專利名稱：：一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本實用新型一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置涉及一種膜片鉗實驗中不破壞封接的狀態(tài)下實現(xiàn)胞內(nèi)透析的裝置。
背景技術(shù)：
：膜片鉗技術(shù)創(chuàng)建于上世紀70年代末，此項技術(shù)使人們得以從分子水平對膜離子通道及受體進行深入的研究，因而很快得到普遍的應(yīng)用和推廣。用膜片鉗技術(shù)對膜蛋白，如離子通道的性質(zhì)和動力學、受體的功能等能作深入的分析。為了實現(xiàn)人為改變細胞內(nèi)成份，在全細胞模式下利用膜片鉗技術(shù)手段達到研究胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑、機制及有關(guān)功能調(diào)制的目的。人們在膜片鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上，發(fā)展出兩種胞內(nèi)灌流或透析(intracellularperfusionordialysis)的方法一是玻璃微電極內(nèi)插管法；二是二次鉗壓技術(shù)(repatchtechnique)。應(yīng)用二次鉗壓技術(shù)時，雖然也可在同一細胞上比較胞內(nèi)有或無藥物存在時對通道或受體功能調(diào)制的影響，但由于二次鉗壓實驗操作難度大、成功率低，且即使二次鉗壓成功，前后二次封接(seal)記錄的通道電流幅值往往不一致，常導致二次鉗壓技術(shù)在實際應(yīng)用中效果不理想。膜片鉗玻璃微電極內(nèi)微插管進行胞內(nèi)灌流技術(shù)，早在上世紀90年代初就已被提出，但這一方法或者因為微電極夾持器設(shè)計復雜，或者因為抽液和注藥的附加控制裝置操作不便，而未能得到推廣和被普遍接受，且國內(nèi)沒有此類產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置的目的是提供一種取材方便、操作簡便、結(jié)果可靠的膜片鉗玻璃微電極內(nèi)微插管胞內(nèi)透析裝置。本實用新型一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置是由微電極夾持器等構(gòu)成；其特征在于在微電極夾持器的負壓側(cè)管上方用2mm鉆頭鉆一45°側(cè)孔，插入密封固定一外徑2mm細鋼管。取通用的20μl微量移液器移液管頭加熱手工拉制50cm長的外徑約100μm內(nèi)徑約50μm的微插管。將拉制出的微插管末端經(jīng)塑料導管沿45°細鋼管插入微電極夾持器的電極尖端，所述微插管的另一端可以經(jīng)三通閾連接lml注射器，改變電極內(nèi)液成份，實現(xiàn)胞內(nèi)透析。本實用新型的有益效果是在不破壞細胞封接的情況下，能方便、穩(wěn)定、可靠的進行胞內(nèi)透析，實驗效果及成功率較二次鉗壓技術(shù)明顯提高，結(jié)構(gòu)及成本較國外的胞內(nèi)灌流裝置大大降低，操作更簡便。圖1為本實用新型的剖面結(jié)構(gòu)示意圖。具體實施方式根據(jù)圖1所示，膜片鉗微電極夾持器的改裝取通常所用膜片鉗微電極夾持器(patchclamppipetteholder)，在抽吸負壓的側(cè)管1(與夾持器縱軸呈90°角)的上方，用2mm鉆頭呈45°角鉆通夾持器管壁直通中央管腔。插入一外徑為2mm細鋼管2(可利用一段20號注射針頭，約2cm長)，密封、固定，以備插入微插管(microcatheter)用。微插管的拉制插入玻璃微電極內(nèi)的微插管，外徑約100μm，內(nèi)徑約50μm。本實驗室利用微量移液管(取液器，adjustablepipetter)通用的20μl移液管頭(universalpipettetip)，在酒精燈火焰上加熱手工拉制而成。選用移液管頭是由于(1)其延展性很強，可以很容易拉出長達1米以上通暢的微插管(50cm長就能滿足使用要求)；(2)20μl的移液管頭的大頭口端通過三通7或直接與注射器嘴連接配套，便于抽吸玻璃微電極內(nèi)液及藥物灌注；(3)移液管頭價格低廉，且屬實驗室常備耗材，因而是一種很理想的材料。拉好后可用裝有蒸餾水的注射器注水檢查是否通暢。用塑料導管3加固微插管4拉制好的微插管細長而柔軟，為了便于微插管插入電極夾持器和固定起見，應(yīng)在45°側(cè)管2內(nèi)先插入一塑料導管3(此塑料導管外徑等于或略小于20號注射針頭的內(nèi)徑，可用硬脊膜外麻醉導管)，具體操作如下(1)將塑料導管輕輕插入側(cè)管內(nèi)，拐過135°角后繼續(xù)送入3～5mm，在側(cè)管的細鋼管外，以一段約1.5cm長的細硅膠管(如小兒頭皮針管)將細鋼管和塑料導管之間密封；(2)在塑料導管的另一端也套上一段約1.5cm長的硅膠管，將拉制好的微插管4順著塑料導管腔3緩慢送入，微插管4前端經(jīng)過135°側(cè)管轉(zhuǎn)角而與Ag-AgCl電極絲5平行由夾持器出口端6出來；(3)將微插管前端多余的部分剪去，使微插管末端4比Ag-AgCl電極末端5約長出5mm。從玻璃微電極內(nèi)抽出內(nèi)液及灌注藥液微插管插入玻璃微電極內(nèi)時，應(yīng)注意盡可能地插到微電極的最尖端，從而能盡量完全地抽吸電極內(nèi)液，以減少對所灌注藥物的稀釋。需注意的是(1)在將玻璃微電極固定在電極夾持器之前，應(yīng)先行將微插管注滿內(nèi)液；(2)細胞封接后當注藥時，須先將負壓吸管的三通打開與大氣相通，以免在抽出內(nèi)液及灌注藥液時玻璃微電極腔內(nèi)壓急劇變化，從而導致已建立的細胞封接遭到破壞；(3)抽出內(nèi)液及灌注藥液時應(yīng)緩慢而勻速，切忌過快過猛。權(quán)利要求1.本實用新型一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置是由微電極夾持器等構(gòu)成；其特征在于在微電極夾持器的負壓側(cè)管上方45°側(cè)孔插入密封固定一外徑2mm細鋼管，將微插管末端沿45°細鋼管插入微電極夾持器的電極尖端，所述微插管的另一端可以經(jīng)三通閾連接1ml注射器。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置的微插管末端；其特征在于，微插管末端可以是20μl移液管的加熱拉長后的管頭。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置的微電極夾持器的側(cè)管；其特征在于，可以在側(cè)管上方45°細鋼管內(nèi)插入一個外徑等于或略小于20號注射針頭內(nèi)徑的塑料導管，所述微插管插入塑料導管腔。專利摘要本實用新型一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置的目的是提供一種取材方便、操作簡便、結(jié)果可靠的膜片鉗玻璃微電極內(nèi)微插管胞內(nèi)透析裝置。本實用新型一種用于膜片鉗胞內(nèi)透析的裝置是由微電極夾持器等構(gòu)成；其特征在于在微電極夾持器的負壓側(cè)管上方，插入密封固定一外徑2mm細鋼管。將拉制出的微插管末端經(jīng)塑料導管沿45°細鋼管插入微電極夾持器的電極尖端，其大頭口端經(jīng)三通閾連接1ml注射器。本實用新型的有益效果是在不破壞細胞封接的情況下，能方便、穩(wěn)定、可靠的進行胞內(nèi)透析，實驗效果及成功率較二次鉗壓技術(shù)明顯提高。文檔編號C12Q1/18GK2798089SQ200520096000公開日2006年7月19日申請日期2005年4月14日優(yōu)先權(quán)日2005年4月14日發(fā)明者李國華申請人:李國華