激性的。Lipford等 US 2003/0232074 Al。免疫刺激性單鏈RM已經(jīng)報道通過Tol 1樣受體 7 (TLR7)和Toll樣受體8 (TLR8)發(fā)揮作用。
除了由RNA與TLR3, TLR7和TLR8的相互作用引起的免疫刺激作 用之外,某些包含胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸(CpG)的核酸分子,特別是 包含CpG的脫氧核糖核酸(DNA),已經(jīng)報道通過與Toll樣受體9 (TLR9) 的相互作用發(fā)揮它們的免疫刺激作用。Hemmi H.等U000) A^i/re 408:740-5。 TLR7, TLR8和TLR9都以MyD88依賴的方式發(fā)信號。
在它們的糖磷酸主鏈中天然存在磷酸二酯核苷酸間鍵的脫氧核糖 核酸分子,和甚至核糖核酸分子,對核酸酶介導(dǎo)的降解都是敏感的。 因?yàn)闉榱伺R床應(yīng)用,經(jīng)常制備免疫刺激性核酸作為合成的寡核苷酸, 這些免疫刺激性的合成寡核苷酸常常在它們的糖磷酸主鏈中包括一個 或多個穩(wěn)定的核苷酸間鍵。 一種通常使用的穩(wěn)定核苷酸間鍵是硫代磷 酸酯。發(fā)明概述
根據(jù)本發(fā)明,目前已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn),具有磷酸二酯主鏈,而
不是硫代磷酸酯主鏈的單鏈RNA,通過MyD88依賴的Toll樣受體而不 是TLR7或TLR8,至少部分地刺激了免疫激活。負(fù)責(zé)這種免疫應(yīng)答的 MyD88依賴的Toll樣受體,假定地指名為TLR9。
CpG介導(dǎo)的免疫激活,其通過TLR9發(fā)揮作用,包括先天免疫的激 活,并導(dǎo)致一種相對于Thl或Thl樣免疫應(yīng)答的免疫應(yīng)答的傾斜。因 此已經(jīng)報道CpG寡核苷酸可用作助劑和活化劑,用于治療其中需要Thl 免疫應(yīng)答刺激的疾病,例如,癌癥,感染,過敏和哮喘。
從而,根據(jù)本發(fā)明目前已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn),具有磷酸二酯主鏈 的單鏈RNA,沒有CpG或者前面描述的免疫刺激性單鏈RNA的序列特 異性特性,可用于需要TLR9介導(dǎo)的免疫系統(tǒng)激活的任何應(yīng)用。這種應(yīng) 用包括,非限制性的,治療患有癌癥,感染,過敏或哮喘的個體。
在一個方面,本發(fā)明是一種在個體中誘導(dǎo)Thl樣免疫應(yīng)答的方法。 根據(jù)本發(fā)明這個方面的方法,包括對個體施用有效量的長度為5-100 個核苷酸的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(ssORN)的步驟,其中免疫刺
激性ssORN具有磷酸二酯主鏈,并包括一種核苷酸序列,其 (1)沒有鳥嘌呤核苷(G),或 (2)包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核苷酸序列包括至少一個G
時,該核苷酸序列
(a) 沒有尿嘧啶核苷(U),和
(b) 沒有CpG基序HCGXA,其中X,, X" 1和1是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G)二核苷酸,其中CG 二核苷酸的C是未甲 基化的,
附帶條件是免疫刺激性ssORN不作為雙鏈核糖核酸(RNA)分子的 一部分存在。
在一個方面,本發(fā)明是一種在個體中誘導(dǎo)抗原特異性應(yīng)答的方法。 根據(jù)本發(fā)明這個方面的方法,包括對個體施用抗原;和對個體施用有 效量的長度為5-100個核苷酸的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(ssORN)的步驟,其中免疫刺激性ssORN具有磷酸二酯主鏈,并包括一種核普 酸序列,其
(1) 沒有鳥嘌呤核苷(G),或
(2) 包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核普酸序列包括至少一個G 時,該核普酸序列
(a) 沒有尿嘧啶核苷(U),和
(b) 沒有CpG基序XACGXA,其中X" X2, X3和l是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G)二核苷酸,其中CG 二核苷酸的C是未甲 基化的,
附帶條件是免疫刺激性s s0RN不作為雙鏈核糖核酸(RNA )分子的 一部分存在。
在一個方面,本發(fā)明是一種治療患有癌癥的個體的方法。根據(jù)本 發(fā)明這個方面的方法,包括對個體施用有效量的長度為5-100個核苷 酸的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(s sORN)的步驟,其中免疫刺激性 ssORN具有磷酸二酯主鏈,并包括一種核苷酸序列,其
(1) 沒有鳥嘌呤核苷(G),或
(2) 包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核苷酸序列包括至少一個G 時,該核苷酸序列
(a) 沒有尿嘧咬核苷(U),和
(b) 沒有CpG基序HCGXA,其中X" X2, X3和X4是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G)二核苷酸,其中CG二核苷酸的C是未甲 基化的,
附帶條件是免疫刺激性ssORN不作為雙鏈核糖核酸UNA)分子的 一部分存在。
在一個方面,本發(fā)明是一種治療患有傳染病的個體的方法。根據(jù) 本發(fā)明這個方面的方法,包括對個體施用有效量的長度為5-100個核 苷酸的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(s sORN)的步驟,其中免疫刺激性 ssORN具有磷酸二酯主鏈,并包括一種核苷酸序列,其 (1)沒有鳥噪呤核苷(G),或(2)包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核苷酸序列包括至少一個G 時,該核苷酸序列
(a) 沒有尿嘧啶核苷(U),和
(b) 沒有CpG基序XJ2CGXJ4,其中X" X2, X3和X,是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G)二核苷酸,其中CG二核苷酸的C是未甲 基化的,
附帶條件是免疫刺激性ssORN不作為雙鏈核糖核酸(RM )分子的 一部分存在。
在一個方面,本發(fā)明是一種治療患有過敏性疾病的個體的方法。 根據(jù)本發(fā)明這個方面的方法,包括對個體施用有效量的長度為5-100 個核苷酸的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(ssORN)的步驟,其中免疫刺 激性ssORN具有磷酸二酯主鏈,并包括一種核苷酸序列,其
(1) 沒有鳥嘌呤核苷(G),或
(2) 包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核苷酸序列包括至少一個G 時,該核苷酸序列
(a) 沒有尿嘧咬核苷(U),和
(b) 沒有CpG基序XACGXsX"其中X" X2, 1和乙是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G) 二核苷酸,其中CG 二核苷酸的C是未甲 基化的,
附帶條件是免疫刺激性ssORN不作為雙鏈核糖核酸(RM)分子的 一部分存在。
在一個方面,本發(fā)明是一種治療患有哮喘的個體的方法。根據(jù)本 發(fā)明這個方面的方法,包括對個體施用有效量的長度為5-100個核苷 酸的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(ssORN)的步驟,其中免疫刺激性 ssORN具有磷酸二酯主鏈,并包括一種核苷酸序列,其
(1) 沒有鳥嘌呤核苷(G),或
(2) 包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核苷酸序列包括至少一個G 時,該核苷酸序列
(a)沒有尿嘧咬核苷(U),和(b)沒有CpG基序XJ2CGX3X4,其中X" X2, 1和1是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G)二核苷酸,其中CG 二核苷酸的C是未甲 基化的,
附帶條件是免疫刺激性ssORN不作為雙鏈核糖核酸(RNA )分子的 一部分存在。
在一個實(shí)施方案中,免疫刺激性ssORN長度為5-40個核苷酸。 在一個實(shí)施方案中,免疫刺激性ssORN長度為5-20個核苷酸。 在一個實(shí)施方案中,免疫刺激性ssORN長度為5-12個核苷酸。 在一個實(shí)施方案中,免疫刺激性ssORN是合成的ssORN。 在一個實(shí)施方案中,免疫刺激性ssORN不是選自聚U,聚G,聚A
或聚C的多核苷酸。
在一個實(shí)施方案中,對個體施用有效量的免疫刺激性ssORN是對
個體全身性地施用有效量免疫刺激性ssORN。
附圖簡述
圖l是一幅示意圖,其描述了如前面了解的,某些Toll樣受體, 它們的配體,以及它們的細(xì)胞內(nèi)信號途徑的特征。MyD88描述為一種 接頭蛋白,其用于核酸應(yīng)答的Toll樣受體TLR7, TLR8和TLR9,以及 用于非核酸應(yīng)答的Toll樣受體TLR2, TLR4和TLR5。
圖2是一幅描述了單鏈磷酸二酯RNA的不依賴于TLR7的識別的 圖解。PD,磷酸二酯主鏈;PTO,硫代磷酸酯主鏈;WT,野生型。RNA63 是具有如5, -CAGOUCUGUGAU-3' (SEQ ID NO: 1)提供的核苷酸序列的 寡核糖核苷酸。CpG-ODN 1668是具有如5, -TCCATGACGTTCCTGATGCT-3' (SEQ ID NO: 2)提供的核苷酸序列的寡脫氧核苷酸。
圖3是一組3幅圖,其描述了對不同的刺激物應(yīng)答,由FLT3-L-誘導(dǎo)的樹狀細(xì)胞(DC)分泌的各種指定的細(xì)胞因子。LPS,脂多糖。 CpG-0DN 2216是具有如5, -GGGGGACGATCGTCGGGGG-3' (SEQ ID NO: 3 )
提供的核苷酸序列的寡脫氧核苷酸。
圖4是一系列4幅圖,其描述了對指定的ss0RN應(yīng)答,在FLT3-L-誘導(dǎo)的樹狀細(xì)胞上CD69表達(dá)的FACS分析。
圖5是兩幅圖,其描述了對指定的刺激物應(yīng)答,M-CSF-來源的巨 噬細(xì)胞和GM-CSF-來源的樹狀細(xì)胞的IL-12p40分泌。
圖6A是一幅圖,其描述了對指定刺激物應(yīng)答,來自野生型(WT), TLR7-敲除(TLR7-/-)和MyD88-敲除(MyD88-/-)小鼠的FLT3-L-誘導(dǎo)的 樹狀細(xì)胞的IL-12p40分泌。pI:C,聚肌苷胞嘧啶核苷。
圖6B是一系列3幅圖,其描述了對指定刺激物應(yīng)答,來自野生 型(WT) , TLR7-敲除(TLR7-/-)和MyD88-敲除(MyD88-/-)小鼠的 FLT3-L-誘導(dǎo)的樹狀細(xì)胞的CD69表達(dá)的FACS分析。
發(fā)明詳述
免疫應(yīng)答概念上分成先天免疫和適應(yīng)性免疫。先天免疫被認(rèn)為包 括傳染性微生物或外源大分子表達(dá)的某類分子共有的病原體相關(guān)分子 模式(PAMP)的識別。PAMP被認(rèn)為由某些免疫細(xì)胞上的模式識別受體 (PRR)識別。
Toll樣受體(TLR)是一個高度保守多肽家族,其在哺乳動物的先 天免疫中起關(guān)鍵作用。目前已經(jīng)鑒定了 10個家族成員,命名為 TLR1-TLR10。各種TLR的細(xì)胞質(zhì)功能域的特征在于Toll-白細(xì)胞介素1 (IL-1 )受體(TIR)功能域。Medzhitov R.等 (1998) M /. CW/ 2:253-8。 TLR對微生物侵入的識別引起了信號級聯(lián)的激活,其在果蠅 和哺乳動物中是進(jìn)化上保守的。包含TIR功能域的接頭蛋白MyD88已 經(jīng)報道與許多TLR相關(guān),并為TLR補(bǔ)充IL-1受體相關(guān)的激酶(IRAK) 和腫瘤壞死因子(TNF)受體相關(guān)的第六因子(TRAF6)。 MyD88依賴的信 號途徑被認(rèn)為導(dǎo)致NF-kB轉(zhuǎn)錄因子和c-Jun冊2末端激酶(Jnk)促分 裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激活,其是免疫激活和炎癥性細(xì)胞因子產(chǎn) 生中的關(guān)鍵步驟。綜述,參見 Aderem A. 等 (2000) A^"re 406: 782-87。
雖然已經(jīng)報道了許多特異性TLR配體,但是一些TLR的配體還留 待鑒定。TLR2的配體包括肽聚糖和脂肽'Yoshimura A.等(1999)/./邊續(xù)o厶163:1-5; Yoshimura A.等(1999) /. 163: l-5;
Aliprantis AO.等(1999) Sci'e/7ce 285: 736-9。病毒來源的雙鏈RM (dsRNA)和I:C, 一種dsRNA的合成類似物,已經(jīng)報道是TLR3的配體。 Alexopoulou L.等(2001) A""i/re 413: 732-8。多糖(LPS)是TLR4 的配體。Poltorak A.等(1998) Science 282: 2085-8; Hoshino K. 等(1999) /. //mz/"/zo/. 162: 3749-52。細(xì)菌鞭毛蛋白是TLR5的配體。 Hayashi F等(2001) A^"re 410: 1099-1103。肽聚糖已經(jīng)報道不僅 是TLR2而且是TLR6的配體。Ozinsky A.等(2000) Sc/. 〃W 97: 13766—71; Takeuchi 0. 等 (2001) //mz w30/. 13:933-40。含鳥噪呤核苷和尿嘧啶核苷的單鏈RNA已經(jīng)報道是TLR7 和TLR8的配體。美國專利申請公開2003/0232074 Al。某些低分子 量合成化合物,咪唑喹啉咪喹莫特(R-837 )和瑞喹莫德(R-848 ), 也已經(jīng)報道是TLR7和TLR8的配體。JurkM,等U002) /邊邊w70/. 3: 499; He咖i H.等(2002) M /應(yīng)/ o入3: 196-200。細(xì)菌DNA (CpG DNA)已經(jīng)報道是TLR9配體。^邊/z /等(2000) #afure 408: 740-5; Bauer S.等(2001)戶roc. 咖98, 9237-42。
TLR1和TLR10的天然配體是未知的。
在接頭蛋白MyD88的參與下,對合適的核酸配體應(yīng)答,TLR7, TLR8 和TLR9都發(fā)出信號。鼠的TLR8,不同于人類TLR8,被認(rèn)為是非功能 性的。因此,在MyD88的參與下,對合適的核酸配體應(yīng)答,在小鼠中 TLR7和TLR9是功能性的并發(fā)出信號。缺乏功能性TLR7的小鼠因此只 有TLR9作為功能性的TLR,其已知對通過MyD88依賴的通道的合適核 酸配體應(yīng)答,能發(fā)出信號(參見

圖1)。
目前已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn),某些具有磷酸二酯,而不是硫代磷酸 酯主鏈的單鏈寡核糖核苷酸,能在缺乏功能性TLR7或TLR8的小鼠中, 以MyD88依賴的方式刺激免疫細(xì)胞。
根據(jù)本發(fā)明有用的免疫刺激性單鏈寡核糖核苷酸(ssORN),其長
度為5-100個核苷酸,具有磷酸二酯主鏈和一種核苷酸序列,其 (1)沒有鳥嘌呤核苷(G),或(2)包括至少一個G,附帶條件是當(dāng)核苷酸序列包括至少一個G 時,該核苷酸序列
(a) 沒有尿嘧啶核苷(U),和
(b) 沒有CpG基序XJ2CGX3X4,其中X" X2, X3和X4是核苷酸,而 且CG是胞嘧啶(C)-鳥嘌呤(G)二核苷酸,其中CG 二核苷酸的C是未曱 基化的,
附帶條件是免疫刺激性ssORN不作為雙鏈核糖核酸(RM)分子的 一部分存在。
在一個實(shí)施方案中,根據(jù)本發(fā)明有用的免疫刺激單鏈寡核糖核苷 酸(ssORN)可以來源于并分離自天然來源的RNA。作為選擇,而且更 一般地,在一個實(shí)施方案中,根據(jù)本發(fā)明有用的免疫刺激性單鏈寡核 糖核苷酸(ssORN),可以通過本領(lǐng)域公知的合成方法獲得。
本發(fā)明的免疫刺激ssORN可以是天然或非天然來源的。天然存在 的RNA是泛指某些核糖核苷單位的線性聚合物的一類核酸,每個核糖 核普單位由嘌呤或嘧咬堿基和核糖組成,通過核苷酸間磷酸二酯鍵連 接。在這點(diǎn)上,"線性"指描述RNA的一級結(jié)構(gòu)。 一般RNA可以是單 鏈的或雙鏈的,包括部分雙鏈。
如這里使用的,"核苷"指與可互換的有機(jī)堿連接的單糖部分(例 如,核糖或者脫氧核糖),該有機(jī)堿是取代的嘧啶(例如,胞嘧啶, 胸腺嘧啶或者取代的嘌呤(例如,腺嚷呤或者鳥嗓呤)。對應(yīng)的核苷 酸是胞嘧啶核苷,胸腺嘧啶核苷,尿嘧啶核苷,腺嘌呤核苷和鳥嘌呤 核苷,其通常分別以C, T, U, A和G表示。如這里所述,核苷可以是 天然存在的核苷,修飾核苷,或合成(人工)核苷。
術(shù)語"核酸"和"寡核苷酸"可以互換使用,指多個核苷酸(即, 包括與磷酸基和可互換的有機(jī)堿連接的糖(例如,核糖或脫氧核糖) 的分子,如上所述。如這里使用的,該術(shù)語指寡核糖核苷酸(ORN)以及 寡脫氧核苷酸(ODN)。該術(shù)語也將包括多核苷(即,多核苷酸磷酸酯) 和包含任何其它的有機(jī)堿的聚合物。核酸分子可以獲自現(xiàn)有的核酸來 源(例如,基因組或cDNA),但是優(yōu)選合成的(例如,通過核酸合成生產(chǎn))。
術(shù)語核酸和寡核苷酸也包含具有取代或修飾的核酸或寡核普酸, 如在堿基中和/或糖中。例如,它們包括具有主鏈糖的核酸,該主鏈糖
共價連接于低分子量有機(jī)基團(tuán)而不是3,位置的羥基,而且不是5,位 置的磷酸基。因此修飾的核酸可以包括2, -0-烷基化的核糖基團(tuán)。另 外,修飾的核酸可以包括糖如阿拉伯糖,而不是核糖。因此,在主鏈 組合物中核酸可以是異源的,從而包含連接到 一起的聚合體單元的任 何可能的組合如肽核酸(其具有氨基酸主鏈和核酸堿基)。在一些實(shí) 施方案中,在主鏈組合物中核酸是同源的。核酸也包括取代的嘌呤和 嘧咬如C-5丙炔修飾的堿基。Wagner RW.等(1996) AW. S/o^c力/ oA 14:840-4。嘌呤和嘧咬包括,但不限于,腺噪呤,胞嘧啶,鳥噤呤, 胸腺嘧啶核苷,5-甲基胞嘧啶,2-氨基-嘌呤,2-氨基-6_氯嘌呤,2,6-二氨基噪呤,次黃嘌呤,及其它天然和非天然存在的核苷堿基,取代 的和未取代的芳香族部分。它的這種修飾是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
天然的核苷堿基可以被修飾的核苷堿基取代,其中修飾的核苷堿 基例如選自次黃嘌呤;二氫尿嘧啶;假尿嘧啶;2-硫尿嘧啶;4一充尿 嘧啶;5-氨基尿嘧啶;5-(d-Cj-烷基尿嘧啶;5-(C2-C6)-烯基尿嘧 啶;5-(C廣C6)-炔基尿嘧啶;5-(羥甲基)尿嘧啶;5-氯尿嘧啶;5-氟尿嘧啶;5-溴尿嘧啶;5-羥基胞嘧啶;5-(d-")-烷基胞嘧啶;5-(C2-C6)-烯基胞嘧啶;5-(C2-C6)-炔基胞嘧啶;5-氯胞嘧啶;5-氟 胞嘧啶;5-溴胞嘧啶;N2-二甲基鳥嘌呤;2, 4-二氨基嘌呤;8-氮雜嘌 呤(包括,特別是,8-鳥嘌呤唑);取代的7-去氮嘌呤(包括,特別 是,7-去氮鳥嘌呤),包括7-去氮-7-取代的和/或7-去氮-8-取代的 噪呤;或天然核苷堿基的其它修飾。該列舉是示例性的,而不應(yīng)該解 釋為限定。
特別地,當(dāng)在免疫刺激性ssORN中存在至少一個鳥嘌呤核苷時, 免疫刺激性ssORN的至少一個烏嘌呤堿基可以是取代的或修飾的鳥嘌 呤如7-去氮鳥嘌呤;8-鳥嘌呤唑;7-去氮-7-取代的鳥嘌呤(如7-去 氮-7-(C廣C6)炔基鳥噪呤);7-去氮-8-取代的鳥嘌呤;次黃嘌呤;2, 6-二氨基嘌呤;2-氨基-嘌呤;嘌呤;8-取代的鳥嘌呤如8-羥基嘌呤; 和6-硫代鳥噪呤。該列舉是示例性的,而不應(yīng)該解釋為限定。
同樣特別地,當(dāng)免疫刺激性ssORN中存在至少一個尿嘧啶核苷時, 免疫刺激性ssORN的至少一個尿嘧啶堿基可以是取代的或修飾的尿嘧 啶如假尿嘧啶和5-甲基尿嘧啶。
為了用于本發(fā)明,本發(fā)明的核酸可以使用本領(lǐng)域已知的任何方法 從頭合成。例如,P-氰乙基亞磷酰胺法(Beaucage SL.等(1981) 7Wra力e^加丄eH. 22: 1859);核苷氬膦酸酯方法(Garegg等(1986) r"ra力e(/ro/7i:e〃. 27:4051-4; Froehler等(1986)腸/. 14:5399-407; Garegg等(1986) 7Wra力^/ro"eW. 27: 4055-8; Gaffne》等(1988) 7e"s力etfr加Ze〃. 29: 2619-22)。這些化學(xué)作 用可以通過市場上可獲得的各種自動化核酸合成裝置執(zhí)行。這些核酸 稱為合成核酸??梢允褂靡阎募夹g(shù),如那些應(yīng)用限制性內(nèi)切酶,外 切酶或核酸內(nèi)切酶,從已知核酸序列(例如,核糖體的,信使,或轉(zhuǎn) 移RNA)制備核酸。以這種方式制備的核酸稱為分離核酸。分離核酸 泛指從通常與其天然連接在一起的組分分離的核酸。舉例來說,分離 核酸可以是從細(xì)胞,細(xì)胞核,線粒體或染色質(zhì)分離的核酸。術(shù)語"核 酸"包括合成和分離核酸。
根據(jù)本發(fā)明有用的ssORN是免疫刺激性的。如這里使用的,免疫 刺激性ssORN指能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的ssORN,例如,刺激免疫系統(tǒng)的細(xì) 胞而成為激活的,以增殖,分化,遷移,增加細(xì)胞溶解活性,增強(qiáng)與 免疫細(xì)胞激活相關(guān)的分泌產(chǎn)物的表達(dá),增強(qiáng)與免疫細(xì)胞激活相關(guān)的細(xì) 胞表面標(biāo)記或共同刺激分子的表達(dá),或其任何結(jié)合。與免疫細(xì)胞激活 相關(guān)的分泌產(chǎn)物是本領(lǐng)域>^知的,而且可以包括,非限制性的,細(xì)胞 因子,趨化因子和抗體。
本發(fā)明的免疫刺激性ssORN可用于在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)Thl樣免疫 應(yīng)答。如這里使用的,Thl樣免疫應(yīng)答指激活免疫細(xì)胞以表達(dá)Thl樣 分泌產(chǎn)品,包括某些細(xì)胞因子,趨化因子,和免疫球蛋白的亞類;和 激活某些免疫細(xì)胞。Thl樣分泌產(chǎn)物包括,非限制性的,細(xì)胞因子IFN-Y, IL-2, IL-12, IL-18, TNF-oc,和趨化因子IP-10 (CXCL10)。在 小鼠中,Thl免疫激活刺激IgG2a的分泌。在人類中,Thl免疫激活刺 激IgGl的分泌。從而,小鼠中的Thl樣免疫應(yīng)答可以包括增加的IgG2a 分泌,人類中的Thl樣免疫應(yīng)答可以包括增加的IgGl分泌。Thl和Thl 樣免疫激活也可包括NK細(xì)胞和樹狀細(xì)胞的激活,即涉及細(xì)胞免疫的 細(xì)胞。Thl和Thl樣免疫激活被認(rèn)為反調(diào)節(jié)Th2免疫激活。
本發(fā)明的免疫刺激性ssORN可用于在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)抗原特異性 免疫應(yīng)答。如這里使用的,抗原特異性免疫應(yīng)答是由免疫系統(tǒng)的細(xì)胞 與抗原之間的接觸引起的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。
術(shù)語"抗原"指能夠引起免疫應(yīng)答的分子。術(shù)語抗原廣義地包括 被外源的宿主系統(tǒng)識別的任何類型的分子。抗原包括但不限于微生物 抗原,癌癥抗原和過敏原??乖ǎ幌抻?,細(xì)胞,細(xì)胞提取物, 蛋白質(zhì),多肽,肽,多糖,多糖綴合物,多糖及其它分子的肽和非肽 模擬物,小分子,脂質(zhì),糖脂和碳水化合物。許多抗原實(shí)質(zhì)上是蛋白 或多肽,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)和多肽一般比碳水化合物或脂肪更加抗原性的。
抗原可以是核酸栽體編碼的抗原,或者它可以是抗原本身。在前 一種情況下,核酸載體被施用給個體,而且抗原在體內(nèi)表達(dá)。在后面 的情況中,抗原被直接施用給個體。如這里使用的,核酸載體中沒有 編碼的抗原指不是核酸的任何類型的抗原。例如,在本發(fā)明的一些方 面中,核酸栽體中沒有編碼的抗原是肽或多肽。肽或多肽抗原的主要 氨基酸序列較小的修飾,還可產(chǎn)生與未修飾的對應(yīng)多肽相比,具有基 本上相當(dāng)?shù)目乖钚缘亩嚯?。這種修飾可以是深思熟慮的,如通過定 點(diǎn)誘變,或可以是自發(fā)的。通過這些修飾產(chǎn)生的所有多肽都包括在這 里,只要抗原性仍然存在。肽或多肽可以是,例如,病毒來源的。用 于本發(fā)明的抗原可以是任何長度的,從全長蛋白或多肽的小肽片段到 全長形式。例如,抗原的長度可以小于5個,小于8個,小于10個, 小于15個,小于20個,小于30個,小于50個,小于70個,小于 100個,或更多個氨基酸殘基,只要它刺激特異性免疫應(yīng)答。
在某些實(shí)施方案中,抗原是癌癥抗原。如這里使用的"癌癥抗原"是與腫瘤或癌細(xì)胞表面相關(guān)的化合物,如肽或蛋白,而且當(dāng)在MHC分 子的情況中在抗原遞呈細(xì)胞表面表達(dá)時,其能引起免疫應(yīng)答。癌癥抗 原可以通過制備癌細(xì)胞的粗提物,例如,如Cohen PA等(1994) Ca/ cer
54:1055-8中所述,通過部分純化抗原,通過重組技術(shù),或通過 已知抗原的從頭合成,從癌細(xì)胞制備。癌癥抗原包括但不限于,重組 表達(dá)的抗原,腫瘤或癌癥的免疫原性部分或全部。這些抗原可以分離 的,或重組或通過本領(lǐng)域已知的任何其它方法制備的。
術(shù)語"癌癥抗原"和"腫瘤抗原,,可以互換使用,而且指由癌細(xì) 胞差示表達(dá)的抗原,并因此可以開發(fā)以便用于靶癌細(xì)胞。癌癥抗原是 可能刺激明顯的腫瘤特異性免疫應(yīng)答的抗原。這些抗原的一些是由正 常細(xì)胞編碼的,盡管未必表達(dá)。這些抗原可以表征為其在正常細(xì)胞中 一般沉默的(即,不表達(dá))抗原,只在分化的某些階段表達(dá)的抗原, 以及短暫表達(dá)的如胚胎和胎兒抗原。其它的癌癥抗原由突變體細(xì)胞基 因編碼,如致癌基因(例如,激活的ras致癌基因),抑制基因(例如, 突變體p53),源于內(nèi)部缺失或染色體易位的融合蛋白質(zhì)。其它的癌 癥抗原還可以是由病毒基因編碼的,如RM和DNA腫瘤病毒中攜帶的 那些。腫瘤抗原的例子包括MAGE, MART-1/Melan-A, gp100, 二肽基 肽酶IV (DPPIV),腺嘌呤核苷脫氨酶-結(jié)合蛋白(ADAbp),親環(huán)蛋白b, 結(jié)腸直腸相關(guān)抗原(CRC)-C017-1A/GA733,癌胚抗原(CEA)和它的免疫 原性抗原表位CAP-l和CAP-2, etv6, amll,前列腺特異性抗原(PSA) 和它的免疫原性抗原表位PSA-1, PSA-2,和PSA-3,前列腺特異性膜 抗原(PSMA), T-細(xì)胞受體/ CD3-C鏈,腫瘤抗原的MAGE家族例如, MAGE-Al, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-AIO, MAGE-All, MAGE-A12, MAGE-Xp2 (MAGE-B2), MAGE-Xp3(MAGE-B3),MAGE-Xp4(MAGE-B4),MAGE-Cl, MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-C4, MAGE-C5),腫瘤抗原的GAGE家族(例如,GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7, GAGE-8, GAGE-9), BAGE, RAGE, LAGE-1, NAG, GnT-V, MUM-l, CDK4,酪氨酸酶,p53, MUC 家族,HER2/neu, p21ras, RCAS1, oc-甲胎蛋白,E-桑椹粘著蛋白,ot-連環(huán)蛋白,P-連環(huán)蛋白和y-斑珠蛋白,pl20ctn, gplOOPfflelll7, PRAME, NY-ES0-1, cdc27,腺瘤的多發(fā)性息肉大腸桿菌蛋白(APC), 鈣影蛋白,連接蛋白37, Ig-個體基因型,p15, gp75, GM2和GD2神 經(jīng)節(jié)糖苷,病毒產(chǎn)物如人類乳頭狀瘤病毒蛋白質(zhì),腫瘤抗原的Smad 家族,Imp-1, P1A, EBV編碼的核抗原(EBNA)-1,腦糖原磷酸化酶, SSX-1, SSX-2 (HOM-MEL-40), SSX-1, SSX-4, SSX-5, SCP-1和CT-7 以及c-erbB-2。
與這些腫瘤相關(guān)(而不是專門地)的癌癥或腫瘤和腫瘤抗原,包 括急性淋巴母細(xì)胞性白血病(etv6; amll;親環(huán)蛋白b) , B細(xì)胞淋巴 瘤Ug-個體基因型),神經(jīng)膠質(zhì)瘤(E-桑椹粘著蛋白;oc-連環(huán)蛋白; P-連環(huán)蛋白;Y-斑珠蛋白;pl20ctn),膀胱癌(p21ras),膽癌癥 (p21ras),乳腺癌(MUC家族;隨2/neu; c-erbB-2),宮頸癌(p53; p21ras),結(jié)腸癌(p21ras; HER2/廳;c-erbB-2; MUC家族),結(jié)腸 直腸癌(結(jié)腸直腸相關(guān)的抗原(CRC)-C017-1A/GA733; APC ),絨毛膜 癌(CEA),上皮細(xì)胞癌癥(親環(huán)蛋白b),胃癌(HER2/neu; c-erbB-2; ga733糖蛋白),肝細(xì)胞癌(a-胎兒球蛋白),霍奇金淋巴瘤(lmp-l; EBNA-1)肺癌(CEA; MAGE-3; NY-ES0-1),淋巴樣細(xì)胞起源的白血病
(親環(huán)蛋白b),黑素瘤(pl5蛋白,gp75,癌胚抗原,GM2和GD2 神經(jīng)節(jié)糖苷),骨髓瘤(MUC家族;p21ras),非小細(xì)胞肺癌(HER2/neu; c-erbB-2 ),鼻咽癌(lmp-l; EBNA-1),卵巢癌(MUC家族;證2/neu; c-erbB-2),前列腺癌(前列腺特異性抗原(PSA)和它的免疫原性抗原 表位PSA-1, PSA-2,和PSA-3; PSMA; HER2/neu; c-erbB-2),胰腺 癌(p21ras; MUC家族;HER2/neu; c-erbB-2; ga733糖蛋白),腎癌
(HER2/neu; c-erbB-2 ),宮頸和食管的鱗狀上皮細(xì)胞癌(病毒產(chǎn)物如 人乳頭狀瘤病毒蛋白質(zhì)),睪丸癌(NY-ES0-1) , T細(xì)胞白血病(HTLV-1 抗原表位),以及黑素瘤(Melan-A/MART-l; cdc27; MAGE-3; p21ras; gpl00Pnel117)。
本發(fā)明的免疫刺激性ssORN的長度一般為至少5個核苷酸,而且 不超過100個核苷酸。在不同的某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的免疫刺激性ssORN的長度不超過40個核苷酸,具體地包括長度為5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39或 40個核苷酸。
在某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的免疫刺激性ssORN可以包括聚G序 列,其包括至少4個連續(xù)的G核苷酸,只要ssORN不是完全由聚G組 成。在一個實(shí)施方案中,聚G序列,當(dāng)存在時,占據(jù)ssORN的3,末
^& 。
在一個實(shí)施方案中,本發(fā)明的免疫刺激性ssORN不是完全由聚U 組成。在一個實(shí)施方案中,本發(fā)明的免疫刺激性ssORN不是完全由聚 A組成。在一個實(shí)施方案中,本發(fā)明的免疫刺激性ssORN不是完全由 聚C組成。
本發(fā)明的ssORN可特別用于治療患有癌癥的個體,患有傳染病的 個體,患有自身免疫性疾病的個體,患有敏感癥的個體以及患有哮喘 的個體,但不僅僅限于此。
如這里使用的"癌癥",指細(xì)胞不受控制的生長,其妨礙身體器 官和系統(tǒng)的正常發(fā)揮功能。從它們的原始位置和種子活器官遷移的癌 癥,最終會通過被影響器官的功能性衰竭導(dǎo)致個體的死亡。造血癌癥, 如白血病,能在竟?fàn)幹袆龠^個體中正常的造血間隔,從而導(dǎo)致造血故 障(以貧血,血小板減少和中性白細(xì)胞減少的形式),最終導(dǎo)致死亡。
如這里使用的,患有癌癥的個體指具有可檢測的癌癥細(xì)胞的個體。
轉(zhuǎn)移性病灶是癌細(xì)胞區(qū)域,不同于原發(fā)腫瘤位置,其源于癌細(xì)胞 從原發(fā)腫瘤散布到身體的其它部分。在診斷原發(fā)腫瘤塊的時候,可以 監(jiān)控個體的轉(zhuǎn)移性病灶的存在。最常通過核磁共振成像(MRI)掃描,計 算層析成象(CT)掃描,血液和血小板計數(shù),肝功能研究,胸X-射線, 和骨掃描的單獨(dú)或組合使用,以及監(jiān)控特異性癥狀,來檢測轉(zhuǎn)移性病 灶。
癌癥包括,但不限于,皮膚基底細(xì)胞癌,膽道癌;膀胱癌;骨癌; 腦和CNS癌;乳腺癌;宮頸癌;絨毛膜癌;結(jié)腸和直腸癌;結(jié)締組織癌;消化系統(tǒng)的癌癥;子宮內(nèi)膜的癌癥;食道癌;眼癌;頭部和頸部 的癌癥;胃癌;上皮細(xì)胞內(nèi)的贅生物;腎癌;喉癌;白血病;肝癌; 肺癌(例如小細(xì)胞和非小細(xì)胞);淋巴瘤包括霍奇金的和非霍奇金的淋 巴瘤;黑素瘤;骨髄瘤;成神經(jīng)細(xì)胞瘤;口腔癌(例如,唇,舌,口 腔和咽);卵巢癌;胰腺癌;前列腺癌;成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤;橫紋肌肉 瘤;直腸癌;腎癌;呼吸系統(tǒng)的癌;肉瘤;皮膚癌;胃癌;睪丸癌; 甲狀腺癌;子宮癌;泌尿系統(tǒng)的癌癥以及其它的癌和肉瘤。
如這里使用的"傳染病",指由傳染性的微生物表面,局部或全 身地侵入宿主而引起的紊亂。傳染性微生物包括細(xì)菌,病毒,寄生蟲 和真菌。
如這里使用的,患有傳染病的個體,指已經(jīng)暴露于傳染性的生物 體,而且體內(nèi)具有急性或慢性可檢測水平的生物體的個體。暴露于傳 染性的生物體一般發(fā)生在個體的外表面,例如,皮膚或粘膜的膜,和/ 或指傳染性的生物體穿透個體的外表面。
已經(jīng)在人體中發(fā)現(xiàn)的病毒的實(shí)例包括,但不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒(例 如,人類免疫缺陷性病毒,如HIV-1 (也稱為HDTV-III, LAVE或 HTLV-ni/LAV,或HIV-III;以及其它的分離物,如HIV-LP;細(xì)小核
糖核酸病毒(例如骨髄灰白質(zhì)炎病毒,甲型肝炎病毒;腸道病毒,人 柯薩奇病毒,鼻病毒,人腸道孤病毒);Calciviridae (例如引起胃
腸炎的菌林);披蓋病毒科(例如馬腦炎病毒,風(fēng)疹病毒);Flaviridae (例如登革熱病毒,腦炎病毒,黃熱病毒);冠狀病毒科(例如冠狀 病毒);彈狀病毒科(例如水泡性口膜炎病毒,狂犬病病毒);纖絲
病毒科(例如埃博拉病毒);副粘病毒科(例如副流感病毒,腮腺炎 病毒,麻疹病毒,呼吸道合胞病毒);正粘病毒科(例如流感病毒); Bungaviridae (例如漢坦病素,寄生性野恭病毒,白蛉病毒和內(nèi)羅病 毒);沙粒病毒科(出血熱病毒);呼腸孤病毒科(例如呼腸孤病毒, 環(huán)狀病毒和輪狀病毒);雙核糖核酸病毒科;肝DNA病毒科(乙型肝 炎病毒);微小病毒科(細(xì)小病毒);乳多空病毒科(乳頭狀瘤病毒, 多形瘤病毒);腺病毒科(大多數(shù)腺病毒);皰疹病毒科(單純皰疹
20病毒(HSV) 1和2,水痘帶狀皰滲病毒,巨細(xì)胞病毒(CMV),皰滲病 毒;痘病毒科(天花病毒,牛痘病毒,痘病毒);和虹彩病毒科(例 如非洲豬瘟病毒);以及未分類的病毒(例如A肝炎因子(認(rèn)為是乙 型肝炎病毒的缺陷隨體),非甲非乙型肝炎因子(1類=內(nèi)部傳送;2 類-胃腸外傳送(即丙型肝炎);諾瓦克和相關(guān)病毒,以及星狀病毒)。
革蘭氏陰性與革蘭氏陽性細(xì)菌都用作脊推動物中的抗原。這種革 蘭氏陽性細(xì)菌包括,但不限于,巴斯德菌屬,葡萄球菌屬和鏈球菌屬 菌種。革蘭氏陰性細(xì)菌包括,但不限于,大腸桿菌,假單胞菌屬和沙 門氏菌屬菌種。感染菌的具體實(shí)例包括,但不限于,幽門螺桿菌,布 氏疏螺旋體,侵肺軍團(tuán)菌,分支桿菌屬數(shù)種(例如結(jié)核分支桿菌,鳥 分支桿菌,胞內(nèi)分支桿菌,堪薩斯分支桿菌,戈登分支桿菌),金黃 色葡萄球菌,淋病奈瑟氏菌,腦膜炎奈瑟氏球菌,單核細(xì)胞增生利斯 特氏菌,釀膿鏈球菌(A組鏈球菌屬),無乳鏈球菌(B組鏈球菌屬), 鏈球菌屬(viridans組),糞鏈球菌,牛鏈球菌,鏈球菌屬(厭氧種), 肺炎鏈球菌,病原性的彎曲桿菌屬菌種,腸球菌菌種,流感嗜血桿菌, 炭疽桿菌,白喉棒桿菌,棒狀桿菌屬菌種,紅斑丹毒絲菌,產(chǎn)氣莢膜 梭菌,破傷風(fēng)桿菌,產(chǎn)氣腸桿菌,克雷白氏桿菌,多殺巴斯德氏菌, 畸形菌體菌種,具核梭桿菌,念珠狀鏈桿菌,蒼白密螺旋體,雅司螺 旋體,鉤端螺旋體屬,立克次氏體和伊氏放線菌。
真菌的實(shí)例包括新型隱球菌,莢膜組織胞漿菌,粗球孢子菌,皮 炎芽生菌,沙眼衣原體,白色假絲酵母。
其它的傳染性生物體(即,原生生物)包括瘧原蟲屬數(shù)種如鐮狀 痗原蟲,三日瘧原蟲,卵形瘧原蟲,和間日瘧原蟲以及龔地弓形蟲。
血液帶有的和/或組織寄生蟲包括瘧原蟲屬數(shù)種,果氏巴貝蟲,分歧巴 貝蟲,熱帶利什曼蟲,利什曼原蟲數(shù)種,巴西利什曼蟲,杜氏利什曼 蟲,岡比亞錐蟲和羅德西亞錐蟲(非洲昏睡病),南美洲錐蟲(恰加 斯氏病)和龔地弓形蟲。
文獻(xiàn)中已經(jīng)廣泛描述了其它的醫(yī)學(xué)上相關(guān)的微生物,例如,參見 C. G. A Thomas,船d/c" #/cro6/o/o , Bailliere Tindall, GreatBritain 1983,以其全部內(nèi)容引入這里作為參考。
本發(fā)明的ssORN也可用于治療和預(yù)防自身免疫性疾病。自身免疫 性疾病是這樣一類疾病,其中個體自身的抗體與宿主組織發(fā)生反應(yīng), 或者其中免疫效應(yīng)性T細(xì)胞與內(nèi)源的自身肽自動發(fā)生反應(yīng),并引起組 織破壞。因此免疫應(yīng)答被確定為抗個體自身的抗原,其稱為自體抗原。 自身免疫疾病包括,但不限于,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,克羅恩氏病,多發(fā) 性硬化,系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE),自身免疫腦脊髄炎,重癥肌無力(MG), 橋本氏甲狀腺炎,古德帕斯徹氏綜合征,天皰瘡(例如,尋常天皰瘡), Grave氏病,自身免疫性溶血性貧血,自身免疫性血小板減少性紫癜, 帶有抗膠原蛋白抗體的硬皮病,混合結(jié)締組織病,多肌炎,惡性貧血, 自發(fā)的青銅色皮膚病,自身免疫相關(guān)的不育癥,血管球性腎炎(例如, 新月形的血管球性腎炎,增生性的血管球性腎炎),大皰的類天皰瘡, 舍格倫氏綜合征,胰島素抵抗力和自身免疫糖尿病。
如這里使用的,過敏指對物質(zhì)(過敏原)獲得的超敏反應(yīng),過敏 疾病包括但不限于,濕滲,過敏性鼻炎或鼻炎,花粉熱,變應(yīng)性結(jié)膜 炎,支氣管性哮喘,萼麻疹和食品變應(yīng)性,其它的特應(yīng)性疾病包括特 應(yīng)性皮炎;過敏性反應(yīng);藥物過敏和血管性水腫。過敏性疾病包括但 不限于鼻炎(花粉熱),哮喘,蕁麻疹和特應(yīng)性皮炎。
如這里使用的,患有過敏的個體是具有對過敏原的過敏性反應(yīng)的 個體。
過敏原指能在敏感的個體中誘導(dǎo)過敏或氣喘應(yīng)答的物質(zhì)(抗原)。 過敏原的數(shù)目是巨大的,而且可以包括花粉,昆蟲毒液,動物頭皮屑 塵屑,真菌孢子和藥物(例如青霉素)。天然的,動植物過敏原的例 子包括,但不限于對以下屬特異性的蛋白質(zhì)Canis(家犬);塵螨屬 (例如粉塵螨);Felis ( Felis domesticus ); Ambrosia (Ambrosia artemiisfolia;黑麥草屬(例如黑麥草或多花黑麥草);柳杉(日本 杉P杉);鏈格孢屬(Alternaria alternata );赤楊;榿木屬(Al謂 gul t inoasa );樺屬(疣皮樺);櫟屬(白櫟);齊墩果(Olea europa ); 艾屬(Artemisia vulgaris);車前(例如長葉車前);墻草(例如Parietaria officinalis或Parietaria judaica); 小蠊(例如德 國小蠊);Apis (例如Apis multiflorum) ; Cupressus (例如地中 海柏木,Cupressus arizonica和Cupressus macrocarpa );檜屬(例 如Juniperus sabinoides,鉛筆柏,歐洲刺柏和Juniperus ashei); Thuya(例如Thuya oriental is )5 Chamaecyparis(例如Chamaecyparis obtusa);大蠊屬(例如美洲大蠊);冰草屬(例如匍匐水草);黑 麥屬(例如黑麥);小麥屬(例如小麥);鴨茅屬(例如鴨茅);Festuca (例如牛尾草);Poa (例如草地早熟禾或扁早熟禾);燕麥屬(例如 燕麥);Holcus (例如絨毛草);Anthoxanthum (例如黃花茅);燕 麥草屬(例如燕麥草);Agrostis (例如小糠草);Phleum (例如梯 牧草);Phalaris (例如鶴草);雀稗屬(例如百喜草);高粱(例 如Sorghum halepensis)和Bromus (例如無芒雀麥草)。
如這里使用的,哞喘指呼吸系統(tǒng)紊亂,其特征為炎癥,導(dǎo)氣管狹 窄,和導(dǎo)氣管對吸入劑增強(qiáng)的反應(yīng)性。哮喘經(jīng)常,不過不是專門地, 與特應(yīng)性或過敏性狀況相關(guān)。哮喘的癥狀包括源于氣流阻塞的喘息, 氣喘,胸緊密,以及咳嗽的復(fù)發(fā)性事件。與哮喘相關(guān)的導(dǎo)氣管炎癥可 以通過觀察許多生理變化來檢測,如,導(dǎo)氣管上皮細(xì)胞的剝蝕,基底 膜下的膠原蛋白沉積,浮腫,肥大細(xì)胞激活,炎性細(xì)胞浸潤,包括嗜 中性白細(xì)胞,inosineophil和胸腺依賴性細(xì)胞。由于導(dǎo)氣管炎癥的結(jié) 果,哮喘患者常常經(jīng)歷導(dǎo)氣管極度應(yīng)答,氣流受限,呼吸性癥狀,和 慢性疾病。氣流受限包括急性支氣管收縮,導(dǎo)氣管浮腫,宮頸管粘液 栓形成,和導(dǎo)氣管重新塑造,其常常導(dǎo)致支氣管阻塞。在哮喘的有些 情況中,基底膜下成纖維化會發(fā)生,其導(dǎo)致肺功能中的持久性異常。
如這里使用的,患有哮喘的個體是患有呼吸系統(tǒng)紊亂的個體,其 特征為炎癥,導(dǎo)氣管狹窄,和導(dǎo)氣管對吸入劑增強(qiáng)的反應(yīng)性。哮喘經(jīng) 常,不過不是專門地,與特應(yīng)性或過敏性癥狀相關(guān)。哮喘還經(jīng)常,不 過不是專門地,與接觸引發(fā)劑相關(guān)。如這里使用的"引發(fā)劑"指引起 哮喘的組合物或環(huán)境條件。引發(fā)劑包括,但不限于,過敏原,氣溫酷 寒,鍛煉,病毒感染,S02。本發(fā)明的ssORN可以單獨(dú)使用或者與其它的治療劑組合使用。在 一個實(shí)施方案中,其它的治療劑是本發(fā)明的另一種ssORN。 ssORN和其 它的治療劑可以同時或相繼施用。當(dāng)其它的治療劑同時施用時,它們 可以相同的或單獨(dú)的制劑施用,但是同時施用。當(dāng)其它的治療劑和 ssORN暫時是分離的時,其它的治療劑彼此以及與ssORN相繼施用。 這些化合物施用之間的時間間隔可以為幾分鐘或者可以更長。其它的 治療劑包括,但不限于,抗微生物劑,抗癌劑,抗過敏劑,等等。
本發(fā)明的ssORN可與抗微生物劑一起施用給個體。如這里使用的, 抗微生物劑,指天然存在的或合成的化合物,其能殺死或抑制傳染性 微生物??捎糜诒景l(fā)明的抗微生物劑的種類取決于個體被感染的或處 于成為被感染的風(fēng)險中的微生物的種類??刮⑸飫┌?,但不限于, 抗菌劑,抗病毒劑,抗真菌劑和抗寄生蟲劑。短語如"抗感染劑",
"抗菌劑","抗病毒劑","抗真菌劑","抗寄生蟲劑"和"殺 寄生蟲劑",對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說具有很確定的含義,而且在 標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥教科書中有定義。簡而言之,抗菌劑殺死或抑制細(xì)菌,而且 包括抗生素以及具有類似功能的其它的合成或天然化合物。抗生素是 低分子量分子,其由細(xì)胞如微生物,生產(chǎn)作為次級代謝產(chǎn)物。 一般, 抗生素干擾一種或多種細(xì)菌功能或結(jié)構(gòu),其是微生物特異性的,而且 宿主細(xì)胞中不存在??共《緞┛梢詮奶烊粊碓捶蛛x或者合成,而且可 用于殺死或抑制病毒。抗真菌劑用于處理表面的真菌感染以及條件性 病原微生物,和初級的全身性真菌感染??辜纳x劑殺死或抑制寄生 蟲。
可用于人給藥的抗寄生蟲劑,也稱為殺寄生蟲劑的例子包括,但 不限于,丙硫咪唑,兩性霉素B,芐硝唑,硫雙二氟酚,氯喹HC1,氯 會磷酸鹽,氯林肯霉素,去氫吐根堿,乙胺嗪,二氯散糠酸酯,依氟 鳥氨酸,呋喃唑酮,糖皮質(zhì)激素,氯氟菲醇,雙碘喹啉,異阿凡曼菌 素,甲苯咪唑,甲氟喹,葡甲胺,銻酸鹽,米拉索普,美曲磷脂,甲 硝噠唑,貝螺殺,硝呋噻氧,羥胺硝喹,巴龍霉素,戊烷脒羥乙基磺 酸鹽,哌溱,吡嗇酮,伯氨喹啉磷酸鹽,氯胍,雙羥萘酸喹嘧啶,pyrimethanmine-氨碌酰,pyrimethanmine-周效碌胺,奎吖因HC1, 硫酸奎寧,葡糖酸查尼定,螺旋霉素,葡萄糖酸銻鈉,蘇拉明,四環(huán) 素,強(qiáng)力霉素,噻苯咪唑,磺甲硝咪唑,trimethroprim-磺胺甲基-5 異惡唑和錐蟲胂胺,其中的一些單獨(dú)使用或與其它的聯(lián)合使用。
抗細(xì)菌劑殺死或抑制細(xì)菌的生長或功能。 一大類抗菌劑是抗生素。 抗生素,其可有效的殺死或抑制各種各樣的細(xì)菌,稱為廣i脊抗菌素。 其它種類的抗生素能顯著有效的抗格蘭氏陽性或革蘭氏陰性類的細(xì) 菌。這些種類的抗生素稱為窄鐠性的抗生素。能有效的抗單一生物體 或疾病,而不抗其它種類的細(xì)菌的其它抗生素,稱為有限i普抗生素。 有時根據(jù)它們的主要作用方式,對抗菌劑進(jìn)行分類。 一般,抗菌劑是 細(xì)胞壁合成抑制劑,細(xì)胞膜抑制劑,蛋白質(zhì)合成抑制劑,核酸合成或 功能性抑制劑,以及竟?fàn)幮砸种苿?br> 抗病毒劑是這樣的化合物,其防止病毒對細(xì)胞的感染,或病毒在 細(xì)胞內(nèi)部復(fù)制。存在的抗病毒劑比抗菌劑少,因?yàn)椴《緩?fù)制的過程與 宿主細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制是如此密切相關(guān),以致非特異性的抗病毒劑對 宿主將常常是有毒的。病毒感染過程中有幾個階段可以被抗病毒劑阻 斷或抑制。這些階段包括,病毒對宿主細(xì)胞的附著(免疫球蛋白或結(jié) 合肽),病毒的脫殼(例如氨基三環(huán)癸烷),病毒mRNA的合成或翻譯 (例如干擾素),病毒RNA或DNA的復(fù)制(例如核苷酸類似物),新 的病毒蛋白質(zhì)的成熟(例如蛋白酶抑制劑),和病毒的出芽和釋放。
核苷酸類似物是合成化合物,其與核苷酸相似,但是其具有不完 全的或異常的脫氧核糖或核糖基團(tuán)。 一旦核苷酸類似物處于細(xì)胞中, 它們被磷酸化,產(chǎn)生形成的三磷酸鹽,其與正常的核苷酸竟?fàn)幷系?病毒DNA或RNA中。 一旦核苷酸類似物的三磷酸鹽形式整合到增長的 核酸鏈中,它引起與病毒聚合酶的不可逆結(jié)合,并從而導(dǎo)致鏈終止。 核普酸類似物包括,但不限于,無環(huán)鳥苷(用于治療單純皰疹病毒和 水痘-帶狀皰滲病毒),gancyclovir (用于治療巨細(xì)胞病毒),碘苷, 病毒唑(用于治療呼吸道合胞病毒),二脫氧肌苷,2,3-二脫氧胞嘧 啶核苷,疊氮胸苷(艾滋病防護(hù)藥),咪喹莫特和resiffliquimod。干擾素是由感染病毒的細(xì)胞以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。干擾 素通過與受感染細(xì)胞相鄰的細(xì)胞上的特異性受體結(jié)合發(fā)揮作用,導(dǎo)致
細(xì)胞中的改變,其保護(hù)細(xì)胞免于被病毒感染。a和p-干擾素也誘導(dǎo)受 感染細(xì)胞表面上的I類和II類MHC分子的表達(dá),導(dǎo)致增加的抗原呈 遞用于宿主免疫細(xì)胞識別。oc和p-干擾素作為重組形式是有效的,而 且已經(jīng)用于治療慢性乙型和丙型肝炎感染。抗病毒治療有效的劑量, 干擾素具有嚴(yán)重的副作用如發(fā)燒,不適和體重減輕。
可用于本發(fā)明的抗病毒劑包括,但不限于免疫球蛋白,氨基三環(huán) 癸烷,干擾素,核苷酸類似物和蛋白酶抑制劑??共《镜木唧w的實(shí)例 包括,但不限于乙酰嗎喃;無環(huán)鳥苷;無環(huán)鳥苷鈉;阿德福韋;阿洛 夫定;阿韋舒托;鹽酸金剛烷胺;珠囊殼素;阿立酮;阿的維定甲磺 酸鹽;阿夫立定;西多福韋;西潘茶堿;鹽酸阿糖胞苷;地拉夫定甲 磺酸鹽;脫氧無環(huán)鳥苷;2:3'-雙脫氧肌苷;二惡沙利;依度尿苷; 恩韋拉登;恩韋將;泛西洛維;抑感靈鹽酸鹽;非西他濱;非阿尿苷; 膦酸利酯;膦甲酸鈉;Fosfonet鈉;9-(1, 3-二羥-2-丙氧甲基)鳥嘌 呤;9-(l,3-二羥-2-丙氧甲基)鳥噪呤鈉;碘苷;乙氧二羥丁酮;拉米 夫定;洛布卡韋;曱氧笨異喹鹽酸鹽;甲吲噻腙;奈韋拉平;噴西洛 維;吡羅達(dá)韋;病毒唑;鹽酸金剛乙胺;沙奎那韋甲磺酸鹽;索金剛 胺鹽酸鹽;索利夫定;匐支青霉菌素;雙脫氧胸苷;雙二乙氨乙基芴 酮鹽酸鹽;三氟尿苷;伐昔洛韋鹽酸鹽;阿糖腺苷;阿糖腺苷磷酸酯; 阿糖腺普磷酸鈉;韋羅肟;2',3'-雙脫氧胞苷;疊氮胸苷和凈韋肟。
抗真菌劑用于治療和預(yù)防傳染性的真菌??拐婢鷦┩ㄟ^它們 的作用機(jī)理進(jìn)行分類。 一些抗真菌劑作為細(xì)胞壁抑制劑通過抑制葡萄 糖合酶發(fā)揮作用。這些包括,但不限于,basiungin/ECB。其它的抗真 菌劑通過使膜完整性不穩(wěn)定來發(fā)揮作用。這些包括,但不限于,咪唑 類,如克霉唑,絲他康唑,氟康唑,依曲康唑,酮康唑,咪康唑,和 伏立康唑,以及FK 463,兩性霉素B, BAY 38-9502, MK 991,普拉米 星,UK 292,布替那非和特比萘芬。其它的抗真菌劑通過破壞幾丁質(zhì) (例如幾丁質(zhì)酶)或免疫抑制(501乳骨劑)發(fā)揮作用。本發(fā)明的ssORN也可以與抗癌治療一起施用。抗癌治療包括癌藥 物,放射和外科手術(shù)方法。如這里使用的,"癌藥物"指施用給個體 用于治療癌癥的用途的藥劑。如這里使用的,"治療癌癥"包括防止 癌癥的發(fā)展,減輕癌癥的癥狀,和/或抑制已形成的癌癥的生長。在其 它的方面,癌癥藥物被施用給處于生長癌癥的風(fēng)險中個體,以便降低 生長癌癥的風(fēng)險。這里描述了用于治療癌癥的各種類型的藥物。為了 本說明書的目的,癌癥藥物被分為化療劑,免疫治療劑,癌癥疫苗, 激素治療和生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物。
化療劑可以選自氨曱蝶呤,長春新堿,阿霉素,順氯氨鉑,含有 非糖物質(zhì)的氯乙基硝基脲,5-氟尿嘧啶,絲裂霉素C,爭光霉素,亞 德利亞霉素,氮烯唑胺,紫杉酚,fragyline, Megla邁ine GLA,戊柔 比星,卡莫司汀和poliferposan, MMI270, BAY 12-9566, RAS famesyl 轉(zhuǎn)移酶抑制劑,famesyl轉(zhuǎn)移酶抑制劑,MMP, MTA/LY231514 , LY264618/Lometexo1, Glamolec, CI-994, TNP-470,和美新/托泊替 康,PKC412,伐司樸達(dá)/PSC833,諾消靈/Mitroxantrone, Metaret/ 蘇拉滅,巴馬司他,E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, Incel/VX-710, VX-853, ZD0101,ISI641,0DN 698,TA 2516/Marmistat, BB2516/Marmistat, CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f,乳桿菌 制劑DP 2202, FK 317,溶鏈菌/0K-432, AD 32/戊柔比星,氯化鍶 /鍶衍生物,Temodal/替莫唑胺,阿霉素脂質(zhì)體/脂質(zhì)體亞德利亞霉素, Yewtaxan/紫杉醇,紫杉盼/紫杉醇,希羅達(dá)/卡培他濱,氟鐵龍/去氧 氟尿苷,Cyclopax/口服的紫杉醇,口服的紫杉烷,SPU-0W/順氯氨鉑, HMR 1275/Flavopiridol, CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/RAS致 癌基因抑制劑,BMS-182751 /口服鉑,UFT (Tegafur /尿嘧啶),左 旋咪唑/左旋四咪唑,恩尿嘧啶/776C85/5FU增強(qiáng)劑,依立替康/左旋 四咪唑,鹽酸依立替康和山梨醇注射劑/依立替康, Tumodex/Ralitrexed,克拉立平/克拉屈濱,Paxex/紫杉醇,鹽酸多 柔比星脂質(zhì)體/脂質(zhì)體亞德利亞審素,Caelyx/脂質(zhì)體亞德利亞霉素, 福達(dá)華/氟達(dá)拉濱,Pharmarubicin/表柔比星,DepoCyt, ZD 1839, LU79553 /雙Naphtalimide, LU 103793 /多拉司他汀,Caetyx/脂質(zhì)體 亞德利亞霉素,健擇/吉西他濱,ZD 0473/Anormed, YM 116,硪種子, CDK4和CDK2抑制劑,PARP抑制劑,D4809/Dexifosamide, Ifes/鎂 鈉針劑/異磷酰胺,威猛/表鬼臼毒噻吩糖苷,鉑爾定/卡鉑,順鉑/ 順氯氨鉑,足葉乙苷/鬼臼亞乙苷,ZD 9331,紫杉特爾/紫杉萜,鳥嗓 呤阿糖腺苷的前體藥物,紫杉烷類似物,亞硝基脲,烷化劑如 melphelan和環(huán)磷酰胺,氨魯米特,天冬酰胺酶,白消安,卡鉑, Chlorombucil,阿糖胞苷HC1,放線菌素,道諾紅菌素HC1,雌氮芥磷 酸酯鈉,鬼臼亞乙苷(VP16-213) , 5-氟脫氧尿苷,氟尿嘧啶(5-FU), 氟他胺,羥基脲,異磷酰胺,干擾素oc-2a, cc-2b,醋酸亮丙瑞林醋 酸鹽(LHRH-釋放因子類似物),環(huán)己亞硝脲(CCNU), 二氯甲二乙胺HC1 (氮芥子氣),巰基嘌呤,巰乙磺酸鈉,米托坦(o.p, -DDD),米托 蒽醌HC1,奧曲肽,光輝霉素,普魯千肼HC1,鏈脲霉素,枸櫞酸它莫 西芬,2-氨基嘌呤-6-硫醇,硫替派,硫酸長春堿,安丫啶(m-AMSA), 阿扎胞苷,促紅細(xì)胞生成素,六甲三聚氰胺(H腿),白細(xì)胞介素2,丙 脒腙(甲基-GAG;甲基乙二醛雙丙咪腙;MGBG),噴司他丁 ( 2,脫氧 柯福霉素),曱基環(huán)己亞硝脲(曱基-CCNU),表鬼臼毒噻吩糖苷(VM-26)
和去乙酰長春酰胺硫酸鹽,但是不是如此有限。
免疫抑制劑選自Ributaxin,赫賽汀,Quadramet,單抗17-1A, IDEC-Y2B8, BEC2, C225, 0ncolym, SMART M195, ATRAGEN, 0varex, Bexxar, LDP-03, ior t6, MDX-210, MDX-ll, MDX-22, 0V103, 3622 W94,抗VEGF,賽尼哌,MDX-220, MDX-447, MELI醒UNE-2, MELI腿UNE-1 , CEACIDE, Pretarget, NovoMAb-G2, TNT , Gliomab-H, GNI-250 , EMD-72000, LymphoCide, CMA 676, Monopharm-C, 4B5, ioregf.r3, ior c5, BABS,抗FLK-2, MDX-260, ANA Ab, SMART 1D10 Ab, SMART ABL 364 Ab和ImmuRAIT-CEA,但是不是如此有限。
癌癥疫苗可以選自EGF,抗獨(dú)特型癌癥疫苗,Gp75抗原,GMK黑 素瘤疫苗,MGV神經(jīng)節(jié)苷脂綴合物疫苗,Her2/neu, Ovarex, M-Vax, O-Vax, L-Vax, STn-KHL theratope, BLP25 (MUC-1),脂質(zhì)體獨(dú)特型疫苗,黑素瘤疫苗,肽抗原疫苗,毒素/抗原疫苗,基于MVA的疫苗, PACIS, BCG疫苗,TA-HPV, TA-CIN, DISC-病毒和ImmuCyst /TheraCys, 但是不是如此有限。
本發(fā)明的ssORN可與哮喘/過敏性藥物一起施用給個體。如這里使 用的,"哞喘/過敏性藥物"是一種組合物,其降低哮喘或過敏性反應(yīng) 的癥狀,防止哞喘或過敏性反應(yīng)的發(fā)展,或抑制哮喘或過敏性反應(yīng)。 診斷和處理津喘的指南中描述了用于治療哞喘和過敏的各種藥物,專 家組報告2, NIH
發(fā)明者S·鮑爾 申請人:科利制藥公司
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