專利名稱：：具有活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒的制作方法具有活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒相關(guān)申請0001本申請要求根據(jù)35U.S.C.§119而基于在2005年10月12日提交的美國臨時申請序號60/726,494的優(yōu)先權(quán)。發(fā)明領(lǐng)域0002本發(fā)明涉及具有活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒。具體地，本發(fā)明涉及含有活性劑的熱穩(wěn)定、持久顆粒，該顆粒特別地適合包含在蒸汽處理過程中，包括微丸化和壓片過程以及飼料的蒸汽處理過程；而活性劑的活性沒有明顯損失。這種穩(wěn)定的、持久顆粒具有適合釋放活性劑的溶解曲線，以便給其預定目標提供效率。在未成微丸的混合物中存儲和蒸汽處理之后，活性劑的活性被保留下來。發(fā)明背景0003在動物飼料中使用活性劑，例如酶，是普遍的。酶眾所周知地可以提高詞料消化率，降低飼料中抗營養(yǎng)因素，以及提高動物生產(chǎn)力。眾所周知在工業(yè)中，酸性和堿性飼料成分以及動物飼料的具體成分，包括，但不限于微量礦物質(zhì)、有機或無機酸或堿、還原糖、以及吸濕性物質(zhì)，特別是氯化膽堿和氯化鈉，對活性劑具有不良作用，例如其他維生素、蛋白質(zhì)、抗微生物劑、益菌生(prebiotics)、益生菌(probiotics)和酶；并且，還眾所周知一些飼料生產(chǎn)過程對于活性劑是不利的。0004在工業(yè)中存在一個問題，要提供保護性制劑，以便活性劑在未成微丸態(tài)的動物飼料混合物中適合儲存，例如在可能是酸性的或堿性的以及含有對活性劑的穩(wěn)定性具有相反作用的成分的基礎(chǔ)混合物或預混和物中。關(guān)于不良作用的一個機理被認為是氧化-還原反應(yīng)(oxidation-reduction(redox))，在預混和物中的氧化性化合物與還原性化合物——在出現(xiàn)水時——發(fā)生氧化-還原反應(yīng)。一份在BASFTechnicalBulletinNU0013上報告的研究報道二種可商業(yè)獲得的酶，在飼料預混合物中儲存3周之后，其含有顆粒留存活性相應(yīng)地為86%和81%;在飼料預混合物中儲存6周之后，其含有顆粒留存活性相應(yīng)地為55%和33%。目前一些用于飼料工業(yè)的酶制造商建議，如果酶被儲存在預混合物中，則需要用阻隔性包裝被保護，或者它們與預混合物被分別儲存，或者它們僅被儲存在預混合物中很短的一段時間。0005另外，用于食品和飼料中的很多活性劑是熱不穩(wěn)定的。在工業(yè)上，特別是在動物飼料微丸(pellet)的生產(chǎn)中，酶的熱穩(wěn)定性以及能在動物飼料生產(chǎn)加熱工藝步驟中存活下來的能力是個問題。當與干燥飼料混合物相比，飼料微丸具有有利工業(yè)的性質(zhì)，例如提高的飼料質(zhì)量，降低了病原體，制造過程中的更低粉塵水平，易操作性，和更均勻的成分劑量。優(yōu)選的工業(yè)微丸化過程利用蒸汽注射，在被已知為調(diào)理過程里，其在微丸化步驟前加入水份并且將溫度升高，然后微丸化步驟強制蒸汽加熱飼料成分、或經(jīng)過調(diào)理的配合粉料(調(diào)質(zhì)料漿(conditionedmash))通過沖模(die)。微丸化過程溫度可以從大約70'C到9(TC，或更高。0006酶是重要的飼料成分，必須能夠承受在微丸化過程中使用的日益增高的工藝溫度，具體是那些使用膨化器的過程，而同時持續(xù)輸送體內(nèi)效率。0007鑒于用于微丸化過程的蒸汽、溫度和壓力，酶和其他活性劑的穩(wěn)定性是個問題，其如以下事實示例飼料酶經(jīng)常作為穩(wěn)定的液體產(chǎn)品被提供給工業(yè)，為避免酶鈍化，在微丸過程之后這種穩(wěn)定的液體產(chǎn)品被加入到飼料微丸中。例如，當酶以噴涂到微丸上的方式，被用于后微丸化過程時(postpelleting)，均勻的劑量是個問題，以及將酶加入到后-微丸的裝備費用很高?？蛇x地，液體酶制劑，或干燥混合酶制劑可以在微丸化過程之前被加入到混合物。在一些情況，為補償在微丸化過程中的損失，加入比需要的更多水平的酶。0008片劑形成過程也利用壓縮力，以及可能或可能不應(yīng)用熱量。片劑被用于家用護理工業(yè)，例如，在洗衣房中、碟子和表面清潔應(yīng)用。0009在食品、詞料、和家用護理工業(yè)方面，需求具有活性成分的穩(wěn)定、持久顆粒劑，該顆粒作為制劑的組成成分需要經(jīng)歷蒸汽處理，例如，微丸化過程和壓片過程，而活性劑活性沒有明顯損失并且該顆粒具有適于釋放活性成分的溶解特性，以便為它們的預計目標提供效率。還需求，當具有活性成分的穩(wěn)定、持久顆粒劑；當其被用作動物飼料制劑的成分時，例如，在包含對活性劑具有相反作用成分的未微丸化的混合物中時，保留它們的活性。發(fā)明概述0010本發(fā)明涉及用于飼料組合物的顆粒，包括核(芯，core);活性劑；和至少一層包衣，所述顆粒的活性劑在選自下述的一種或更多情況后，至少存留50%活性，至少存留60%活性，至少存留70%活性，至少存留80%活性，情況為a)詞料微丸化過程，b)蒸汽-加熱飼料預處理過程，c)存儲，d)作為成分在未微丸化的(造粒，?；?，pdlet)混合物中的存儲，e)作為成分在飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混和物中的存儲，飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混和物包括至少一種化合物，該化合物選自微量礦物質(zhì)、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿、和能導致酸性或堿性詞料基礎(chǔ)混合物或預混和物的化合物。0011在本發(fā)明的一個實施方式中，被提供用于動物飼料的顆粒包括核；活性劑，當顆粒是一種成分的情況下，在儲存和蒸汽-加熱微丸化過程之后，顆粒的活性劑留存至少80%的活性；水分屏障包衣(潮氣隔離包衣(moisturebarriercoating));和至少是顆粒的25%w/w的水分水合包衣(moisturehydratingcoating)，在蒸汽-加熱微丸化過程之前，顆粒含有少于0.5的水活性。0012在本發(fā)明的另一個實施方式中，提供了動物飼料成分，包括包含核的顆粒；環(huán)繞核的活性劑；和至少一層環(huán)繞活性劑的包衣，活性劑在選自下述一個或更多情況后，至少存留50%活性，至少存留60%活性，至少存留70%活性，至少存留80%活性，情況為a)飼料微丸化過程，b)蒸汽-加熱詞料預處理過程，c)存儲，d)作為成分在未制丸混合物中的存儲，e)作為成分在飼料基礎(chǔ)混合物或詞料預混和物中的存儲，詞料基礎(chǔ)混合物或飼料預混和物包括至少一種化合物，所述化合物選自微量礦物質(zhì)、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿和能導致酸性或堿性飼料基礎(chǔ)混合物或預混和物的化合物。0013在本發(fā)明為生產(chǎn)用于飼料的包括活性劑的顆粒之方法中，所述方法包括準備具有核、至少一種活性劑、和至少一層包衣的穩(wěn)定顆粒;將穩(wěn)定顆粒與a)稀釋劑、b)基礎(chǔ)混合物、c)預混和物、和d)用于微丸化過程的飼料混合物之一種或多種混合在一起。0014在本發(fā)明的另一個實施方式中，提供了制備穩(wěn)定顆粒的方法，該顆粒含有在詞料預混和物中進行存儲的酶，其中詞料預混和物中包含氯化膽堿，該方法包括提供核材料和酶，酶被分散到核材料或?qū)痈驳胶瞬牧现?；在核材料與酶上應(yīng)用潮氣吸收材料(水分水合材料，moisturehydratingmaterial)，以形成是穩(wěn)定顆粒的至少25%w/w的層；再用潮氣阻擋材料(水分屏障材料，moisturebarriermaterial)涂布該層，以形成是顆粒的至少2%w/w的包衣，在選擇的條件下應(yīng)用與進行包衣，因此穩(wěn)定顆粒的水活性是少于0.5的。0015上面實施方式中的穩(wěn)定、持久顆粒，在蒸汽加熱微丸化過程或預處理過程條件下——其中升高微丸化材料的溫度高至85'C到大約9(TC保持達到大約幾分鐘，留存至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、和至少95%的活性劑活性。本發(fā)明的穩(wěn)定、持久顆粒特別適合作為動物詞料微丸中的成分，以及作為家用護理片劑中的成分。0016在本發(fā)明的實施方式中，穩(wěn)定持久顆粒包括潮氣吸收材料，其至少占顆粒的大約55%w/w。0017在本發(fā)明的其他實施方式中，穩(wěn)定持久顆粒具有潮氣吸收包衣，其占顆粒的至少大約25%、大約30%、大約35%、大約40%、大約50%、和大約60°/。w/w，以及潮氣隔離包衣，其包含顆粒的至少大約2%到大約40%w/w、大約2%到大約10%、大約2%到大約7%、大約5%到大約15%。0018在本發(fā)明的實施方式中，穩(wěn)定持久顆粒包括三層保護包衣，其中一層包衣占顆粒大約20%到25%w/w的潮氣吸收材料和其他二層包衣占顆粒大約5%到15%w/w的潮氣阻擋材料。在這個實施方式中，為給潮氣阻擋材料退火，熱退火工藝程序步驟被使用。0019在本發(fā)明的實施方式中，穩(wěn)定持久顆粒包括硅酸鹽或粘土核和在基體里的內(nèi)在熱穩(wěn)定活性劑；可選的無機鹽潮氣吸收保護性包衣；以及，可選的潮氣隔離包衣。在這個實施方式中，所述的可選擇的包衣占顆粒大約0%到大約15%w/w。0020本發(fā)明進一步包括制造穩(wěn)定持久顆粒以及飼料微丸；寵物食品；和家用護理和含有這種穩(wěn)定、持久顆粒的食物片劑的方法。發(fā)明詳述0021本發(fā)明提供含有活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒，當其被加入到制劑中，在制劑經(jīng)歷，例如，加熱蒸汽預處理過程，飼料微丸化過程和壓片過程時，可以耐受高溫和壓縮壓力，而保持適合釋放活性劑的溶解特性，以便能夠為它們的預定目標提供效率。0022本發(fā)明的第一方面出人意料地提供具有飼料活性劑的穩(wěn)定持久顆粒，其能承受蒸汽預處理過程、和飼料微丸化蒸汽-加熱過程溫度和壓力，而保持適合釋放活性劑的溶解特性，以便提供預計的效率。在這個實施方式中，優(yōu)選地，顆粒成分被批準在飼料中使用。0023本發(fā)明的第二個方面提供具有酶的穩(wěn)定持久顆粒，其能承受蒸氣-加熱飼料預處理過程、和微丸化過程溫度和壓力，而保持釋放酶以提供體內(nèi)生物利用度效率的溶解特性。在這個實施方式中，顆粒成分可以被動物食用，以及優(yōu)選地，并且是可以消化的。0024本發(fā)明的第三個方面提供具有活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒，其用于動物飼料未微丸化混合物，例如，預混和物。在未微丸化混合物喂給動物之前，當未微丸化混合物被加熱和蒸汽預處理時，或未微丸化混合物被微丸化之后，該穩(wěn)定持久顆粒保持效能。在本發(fā)明的這個方面中，令人驚喜地，存儲在含有對酶穩(wěn)定性不利成分的未微丸化混合物中的活性劑保持活性。在本發(fā)明的這個方面，不希望被任何特別的理論所限制，可以相信，在顆粒中的潮氣吸收材料與顆粒中的潮氣阻擋材料相結(jié)合，扮演著保護活性成分，從而不受未微丸化的混合物中之不利成分的影響。潮氣吸收材料延緩或降低水擴散到活性劑的區(qū)域中的速率或程度。并且潮氣阻擋材料排除水。潮氣吸收材料與潮氣阻擋材料的結(jié)合提供了機械穩(wěn)定性，以便在潮氣阻擋材料層被損壞事件中，進一步保護活性劑。此外，本發(fā)明的一些實施方式中，潮氣阻擋材料被使用，它們僅僅在極端情況下氧化，因此，在與潮氣吸收材料結(jié)合的情況下，顆粒是化學性穩(wěn)定的，因為據(jù)信顆粒在未微丸化混合物中的存儲期間，氧化還原反應(yīng)被降低了。0025本發(fā)明的第四個方面提供具有活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒，其能承受壓片程序，而顆粒保持釋放活性劑的溶解特性，以便在家用護理應(yīng)用，例如，洗衣間、碟子、和表面清潔應(yīng)用方面，以提供效能。在這個實施方式中，顆粒成分包括不能被動物消化的原料，例如，表面活性劑、沸石、漂白材料、和色料。0026本發(fā)明的穩(wěn)定、持久顆粒是球形或近似球形的顆粒，盡管其他形狀，例如，圓盤形、橢圓形、圓柱形和長方形，如果期望則可以被使用。顆粒具有環(huán)繞活性劑的一個或更多個保護層。0027在用于微丸化過程或壓片過程，或在被用在干性飼料混合物中以及在未微丸的粉料中之前，顆?？梢耘c干性成分，例如，飼料或家用護理制劑，或未微丸化混合物，例如，預混和制劑混合在一起。顆粒特別地適合用于飼料微丸化生產(chǎn)過程中，并且也適合用于食品，包括寵物食品，以及用在家用護理片劑生產(chǎn)過程中。0028除非以其他方式定義，否則本文所用的所有技術(shù)及科學術(shù)語都具有與本發(fā)明相關(guān)的具有本領(lǐng)域的普通技術(shù)的人員所普遍理解的相同含義。如在說明書和權(quán)利要求書中所用，單數(shù)"一個(a)"、"一種(an)"和"該"包括復數(shù)指代，除非上下文清楚地指明其他情況。例如，術(shù)語顆?？梢园ㄔS多顆粒。0029對于本公開內(nèi)容的目的，"活性劑(activeagent)"可以是任何物質(zhì)，其被加入到穩(wěn)定、持久顆粒中?；钚詣┛梢允巧飳W上的有生命物質(zhì)，食品或飼料成分，抗微生物劑，抗菌素取代劑，益菌生，益生菌，農(nóng)業(yè)化學成分，例如殺蟲劑、化肥或除草劑；藥物成分或家用護理活性成分，或它們的混合物。在一個優(yōu)選實施方式中，活性成分是蛋白質(zhì)，酶，肽，多肽，氨基酸；碳水化合物，脂類或油，維生素，輔-維生素，或激素，或它們的混合物。在另一個實施方式中，活性成分是酶，漂白劑，漂白劑催化劑，香料，或其他生物活性成分。內(nèi)在熱穩(wěn)定活性劑被本發(fā)明所包括，并且在本發(fā)明的顆粒中顯示增強的熱穩(wěn)定性。作為可選擇的，當提供含有內(nèi)在熱穩(wěn)定活性劑的顆粒時，更少的包衣材料可以被使用；并且，這里提供的保護包衣材料數(shù)量主要是針對非內(nèi)在熱穩(wěn)定的活性劑予以選擇的。0030用于食品和飼料應(yīng)用而言，大多數(shù)優(yōu)選活性成分是酶，肽和多肽，氨基酸，抗生物劑，內(nèi)臟健康促進劑，維生素，以及它們的混合物。0031任何酶可以被使用，并且非限定性的酶名單包括肌醇六磷酸酶，木聚糖酶，p-葡聚糖酶，磷酸(酯)酶，蛋白酶，淀粉酶(a或P或葡糖糖化酶)纖維素酶，脂肪酶，角質(zhì)酶，氧化酶，轉(zhuǎn)移酶，還原酶，半纖維素酶，甘露聚糖酶，酯酶，異構(gòu)酶，果膠酶，乳糖分解酵素，過氧(化)物酶，漆酶，其他氧化還原酶和它們的混合物。0032特別地優(yōu)選的酶包括從里氏木霉(7Hc/w&m7"Me^')中得到的木聚糖酶和從里氏木霉中得到的變異體木聚糖酶，兩者可以從DaniscoA/S，Denmark禾口/或GenencorInternational,Inc.,PaloAlto,California獲得，或者在EP1222256B1中所描述的內(nèi)在熱穩(wěn)定性木聚糖酶，以及從黑曲霉(^wg〃/Mw/ger)、白曲霉(j/erg/〃wsA:a窗c/n'/)，塔賓曲霉(爿s/ergZ〃1^勵/gms/s)芽包桿菌(J5a"7/ws">cw/<ms),短小芽孢桿菌(Ba"'〃ws/7wm7ws)，枯草芽孢桿菌(5a"'〃附5T^"7&)5iVeoca〃/附aymx/^z/n'darww(tK生真菌)，青霉菌(戶em.c/〃/wms/ec/es),變辛S青鏈霉菌d一函yc&s//v油ra),熱紫鏈霉菌(5Vr，麵yces/Aen77oWo/acews),褐色高顯單f包菌(77zermomowos/o/^/ksca)，木徽菌(7Wc/zofiferma/zarz/aww附)，里氏木霄(rn'c/zotfermareesw.),l錄木霄獲(Tht'c/zoii^vw"Wr/A)得的其他木聚糖酶；肌醇六磷酸酶的實例是FinaseL⑧(芬拿斯植酸酶L⑧)，是一種從曲霉菌某種U/^g飾H/0得到的肌醇六磷酸酶，可以從ABEnzymes，Darmstadt，德國獲得；PhyzymeTMXP，是一種來源于E.Coli的肌醇六磷酸酶，可以從Danisco，Copenhagen,Denmark獲得，以及其他肌醇六磷酸酶從，例如，下面種類中獲得木霉菌(Trichoderma),青霉菌(Penicillium)，鐮刀菌(Fusarium),布丘氏菌(Buttiauxella),擰檬酸桿菌(Citrobacter)，腸桿菌(Enterobacter)，青霉菌屬(Pencillium)，腐質(zhì)霉(Humicola)，桿菌(Bacillus)，禾卩Peniophora。0033纖維素酶的實例是MultifectBGL，是一種纖維素酶(P葡聚糖酶)，可以從DaniscoA/S，Denmark中獲得，和其他纖維素酶，從例如曲霉菌(Aspergillus)，木霉菌(Trichode腿)，青霉菌(Penicillium)，腐質(zhì)霉(Humicola)，桿菌(Bacillus)，纖維單胞菌屬(Cellulomonas)，青霉菌(Pencillium)，熱單孢子(Thermomonospore)，梭菌(Clostridium)，以及肉座菌屬(Hypocrea)的物種獲得。在US20060193897A1中描述的纖維素酶和內(nèi)切葡聚糖酶也可以被使用。淀粉酶可以從，例如，從種類，例如，曲霉菌(Aspergillus)，木霉菌(Trichoderma)，青霉菌(Pencillium)，桿菌(Bacillus)，例如，枯草芽孢桿菌，嗜熱脂肪芽孢桿菌(及細涵簡opMw)，豆形桿菌(5./e咖)，地衣芽孢桿菌(5.//c/zem/wvm'5)，凝結(jié)芽孢桿菌(及coag"/a/w)，以及淀粉液化芽孢桿菌(Aam_y/o%Me/a"'ew)中獲得。適合的真菌淀粉酶可以從曲霉菌"wwgV/w)，例如，米曲霉".07zae)和黑曲霉(Aw'gw)中獲得。蛋白酶可以從淀粉液化芽孢桿菌(Bac/〃Mam少/o"gMe/a"'era)，豆形桿菌(Bac/〃w/e"^s)，枯草芽抱桿菌(Bac/〃ws^Z^'fc)，地衣芽抱桿菌(5ac/〃ws//c/7e"i/bm^)，禾口曲霉菌(y45perg〃/ws)以及木霉菌(7Wc/zoo^ma)種類中獲得。0034肌醇六磷酸酶，木聚糖酶，磷酸(酯)酶，蛋白酶，淀粉酶，酯酶，氧化還原酶，脂肪酶，轉(zhuǎn)移酶，纖維素酶，以及e-葡聚糖酶，是經(jīng)常被使用而包括在動物飼料中的酶。家用護理應(yīng)用中適合包含入片劑中的酶是相似的，特別是蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、半纖維素酶、氧化還原酶、過氧(化)物酶、轉(zhuǎn)移酶以及纖維素酶。0035在本發(fā)明的特別優(yōu)選方面中，酶選自肌醇六磷酸酶，木聚糖酶，e-葡聚糖酶，淀粉酶，蛋白酶，脂肪酶，酯酶，和它們的混合物。在本發(fā)明的一個實施方式中，在顆粒中有二種酶被提供，即木聚糖酶，e-葡聚糖酶。酶可以被混合在一起或分別用于顆粒。在另一個實施方式中，在顆粒中有三種酶——e-葡聚糖酶，木聚糖酶，肌醇六磷酸酶——被提供。0036上述酶的名單僅僅是實例，并不意味是排他的。在本發(fā)明的持久顆粒中任何酶可以被使用，包括細菌、真菌、酵母、植物、昆蟲和動物來源的野生類型、重組類型和變異類型的酶，以及酸性、中性或堿性酶。0037本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員可以認識到所使用的酶數(shù)量——將由，至少部分由——所選擇的酶的類型及性質(zhì)和預定用途所決定。0038本發(fā)明持久顆粒包括在干重基礎(chǔ)上，大約0.0005到大約20%之間的顆粒酶成分。例如，在本發(fā)明的實施方式中，在顆粒中，酶的重量百分比至少0.0005到大約15%，至少0.001到大約15%，至少0.01到大約10%，至少0.1到大約10%，至少1.0到大約10%,至少1.0到大約8%，至少1.0到大約5%，至少2.0到至少5%。每噸飼料中，25到400克典型劑量的穩(wěn)定持久酶顆?？梢暂斔兔繃嶏暳洗蠹s0.0001到大約80克活性酶蛋白質(zhì)，并且酶顆?？梢砸悦繃嶏暳?000克而被劑量使用。對于其他活性成分，典型地，劑量是0.001到大約每噸飼料400克，或更高。當本發(fā)明的熱穩(wěn)定顆粒被用作動物飼料未微丸化混合物——例如，預混和物——的成分時，劑量可能更高，所述顆?？赡芎袔追N活性劑并且被加入到飼料組合物中。例如，被加入到預混和物的酶顆粒之劑量可能是預混和物的大約0.2%至(」10%，或原始混合物的大約0.1%到大約3%。在一個代表性的實施方式中，存儲在預混和物中的包含肌醇六磷酸酶之穩(wěn)定、持久顆粒的活性水平，是大約500U/g，或更高。典型地，預混和物以大約0.5%至(」2%被加入到食物中，原始混合物以大約2%到大約6%被加入。0039包含活性劑，包括任何過程固體、粘結(jié)劑和存在于其中的其他成分，沒有本發(fā)明的保護包衣(多層包衣)的持久顆粒部分，可能包含少于大約70%，少于大約60%，少于大約50%，少于大約40%，少于大約30%，少于大約20%的顆粒重量；而且，通常地，重量百分數(shù)是大約25%到大約50%w/w，大約40°/。到大約60%，或者大約50%到大約60%。0040包衣層(多層包衣)可能包括多于大約30%，多于大約40%，多于大約50%，多于大約60°/。，多于大約70%，以及多于大約80%的顆粒重量，而且，通常地，重量百分數(shù)取決于包衣層的類型和數(shù)量，可以是大約50。/。到大約75。/。w/w，大約40%到大約60%w/w，或者大約40%到大約50%。0041對于使用內(nèi)在熱穩(wěn)定活性劑的實施方式，核可能占顆粒含量的大約85到大約100%w/w，包衣層可能占顆粒的大約0%到大約15%w/w。0042本發(fā)明的持久顆?？梢匀缦Ｍ惚辉O(shè)計制作尺寸，直徑大約在300um到1000um之間，大約在300um到900um之間，大約在400um到800um之間，以及大約在400um到600um之間。0043對于本公開的目的，"壓縮力(compressionforces)"通常地指能使物質(zhì)原子緊湊的軸向方向應(yīng)用的力。壓縮力，如這里被使用的，發(fā)生在制丸過程和壓片過程中，并且，當所施加的力相對于該材料的縱向軸不是完全對稱的情況下，可能包括彎曲應(yīng)力的因素的，。0044"內(nèi)在熱穩(wěn)定酶或蛋白質(zhì)(inherentlythermostableenzymeorprotein)"指具有熔點溫度在大約6(TC之上到大約65°C的酶和蛋白質(zhì)。例如，在表2中顆粒28、29、和30中被使用的內(nèi)在熱穩(wěn)定酶，其在pH為5.5時的熔點為69i:，pH為8.0時的熔點為72。C。在整個申請文件中所提及的許多熱穩(wěn)定酶具有，例如，在pH值為5.5和8.0時，熔點小于60°C。0045"潮氣阻擋材料(水分屏障材料，moisturebarriermaterials)"所指材料排除、阻止、或?qū)嵸|(zhì)上阻礙水氣進入。典型地，這些材料是疏水的或兩親的，提供對水的絕緣并且內(nèi)在地不吸收和/或結(jié)合水，以及包括，并不限于成膜材料。潮氣阻擋材料的實例包括聚合物，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)，脂肪和油，脂肪酸以及橡膠。成膜潮氣阻擋材料的實例是天然的和改性的聚合物，例如，阿拉伯橡膠，乳清，乳清蛋白質(zhì)濃縮物，PVA，包括改性PVA和合成聚合物，例如，乳膠，HPMC和酸解羥丙基淀粉，例如，PureCote,氧化淀粉，和改性淀粉。非-成膜潮氣阻擋材料包括，例如，蠟，脂肪，油和脂質(zhì)，和卵磷脂。不容易氧化的精選潮氣阻擋材料為，例如，乳膠聚合物和乳膠多種聚合物，例如阿拉伯橡膠。0046"潮氣吸收材料(水分水合材料，moisturehydratingmaterials)"是指通過一種或幾種機理吸收含水液體——例如，水一一的材料。在第一個機理中，材料吸收自由水。在第二個機理中，材料吸收結(jié)合水，結(jié)合水一般以水合作用的晶態(tài)水存在。因此，材料可以以部分地或完全地水合材料被提供，或以未-水合材料被提供，這種未-水合材料將吸收或結(jié)合含水液體，并阻止或降低這種液體向活性劑遷移的速率或程度。在第三個機理中，通過阻止熱量傳遞給顆粒中的活性劑和通過保持活性劑在比顆粒外表面溫度更低的溫度下的方式，潮氣吸收材料使活性劑熱力地絕緣。潮氣吸收材料包括碳水化合物和無機鹽，包括水合鹽，例如，硫酸鎂，硫酸鈉，和硫酸鋁；麥芽糖糊精；糖，例如，蔗糖；和玉米淀粉。0047在本發(fā)明的示例性實施方式中，潮氣吸收材料是無機鹽，當無機鹽以多于大約25%w/w被加入到顆粒中時，潮氣吸收材料是無水的或含有相對低數(shù)量的結(jié)合水或自由水，因此全部顆粒的水活性少于0.5。沒有希望能夠被任何具體理論所束縛，當顆粒經(jīng)歷蒸汽-加熱過程時，無機鹽潮氣吸收材料將開始從蒸汽-加熱處理中吸收水，水分以動力過程經(jīng)過蒸汽-處理的短暫時間進入潮氣吸收材料，以防止水分滲透進入載有活性劑的顆粒區(qū)域。在顆粒的水分活性小于0.5的這些實施方式中，潮氣吸收材料可以少到占顆粒的25n/。w/w。在潮氣吸收材料占顆粒的大約40-70%w/w的實施方式中，潮氣吸收材料的比較厚的層允許使用水合或部分水合材料，特別是無機鹽。對于本公開的目的，"水合的(hydmted)"，"部分水合的(partiallyhydrated)"，"不水合的(non-hydrated)"指在顆粒經(jīng)歷蒸汽-加熱之前平衡時物質(zhì)的水合潛能。"水合"材料指包含以自由或束縛方式存在的水的材料，或它們的組合物。水可以在包衣過程之中或包衣過程之后被加入，并且顆粒的水合程度是顆粒材料和它所接受的溫度、濕度和干燥條件的函數(shù)。0048"微丸(Pellets)"和"微丸化(Pelleting)"指固體圓形的、球形的、和圓柱形的片劑或微丸，以及形成這樣固體形狀的過程，特別飼料微丸和固體的、擠壓的動物飼料。眾所周知的飼料微丸化生產(chǎn)過程一般包括混合飼料成分在一起達到大約1到大約5分鐘，將混合物移入緩沖倉，將混合物傳送入蒸汽調(diào)理器，任選地將蒸汽調(diào)理的混合物移入膨化器，將混合物轉(zhuǎn)移入微丸壓搾機或擠壓機，最后將微丸移入微丸冷卻機。Fairfield,D.1994.Chapter10，PelletingCostCenter.在Mtw"y^"鵬'wg7^c/ww/ogy/K(McEllhiney，編者),AmericanFeedIndustryAssociation,Arlington,VA，pp110-139中。0049蒸汽調(diào)理器在大約85T到大約95。C時，將混合物處理大約20到大約90秒，直到幾分鐘。蒸汽的數(shù)量隨濕度的數(shù)量和飼料混合物質(zhì)的初始溫度而變化。在微丸化過程中，大約4%到6%被加入蒸汽被報道，并且在微丸化過程之前選擇該數(shù)量，以便在飼料漿中產(chǎn)生少于18%的潮氣數(shù)量，或在預計用于的擠壓過程的飼料漿中產(chǎn)生直到大約28%的潮氣數(shù)量。0050在大約IO(TC到大約14(TC溫度范圍，可選擇的膨化器過程發(fā)生持續(xù)大約4到大約10秒鐘。生產(chǎn)過程的微丸壓榨部分在大約85。C到大約95匸的溫度時，典型地運行大約3到大約5秒鐘。0051"穩(wěn)定的"顆粒指當顆粒作為制劑中的成分，此制劑經(jīng)歷蒸汽加熱預處理過程、蒸汽加熱微丸化過程、蒸汽加熱壓片過程、單獨儲存后以及在未微丸化和未片化混合物中作為成分而儲存之后，活性劑的活性實質(zhì)上予以保持的顆粒。當含有活性劑的顆粒在未微丸化或未片化混合物中儲存和/或經(jīng)歷蒸汽加熱和加壓的微丸化過程和壓片過程時，穩(wěn)定性包括熱穩(wěn)定性，貨架壽命或儲藏穩(wěn)定性，機械穩(wěn)定性，和/或化學穩(wěn)定性。機械穩(wěn)定性指顆粒的物理強度或結(jié)構(gòu)完整性，結(jié)構(gòu)完整性包括對微生物的抵抗性，對灰塵產(chǎn)生的抗性和可能導致氣味產(chǎn)生的成分的釋放的抗性。化學穩(wěn)定性指當顆粒與對活性劑有害的成分在未微丸化和未片化混合物中被儲存時，活性的實質(zhì)上保持。這里熱穩(wěn)定性被進一步限定，并且一般指當穩(wěn)定、持久顆粒是微丸、片劑以及未微丸化和未片化混合物的成分時，在暴露給直到大約85'C到95T:的溫度之后，保持活性。0052"片化過程(Tableting)"指通過在壓片機上壓縮混合的成份而形成固體小塊或片劑的過程，壓片機在EP1257631B1中被描述，在此引用，以作參考。0053片劑可以通過直接壓縮成片——活性劑，填料/粘結(jié)劑，潤滑劑，和任何其他可選擇成分組成的混合物——的壓片過程而被制備。活性劑成分——在進入壓片機器之前，與其它片劑成分充分混合。成分在任何適合混合的裝置中，例如，雙筒混合機或類似裝置，或使用能導致片劑成分混合的任何混合方法而被混合。0054隨后，使用任何壓片裝置，例如壓片機(StokesModelR-4,Warminster,PA)，混合物被壓制成片劑。一般情況，壓片機具有高和低形狀-對應(yīng)沖床，其可以從沖模的上面或下面插入沖模。混合的片劑材料被填充到?jīng)_?？昭ㄖ校⑶抑辽僖粋€沖床，典型地，為上面沖床，進入到?jīng)_模空穴。壓力被用于上面和下面沖床。上和下沖床互相移動的行為對沖床之間的材料使用壓力，因此形成片劑。0055廣泛種類的片劑形狀可以被制作。片劑形狀由沖床的模具所決定。壓緊力隨沖床的幾何形狀、設(shè)備的類型、和所使用的配方而變化。作為可選擇地，片劑可以使用干式或濕式?；^程被制備，此過程在U.S.Pat.No.6，852，336中所描述，這里引入它的全部內(nèi)容，以作參考。'336專利陳述到當成分中的一種具有足夠被制成片劑的粘著性質(zhì)的情況下，干式?；^程可以被使用。如果需要，這種方法用潤滑劑混合這些成分。被描述的濕?；^程用雙筒混合機或雙錐混合機，在剪切混合條件下，混合干的成分；然后，在混合的粉末中加入粘結(jié)溶液，以取得?；?。0056"熱穩(wěn)定"顆粒指具有活性劑的顆粒，在顆粒被加入到制劑中之后，隨后暴露到熱量或熱量和蒸汽中，這樣以致制劑接觸直到大約85"C到大約95"C的溫度長達到幾分鐘，通過具體針對所選擇的活性劑所使用的常規(guī)化驗所測量，其保留至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、和至少95%的活性。在本領(lǐng)域那些技術(shù)人員將認識到，被暴露在小于85'C的溫度的制劑中的熱穩(wěn)定顆粒是穩(wěn)定的，并且在8(TC所做的測試結(jié)果確立這是真實情況。因此，可以認為直到85"到95r意味著包含小于85'C的溫度，這被包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。0057在一個實施方式中，"熱穩(wěn)定"指活性劑在被加入到制劑中之后，隨后暴露到蒸汽中，這樣以致制劑接觸大約85i:-95t:的溫度達到30秒，通過具體針對所選擇的活性成分所使用的常規(guī)化驗所進行的測量，其保留至少80%的活性。在另一個實施方式中，"熱穩(wěn)定"指活性劑在被加入到制劑中之后，隨后暴露到蒸汽中，這樣制劑接觸達到大約85°C-95"C的溫度達到30秒，通過具體對所選擇的活性成分使用常規(guī)方法所測量，其保留至少50%的活性。0058"未微丸化混合物(Unpelletedmixtures)"指預混和物或先驅(qū)物，基礎(chǔ)混合物，粉料，和稀釋劑。典型地，預混和物包括維他命和微量礦物質(zhì)。典型地，基礎(chǔ)混合物包括食品和飼料成分，例如，磷酸二鈣，石灰石，鹽和維生素和礦物質(zhì)的前混合物，但沒有谷物和蛋白質(zhì)成分。稀釋劑包括，但不限于谷物(例如粗小麥粉和米糠)和粘土，例如頁硅酸鹽(硅酸鎂海泡石，膨潤土，高嶺土，蒙脫土，漢克特石，皂石，貝得石，綠坡縷石，和硅鎂石)。粘土還具有作為載體和液態(tài)化試劑，或針對飼料前混合物而言，作為稀釋劑的功能。麥芽漿典型地包括完全動物食物。0059本發(fā)明的穩(wěn)定顆?？梢员患尤氲竭@些未微丸化混合物，和粉料混合物中，其隨后可以用蒸汽和/或蒸汽微丸化、或干燥處理。0060"水活性(wateractivity)"，以aw進行符號表征，指與固相或液相材料相平衡的大氣中的部分相對濕度；即，在相同溫度下，水蒸汽的分壓相對于純水之上存在的壓強的比率。在所有相中水分配達到平衡，可以定義是相等的。術(shù)語"相對濕度(relativehumidity)"—般用于描述大氣中的水分或與固體平衡的氣相，以及被表示為百分數(shù)，用100%作為在密閉系統(tǒng)中純水的相對濕度。因此，對于任何水活性值，相應(yīng)的相對濕度用Q/。RH400*aw給出。水活性可以通過本領(lǐng)域熟知的方法被測量，典型地通過在水活度計的溫度控制室中放置材料的樣品，例如水活度系統(tǒng)模型D2100，可以從RotronicInstrumentCorp.(Huntington,N.Y.)獲得，并且允許達到平衡的測量值在顯示器上顯示。這里所指的水活性，是在應(yīng)用所有的包衣后顆粒自身的水活性。0061對于本發(fā)明顆粒，尤其當聚合物外圍包衣被使用時，優(yōu)選的水活性是小于0.5。0062本發(fā)明的穩(wěn)定、持久顆粒是可以通過任何方法制備的顆粒，該方法能夠?qū)е乱粋€或更多保護包衣應(yīng)用到核上。活性劑可以是顆粒的核的成分，或可以被包衣到核材料之上，并且對于本公開的目的，核指持久顆粒的所有成分，除了應(yīng)用于顆粒之核的任何保護包衣而外。0063核可以通過本領(lǐng)域熟知的任何方法而被制備，例如，?；^程、擠出過程、鍋包衣、滾圓過程、轉(zhuǎn)鼓造粒過程、高剪切結(jié)塊、流化床噴涂包衣、結(jié)晶過程、沉淀過程、和促使固體物變成顆粒過程。在本領(lǐng)域，這些方法眾所周知；并被描述在美國專利號(U.S.Pat.No.)4,689,297和美國專利號5,324,649(流化床工藝過程)；EP656058B1和美國專利號454332(擠出過程)；美國專利號6,248,706(粒化過程，高剪切過程)；和EP804532B1和美國專利號6，534466(使用流化床、核與混合包衣的結(jié)合過程)，引入這些的所有公開內(nèi)容的全部，以作參考。0064本發(fā)明的保護性包衣可以應(yīng)用于如上面陳述中所描述的?；^程、擠出過程、流化床和使固體變成顆粒過程里。此外，保護性包衣可以通過澆鑄方法被應(yīng)用，包括旋轉(zhuǎn)圓盤澆鑄方法，正如在WO03/000625中被描述的，其在此被引用它的全部內(nèi)容，以作參考。0065另外，在一個實施方式中，該方法可能包括熱退火步驟，其中加熱顆粒到潮氣隔離成分的玻璃轉(zhuǎn)化溫度(glasstransitiontemperature(Tg))之上，并且隨后逐級降低溫度，從而使隔離材料變硬，或變成玻璃狀的。0066核是顆粒的內(nèi)部核，并且正如上面陳述的一樣，可以包括活性成分，或者活性成分可以被包覆在核材料周圍。適合用于本發(fā)明的核優(yōu)選地是可以水合的或多孔的材料(即，可以分散或溶解在水中的物質(zhì))，該可以水合的或多孔的材料是飼料級物質(zhì)。核材料應(yīng)該分散在水中(當被水合時，崩解)或通過進入真正的水溶液中而在水中加解。粘土(例如，頁硅酸鹽斑脫土，高嶺土，蒙脫土，漢克特石，皂石，貝得石，綠坡縷石，和硅鎂石，硅酸鹽，例如沙子(硅酸鈉)，粘有糖粒的小糖丸(nonpareils)和結(jié)塊的馬鈴薯淀粉或面粉，或其他淀粉顆粒資源——例如小麥和玉米芯粉顆粒(corncobs),被認為是可以分散的。粘有糖粒的小丸是包含種子晶體的球狀微粒，在旋轉(zhuǎn)球體容器中通過粘結(jié)粉末層和種子晶體的溶質(zhì)，種子晶體被建立并且發(fā)展為球形形狀。粘有糖粒的小糖丸典型地可以從糖——例如蔗糖，和粉末——例如谷物淀粉的組合物制備。在本發(fā)明的一個實施方式中，核是氯化鈉或硫酸鈉晶體，有時也稱作種子，或者是其他無機鹽晶體。本發(fā)明的另一個實施方式中，核是蔗糖晶體。0067包括無機鹽和/或糖和/或小有機分子的微粒，可以被用作本發(fā)明的核。結(jié)合進入核中的適宜的水溶解成份，包括無機鹽，例如氯化鈉、硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸鋅；或尿素，檸檬酸，糖——例如蔗糖、乳糖和類似物。核(CORES)0068本發(fā)明的核可以進一步包括下面"的一個或多個活性劑，飼料或食物級聚合物，填料，增塑劑，纖維材料，增量劑，和其他被用在核中的已知化合物。適合聚合物包括聚乙烯醇(polyvinylalcohol(PVA))，聚乙二醇，聚環(huán)氧乙烷，聚乙烯基吡咯垸，和碳水化合物聚合物(例如淀粉，直鏈淀粉，支鏈淀粉,a和e-葡聚糖，果膠，糖原)，包括它們的混合物和衍生物。0069在實例中所使用的核包括糖晶體、無機鹽晶體、谷物圓塊核、粘土和硅酸鹽。0070在核中有用的適合填料包括惰性物質(zhì)，其被大量加入而降低費用，或被用于在成品顆粒中調(diào)節(jié)預定酶活性的目的。這樣的填料實例包括，但不限于水溶解試劑，例如鹽，糖；和水分散試劑，例如粘土，云母，硅酸鹽，纖維素和淀粉；以及纖維素和淀粉衍生物。0071用于本發(fā)明核的適合的增塑劑是低分子量的有機化合物，并且是高度特異于欲被增塑的聚合物。實例包括，但不限于，糖(例如，葡萄糖、果糖、和蔗糖)，糖醇(例如，山梨(糖)醇、木糖醇、麥芽糖醇和其他二元醇)，極性低分子量有機化合物一一例如尿素，或其他已知的增塑劑——例如水或飼料級增塑劑。0072在本發(fā)明的核中有用的合適纖維材料包括，但不限于纖維素，和纖維素衍生物，例如HPMC(hydroxy陽propyl-methylcellulose(羥基畫丙基-甲基纖維素))，CMC(carboxy-methylcellulose(羧基-甲基纖維素))，HEC(hydroxy陽ethylcellulose(羥基-乙基纖維素))。0073在本發(fā)明一個實施方式中，特別地，對于飼料應(yīng)用，核是水溶性的或水可分散的谷物圓塊物質(zhì)或糖或鹽晶體。在另一個實施方式中，尤其適合于家居清潔用品應(yīng)用，核是水溶性或分散型的糖或鹽晶體或蔗糖小丸(nonpareil)。0074本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認識到，對于詞料和食品應(yīng)用，核(和任何聚合物、填料、增塑劑、纖維物質(zhì)、和增量劑)對于食品和/或伺料應(yīng)用是可接受的。對于家居清潔用品應(yīng)用，不需要應(yīng)用這樣的限制。0075本發(fā)明顆粒的核——包括其中具有活性成分的任何包衣，并且排除下面描述的保護性包衣——優(yōu)選地占持久顆粒的少于大約70%，少于大約60%，少于大約50%，少于大約40%,少于大約30%，少于大約20%w/w?；钚詣?ACTIVEAGENT)0076活性劑或多種試劑，尤其是上面討論的酶，是可以從發(fā)酵液中取得的并且可以是整個發(fā)酵液、裂解液、或是從發(fā)酵過程中回收的經(jīng)過澄清的發(fā)酵液。從發(fā)酵液中利用回收過程所獲得的酶，可以是液體、漿液、干燥的、凍干的、或晶體形式?？蛇x擇地，酶與增塑劑——例如碳氫化合物，和聚合物——例如改性的或天然淀粉混和在一起，以形成基質(zhì)。增塑劑的非限制性名單包括糖——葡萄糖、果糖、和蔗糖，糊精，PVA，和糖醇，例如，山梨(糖)醇，木糖醇，麥芽糖醇，或上面列出的增塑劑的任何一種。改性淀粉包括，但不限于谷物淀粉和酸解羥丙基淀粉，例如，PureCote⑧，和氧化淀粉?？蛇x擇地，活性劑可以被加入到核中，或被加入到核和包圍核的層二者中。保護性包衣(PROTECTIVECOATINGS)0077當活性劑不是內(nèi)在熱穩(wěn)定的時候，本發(fā)明的保護性包衣一般作為一個或多個圍繞核的層被應(yīng)用。實施方式包括一個、二個、三個、或四個保護性包衣層。0078適合的保護包衣材料包括聚合物，碳氫化合物，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)，脂肪和油，脂肪酸，無機鹽，以及膠，和它們的混合物。0079保護包衣包括潮氣隔離包衣(水分屏障包衣，moisturebarriercoatings)禾口潮氣吸收包衣(tK分水合包衣，moisturehydratingcoatings)。潮氣隔離包衣通過排出潮氣，例如通過形成殼層(shelllayer)而起作用，其中殼層典型地不吸收潮氣并且阻止或延緩潮氣遷移進入顆粒的速率。顆粒上的潮氣吸收包衣或者以自由水或者以水合作用水方式吸收或結(jié)合潮氣，因此發(fā)揮作用，從而阻止或延緩外界潮氣傳送入顆粒的程度或速率。潮氣吸收包衣典型地占顆粒的至少大約35。/。W/W。存在于包衣中的潮氣吸收材料使活性劑熱力地絕緣，并且將吸收一定數(shù)量的潮氣并且將潮氣保留在吸收材料中，而不允許它穿過并進入具有活性劑的顆粒部分。對于在穩(wěn)定、持久顆粒上的潮氣吸收包衣，其在蒸汽處理之前不含有可觀的水，這樣的包衣可以占顆粒的大約25n/。W/W。0080潮氣隔離包衣典型地包括疏水材料，例如疏水聚合物，例如，PVA，HPMC，酸解羥丙基淀粉和氧化淀粉；蛋白質(zhì)，例如乳清和乳清蛋白質(zhì)濃縮物；脂質(zhì)，例如，卵磷脂；脂肪和油，脂肪酸，乳膠和樹膠，例如，阿拉伯樹膠。當本發(fā)明的顆粒被儲存在未成微丸或未成片劑混合物中，例如，在含有氯化膽堿的預混合物中，一些潮氣隔離包衣，例如PVA和阿拉伯樹膠，不是容易被被氧化的，并且在提供化學穩(wěn)定性方面發(fā)現(xiàn)了特別的可以應(yīng)用性。典型地，潮氣吸收包衣是親水物質(zhì)，例如碳水化合物和無機鹽，包括水合鹽。潮氣吸收物質(zhì)的實例是硫酸鎂，硫酸鈉，麥芽糊精，硫酸銨，糖，例如，蔗糖，以及天然谷物淀粉。0081用于保護性包衣的聚合物是聚乙烯醇(polyvinylalcohol(PVA))，聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚丙烯酸酯，聚環(huán)氧乙垸(polyethyleneoxides(PEO))，聚乳酸，聚氯乙烯，聚醋酸乙烯酯，聚乙烯基吡咯垸酮類(polyvinylpyrrolidones(PVP)),纖維素醚，藻酸鹽，白明膠，改性淀粉和它們的取代衍生物、水解產(chǎn)物、和共聚物，例如，酸解羥丙基淀粉，例如，PureCote,羥基-丙基-甲基纖維素(HPMC)，甲基纖維素(methylcellulose(MC))，羧基-甲基纖維素(CMC)，和乙基纖維素。用于保護性包衣的最優(yōu)選聚合物是PVA，改性PVA，正如在美國專利6，872，696被描述的，和改性維生素，例如甲基維生素和羥基丙基甲基纖維素，其在PCT出版物第WO99/51210號中被描述，這二個文件在這里被引用，以作參考。0082用于保護性包衣的碳水化合物是麥芽糊精，羥甲基纖維素，從玉米、高粱、竹芋、稻、小麥、黑麥、大麥、燕麥、馬鈴薯、山藥、木薯粉(tapioca)、木薯(cassava)、西米制備的改性或天然的淀粉，以及糖，包括蔗糖，玉米糖漿干粉，糖蜜，葡萄糖，果糖和乳糖。0083用于保護性包衣的蛋白質(zhì)是乳清粉，乳清蛋白濃縮物，乳清蛋白分離物，酪蛋白酸鹽，大豆蛋白濃縮物和分離物，玉米蛋白，白蛋白和白明膠。0084可以在保護性包衣中被使用的簡單的、化合的和衍生的脂質(zhì)是蠟(例如，植物的，礦物質(zhì)的和合成的，例如巴西棕櫚、蠟大戟、蜂蠟、耳蠟、巴西蠟(camuba)、蟲漆、石蠟、以及微晶蠟)；卵磷脂(例如單酸甘油二酯和單甘油二酸酯)；脂肪酸(例如硬脂酸的、棕櫚酸的、亞油酸的、油酸的，丁酸的，和花生四烯酸脂肪酸，以及它們的鈉，鉀，鈣，鋅鹽)；和脂肪和油(例如氫化或部分氫化的脂肪和油，例如大豆、玉米、棉籽、動物脂、卡諾拉油、和亞麻籽油)。用于保護性包衣的優(yōu)選脂質(zhì)是卵磷脂。0085用于保護性包衣的無機鹽包括硫酸鹽，檸檬酸鹽，氯化物，碳酸鹽，亞硫酸鹽，磷酸鹽，膦酸鹽，和碳酸鈉，碳酸銨，碳酸鉀，碳酸鈣，碳酸鎂，和碳酸鋅鹽。優(yōu)選鹽是硫酸鎂，硫酸鈉和硫酸銨。0086被用于保護性包衣的樹膠包括阿拉伯樹膠，瓜耳膠，瓊脂，黃蓍膠，karyagum，刺槐豆膠，紅藻膠，黃原膠，以及藻酸鹽。0087本發(fā)明的保護性包衣進一步可以包括增塑劑，滑潤劑，色素和粉末，例如云母，斑脫土，高嶺土，玉米淀粉，硅酸鎂，碳酸鈣和聚氨基葡糖(chitosan)。0088本發(fā)明的一些實施方式典型地具有單層的潮氣吸收材料，其是顆粒的至少大約55%w/w。因為潮氣吸收材料吸收和隔離水分的能力是具有限度的，相對高水平的單一層包衣被應(yīng)用?？梢赃x擇地，潮氣吸收材料(多種材料)可以以二層被應(yīng)用。本發(fā)明的其他實施方式使用潮氣吸收材料和潮氣阻擋材料共同作為保護性包衣。在這些實施方式中，潮氣吸收材料的數(shù)量更低，至少是顆粒含量的大約25%w/w;和潮氣阻擋材料占顆粒含量的大約2%到25%w/w。使用潮氣吸收材料和潮氣阻擋材料一同組成保護機制，并且典型地降低了費用，尤其是潮氣阻擋材料的費用。如果這些材料以薄包衣方式被單獨使用，潮氣阻擋材料，則潮氣阻擋材料，尤其成膜材料可能經(jīng)歷機械損壞，其可能導致對活性劑的保護損失。這種組合允許比材料單獨使用時所需要的更少材料。考慮到潮氣吸收材料的存在，這種組合物允許對潮氣阻擋材料的一些損壞。正如上面討論的，當顆粒被存儲在未微丸混合物中時，通過保持活性，材料的組合特別地適合提供化學穩(wěn)定性。0089對于具有熱退火工藝過程步驟的顆粒，潮氣吸收材料的數(shù)量是可以被降低到顆粒的大約至少20%w/w，因為融合的潮氣隔離層已經(jīng)提高了連續(xù)性并且更少遭遇機械損失。0090本發(fā)明的方法，除了所描述的用于穩(wěn)定、持久顆粒的生產(chǎn)的方法，包括將顆粒與未微丸飼料混合物進行混合以及最終混合物的儲存。其他的方法包括蒸汽-處理最終混合物和/或微丸化最終混合物。當然，本發(fā)明的穩(wěn)定、持久顆粒，還可以根據(jù)希望，被單獨地儲存，以及與飼料混合，或被微丸化。0091下面的實施例并不意味被限定。實施例0092表1是在下面實施例中所使用的成分和縮寫的列表。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>0093表2示例了本發(fā)明的許多代表性的穩(wěn)定、持久顆粒的組成，以及在具體的微丸化條件下，沒有表現(xiàn)出至少50%回收活性劑活性的幾種顆粒的組成。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>活性劑<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>制劑#15(熱不穩(wěn)定的)成分%(w/w)干基核材料蔗糖35-50目49.6活性劑酶9.9蔗糖16.9玉米淀粉16.9第一層包衣乙基纖維素11.5則劑#16(熱不穩(wěn)定的)成分%(w/w)干基核材料蔗糖35-50網(wǎng)眼48.3活性劑第一層包衣酶9.7蔗糖16.5玉米淀粉16.5第一層包衣羥基丙基甲基纖維素9.1成分%(w/w)干基核材料硫酸鈉10.7活性劑第一層包衣酶2.1蔗糖2.4玉米淀粉4.8第一層包衣MgSQ440<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>制劑#24(熱不穩(wěn)定的)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>制劑#25(熱不穩(wěn)定的)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>制劑#26<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>實施例1.表2中的顆粒的制備0094表2中的所有顆粒，除了顆粒編號1夕卜，都是使用美國專利5,324,649中所描述的流化床工藝而制備的顆粒。流化床工藝流化核材料，是在VectorFL-1處理器(由VectorCorp，Marion,IA，USA制造)，Glatt3或Uniglatt處理器(二者都由GlattAirTechniques,Binzen，Germany制造)中流化。酶/糖/淀粉混和物被噴涂包衣在核材料上。隨后，任何保護包衣被按順序地噴涂在酶層之上，并且讓其干燥。0095例如，#3制劑顆粒由以下所述制備0096在Glatt3頂噴霧流化床涂布機中，篩分為-45/+140目的硫酸鈉晶體被加入并利用加熱床溫度流化。來自里氏木霉(Trichodermareesei)的木聚糖酶超濾濃縮物與玉米淀粉和蔗糖混合，并被噴涂在晶體之上。溶液為大約33%干固體。最終批重量為4000克。0097在VectorFL-1頂噴霧涂布機中，潮氣吸收材料，硫酸鎂溶液，被噴涂在上面描述的833克材料上面。床溫度為5(TC。最終批重量是2500克。0098顆粒編號1的制備進一步包括熱退火步驟，在熱退火過程中，顆粒被加熱到足夠超過卡那巴蠟之玻璃轉(zhuǎn)化溫度(Tg)的溫度，隨后通過逐漸冷卻產(chǎn)生硬化的、玻璃狀的蠟層。實施例2:帶有顆粒的麥芽漿樣品的制備和微丸化過程0099使用三種不同飼料制劑和微丸化方法，采用表2中列出的顆粒，進行微丸制備。相對高劑量的顆粒被加入到飼料制劑中，以優(yōu)化活性劑保留活性測定法。碾磨#0100來自表2中的選定顆粒與飼料制劑混合在一起。飼料制劑的組成如下75%(w/w)玉米粉(富含黃色去胚玉米粉，編號50956，GeneralMillsOperation,Minneapolis,MN);禾卩25%(w/w)豆柏(ProSoybeanmeal，CargillOilseedCo.，CedarRapids，IA).12千克的上述飼料混合物與每份樣品顆粒(劑量為5g/kg飼料制劑)混合，并且在大型的Hobart混合機(型號D-300T，TroyOH)中混合8分鐘。每種樣品的大約150克被留作麥芽漿樣品，或未微丸飼料混合物。每批隨后被分成三個4千克的子組，在三份重復的丸粒壓制機運轉(zhuǎn)批次中，被微丸化。0101使用的丸粒壓制機是CPM型號CL5(CaliforniaPelletMillCo.,Cmwfordaville,IN)。在蒸汽調(diào)理機中，溫度由以1.36標準大氣壓(atm)所注入蒸汽的數(shù)量控制。漿液的調(diào)理溫度，在進入丸粒壓制機的模具之前被測定，目標指標是89-90。C。使用溫度計和"J"型熱電偶(OMEGAEngineering,Inc.Stamford,CT)可以進行溫度測量。在調(diào)理器中的停留時間大約為5秒鐘。沖模尺寸為內(nèi)徑12.7cm(厘米)，外徑17.8cm(厘米)，孔徑4.7mm(毫米)。丸粒壓制機持續(xù)轉(zhuǎn)動，樣品有順序地通過壓制機被處理，以在樣品之間運行大約2kg(公斤)的玉米粉/大豆混合物而被分隔開。在測試漿液被加入調(diào)理器中大約1分鐘之后，調(diào)理器溫度穩(wěn)定在目標溫度，在30秒時間間隔上收集微丸，允許每種樣品大約lkg的微丸被收集。收集的微丸被放置在工作條件下30秒，隨后用空氣冷卻器冷卻2-3分鐘到室溫。碾磨#0102來自表2中的已經(jīng)制備好的持久顆粒，與谷物和大豆飼料制劑被制成微丸。飼料制劑的準確組成如下61.2%(w/w)玉米粉，31.6%(w/w)豆粕，3.0%肉骨粉，2.5%豆油，1.3%石灰石，0.28%鹽，禾口0，08%蛋氨酸。對于每種被測試的顆粒，取決于酶的類型和活性，370克到2000克的顆粒與450公斤的無油飼料混合，并且在犁片混合機中攪拌摻混2分鐘。隨后大豆油被加入，并且樣品被額外混合3分鐘。丸粒壓制機為Master型號，由CaliforniaPelletMill生產(chǎn)。沖模微丸孔徑為4.5mm。代表性的飼料速率為每小時780kg。蒸汽調(diào)理器中的溫度由手工控制，并且從調(diào)理器的飼料出口處進行測量。二個被使用的調(diào)理溫度是；85°C和95。C。在調(diào)理器中的停留時間為大約30秒。當達到目標溫度時，在取樣發(fā)生之前，系統(tǒng)運行大約5分鐘。大約5kg的微丸飼料樣品被制備，并通過鋪在篩板之上而被冷卻。碾磨#0103將制備的持久顆粒，與小麥和大豆飼料制劑，或與小麥和大麥制劑，一起被微丸化。詞料制劑的組成，或者為60%小麥，31.5%大豆粉，4%大豆油，1.5%磷酸二鈣，1.23%維生素礦物質(zhì)預混合物，1.2%石灰石，0.4%鹽，和0.2。/。DL蛋氨酸；或60%小麥，30%大麥，以及二個被使用的調(diào)節(jié)溫度是9(TC和95°C。對于每種受測試的顆粒，取決于酶類型和活性，將200到500克的顆粒與160kg的飼料混合，并且在水平式螺條混合器中攪拌大約15分鐘。微丸壓制機為SimonHeesen，單輥型，其配備有17.3cm內(nèi)徑?jīng)_模，具有3mm的微丸孔徑。沖模速度為500rpm，被7.5kW馬達驅(qū)動。典型的詞料速度為每小時300kg。在蒸汽調(diào)理器中的溫度保持在+/-0.1攝氏度，從調(diào)理器的詞料出口處測量。調(diào)理器具有階式混合系統(tǒng)。被使用的三個調(diào)理溫度為85°C，9(TC和95。C。蒸汽入口壓力為2個標準大氣壓(atm)，通過手工調(diào)節(jié)控制蒸汽運送的三個閥門來控制調(diào)理器中的溫度。調(diào)理器中的停留時間為大約30秒。當達到目標溫度時，在取樣發(fā)生之前，系統(tǒng)運行大約5到10分鐘。樣品被取走，持續(xù)1-1.5分鐘時間期間，相當于5-7.5kg的微丸化的飼料，并且立即被放入冷卻箱中，冷卻箱底部帶孔，其每小時空氣流量1500立方米。在冷卻15分鐘之后，樣品被通過使用樣品分樣器被縮小二次，并且lkg被拿出，用于實驗室測試。實施例3:酶活性測量酶活性的測定0104為測定微丸化之后酶的活性，漿液和微丸化樣品隨后被放入廚房咖啡研磨機(型號203-42,KrupsNorthAmericanInc.,MedfordMA)中被研磨30秒，并且如下面所描述分析酶的活性。替代性地，樣品在配有l(wèi)mm篩網(wǎng)的ZM-200離心式粉碎機中(RetschGmbH,Germany)研磨。0105恢復活性的百分比計算對于每個試驗樣品，漿液和相應(yīng)的微丸樣品被測試活性?；謴偷幕钚园俜直扔上旅嬗嬎鉗/?；謴突钚远谖⑼柚械幕钚詘100在漿液中的活性0106肌醇六磷酸酶化驗根據(jù)AOAC(AssociationofAnalyticalChemists)(分析化學家學會)官方方法2000.12被測定，正如在"Determinationofphytaseactivityinfeedbyacolorimetricenzymaticmethod:collaborativeinterlaboratorystudy"("通過酶比色法合作實驗室間研究飼料中肌醇六磷酸酶活性的確定")中所描述的。EngelenAJ，vanderHeeftFC，RandsdorpPH,SomersWA,SchaeferJ，vanderVatBJ.JAOAOCInt.2001May-Jun;84(3):629-33。簡短地來說，研磨樣品在220mM三水醋酸鈉，68.4mM二水氯化f丐，0.01%Tween20，pH為5.5中被萃取。隨后，上清液被測試分析。在pH5.5，37。C下，測試持續(xù)60分鐘，該測試從水稻植酸中測量無機磷酸鹽的釋放。測試用酸性鉬酸/釩酸試劑終止，磷酸鹽由釩鉬磷(vanadomolybdophosphor)的黃色顯色復合物的強度量化。0107木聚糖酶試驗使用木聚糖酶試驗盒(XylanaseAssayKit)進行(XylazymeAXFormat)，CatNo:K-XYLSMegazymeInternationalIrelandLtd.,Wicklow,Ireland。用于試驗的材料包括16x125mm可拋棄的玻璃培養(yǎng)試管；萃取緩沖液pH為6.0的100mMMES鈉鹽緩沖液；試驗緩沖液pH為6.0的25mM磷酸鈉緩沖液；終止溶液處于1升MilliQ水中的20克NaPO412H20;聚苯乙烯細胞培養(yǎng)瓶，225ml(CorningIncorporated-lifeSciencesBigFlats,NewYork)。在20-25。C下，在培養(yǎng)瓶里，6-12克的研磨飼料在120ml的萃取緩沖劑中被萃取l小時，同時在設(shè)置于100rpm的軌道膠體搖拌器上進行搖動。樣品隨后以2000g被離心1分鐘，并且上清液被試驗分析。對于這個試驗，使用試驗緩沖液，將20到100pl的飼料上清液在培養(yǎng)管中被稀釋到500ul，并且在40。C的水浴中平衡10分鐘。隨后，一個酶底物片劑被放入每個培養(yǎng)管，樣品在4(TC下額外溫育10分鐘。10ml的終止溶液隨后被加入到每個試管。樣品被短暫地渦旋，隨后通過Whatman#l濾紙過濾。濾出液的吸收率通過分光光度計閱讀，波長為590nm。分光光度計最初用空白調(diào)設(shè)為零，空白由組合20到100pl的飼料上清液、500ul的試驗緩沖液、和10ml的終止溶液制備。然后加入一個酶底物片劑，隨后，用與樣品相同的方式進行漩渦和過濾。從一些詞料成分而來的干擾可以影響試驗結(jié)果。為了糾正任何干擾，飼料背景的標準曲線被制備。未包衣的木聚糖酶顆粒，以幾種水平被加入到空白漿液中，以及加入到空白微丸中。隨后，加上顆粒的漿液和微丸樣品被研磨，并且如上面所描述的，進行準確地萃取。從這個系列萃取中，生成對于漿液和微丸的標準曲線。0108使用P-葡聚糖酶試驗試劑盒(Beta-GlucazymeTabletformat),CatNo:T-BGZ2000，MegazymeInternationalIrelandLtd.Wicklow,Ireland,進行后-葡聚糖酶試驗。用于試驗的材料包括16x125mm—次性玻璃培養(yǎng)管；萃取緩沖液和實驗緩沖液:25mM醋酸鈉緩沖液；終止溶液:在1升MilliQ水中的2。/。NaPO412H20溶液；140ml玻璃燒杯。在100ml的萃取緩沖液中，在20-25T:下，通過在燒杯中攪拌l小時，10g研磨飼料被萃取。樣品隨后以2000克被離心1分鐘，并且上清液被試驗。對于該測試，20到100(^1的詞料上清液被使用試驗緩沖液在培養(yǎng)管中稀釋到500^1，并且在4(TC的水浴平衡10分鐘。隨后，一個酶底物片劑被放入每個培養(yǎng)管，樣品在4(TC額外溫育10分鐘。隨后，10ml的終止溶液被加入到每個試管。樣品被短暫地渦旋，隨后通過Whatman#1濾紙過濾。濾出液的吸光值，通過分光光度計閱讀，波長在590nm下。分光光度計最初用空白調(diào)整為零，空白是由組合20到100u1的飼料上清液、500W的試驗緩沖液、和10ml的終止溶液而制備。隨后，一個酶底物片劑被加入，跟著的是與樣品相同方式的漩渦和過濾。通過在試驗緩沖液中測試一系列稀釋到合適水平酶的測試過程，制作標準曲線。留存的酶活性結(jié)果表3:微丸化結(jié)果-微丸化之后恢復活性百分比制劑壓制機#1，90°C在85。C-95°C，壓制機#2，3，或410<30%木聚糖酶12<30%木聚糖酶13<30%木聚糖酶14<30%木聚糖酶15<30%木聚糖酶16<30%木聚糖酶21<30%木聚糖酶25<30%木聚糖酶1〉50%木聚糖酶2>50%木聚糖酶3〉70%木聚糖酶>70%木聚糖酶5〉50%木聚糖酶>50%木聚糖酶，>80%大腸桿菌肌醇六磷酸酶6〉50%木聚糖酶7〉50%木聚糖酶9〉50%木聚糖酶11>50%木聚糖酶，〉70%曲霉菌肌醇六磷酸酶30〉60%熱穩(wěn)定木聚糖酶22〉50%木聚糖酶23〉60%大腸桿菌肌醇六磷〉50%木聚糖酶，〉80%大腸桿菌肌醇六磷酸酶酸酶27〉50%木聚糖酶〉80%大腸桿菌肌醇六磷酸酶33>90%BGL，>70%熱穩(wěn)定木聚糖酶4>70%木聚糖酶8〉70%木聚糖酶17〉70%木聚糖酶18>70%木聚糖酶19〉70%木聚糖酶20〉70%木聚糖酶26〉70%木聚糖酶>90%曲霉菌肌醇六磷酸酶28>90%BGL，>90%熱穩(wěn)定木聚糖酶29〉70%BGL,>70%熱穩(wěn)定木聚糖酶31>90%曲霉菌肌醇六磷酸酶32>90%曲霉菌肌醇六磷酸酶所使用的微丸壓制機被分為二組。碾磨#1(MiMl)是實驗室等級的壓制機，其比在商業(yè)實踐中典型遇見的壓制機要更為更加嚴酷。嚴酷性歸因于大量的蒸汽，其被傳遞給相對小的漿液部分，這與飼料混合物不含有油的事實相配合，當蒸汽穿過沖模時，這典型地潤滑了飼料。壓制機#2到#4被認為更加代表商業(yè)條件。0109被測試顆粒的留存活性在表3中顯示。在本發(fā)明中，不被認為是穩(wěn)定、持久顆粒的是編號IO、12、13、14、15、16、21和25，所有這些顆粒證明少于30%的恢復活性。這些顆粒含有酶基質(zhì)層所包覆的核，其中包衣核更大，其大約占整個核的50w/wM。大部分這些不穩(wěn)定顆粒僅僅具有一層潮氣阻擋材料保護包衣，例如巴西棕櫚蠟，或乙基纖維素，或HPMC，或卡諾拉油。不希望被任何特定的理論所束縛，并且認識到這些顆粒在70-85。C時可以顯示出大于50%的存留活性劑活性，在這些測試條件下，相對于穩(wěn)定、持久顆粒，這些顆粒的弱熱穩(wěn)定性可能由于包衣材料作為相對薄層的供應(yīng)，在五個實例中，包衣材料占顆粒的大約2.0到大約17.0%w/w，禾n/或應(yīng)用特定的包衣試劑。例如，顆粒編號10具有占50w/w。/。的潮氣阻擋材料(巴西棕櫚蠟)的單層包衣材料；和顆粒編號25具有二層潮氣隔離保護包衣，其共同占顆粒的32%w/w。0110本發(fā)明的特別穩(wěn)定、持久顆粒是編號4、8、17、18、19、20、26、28、29、31和32，所有這些顆粒，當在大約9(TC下被微丸化大約5秒鐘時，具有超過70%的恢復木聚糖酶活性。此外，顆粒26、31和32證實在大約85'C和95"C之間被微丸化大約30秒鐘，具有超過90%恢復肌醇六磷酸酶活性。顆粒28和29被證實當在大約85"C和95。C之間被微丸化大約30秒鐘時，在酶混合物中的一種內(nèi)在熱穩(wěn)定木聚糖酶具有超出90%存留活性；以及一種熱不穩(wěn)定的e-葡聚糖酶具有超出70%-90%存留活性。那些具有不是內(nèi)在熱穩(wěn)定的活性劑的穩(wěn)定、持久顆粒是以下二種情況之一，或者；1)涂布有單個、厚的潮氣吸收材料保護層，或2)用二層到三層的保護層涂布，其中至少一層為潮氣吸收材料并且一層為潮氣阻擋材料。0111一般地，當潮氣吸收材料以單個層被應(yīng)用時，包衣必須至少占顆粒的大約55%，以提供適合的熱保護；并且，在使用單一層時，當潮氣吸收材料的數(shù)量低到少于55%時，則存留活性的百分數(shù)降到小于50%。但是，當潮氣吸收材料與潮氣阻擋材料合并使用時，潮氣吸收保護層可以低到顆粒的至少大約25%W/W，而潮氣阻擋材料可以是顆粒的大約2%到40%W/W。0112本發(fā)明的其他穩(wěn)定，持久顆粒是數(shù)字l，2，3，5，6，7，9，11,22，23，27，30和33，所有這些證實在大約9(TC被微丸化大約5秒鐘，或在大約85。C和95。C之間被微丸化大約30秒鐘，具有超過50%恢復肌醇六磷酸酶或木聚糖酶活性。正如從這些結(jié)果可以看出，無機鹽外部或內(nèi)部包衣單獨提供對酶的優(yōu)良保護并且當與潮氣隔離包衣合并時增強保護。如先前陳述，顆粒數(shù)字1使用熱退火步驟被制備，因此確信熱退火步驟地加入增強潮氣阻擋材料的隔離性質(zhì)，例如，聚合物，蛋白質(zhì)，和脂質(zhì)，因此減少了需要提供熱穩(wěn)定性的潮氣吸收材料的數(shù)量。當與顆粒#1相同的其他顆粒沒有通過熱退火被制備，恢復活性是35%。顆粒2，3，和22顯示不包含顆粒穩(wěn)定性的不同的核材料可以被使用。0113顆粒3證實了在5秒和30秒的微丸化(?；?時間段，70%以上的恢復酶活性。顆粒11證實了在當85"C至95'C之間微丸化大約30秒鐘時，50%以上的恢復木聚糖酶活性，和當在85'C至95T:之間被微丸化大約30秒鐘時，70%以上的恢復肌醇六磷酸酶活性。顆粒#23證實了在90。C被微丸化大約5秒鐘，具有60%以上的恢復肌醇六磷酸酶活性，和當在85"C至95"C之間被微丸化30秒鐘，具有超過50%恢復木聚糖酶活性；和當在85。C至95"C之間被微丸化30秒鐘時，具有超過80°/。的恢復肌醇六磷酸酶活性。實施例4:直接蒸汽測試0114包含75%玉米粉和25%大豆的100克粉料部分，以1千克漿液配1.25克顆粒的混入比率，加入顆粒，該顆粒含有大腸桿菌肌醇六磷酸酶。漿液樣品隨后被包裹在奶酪布包中，通過將布包放入漏斗，并向漏斗底部施用30psi蒸汽，蒸20秒。蒸完之后，樣品被冷卻直到環(huán)境溫度，被干燥過夜，隨后測試肌醇六磷酸酶活性。相對于未加熱漿液，報告蒸汽樣品的恢復活性的百分數(shù)。0115在這些測試條件下，不被認為適合抗蒸汽的顆粒是第25號顆粒，其在蒸汽之后含有少于35%恢復活性。本發(fā)明的穩(wěn)定，持久顆粒是顆粒#5和顆粒#23，其在蒸汽之后具有50%以上的恢復活性。實施例5:微丸化顆粒的生物利用率測試0116使用眾所周知的生物利用率測試方法，本發(fā)明的穩(wěn)定、持久顆粒可以被測試活性劑酶的生物利用率，生物利用率測試，例如在WO00/47060中公開的肌醇六磷酸酶生物利用率研究；在EnzymesinAnimalNultrition,Proceedingsofthe1stSymposium,KartauseIttingen，Switzerland,October13016，1993中描述的生物利用率測試；在Chemgen專利中描述的生物利用率測試。0117在微丸化之后，本發(fā)明的穩(wěn)定顆粒被評估以確定在商業(yè)飼糧喂制的肉雛雞(broilerchick)中的生物利用率。材料和方法0118測試酶和顆粒和膳食處理包括單獨的Phyzyme⑧XP(6-肌醇六磷酸酶;E.C.3丄1.26)酶，以及包含PhyzymeXP酶的本發(fā)明PVA-包被的和GumArabic(GA)包被的穩(wěn)定顆粒(參看表4)。受測試的酶和顆粒以漿液膳食或丸粒(在9(TC被制備)膳食被喂給肉雛雞。實驗膳食為正對照(商業(yè)膳食)，負對照，負對照+500U/kgPhyzymeXP，負對照+500U/kgPVA-包被的-肌醇六磷酸酶，負對照+500U/kgGA-包被的-肌醇六磷酸酶，負對照+500U/kg在9(TC時被微丸化的PVA-包被的-肌醇六磷酸酶，負對照+500U/kg在9(TC時被微丸化的GA-包被的-肌醇六磷酸酶。除了鈣和磷，所有的膳食是等熱量的和等氮的(參考表6)。在正和負對照膳食中的鈣和可用磷分別地為0.90%和0.78%，以及0.37%和0,26%。二氧化鈦(0.10%),其作為幫助評估營養(yǎng)消化率的不消化標記，被加入到膳食中。實驗膳食由ADASGleadthorpe以商業(yè)規(guī)格生產(chǎn)并且在ADASGleadthorpe存留，保存在冰箱中。酶添加劑混合物(25g)，谷類(250g)，豆粕(250g)的樣品和所有膳食(250g)樣品被送到DaniscoAnimalNutritionEnzymesFeedServices,EdwinRahrsVej38,DK-8220Brabrand,Denmark.。在喂之前所有的飼料樣品被測試其肌醇六磷酸酶。實驗動物與設(shè)計0119雞為年齡0到21天的雄性Ross308肉雛雞，其每次處理使用八倍欄，每欄30只雞。雞仔被稱重之前，被隨意放置在箱中并且隨意分配到處理欄中。每欄包括一個進料管和雞仔可以通過奶嘴飲水器(每欄4個)自由喝水并且在所有時間進食。飲水器的高度定期調(diào)節(jié)以保持在雞仔背部頂端的水平。干草(litter)以5cm厚度的干凈刨木花的形式被提供。房間通過曖氣孵化系統(tǒng)(broodingsystem)被加熱，孵化目標溫度方案在開始時是3rc，每隔一天降低rc，直到在第21天降到2rc。最小通風速率被自動地計算，以提供每kgQ'75體重每秒1.9><1041113的空氣并且這個速率由Farm-ExDiacam控制儀表板控制的一個610mm風扇所提供。照明程序為23小時照明和1小時黑暗。光線強度從在開始時(dayold)(40-601ux)可達到的最大量減少到IO天年齡時大約10lux的強度。使用Tinytalk⑧數(shù)據(jù)記錄器，在每天基礎(chǔ)上監(jiān)測相對濕度。X鳥用IBH120&50%Avinue(ND)在Hatchery接種疫苗。飼料攝入/體重0120在0到21天之間測量飼料利用率。通過稱量在期末剩余的飼料數(shù)量和將之從提供的數(shù)量中減去，測量在每欄中的飼料。在開始時雞仔在欄中被稱量。在21天所有欄中的所有雞仔被分批稱量。每欄中的所有雞仔的總重量被測定并且平均值被計算。所有死去的雞仔被稱量并且詳細記錄，任何跛的或不能進食和喝水的雞仔從研究中挑選出，并且列出挑選原因。0121使用頸脫臼和左腿移動，從每個欄中選出21天年齡的2個雞仔。脛骨被解剖并且骨頭被送到Eurofins實驗室，Woodthorne,Wolverhampton.在試驗基礎(chǔ)(plotbasis)上進行灰化。使用普遍的SAS線性模型程序(SASInst.Inc.,Cary,NC)分析所有數(shù)據(jù)。當發(fā)現(xiàn)顯著差異時，Duncant的測試常常被用于比較各個處理手段。結(jié)果與討論0122在實驗食譜中被分析肌醇六磷酸酶活性為<50，<50，563，467，558TTU/kg(PVA-包被的-肌醇六磷酸酶)，禾f]554禾口440(GA-包被的-肌醇六磷酸酶)，對于正對照，負對照，負對照+50011/1^1^2乂1116@:^，負對照+500U/kgPVA-包被的-肌醇六磷酸酶，和GA-包被的-肌醇六磷酸酶，負對照+分別在90。C時被微丸化的500U/kgPVA-包被的-肌醇六磷酸酶和GA-包被的-肌醇六磷酸酶，(表5)，這顯示PVA-包被的-肌醇六磷酸酶和GA-包被的-肌醇六磷酸酶在9(TC被微丸化之后，沒有被毀壞。0123用在9(TC時微丸化的+500U/kgPVA-包被的-肌醇六磷酸酶和GA-包被的-肌醇六磷酸酶補充的膳食喂養(yǎng)的雞仔，在21天時比用正對照，負對照，負對照+50011/1^1^271116@乂？食譜喂的雞仔更重(表7)。用負對照膳食喂的雞仔，比在90。C時微丸化的500U/kgPVA-包被的-肌醇六磷酸酶和GA-包被的-肌醇六磷酸酶補充的膳食喂的雞仔，消費更少的飼料(表8)。用500U/kgPhyzyme和PVA-包被的-肌醇六磷酸酶和GA-包被的-肌醇六磷酸酶補充的配合粉料膳食喂的雞仔沒有與正對照顯示出統(tǒng)計學差異。那些用在90。C時微丸化的500U/kgPVA-包被的-肌醇六磷酸酶和GA-包被的-肌醇六磷酸酶補充膳食喂的雞仔，在21天時比用負對照+500U/kgPhyzymeXP和正對照膳食喂的雞仔，具有更好的飼料轉(zhuǎn)化率(表9)。對于用負對照膳食喂的雞仔與所有其他處理相比較，脛骨灰最低。用正對照膳食和肌醇六磷酸酶-補充膳食喂的雞仔具有相同的脛骨灰(表10)。0124被測試的肌醇六磷酸酶，或者作為PhyzymeXP或用PVA或GA包被，當被作為粉料喂食時，作用相同于正對照膳食。當PVA或GA-包被的肌醇六磷酸酶被加入到在9(TC時?；纳虡I(yè)膳食時，產(chǎn)物的回收保持在未微丸化的水平，并且性能至少與正對照膳食一樣好或更好。結(jié)果顯示，用PVA或GA包被的酶提高了其在90。C?；瘻囟戎械臒岱€(wěn)定性，沒有損失喂飼商業(yè)食譜的肉雛雞中的生物功效。<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>表5在實驗膳食中的肌醇六磷酸酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>表7喂食試驗膳食肉雛雞的最初及最后體重<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>在同一欄中的不同上標顯示明顯差異表8喂食試驗膳食d肉雛雞總飼料攝入<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>在同一欄中的不同上標顯示明顯差異表9喂食試驗食譜肉雛雞的飼料轉(zhuǎn)化率<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在同一欄中的不同上標顯示明顯差異表10喂試驗膳食肉雛雞的脛骨灰內(nèi)容<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在同一欄中的不同上標顯示明顯差異實施例6:酶預混合物及微丸化穩(wěn)定性0125根據(jù)表2中具有PVA或阿拉伯樹膠包衣和水分水合包衣的配方所制備的含有肌醇六磷酸酶的顆粒，與粘土海泡石混合，或與含有或不含有氯化膽堿的標準肉雛雞維生素礦物質(zhì)預混合物混合?；旌媳嚷蕿?00克的顆粒被加入到900克的粘土(海泡石)，或100克的顆粒被加入到500克的維生素礦物預混合物。樣品在35'C被保存在密封容器中3周，隨后被經(jīng)歷如在上面碾磨#3(Mill#3)中描述的微丸化過程。實驗對照為沒被存儲在預混合中、并且被放置在適宜條件下3周的顆粒。0126表11和12顯示在9(TC和95t:?；?，這些混合物的肌醇六磷酸酶恢復活性的百分數(shù)。與海泡石或維生素礦物預混合物的混合的顆粒被發(fā)現(xiàn)，在微丸化之后，具有顯著增加的恢復活性。表11<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>表12<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>0127不希望被任何特定理論所束縛，可以相信粘土和維生素礦物預混合物具有吸收水分的能力，并且在與穩(wěn)定顆粒儲存期間，它們從顆粒中吸收剩余水分。為了示例這個效應(yīng)，表13顯示了實驗的結(jié)果，在這個實驗中，顆粒和海泡石被儲存在開放的容器中，并排放置，在密閉的室中。顆粒的水活性，和海泡石的水活性，在25'C儲存之前和之后7天被測量。在儲存期間，海泡石從顆粒中吸收水分直到系統(tǒng)達到平衡。儲存之后，顆粒在水活性方面顯示了下降，而海泡石在水活性方面顯示了上升。表13最初水活性共同儲存七天后水活性制劑GA顆粒海泡石顆粒海泡石顆粒0.3120.5580.3590.373制劑PVA顆粒0.3120.5160.3540.365實施例7:含有氯化膽堿的存儲穩(wěn)定性0128氯化膽堿，或N-(2-羥乙基)三甲基氯化銨，是在家禽，豬和其他動物飼料重要的飼料添加劑，維生素營養(yǎng)物。氯化膽堿是反應(yīng)性分子，對其他維生素和酶具有眾所周知的破壞作用。氯化膽堿經(jīng)常包含在預混合物和原始混合物中。在預混和物中，對豬，被使用的最高水平的是74，800mg/kg，對家禽，為150,000mg/kg。對豬原始混合物的典型水平為大約966到1282.9mg/kg。0129當在氯化膽堿存在下保存的，本發(fā)明的穩(wěn)定，持久的顆粒被顯示為保持了酶活性。從具有PVA或阿拉伯橡膠和水分水合材料的配方所制備的包含肌醇六磷酸酶的顆粒，與含有或不含有氯化膽堿的標準肉雛雞微生物礦物質(zhì)預混合物混合?；旌媳嚷蕿?00克的顆粒被加入到500克的維生素礦物預混合物。樣品在35"C被存儲在密封容器中3周，隨后使用上面描述的肌醇六磷酸酶實驗方案，測試活性。實驗對照為沒有被儲存在預混合物中并且在35t:保持3周的顆粒。表14和15顯示了在儲存之前和之后混合物的活性測量，以及在活性方面的變化百分比。沒有一個樣品在儲存之后顯示活性的顯著損失。這個實驗的誤差，包括取樣，萃取，和活性分析的誤差為大約15%。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>實施例8:水活性對微丸化穩(wěn)定性的影響0130根據(jù)具有PVA包衣和/或無機鹽層包衣的配方，肌醇六磷酸酶顆粒在前面已描述的流化床過程中被制備。如果顆粒的水活性在工藝之后超過0.5，額外的干燥步驟可以被使用，以便在流化床涂布機中，或其他合適過程中，顆?？梢员桓稍镏钡竭_到水活性<0.5。結(jié)果在表16中被顯示，并且證實當水活性少于0.5，微丸化之后，存留活性被增強。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>權(quán)利要求1.用于飼料組合物的顆粒，包括核；活性劑；和至少一層包衣，在一個或多個條件之后，所述顆粒的所述活性劑保留至少50％的活性、至少60％的活性、至少70％的活性、至少80％的活性，所述一個或多個條件選自a)飼料微丸化過程，b)蒸汽-加熱飼料預處理過程，c)儲存，d)作為成分儲存在未微丸化的混合物中，和e)作為成分儲存在飼料基礎(chǔ)混合物中或飼料預混合物中，其中所述飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物包含至少一種化合物，所述化合物選自微量礦物質(zhì)、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿和導致酸性或堿性飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物的化合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述至少一層包衣包含構(gòu)成所述顆粒至少55%w/w的水分水合材料。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述至少一層包衣包含兩層包衣。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的顆粒，其中所述兩層包衣為水分水合包衣和水分屏障包衣。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的顆粒，其中所述水分水合包衣占所述顆粒的25%到60Mw/w之間，以及所述水分屏障包衣占所述顆粒的2%到15%w/w之間。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的顆粒，其中所述水分水合包衣選自無機鹽、蔗糖、淀粉和麥芽糊精，以及所述水分屏障包衣選自聚合物、膠、乳清和淀粉。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述活性劑為一種或多種酶。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述飼料微丸化過程和所述飼料預處理過程在7(TC至95。C之間進行，最長達幾分鐘。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述飼料微丸化過程和所述飼料預處理過程在85"C至95'C之間進行。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述未微丸化的混合物是稀釋劑，其選自一種或多種粘土、麥麩或米糠。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的顆粒，其中所述詞料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物包括氯化膽堿，并且所述活性劑是至少一種酶，當其儲存在所述飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物中時保留至少80%的活性。12.動物飼料化組合物，包括如權(quán)利要求1所述的顆粒。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的動物飼料組合物，其選自動物飼料稀釋劑、動物飼料基礎(chǔ)混合物、動物飼料預混合物、配合粉料(mash)和動物飼料微丸。14.用于動物飼料的顆粒，包括-核活性劑，在儲存之后及在所述顆粒作為一種成分的蒸汽-加熱微丸化過程后，所述顆粒的所述活性劑保留至少80%的活性；水分屏障包衣；和水分水合包衣，其為所述顆粒的至少25。/。w/w，所述顆粒在蒸汽-加熱微丸化過程前具有0.5以下的水活性。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的顆粒，其中所述水分屏障包衣選自聚合物和膠，所述水分水合材料為無機鹽。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的顆粒，其中所述水分水合包衣占所述顆粒的25%到45%w/w之間，所述水分屏障包衣占所述顆粒的2°/。到10%w/w之間。17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的顆粒，其中所述活性劑為一種或多種酶。18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的顆粒，其中所述蒸汽-加熱微丸化過程在85'C至95"C之間進行，最長達幾分鐘。19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的顆粒，其中所述顆粒在未微丸化混合物中儲存后，至少80%的活性被保留，其中所述未微丸化混合物包含至少一種化合物，所述化合物選自微量礦物質(zhì)、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿和能導致酸性或堿性未微丸化混合物的化合物。20.動物飼料組合物，包含如權(quán)利要求14所述的顆粒。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的動物飼料組合物，選自動物飼料稀釋劑、動物飼料基礎(chǔ)混合物、動物飼料預混合物、動物飼料混合物和動物飼料微丸。22.動物詞料成分，包括顆粒，包括核；包圍所述核的活性劑；和至少一層包圍所述活性劑的包衣，在一個或多個條件之后，所述活性劑保留至少50%的活性、至少60%的活性、至少70%的活性、至少80%的活性，所述一個或多個條件選自a)飼料微丸化過程，b)蒸汽-加熱飼料預處理過程，c)存儲，d)在未微丸化混合物中作為成分存儲，和e)作為成分在飼料基礎(chǔ)混合物中或詞料預混合物中存儲，其中所述飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物包含至少一種化合物，所述化合物選自微量礦物質(zhì)、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿和能導致酸性或堿性飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物的化合物。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的動物詞料成分，其中所述至少一層包衣包含兩層包衣。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的動物飼料成分，其中所述兩層包衣為水分水合包衣和水分屏障包衣。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的動物飼料成分，其中所述水分水合包衣包含選自無機鹽、碳水化合物、麥芽糊精和淀粉的材料，所述水分屏障包衣包含選自聚合物、蛋白質(zhì)、脂類、脂肪、油類、脂肪酸、膠、淀粉、卵磷脂或蠟的材料。26.根據(jù)權(quán)利要求22所述的動物飼料成分，其中所述核與所述活性劑共同構(gòu)成所述顆粒的至少50%w/w。27.根據(jù)權(quán)利要求22所述的動物飼料成分，其中所述核與所述活性劑共同構(gòu)成所述顆粒的大約50%到大約60%w/w。28.根據(jù)權(quán)利要求22所述的動物詞料成分，其中所述核與所述活性劑構(gòu)成所述顆粒的大約90%到大約100%w/w，并且所述活性劑為內(nèi)在熱穩(wěn)定性酶。29.根據(jù)權(quán)利要求22所述的動物飼料成分，其中所述活性劑為熱不穩(wěn)定的。30.根據(jù)權(quán)利要求22所述的動物飼料成分，進一步包括飼料組合物，所述顆粒分散在所述飼料組合物中。31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的動物飼料成分，其中所述飼料組合物是飼料微丸，所述活性劑分散在所述飼料微丸中，并且所述活性劑具有保留的活性，其為預-微丸化活性的至少50%、至少60%、至少70%、至少80%和至少90%。32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的動物飼料成分，其中所述飼料組合物選自粘土、基本營養(yǎng)劑、谷物、小麥、黑麥、米和它們的混合物。33.生產(chǎn)用于飼料的、包含活性劑的顆粒的方法，該方法包括制備含有核、至少一種活性劑以及至少一層包衣的穩(wěn)定顆粒；將所述穩(wěn)定顆粒與以下一種或多種混合在一起a)稀釋劑，b)基礎(chǔ)混合物，c)預混合物，和d)用于微丸化的飼料混合物。34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，進一步包括使所述飼料混合物微丸化的步驟，所述微丸化在7(TC到95。C溫度之間進行，最長達幾分鐘。35.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述穩(wěn)定顆粒與粘土混合在一起。36.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述穩(wěn)定顆粒與含有氯化膽堿的預混合物混合在一起。37.動物飼料組合物，其通過如權(quán)利要求33所述的方法制備。38.制備用于儲存在含氯化膽堿飼料預混合物中的含酶穩(wěn)定顆粒的方法，所述方法包括提供核材料和酶，所述酶分布在整個所述核材料中或?qū)盈B在核材料上;向所述核材料和酶施用水分水合材料，以形成占所述穩(wěn)定顆粒至少25。/。w/w的層；用水分屏障材料包被所述層，以形成占所述顆粒至少5%w/w的包衣，所述施用和包被的條件被選擇以便所述穩(wěn)定顆粒的水活性小于0.5。39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述水分水合材料為無機鹽，所述層占所述穩(wěn)定顆粒的大約35%到大約45%w/w。40.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述包衣選自聚合物和膠。全文摘要用于飼料組合物的穩(wěn)定、持久顆粒，其含有核，至少一種活性劑；和至少一層包衣。在選自下述一個或多個的條件之后，顆粒的活性劑保留至少50％的活性，至少60％的活性，至少70％的活性，至少80％的活性，所述一個或多個的條件是a)飼料微丸化過程，b)蒸汽-加熱飼料預處理過程，c)存儲，d)作為成分存儲在未微丸化的混合物中，和e)作為成分存儲在飼料基礎(chǔ)混合物中或飼料預混和物中，其中飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混和物包括至少一種化合物，該化合物選自微量礦物質(zhì)、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿、以及導致酸性或堿性飼料基礎(chǔ)混合物或飼料預混合物的化合物。文檔編號C12N9/98GK101287381SQ200680037973公開日2008年10月15日申請日期2006年10月12日優(yōu)先權(quán)日2005年10月12日發(fā)明者B·弗呂克斯代爾,D·戴爾,K·A·克拉克森,M·S·格伯特,M·帕特蘇夫,N·T·貝克爾,T·格拉文森申請人:金克克國際有限公司