專利名稱：用兩性離子化合物提高核酸雜交特異性的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用特定的兩性離子化合物提高核酸雜交特異性的方法。
背景技術：
雜交特異性(也稱為雜交嚴格性)指當兩條互補核酸和非互補核酸進行雜交時，互補核酸相互形成特異性雜合體的程度。總的來說，已試圖通過調整緩沖液中的鹽濃度和反應溫度，或者通過加入添加劑如Denhart溶液，或添加非特異性DNA或RNA以誘導雜交競爭來獲得更高的雜交特異性。
聚合酶鏈式反應(PCR)是擴增核酸的方法，包括核酸的變性、退火和延伸，在退火進程期間，發(fā)生探針與目標核酸的雜交?？梢愿鶕结樑c目標核酸之間的同源程度更改PCR的條件。當在給定PCR條件下提高退火溫度時，非特異性雜交產物的產率下降，然而，當降低退火溫度時，非特異性雜交產物的產率增加。
雜交特異性對聚合酶鏈式反應(尤其是對多重PCR)有不利影響。多重PCR使待擴增的不同基因能夠在同一反應中同時擴增。也就是說，將能夠擴增各自的目標序列的不同引物組放在一個反應器中，目標序列的擴增在單個PCR中同時進行。用于多重PCR的引物應當只對目標DNA序列是特異性的，并且不應干擾其它引物的反應，這樣目標DNAs可以充分地擴增。多重PCR產生許多目標雜交產物，它們由許多的電泳條帶所顯示。因此，如果退火過程中雜交特異性低，那么除了許多目標條帶之外，在電泳凝膠上還會出現許多的條帶，在多重PCR結果分析中帶來問題。因此，強烈需要提高雜交特異性。
美國專利4,936,963公開了是使用兩性離子物質組氨酸減少電泳所用時間以降低電泳中總傳導率的方法。該發(fā)明利用兩性離子物質，本發(fā)明也利用兩性離子物質。然而，其使用兩性離子物質的目的是減少電泳所用時間，不同于本發(fā)明的目的，本發(fā)明的目的是提高核酸雜交特異性。
出于這種考慮，本發(fā)明的發(fā)明人進行了研究，目的是解決相關領域現有技術所暴露出來的問題，發(fā)現核酸雜交特異性的提高可以通過向核酸雜交反應體系尤其是多重PCR中添加特定的兩性離子化合物來誘導。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供通過在含特定兩性離子化合物的溶液中雜交核酸來提高核酸雜交特異性的方法。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了提高核酸雜交特異性的方法，該方法包括在含兩性離子化合物的溶液中雜交核酸，所述兩性離子化合物選自3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl-ammonio]-1-propane sulfonate)(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
根據本發(fā)明的另一個方面，提供了擴增目標核酸的方法，該方法包括在含兩性離子化合物的溶液中雜交引物和目標核酸，所述兩性離子化合物選自3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
根據本發(fā)明的另一個方面，提供了用于核酸雜交的包含兩性離子化合物的溶液，所述兩性離子化合物選自3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
根據本發(fā)明的另一個方面，提供了包含用于核酸雜交的溶液的核酸雜交試劑盒，所述溶液包含兩性離子化合物，所述兩性離子化合物選自3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。


通過參考附圖詳細描寫其示例性實施方案，本發(fā)明上述以及其他特征和優(yōu)勢將更為明顯，其中圖1為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降；圖2為目標雜交產物和非特異性雜交產物的產率的定量評估中，用Agilent 2100Bioanalyzer獲得的譜圖；圖3為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降；圖4為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降；和圖5為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加甜菜堿時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降。
具體實施例方式
現在將參考附圖更為充分地描述本發(fā)明，附圖中顯示本發(fā)明的示例性實施方案。然而，本發(fā)明可以許多不同形式來具體體現，而不應理解為限于本文所列出的實施方案；相反，提供這些實施方案將使本公開全面和完整，將充分地為本領域技術人員傳達本發(fā)明的構思。
核酸雜交指不同來源的核酸之間的結合，雜交的條件可以根據所要結合的核酸的序列同源性而有所不同。換句話說，如果受試核酸之間的序列同源性高，則使用嚴格條件，如果序列同源性低，則使用溫和條件。當雜交條件嚴格時，雜交特異性提高，此雜交特異性的提高導致非特異性雜交產物產率的下降。然而，在溫和雜交條件下，雜交特異性下降，此雜交特異性的下降導致非特異性雜交產物產率的提高。尤其在后一種情況下，需要降低非特異性雜交產物的水平，因此，在本發(fā)明中，嘗試通過在含特定兩性離子化合物的溶液中雜交核酸而提高核酸雜交特異性。
核酸之間的雜交可以分為DNA與DNA之間的雜交、DNA與RNA之間的雜交、和RNA與RNA之間的雜交。核酸雜交反應通常分為Southern雜交反應或Northern雜交反應。核酸雜交反應對于DNA芯片尤其重要，因為實施雜交反應時，可能影響特異于探針的目標核酸的快速檢測，其中所述探針固定在芯片上，且含目標核酸的樣品添加到固定的探針上。
根據本發(fā)明的實施方案，提供通過在含特定兩性離子化合物的溶液中雜交核酸來提高核酸雜交特異性的方法。兩性離子化合物指在中性溶液中能夠同時作為酸和堿起作用的化合物。兩性離子化合物的例子包括甜菜堿、氨基酸、3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)等。兩性離子化合物甜菜堿和CAPS具有如下所示的結構。
大多數情況下，兩性離子化合物在核酸雜交反應中都傾向于提高核酸雜交特異性，因此降低非特異性雜交產物的產率，但不幸的是，相同化合物也降低目標雜交產物的產率。然而，一些兩性離子化合物顯示出所期望的特征，即降低非特異性雜交產物的產率而提高核酸雜交特異性，同時維持目標雜交產物的產率。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現了具有此期望特征的兩性離子化合物，包括3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)等。
當將根據本發(fā)明實施方案的這種兩性離子化合物添加到核酸雜交反應體系時，核酸雜交反應的特異性提高，結果可以減少假陽性條帶的產生，假陽性條帶的產生在雜交反應期間帶來顯著的問題。假陽性條帶是分離目標基因方法的結果，其在核酸雜交反應的特異性下降時大量產生。這些假陽性條帶使得目標雜交產物的分離很困難，在處理時間和操作成本方面給分離目標基因的方法帶來不利影響。因此，目標基因的分離強烈需要消除這樣的非特異性雜交產物。
根據本發(fā)明的實施方案，兩性離子化合物的濃度以重量計可以為0.2至3％。當兩性離子化合物的濃度以重量計低于0.2％時，核酸雜交特異性降低，降低非特異性雜交產物產率的效果將因此下降。當兩性離子化合物的濃度以重量計高于3％時，目標雜交產物的產率下降。
根據本發(fā)明的另一實施方案，提供了擴增目標核酸的方法，包括在溶液中雜交引物和目標核酸，所述溶液含有選自以下的兩性離子化合物3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
根據本發(fā)明當前的實施方案，擴增目標核酸的方法包括變性、退火和延伸，探針與目標核酸之間的雜交發(fā)生在退火過程期間。當把根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物添加到雜交反應體系時，探針與目標核酸之間的雜交特異性增強。此核酸雜交特異性的增強導致非特異性擴增產物產率的降低，只有所需的目標雜交產物特異地擴增。
擴增目標核酸的方法的例子包括聚合酶鏈式反應(PCR)、連接酶鏈式反應、鏈置換擴增、核酸依賴的擴增、修復鏈式反應(repair chain reaction)、解旋酶鏈式反應(helicase chain reaction)、QB復制酶擴增、以及連接(反應)激活的轉錄(ligation activated transcription)，優(yōu)選使用聚合酶鏈式反應實施目標核酸的擴增。
根據本發(fā)明的實施方案，PCR為多重PCR。根據本發(fā)明當前實施方案的擴增目標核酸的方法預計用于增強核酸雜交反應的特異性，更具體地，預計用于消除目標基因擴增期間多重PCR的非特異性雜交產物，其可用于鑒定大量病原體。大多數情況下，兩性離子化合物都傾向于提高核酸雜交反應中的核酸雜交特異性，因此降低非特異性雜交產物的產率，但不幸的是，同樣的化合物也降低目標雜交產物的產率。然而，一些兩性離子化合物顯示出所期望的特征，即降低非特異性雜交產物的產率而提高核酸雜交特異性，同時維持目標雜交產物的產率。這些所期望的特征構成能夠通過降低多重PCR中的假陽性條帶正確鑒定特異性病原體的基本要素。
非特異性雜交產物的產生成為多重PCR中的特殊問題。多重PCR允許通過單一PCR檢測大量基因，電泳凝膠上出現許多條帶。在多重PCR中，如果除了所需大小的基因雜交產物的條帶之外，還產生太多非特異性雜交產物的條帶，則不可能進行特異性病原體的正確鑒定。因此，在多重PCR中，有必要減少非特異性雜交產物條帶的數目。當把適量的根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物添加到多重PCR中時，非特異性雜交產物條帶的數目明顯減少。
根據本發(fā)明的另一實施方案，多重PCR消除非特異性雜交產物，而保留目標雜交產物。如以上所討論的，當把適量的兩性離子化合物添加到多重PCR和時，非特異性雜交產物條帶的數目明顯減少。然而，如果目標雜交產物的產率也隨著非特異性雜交產物的減少而降低，則不能獲得所需的效果。大多數情況下，兩性離子化合物同時降低非特異性雜交產物的產率和目標雜交產物的產率。然而，當使用根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物時，有利地，同時減小非特異性雜交產物的產率和維持目標雜交產物的產率。
根據本發(fā)明的另一實施方案，可以以按重量計0.2至3％的濃度使用所述兩性離子化合物。當兩性離子化合物的濃度以重量計低于0.2％時，核酸雜交特異性降低，降低非特異性雜交產物產率的效果將因此降低。當兩性離子化合物的濃度以重量計高于3％時，目標雜交產物的產率將降低。
根據本發(fā)明的另一實施方案，引物對大量病原體的檢測來說是特異的。當使用根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物實施多重PCR時，非特異性雜交產物的條帶數目減少，同時維持目標雜交產物的產率。因此，現在可以輕易地解決現有技術中存在的問題，所述問題即由于非特異性雜交產物的高產率而難以正確檢測大量的基因。大量基因的檢測包括與病原體、遺傳性疾病等等相關的基因序列的分析。例如，導致人類呼吸性疾病的最常見的病毒包括麻疹病毒、腸道病毒、鼻病毒、SARS相關冠狀病毒(SARS-coV)、水痘帶狀皰疹病毒(VSV)、腺病毒、人副流感病毒1(HPIV1)、人副流感病毒2(HPIV2)、人副流感病毒3(HPIV3)、流感病毒A(IVA)、流感病毒B(IVB)、呼吸道合胞病毒A(RSVA)、和呼吸道合胞病毒B(RSVB)?？焖偬禺惖貦z測這些病毒對于診斷、預放和治療呼吸性疾病是必需的，通過使用根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物實施多重PCR，可以快速正確地檢測所述病毒。
根據本發(fā)明的另一實施方案，提供了用于核酸雜交的溶液，所述溶液含有選自以下的兩性離子化合物3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。根據本發(fā)明當前實施方案的用于核酸雜交的溶液含有核酸雜交反應所需的多種化合物。當使用根據當前實施方案的用于核酸雜交的溶液實施核酸雜交反應時，核酸雜交的特異性增強，可以獲得更好的雜交結果，其中除了所述的多種化合物之外，所述溶液還含有根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物。核酸雜交反應對于DNA芯片是尤其重要的。當探針固定在芯片上時，向其添加含有目標核酸的樣品，用本實施方案的核酸雜交溶液實施核酸雜交反應，由此可以快速地檢測特異于探針的目標核酸。
根據本發(fā)明的另一實施方案，提供包含用于核酸雜交的溶液的核酸雜交試劑盒，所述溶液含有選自以下的兩性離子化合物3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。所述核酸雜交試劑盒可以包含核酸雜交必需的多種組成成分，所述組成成分可能是本領域普通技術人員所熟知的。
以下將參考實施例更詳細地描述本發(fā)明。這些實施例僅用于說明性目的，不應解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實施例1多重PCR中CAPS對核酸雜交特異性的影響從呼吸道感染的主要病原體流感嗜血桿菌(Haemophilus influenza)(來自Samsung Medical Center)分離基因組DNA(gDNA)，作為多重PCR的模板，以0.2ng或1ng的量使用所分離的gDNA。以0.5％或1％的濃度使用作為根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物的3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)，以實施多重PCR。用GeneAmp PCR系統(tǒng)9700(ABI)、PCR混合物(模板gDNA0.2ng或1ng、CAPS 0.5％或1％、1×Taq Pol緩沖液、dNTP混合物每種200μM、PCR引物每種400nM(SEQ ID NO1至SEQ ID NO10)、和Taq Pol 5個單位)，于95℃1分鐘，使DNA完全變性，然后對所述PCR混合物進行25個PCR循環(huán)(95℃5秒、62℃13秒、72℃15秒)，72℃最后延伸1分鐘，如此實施多重PCR。
圖1為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加CAPS時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降。由圖1可以看到，與沒有添加CAPS的樣品(稱為-CAPS)相比，添加有CAPS的樣品(稱為+CAPS)中非特異性雜交產物條帶的強度明顯降低，當CAPS的濃度提高時，非特異性雜交產物條帶的強度顯著降低。在添加有CAPS(+CAPS)的情況下，非特異性雜交產物條帶的強度顯著降低，但保持了目標雜交產物條帶的強度。此外，當如預期的增加模板DNA的量時，目標雜交產物的量和非特異性雜交產物的量也增加。
在用CAPS處理期間，為了定量評估產生目標雜交產物和非特異性雜交產物的程度，使每種PCR產物都進行電泳，然后用Agilent 2100Bioanalyzer檢測熒光。
圖2為目標雜交產物和非特異性雜交產物的產率定量評估中用Agilent2100Bioanalyzer獲得的譜圖。參見圖2，在圖2主圖下面的放大圖中所示的兩條曲線當中，上曲線對應于用0.2ng gDNA而未經CAPS處理所獲得的圖線，下曲線對應于用經0.5％CAPS處理的0.2ng gDNA獲得的圖線。箭頭指示非特異性雜交產物的條帶位置。如圖2所示，無論gDNA是否經由CAPS處理過，目標雜交產物條帶的強度都幾乎是一致的。然而，當用CAPS處理時，非特異性雜交產物的條帶大部分被消除。
因此，可以看到，當把根據本發(fā)明實施方案的兩性離子化合物CAPS添加到多重PCR中時，非特異性雜交產物的產率明顯降低，同時保持了目標雜交產物的產率。由此發(fā)現添加CAPS可用于檢測特定病原體。
實施例2多重PCR中CAPSO和CHES對核酸雜交特異性的影響為研究多重PCR中不同類型兩性離子化合物的核酸雜交特異性，還使用了CAPSO和CHES。以與實施例1中相同的方式進行相同的試驗，不同之處是分別向多重PCR添加濃度為0.2％、0.4％、0.8％和1.6％的CAPSO和CHES，并使用1ng的流感嗜血桿菌gDNA模板。
圖3為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加CAPSO時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降。參見圖3，對對照物進行不添加CAPSO的多重PCR。由圖3可以看到，與不添加CAPSO的情況相比，在添加CAPSO的情況下，非特異性雜交產物條帶的強度顯著降低，并且更高的CAPSO濃度導致條帶強度更顯著的降低。圖4為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加CHES時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降。如圖4所示，CHES產生與CAPSO類似的結果。
實施例3多重PCR中兩性離子化合物的類型對核酸雜交特異性的影響使用甜菜堿研究多重PCR中不同類型兩性離子化合物的核酸雜交特異性。以與實施例1中相同的方式實施相同的試驗，不同之處是用Solgent，Inc.的5×頻帶輔助器具(band doctor)以2.5μl(0.25×)、5μl(0.5×)、10μl(1×)、和15μl(1.5×)的量將甜菜堿添加到多重PCR中，并且分別以1ng、0.1ng和0.01ng的量使用流感嗜血桿菌gDNA模板。
圖5為顯示PCR產物電泳分析結果的照片，所述PCR產物在向多重PCR添加甜菜堿時獲得，結果顯示非特異性雜交產物的產率下降。參見圖5，對照實施不添加甜菜堿的多重PCR，數字″1″、″2″和″3″指用于PCR的模板gDNA的量，例如分別為1ng、0.1ng和0.01ng。由圖5可以看到，與不添加甜菜堿的情況相比，在添加甜菜堿的情況下，非特異性雜交產物條帶的強度顯著降低，并且更高的甜菜堿濃度導致條帶強度更顯著的降低。然而，可以看到，與CAPS的情況不同，雖然隨著甜菜堿濃度的不斷增加，非特異性雜交產物條帶的強度顯著降低，但目標雜交產物條帶的強度也顯著降低。因此，顯示甜菜堿不適合于提高核酸雜交特異性以檢測特定病原體的目的。
因此，并非所有的兩性離子化合物都顯示本發(fā)明的效果，只有特定的兩性離子化合物如CAPS能夠導致非特異性雜交產物條帶強度的降低，同時保持目標雜交產物條帶的強度。
如以上所討論的，根據本發(fā)明實施方案的方法允許在多重PCR中減小非特異性雜交產物的產率，同時保持目標雜交產物的產率，因此提高核酸雜交的特異性，可以有效地用于特定病原體的鑒定、遺傳性疾病的診斷、基因序列的分析等等。
雖然已經詳細地展示了本發(fā)明并參考其示例性實施方案描述了本發(fā)明，但本領域普通技術人員會了解可以在其中作出多種形式上和細節(jié)上的改變，而不背離下述權利要求確定的本發(fā)明的精神和范圍。
序列表<110>三星電子株式會社(Samsung Electronics Co.，Ltd.)<120>用兩性離子化合物提高核酸雜交特異性的方法<160>10<170>KopatentIn 1.71<210>1<211>22<212>DNA<212>人工序列<220>
<223>正向引物<400>1gcgtaccttt tgtataatgg gtc 23<210>2<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>反向引物<400>2gaccttagct ggcggtctg19<210>3<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>正向引物<400>3tgtcgggtaa gttccgacc19
<210>4<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>反向引物<400>4crgaaccacc ggatcacta 19<210>5<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>正向引物<400>5cacctcgatg tcgrctcatc 20<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>反向引物<400>6ggtcctctcg tactagrarc a21<210>7<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>正向引物
<400>7tagcatatca gaaggcacac cc 22<210>8<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>反向引物<400>8atccactcaa gagagacaac att 23<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>正向引物<400>9yccakactcc tacgggaggc 20<210>10<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>反向引物<400>10gtattaccgc rrctgctggc ac 2權利要求
1.提高核酸雜交特異性的方法，所述方法包括在含有選自以下的兩性離子化合物的溶液中雜交核酸3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
2.權利要求1的方法，其中所述兩性離子化合物的濃度以重量計為0.2至3％。
3.權利要求1的方法，其中所述雜交選自DNA與DNA之間的雜交、DNA與RNA之間的雜交，以及RNA與RNA之間的雜交。
4.擴增目標核酸的方法，所述方法包括在溶液中雜交引物和目標核酸，所述溶液含有選自以下的兩性離子化合物3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
5.權利要求4的方法，其中使用聚合酶鏈式反應(PCR)實施目標核酸的擴增。
6.權利要求5的方法，其中所述聚合酶鏈式反應為多重PCR。
7.權利要求4的方法，其中所述引物對于大量病原體的檢測是特異性的。
8.權利要求4的方法，其中所述兩性離子化合物的濃度以重量計為0.2至3％。
9.用于核酸雜交的溶液，其含有選自以下的兩性離子化合物3-(環(huán)己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)和2-(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。
10.核酸雜交試劑盒，其包含權利要求9的用于核酸雜交的溶液。
全文摘要
提供提高核酸雜交特異性的方法，包括在含有選自以下的兩性離子化合物的溶液中雜交核酸3－(環(huán)己基氨基)－1－丙磺酸(CAPS)、3－[(3－膽酰胺基丙基)二甲基銨基]－1－丙磺酸鹽(CHAPS)、3－(環(huán)己基氨基)－2－羥基－1－丙磺酸鹽(CAPSO)和2－(環(huán)己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。所述方法允許在多重PCRs中減小非特異性雜交產物的產率而同時保持目標雜交產物的產率，由此提高核酸雜交的特異性。因此，所述方法能夠有效地用于特定病原體的鑒定、遺傳性疾病的診斷、基因序列的分析等等。
文檔編號C12Q1/68GK101050472SQ20061016864
公開日2007年10月10日 申請日期2006年12月20日 優(yōu)先權日2006年4月7日
發(fā)明者李貞男, 白象鉉 申請人:三星電子株式會社