一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法，屬于一種抗菌方法。本發(fā)明提供的用混合相二氧化鈦抗菌的方法是采用銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例不同的混合相二氧化鈦用于殺傷細(xì)菌的方法，與純相的銳鈦礦和純相的金紅石型二氧化鈦相比，混合型二氧化鈦具有更強(qiáng)的抗菌效果。并且該方法簡(jiǎn)單易行，處理過(guò)程簡(jiǎn)易。本發(fā)明用銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為3:7?7:3的混合相二氧化鈦對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行了抗菌檢測(cè)，取得了很好的抗菌效果，銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為4:6的混合相二氧化鈦的抗菌效果最佳。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種抗菌方法，具體涉及一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]二氧化鈦存在不同的晶型，主要有銳鈦礦型，金紅石型和板鈦礦型。二氧化鈦由于具有很強(qiáng)的光氧化能力，是目前最廣泛使用的殺菌材料之一，在水凈化，空調(diào)和材料的自清潔方面有著很重要的應(yīng)用。二氧化鈦的殺菌性能是在光照的條件下進(jìn)行的，在光照下，二氧化鈦吸收光的能量，產(chǎn)生電子和空穴，電子可以與環(huán)境中的氧作用，產(chǎn)生氧負(fù)離子，空穴可以與水生成羥基自由基，而氧負(fù)離子和羥基自由基具有強(qiáng)氧化性，可以損壞細(xì)菌的細(xì)胞板，細(xì)胞膜，破壞DNA等，從而達(dá)到殺菌的效果。目前，已經(jīng)有報(bào)道單相銳鈦礦型或金紅石型二氧化鈦都具有很好的殺菌性能，未見(jiàn)用混合相二氧化鈦進(jìn)行殺菌的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種殺菌效果更強(qiáng)的抗菌方法，進(jìn)而提供一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下:
[0005]—種用混合相二氧化鈦抗菌的方法，包括以下步驟:
[0006](I)、制備混合相二氧化鈦納米粒子
[0007]將鈦酸異丙酯溶解在正丁醇、硝酸和P123混合液中，室溫下攪拌以獲得暗黃色膠體，將該暗黃色膠體于120 0C處理4小時(shí)，再在900-970 V下空氣環(huán)境中處理8_20小時(shí)，即可獲得不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦納米粒子；
[0008](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子進(jìn)行滅菌處理后配制成5mg/mL的水溶液；
[0009](3)、培養(yǎng)細(xì)菌，在波長(zhǎng)600nm測(cè)試培養(yǎng)的細(xì)菌OD值，OD值為0.1時(shí)備用；
[0010](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL細(xì)菌培養(yǎng)基(LB)配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取15(^1^ 2.411^/111]^的納米粒子溶液和10(^1^步驟(3)得到的細(xì)菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、Oyg/mL ；將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共米集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0011]在上述技術(shù)方案中，所得混合相二氧化鈦納米粒子的銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為3:7-7:3o
[0012]在上述技術(shù)方案中，所得混合相二氧化鈦納米粒子的銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為4:6。
[0013]在上述技術(shù)方案中，步驟(I)的具體步驟為:
[0014]在150mL燒瓶中，將0.0lmol鈦酸異丙酯溶解在0.094mol正丁醇、0.016mol硝酸和1.72 X 10—4H1l P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120 0C處理4小時(shí)，再在900-970 °C下空氣環(huán)境中處理8_20小時(shí)，即可獲得不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦納米粒子。
[0015]在上述技術(shù)方案中，步驟(2)的具體步驟為:
[0016 ] 對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.4 5μπι的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0017]在上述技術(shù)方案中，步驟(3)的具體步驟為:
[0018]將細(xì)菌菌種20yL放入ImL LB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)細(xì)菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0019]在上述技術(shù)方案中，步驟(4)用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0020]將步驟(3)得到的細(xì)菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL800yg/mL的納米粒子溶液混合，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0021]本發(fā)明的有益效果是:
[0022]本發(fā)明提供的用混合相二氧化鈦抗菌的方法是采用銳鈦礦和金紅石混合相二氧化鈦用于殺傷細(xì)菌的方法，與純相的銳鈦礦和純相的金紅石型二氧化鈦相比，混合型二氧化鈦具有更強(qiáng)的抗菌效果。并且該方法簡(jiǎn)單易行，處理過(guò)程簡(jiǎn)易。
[0023]本發(fā)明用銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為3:7-7:3的混合相二氧化鈦對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行了抗菌檢測(cè)，取得了很好的抗菌效果，銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為4:6的混合相二氧化鈦的抗菌效果最佳。
【附圖說(shuō)明】
[0024]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0025]圖1為不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦的XRD圖。
[0026]圖2為加入二氧化鈦納米粒子后，不同時(shí)間測(cè)試的大腸桿菌在600nm的吸收?qǐng)D。
[0027]圖3為加入二氧化鈦納米粒子后，不同時(shí)間測(cè)試的金黃色葡萄球菌在600nm的吸收?qǐng)D。
[0028]圖4為加入二氧化鈦納米粒子后，平板涂布法涂布后，大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)菌生長(zhǎng)圖。
[0029]圖5為加入二氧化鈦納米粒子后，平板涂布法涂布后，金黃色葡萄球菌培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)菌生長(zhǎng)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0030]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做以詳細(xì)說(shuō)明。
[0031 ] 一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法，包括以下步驟:
[0032](I)、制備混合相二氧化鈦納米粒子
[0033]在150mL燒瓶中，將0.0111101(2.848)鈦酸異丙酯溶解在0.09411101(78)正丁醇、0.016mo I (I g)硝酸和1.72 X I O—4mo I P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120°C處理4小時(shí)，再在900-970°C下空氣環(huán)境中處理8-20小時(shí)，即可獲得不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦納米粒子；
[0034](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0035](3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)上述兩種細(xì)菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0036](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL細(xì)菌培養(yǎng)基(LB)配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取15(^1^ 2.411^/111]^的納米粒子溶液和10(^1^步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/1^;將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射301^11，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的00值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共采集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0037]用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0038](I)、制備混合相二氧化鈦納米粒子
[0039]在150mL燒瓶中，將0.0111101(2.848)鈦酸異丙酯溶解在0.09411101(78)正丁醇、0.016mo I (I g)硝酸和1.72 X I O—4mo I P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120°C處理4小時(shí)，再在900-970°C下空氣環(huán)境中處理8-20小時(shí)，即可獲得不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦納米粒子；
[0040](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0041 ] (3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37 V，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)細(xì)菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0042](4)將步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL 800yg/mL的納米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子溶液是取144yL5mg/ml的納米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的)，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0043]實(shí)施例1
[0044](I)、在150mL燒瓶中，將0.0lmol (2.84g)鈦酸異丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇，0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120 °C處理4小時(shí)。再在900°C下空氣環(huán)境中處理8小時(shí)，得到銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為7:3的混合相二氧化鈦(標(biāo)記為A7:R3)。
[0045](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0046](3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)金黃色葡萄球菌或大腸桿菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0047](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的納米粒子溶液和I OOyL步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共采集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0048]用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0049]步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)同上。
[0050](4)將步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL 800yg/mL的納米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子溶液是取144yL5mg/ml的納米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的)，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0051 ] 實(shí)施例2
[0052](I)、在150ml燒瓶中，將0.0lmol (2.84g)鈦酸異丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇，0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120°C處理4小時(shí)。再在950°C下空氣環(huán)境中處理13小時(shí)，得到銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為4:6的混合相二氧化鈦(標(biāo)記為A4:R6)。
[0053](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0054](3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)金黃色葡萄球菌或大腸桿菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0055](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的納米粒子溶液和I OOyL步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共采集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0056]用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0057]步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)同上。
[0058](4)將步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL 800yg/mL的納米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的納米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的)，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0059]實(shí)施例3
[0060](I)、在150ml燒瓶中，將0.0lmol (2.84g)鈦酸異丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇，0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120°C處理4小時(shí)。再在970°C下空氣環(huán)境中處理20小時(shí)，得到銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比為3:7的混合相二氧化鈦(標(biāo)記為A3:R7)。
[0061](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0062](3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)金黃色葡萄球菌或大腸桿菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0063](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的納米粒子溶液和I OOyL步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共采集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0064]用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0065]步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)同上。
[0066](4)將步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL 800yg/mL的納米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的納米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的)，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0067]對(duì)比例I
[0068](I)、在150ml燒瓶中，將0.0lmol (2.84g)鈦酸異丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇，
0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120 °C處理4小時(shí)。再在600 °C下空氣環(huán)境中處理4小時(shí)，得到銳鈦礦型二氧化鈦(標(biāo)記為A)。
[0069](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0070](3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)金黃色葡萄球菌或大腸桿菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0071](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL LB配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的納米粒子溶液和I OOyL步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共采集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0072]用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0073]步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)同上。
[0074](4)將步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL 800yg/mL的納米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的納米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的)，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0075]對(duì)比例2
[0076](I)、在150ml燒瓶中，將0.0lmol (2.84g)鈦酸異丙酯溶解在0.094mol (7g)正丁醇，
0.01611101(18)硝酸_03和1.72\10—411101 P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120 °C處理4小時(shí)。再在1000°C下空氣環(huán)境中處理24小時(shí)，得到金紅石型二氧化鈦(標(biāo)記為R)。
[0077](2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。
[0078](3)、將金黃色葡萄球菌(簡(jiǎn)稱(chēng)S)或大腸桿菌(簡(jiǎn)稱(chēng)E)菌種20yL放入ImLLB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)金黃色葡萄球菌或大腸桿菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。
[0079](4)、取240yL 5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL LB配制成
2.4mg/mL的納米粒子溶液;取150yL 2.4mg/mL的納米粒子溶液和I OOyL步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、(^8/mL;將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共采集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。
[0080]用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下:
[0081]步驟(I)、步驟(2)和步驟(3)同上。
[0082](4)將步驟(3)得到的金黃色葡萄球菌或大腸桿菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL 800yg/mL的納米粒子溶液混合(800yg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子溶液是取144yL 5mg/ml的納米粒子水溶液和156yL的LB混合得到的)，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
[0083 ]圖1為不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的二氧化鈦的XRD圖。通過(guò)XRD計(jì)算，可以看出來(lái)，隨著高溫處理溫度的不同，銳鈦礦和金紅石型的質(zhì)量比例發(fā)生了變化。
[0084]圖2為加入二氧化鈦納米粒子后，不同時(shí)間測(cè)試的大腸桿菌在600nm的吸收值;從圖中可以看出加入混合型二氧化鈦后，大腸桿菌的生長(zhǎng)明顯被抑制。
[0085]圖3為加入二氧化鈦納米粒子后，不同時(shí)間測(cè)試的金黃色葡萄球菌在600nm的吸收值;從圖中可以看出加入混合型二氧化鈦后，金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)明顯被抑制。
[0086]圖4為加入二氧化鈦納米粒子后，平板涂布法涂布后，大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)夜的照片；從圖中可以看出加入混合型二氧化鈦后，大腸桿菌的生長(zhǎng)非常緩慢，遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于未加納米粒子的。
[0087]圖5為加入二氧化鈦納米粒子后，平板涂布法涂布后，金黃色葡萄球菌培養(yǎng)過(guò)夜的照片;從圖中可以看出加入混合型二氧化鈦后，金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)非常緩慢，遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于未加納米粒子的。
[0088]顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說(shuō)明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見(jiàn)的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、制備混合相二氧化鈦納米粒子 將鈦酸異丙酯溶解在正丁醇、硝酸和P123混合液中，室溫下攪拌以獲得暗黃色膠體，將該暗黃色膠體于120 0C處理4小時(shí)，再在900-970 V下空氣環(huán)境中處理8_20小時(shí)，即可獲得不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦納米粒子； (2)、對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子進(jìn)行滅菌處理后配制成5mg/mL的水溶液； (3)、培養(yǎng)細(xì)菌，在波長(zhǎng)600nm測(cè)試培養(yǎng)的細(xì)菌OD值，OD值為0.1時(shí)備用； (4)、取240yL5mg/mL的混合相二氧化鈦納米粒子水溶液加入260yL細(xì)菌培養(yǎng)基(LB)配制成2.4mg/mL的納米粒子溶液;取15(^ 2.4mg/mL的納米粒子溶液和10yL步驟(3)得到的細(xì)菌溶液加入到96孔板中，做三個(gè)孔的平行試驗(yàn);對(duì)納米粒子溶液進(jìn)行對(duì)倍稀釋?zhuān){米粒子溶液終濃度依次為:800、400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、Oyg/mL ；將得到的96孔板用太陽(yáng)光模擬器照射30min，用酶標(biāo)儀測(cè)試每個(gè)孔的OD值，作為初始數(shù)值，測(cè)試完成后，將96孔板拿到搖床中，開(kāi)燈培養(yǎng)，搖床的速度為120rpm，后每隔一個(gè)小時(shí)測(cè)一次，一共米集之后6個(gè)點(diǎn)，制作不同濃度納米粒子溶液條件下隨時(shí)間變化的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，所得混合相二氧化鈦納米粒子的銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為3:7-7: 3。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，所得混合相二氧化鈦納米粒子的銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例為4:6。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，步驟(I)的具體步驟為: 在150mL燒瓶中，將0.0111101鈦酸異丙酯溶解在0.09411101正丁醇、0.01611101硝酸和1.72X 10—4H1l P123混合液中，室溫下強(qiáng)力攪拌以獲得透明的暗黃色膠體，將獲得的暗黃色膠體120°C處理4小時(shí)，再在900-970°C下空氣環(huán)境中處理8-20小時(shí)，即可獲得不同銳鈦礦和金紅石質(zhì)量比例的混合相二氧化鈦納米粒子。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，步驟(2)的具體步驟為: 對(duì)步驟(I)制備的混合相二氧化鈦納米粒子用水和乙醇各清洗兩次，用0.45μπι的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液中的納米粒子，在60 0C烘箱烘干，配制成5mg/mL的水溶液，并進(jìn)行超聲處理24h。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，步驟(3)的具體步驟為: 將細(xì)菌菌種20yL放入ImL LB中，放在搖床中，搖床的速度是120rpm，溫度為37°C，開(kāi)燈進(jìn)行培養(yǎng)，用比色皿測(cè)細(xì)菌在波長(zhǎng)600nm的OD值，當(dāng)OD值為0.1時(shí)備用。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的用混合相二氧化鈦抗菌的方法，其特征在于，步驟(4)用涂布平板法對(duì)混合相二氧化鈦進(jìn)行抗菌檢測(cè)，具體步驟如下: 將步驟(3)得到的細(xì)菌溶液稀釋10000倍，取1yL稀釋后的細(xì)菌溶液與90yL800yg/mL的納米粒子溶液混合，光照30min后涂布，涂布時(shí)取20yL混合液，放置30min，待細(xì)菌溶液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)，過(guò)夜后照相。
【文檔編號(hào)】A01P1/00GK106070322SQ201610464637
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月24日
【發(fā)明人】張海元, 孫秀娟, 常赟, 程巖
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所