專利名稱：一種制備紅景天提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域，具體地說涉及一種紅景天提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
紅景天是指景天科紅景天屬植物，在世界上有90余種，多分布在北半球的高寒地帶，大多數(shù)都生長在海拔3500-5000米左右的高山流石或灌木叢林下。我國有73種，主要分布在我國西藏的高山高寒地帶，另外東北、西北、華北的一些地區(qū)也有紅景天資源分布。
紅景天的主要藥用部位是根莖，主要有效成份是紅景天素、紅景天甙以及其甙元(酪醇)等，具有抗疲勞、抗缺氧、抗誘變和抑制腫瘤等功效，且本身并無副作用(宋月英等 紅景天屬植物化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展 中草藥.2004，35(2).-235-236；李剛等 藏藥紅景天的藥理學(xué)研究進(jìn)展 中國民族醫(yī)藥雜志.2004，10(3).-38-40；王家明 閆繼平 王盛虔 紅景天的藥理作用研究進(jìn)展中醫(yī)藥學(xué)報(bào).2003，31(4).-57-59)，因此在藥品和保健食品的開發(fā)中得到了廣泛的應(yīng)用。
當(dāng)前對紅景天中的紅景天素、紅景天甙等活性成分的主要提取方法是水提法和醇提法，水法提取成本低，方法簡單；醇法提取成本較前者高，但提取液中可溶性固形物的含量(得率)相對于水提法較高，故傳統(tǒng)紅景天有效成分提取以醇提為更為常用(余華 何志禮 紅景天有效成分的提取和加工適應(yīng)性研究 食品工業(yè)科技.2002，23(8).-47-49)。
目前，由于對紅景天的大量開發(fā)利用，使這種我國的特有藥材資源面臨枯竭的危機(jī)，如何在當(dāng)前提取法的基礎(chǔ)上開發(fā)新的提取方法以提高紅景天中有效成分的產(chǎn)率，從而提高紅景天原藥的利用率，成為當(dāng)前本領(lǐng)域急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是提供一種制備紅景天提取物的方法。該方法包括以下步驟a、準(zhǔn)備紅景天根莖原料；b、加入微生物酶液酶解；c、將步驟b處理所得酶解產(chǎn)物進(jìn)行醇提；d、除去c步驟醇提產(chǎn)物中的醇，得紅景天提取物。
其中，上述方法步驟a中的紅景天根莖原料準(zhǔn)備過程是將紅景天根莖按40～80目粉碎，再加入1～3倍重量的水浸泡、然后在80～120℃下加熱蒸煮20～40分鐘。優(yōu)選的，按60目粉碎，加熱蒸煮溫度80～90℃，加熱蒸煮30分鐘。
其中，上述方法步驟b中的酶解為將微生物酶液加入30～50℃的紅景天根莖原料中，保溫酶解8～24小時(shí)。
優(yōu)選的，酶解溫度為40℃，酶解時(shí)間為12小時(shí)其中，上述方法步驟b中的微生物酶液為曲霉、木霉和根霉中的一種或多種的酶液。
進(jìn)一步的，上述的微生物酶液是由以下方法制備得到的將麩皮和水拌勻后在115～125℃滅菌25～35分鐘，冷卻后接種曲霉、木霉或根霉，28～30℃培養(yǎng)36～48小時(shí)；然后加4～6倍水，在28～30℃下浸泡1～3小時(shí)，過濾或離心后取上清液，即得。
其中，上述方法的步驟c中的醇提為在80℃水浴中用醇回流浸提1～8次，每次醇加入量為使醇的終濃度為60％～85％，每次浸提時(shí)間為10～90min。優(yōu)選的，浸提3～5次，每次浸提時(shí)間20～60min。
進(jìn)一步的，上述的醇為乙醇。
本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供一種紅景天提取物，該紅景天提取物是由上述的方法所制備而成的。
本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問題是提供上述的紅景天提取物在制備抗腫瘤、抗疲勞或抗缺氧功能的藥物組合物或保健食品中的用途。
現(xiàn)有紅景天提取物的提取工藝主要是采用直接用濃度約70％的醇類(酒精等)浸泡提取紅景天原料，提取率和藥效受紅景天品種，植株部位和分布地域等影響。
本發(fā)明紅景天提取物的制備方法與原工藝相比，在醇類提取之前，先用微生物酶液預(yù)處理，利用微生物所分泌的多種水解酶預(yù)處理紅景天原料，使其組織疏松，纖維素及淀粉等成分分解，增加醇溶物質(zhì)的溶出率(紅景天有效成份多為醇溶物質(zhì))。
本發(fā)明所使用的微生物酶液是來源于曲霉(Aspergillus)、木霉(Trichoderma)或根霉(Rhizopus)中的一種或多種。其中根霉中常用日本根霉(Rhizopus japonicus)、米根霉(Rhizopus oryzae)和華根霉(Rhizopus chinensis)；木霉(Trichoderma)中常用綠色木霉(Trichoder mavirde)和里氏木霉(Trichoderma reesei)；曲霉中常用是黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(Aspergillus oryzae)。實(shí)際生產(chǎn)中可分別使用上述曲霉、木霉或根霉中的一種或多種進(jìn)行浸提得到酶液，浸提酶液按應(yīng)用需要還可以進(jìn)行混合，以取得更好的效果。
本發(fā)明方法創(chuàng)造性地現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，加入了微生物酶液處理的簡單步驟，使整個(gè)方法能顯著增加醇溶物質(zhì)(含紅景天有效成份)的溶出，使新工藝比現(xiàn)有工藝的浸取率提高約20％-30％，從而有效利用野生資源，大大增加了原材料利用率，提高了經(jīng)濟(jì)收益；同時(shí)本方法能降低藥渣污染物的排量，實(shí)現(xiàn)對紅景天的綠色開發(fā)。本發(fā)明紅景天提取物中有效成分的含量比現(xiàn)有技術(shù)大為提高，其制備的藥物組合物和保健食品的效果也得到了很大的增強(qiáng)，具有極好的市場前景。
下面通過對本發(fā)明較佳實(shí)施方式的詳細(xì)描述對本發(fā)明進(jìn)行說明，但不應(yīng)理解為是對本發(fā)明的限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變型，只要不脫離本發(fā)明的技術(shù)思想，均屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求所定義的范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一 本發(fā)明微生物酶液的制備分別取2kg麩皮，各加水2kg，拌勻后，120℃滅菌30分鐘，冷卻后分別接種所需的各種曲霉、木霉或根霉，28～30℃培養(yǎng)40小時(shí)。然后每份各加水10kg，在30℃下浸泡2小時(shí)，過濾后取上清液，即分別得到20％的酶浸提液。
上述制得的曲霉、木霉或根霉的20％酶浸提液可以單獨(dú)作為本發(fā)明微生物酶液使用，也可以按應(yīng)用需要進(jìn)行兩種或三種的混合均勻后得到微生物酶液。
實(shí)施例二 紅景天提取物的制備取10kg紅景天根莖原料粉碎(40目)，加入3倍重量的水混合，加溫至80～85℃35分鐘，降溫至40℃，按紅景天根莖原料的重量加入按實(shí)施例1方法所制備的混合酶液(黑曲霉+綠色木霉)，混勻后在30℃保溫酶解8小時(shí)。
向酶解后的混合液中加入乙醇至終濃度70％，提取2次，每次1小時(shí)。提取液離心(1800r/min，8min)后用400目篩絹過濾。將濾液在真空度0.015Mpa下減壓蒸餾除乙醇，然后干燥得到紅景天提取物2410g。
實(shí)施例三 紅景天提取物的制備取50kg紅景天原料粉碎(80目)，加入2倍重量的水混合，110～120℃蒸煮20分鐘，降溫至38℃，按紅景天根莖原料的重量加入按實(shí)施例1方法所制備的混合酶液(米曲霉+綠色木霉)，混勻后在40℃保溫12小時(shí)。向紅景天酶解液中加入乙醇至終濃度65％，提取8次，每次20分鐘。提取液離心(1800r/min，8min)后用400目篩絹過濾。將濾液在真空度0.015Mpa下減壓蒸餾除乙醇，然后干燥得到紅景天提取物12150g。
實(shí)施例四 紅景天提取物的制備取50kg紅景天原料粉碎(60目)，加入1倍重量的水混合，85～95℃蒸煮40分鐘，降溫至40℃，按紅景天根莖原料的重量加入按實(shí)施例1方法所制備的混合酶液(米曲霉+黑曲霉)，混勻后在48℃保溫酶解24小時(shí)。向紅景天酶解液中加入乙醇至終濃度85％，提取5次，每次1.5小時(shí)。提取液離心(1800r/min，8min)后抽濾，將濾液在真空度0.015Mpa下減壓蒸餾除乙醇，然后干燥得到紅景天提取物11850g。
實(shí)施例五 紅景天提取物的精制取實(shí)施例二、三和四的提取產(chǎn)物按現(xiàn)有常規(guī)方法制備成浸膏。
實(shí)施例六 紅景天口服液的制備取實(shí)施例五所制得的浸膏3kg，添加適量矯味劑、無菌水和其他常規(guī)輔料，按常規(guī)制藥工藝制備成紅景天口服液。
實(shí)施例七 紅景天膠囊的制備取實(shí)施例五所制得的浸膏5kg，添加適量藥學(xué)上常用的輔料，按常規(guī)制藥工藝制備成紅景天膠囊。
試驗(yàn)例一 本發(fā)明方法的比較實(shí)驗(yàn)1、試驗(yàn)材料a、按常規(guī)醇提方法制備的紅景天提取物取60目粉碎的紅景天原料200g，加入2倍重量的水混勻，85～95℃蒸煮40分鐘，加入乙醇至終濃度85％，提取5次，共5個(gè)小時(shí)。提取液離心(1800r/min，8min)后抽濾，將濾液在真空度0.015Mpa下減壓蒸餾除乙醇，得到紅景天提取物。
b、按本發(fā)明方法制備的紅景天提取物分別取60目粉碎的紅景天原料200g，加入2倍重量的水混勻，85～95℃蒸煮40分鐘，降溫至40℃，按原料重的15％加入本發(fā)明各種酶液(綠色木霉、米曲霉、黑曲霉、日本根霉、綠色木霉+米曲霉、米曲霉+黑曲霉、綠色木霉+黑曲霉)，同時(shí)還設(shè)立添加同樣量的市售淀粉酶的對照組，混勻后在45℃保溫8小時(shí)。向紅景天酶解液中加入乙醇至終濃度85％，提取5次，共5個(gè)小時(shí)。提取液離心(1800r/min，8min)后抽濾，將濾液在真空度0.015Mpa下減壓蒸餾除乙醇，得到紅景天提取物。
將a、b所得的提取物加去離子水調(diào)節(jié)至同體積得到紅景天提取物樣品溶液。
2、檢測項(xiàng)目及檢測方法a、紫外分光光度法檢測紅景天提取物中有效成份含量(結(jié)果見表一)取紅景天提取物樣品溶液適當(dāng)稀釋，用去離子水作空白對照，用分光光度計(jì)測定在278nm處的吸光度值。
b、重氮鹽比色法檢測有效成份的含量(結(jié)果見表一)重氮化試劑甲液用濃鹽酸溶解對氨基苯磺酸制成10％的溶液。稱取對氨基苯磺酸1g，加濃鹽酸10ml充分溶解即得10％的鹽酸對氨基苯磺酸溶液。放在100ml容量瓶中，加水稀釋至100ml即得到1％的該溶液。
乙液配10％的亞硝酸鈉溶液。稱取亞硝酸鈉1g，加水至10ml，使之充分溶解即得10％的亞硝酸鈉溶液。
重氮化反應(yīng)的前處理紅景天的提取物中，仍然含有蛋白和多糖，以及一些色素等從而使得紅景天的提取物呈現(xiàn)暗紅棕色和渾濁，影響產(chǎn)物的比色。用醋酸鉛除去多糖和蛋白，飽和硫酸鈉除去多余的鉛離子。取紅景天提取物樣品5ml，加入10％的醋酸鉛5ml和飽和的硫酸鈉2ml，最后定容至25ml。沉淀完畢后8Krpm離心5min，取上清液用于重氮化反應(yīng)。
重氮化顯色反應(yīng)取上清液5ml于20ml刻度比色管中，在其中加2％碳酸鈉3ml和重氮化試劑3ml，搖勻顯色5min，再加5％氫氧化鈉0.5ml顯色15min。整個(gè)過程都保持在4℃以下，稀釋至1/10，分光光度計(jì)測定在489nm處的吸光度值。
c、重量法測定紅景天總物質(zhì)溶出(結(jié)果見表一)將稱量皿在65℃烘箱中預(yù)烘一天，然后在102℃烘箱中烘至恒重，于天平上稱重，為M1。取25ml的紅景天提取物樣品溶液，置于65℃烘箱中烘干，再在102℃烘箱中烘至恒重。同樣在天平上稱重，為M2。
干物質(zhì)的重量M＝M2-M1。
總固形物溶出率＝M/25*樣品溶液總體積數(shù)/藥材取樣量總固形物溶出率比＝各組總固形物溶出率/直接醇提的總固形物溶出率*100％表一 本發(fā)明方法的比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3、試驗(yàn)結(jié)果分析本方法主要是采用真菌胞外水解酶來破壞紅景天組織以提高紅景天的溶出。其中纖維素酶酶活以木酶最高，黑曲霉和米曲霉次之，根霉幾乎沒有纖維素酶活；蛋白酶酶活以米曲酶最高，木霉和黑曲霉次之，而根霉最少；淀粉酶酶活則以黑曲霉最高，根霉和米曲霉次之，木霉最少；只有黑曲霉產(chǎn)果膠酶。從實(shí)驗(yàn)中的干物質(zhì)溶出率來看，經(jīng)霉菌水解酶處理后的溶出率都比對照高，尤其是黑曲霉和米曲霉，根霉對紅景天的溶出率也有提高，但相比前三者，則要低些。表明在紅景天的干物質(zhì)溶出過程中，這些水解酶起了重要作用。紫外吸光度值除了根霉對應(yīng)的吸光度值比對照的低以外，其余三種霉菌對應(yīng)的值均比對照的高，特別是黑曲霉對應(yīng)的樣品最高，其次是米曲霉和木霉。根霉酶系作用差，可能是根霉產(chǎn)生的酶比較單一，主要是淀粉酶，蛋白酶不高，沒有纖維素酶，不利于紅景天的干物質(zhì)溶出的緣故。重氮鹽比色結(jié)果表明，除黑曲霉外，其他酶解樣品的O.D489值均比對照高，說明酶處理后，紅景天有效成份隨著總物質(zhì)溶出的提高而提高。
同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同霉菌酶系的組合作用優(yōu)于單獨(dú)霉菌酶系的作用，紅景天有效成份的含量明顯高于單種霉菌酶系的作用。其中，木霉和黑曲霉組合酶系綜合效果最好，米曲酶和黑曲霉組合酶系其次。黑曲霉酶系中含酶種豐富，米曲霉酶系以蛋白酶為主，纖維素酶較少；而木霉酶系以纖維素酶為主，酶系組合后，酶種相互彌補(bǔ)，對紅景天組織破解更徹底，溶出率大幅度提高。
本試驗(yàn)總體結(jié)果表明，本發(fā)明方法能有效提高提取物中總物質(zhì)的溶出量和有效成份的得率，可使3％粗提物產(chǎn)品的產(chǎn)量增加10％～20％。
試驗(yàn)例二 本發(fā)明方法的藥渣排量檢測使用同樣200g的原料，分別使用醇提法、超聲波法、熱蒸法和本發(fā)明方法制備紅景天提取物，檢測總固形物溶出(g)，固體排渣量和排渣率(以醇提法的排渣量為100％作為對照)。
表二 總固形物溶出量和排渣量檢測

本試驗(yàn)結(jié)果表明(結(jié)果見表二)，本發(fā)明方法能夠降低藥渣的排放量。
試驗(yàn)例三 使用本發(fā)明方法所增加的經(jīng)濟(jì)收益在原料紅景天干粉、水、20％酶液按1∶1∶1混合的情況下紅景天干粉+水+20％酶液＝100kg+100kg+100kg(其中20％酶液100kg是用100kg水浸泡20kg麩皮固體酶制劑而成)，進(jìn)行收益與成本的比較1、增加的成本a、紅景天原料100kg，按原方法可得3％粗提物約18kgb、增加20kg麩皮固體酶制劑成本麩皮原料20kg×1.2元/kg＝24元生產(chǎn)成本20kg×0.6元/kg＝12元c、增加本工藝的成本約50元總成本＝24+12+50＝86元2、使用本發(fā)明方法所增加的凈收益(紅景天3％粗提物按市場價(jià)200元/kg計(jì))采用本發(fā)明方法如增加20％粗提物增加凈收益為3.6kg×200元/kg＝720元-86＝634元。
采用本發(fā)明方法如增加15％粗提物增加凈收益為2.7kg×200元/kg＝540元-86＝454元。
采用本發(fā)明方法如增加10％粗提物增加凈收益為1.8kg×200元/kg＝360元-86＝274元。
由上可見，使用本發(fā)明方法，平均每100kg原料可以增加274～634元的收益，大大增加了經(jīng)濟(jì)效益。
上述實(shí)例表明本發(fā)明提供紅景天活性成分提取物的制備方法與原工藝相比，所得的紅景天活性成分提取物的活性成分含量可提高約30％，能有效地利用野生資源，大大增加了原材料利用率并帶來顯著的經(jīng)濟(jì)效益；同時(shí)本方法能降低藥渣污染物的排量，實(shí)現(xiàn)對紅景天的綠色開發(fā)，具有極好的市場前景。
以上對本發(fā)明的詳細(xì)描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變及變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求所定義的范圍。
權(quán)利要求
1.一種制備紅景天提取物的方法，其特征在于包括以下幾個(gè)步驟a、準(zhǔn)備紅景天根莖原料；b、加入微生物酶液酶解；c、將步驟b處理所得酶解產(chǎn)物進(jìn)行醇提；d、除去c步驟醇提產(chǎn)物中的醇，得紅景天提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備紅景天提取物的方法，其特征在于所述的步驟a中的紅景天根莖原料準(zhǔn)備過程是將紅景天根莖按40～80目粉碎，再加入1～3倍重量的水浸泡、然后在80～120℃下加熱蒸煮20～40分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備紅景天提取物的方法，其特征在于步驟b所述酶解為將微生物酶液加入30～50℃的紅景天根莖原料中，保溫酶解8～24小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備紅景天提取物的方法，其特征在于步驟b所述的微生物酶液來源于曲霉、木霉和根霉中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備紅景天提取物的方法，其特征在于所述的微生物酶液是由以下方法制備得到的將麩皮和水拌勻后在115～125℃滅菌25～35分鐘，冷卻后接種曲霉、木霉或根霉，28～30℃培養(yǎng)36～48小時(shí)；然后加4～6倍水，在28～30℃下浸泡1～3小時(shí)，過濾或離心后取上清液，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備紅景天提取物的方法，其特征在于步驟c所述的醇提為在80℃水浴中用醇回流浸提1～8次，每次醇加入量與原料的重量之比為使醇的終濃度為60％～85％，每次浸提時(shí)間為10～90min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備紅景天提取物的方法，其特征在于所述的醇為乙醇。
8.一種紅景天提取物，是由權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的方法所制備的。
9.權(quán)利要求8所述的紅景天提取物在制備抗腫瘤、抗疲勞或抗缺氧功能的藥物組合物或保健食品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種制備紅景天提取物的方法。該方法在當(dāng)前提取方法的基礎(chǔ)上用微生物酶液對紅景天進(jìn)行酶解處理，使新工藝比現(xiàn)有工藝的得率大大提高，能有效利用野生藥材資源，同時(shí)還能降低藥渣等污染物的排量，實(shí)現(xiàn)中藥的綠色開發(fā)，解決了當(dāng)前本領(lǐng)域急需解決的問題，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號C12R1/845GK1989991SQ200610146110
公開日2007年7月4日 申請日期2006年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月4日
發(fā)明者張靜波, 鄧小晨 申請人:四川宇妥藏藥藥業(yè)有限責(zé)任公司