杏鮑菇原始母種的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食用菌原始母種制備方法領(lǐng)域，特別是指一種杏鮑菇原始母種的制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國食用菌總產(chǎn)量、年產(chǎn)值逐年增長，是全球最大的食用菌生產(chǎn)消費國，占世界年總產(chǎn)量的70%，成為我國農(nóng)業(yè)領(lǐng)域僅次于糧、油、果、菜的第五大作物。其中，杏鮑菇是一種大型肉質(zhì)傘菌，又名刺芹側(cè)耳，是近年來開發(fā)栽培成功的集食用、藥用、食療于一體的珍稀食用菌新品種。杏鮑菇營養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、多糖、維生素及鈣、鎂、銅、鋅等礦物質(zhì)，可以提高人體免疫功能，對人體具有抗癌、降血脂、潤腸胃以及美容等作用。由于其具有營養(yǎng)豐富、口感好、貨架期長、易工廠化栽培等特點，近年來受到國內(nèi)外消費者和投資者的普遍歡迎，具有很好的發(fā)展?jié)摿Α?br>[0003]目前我國對于，食用菌工廠化生產(chǎn)發(fā)展迅速，在生產(chǎn)過程中，對于菌種的重要性是第一位的。而我國工廠化杏鮑菇生產(chǎn)量在總產(chǎn)量中迅速增加，而市場對高品質(zhì)的杏鮑菇需求也在逐年增加，由于受投資水平、技術(shù)水平、研發(fā)水平的限制，工廠化杏鮑菇生產(chǎn)隨著菌種的逐年使用，生物轉(zhuǎn)化率逐漸降低、抗雜能力下降、產(chǎn)量和品質(zhì)逐漸降低、生產(chǎn)成本步步攀升，大部分杏鮑菇工廠的菌種制作和引種都是很不規(guī)范，尤其是原始母種，造成種子質(zhì)量不穩(wěn)定，菌種退化現(xiàn)象嚴(yán)重，生物轉(zhuǎn)化率下降嚴(yán)重，極易造成雜菌污染?，F(xiàn)有技術(shù)中有“一種杏鮑菇母種馴化方法201210353266.5”發(fā)明專利申請，只簡單披露了母種的純化過程，沒有將母種的培養(yǎng)和純化全過程進(jìn)行控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種適合工廠化運用的杏鮑菇原始母種的制作方法，提高了菌種抗雜能力、提高產(chǎn)量和品質(zhì)、保證了產(chǎn)量和質(zhì)量的穩(wěn)定性。
[0005]本發(fā)明提出一種杏鮑菇原始母種的制作方法，先是進(jìn)行杏鮑菇原始母種的培養(yǎng)，再進(jìn)行杏鮑菇原始母種的提純;包括以下步驟，
[0006]杏鮑菇原始母種的培養(yǎng):
[0007]A、挑選種菇:從疏過蕾1-2天的育菇房，挑選多個六成熟，有本品種典型性狀，健壯、美觀、無病蟲害的菇子10-20個作為種菇，采摘的時候戴上無菌手套，采摘后放到無菌塑料袋里面，并封嚴(yán)實袋口；
[0008]B、準(zhǔn)備用具:把種菇、經(jīng)過檢測無菌的PDA培養(yǎng)皿、無菌水及全部操作用具滅菌后放入消過毒的超凈工作臺里面；
[0009]C、沖洗種菇:在無菌、正壓的情況下，戴上無菌手套用無菌水把種菇逐個沖洗干凈，分開放到超凈工作臺上，開紫燈消毒30分鐘后，再開潔凈正壓風(fēng)，把種菇表面的水分吹干、備用；
[0010]D、接種:戴上無菌手套，把杏鮑菇一分為二的切開，并在菌蓋和菌柄處用無菌手術(shù)刀切取菌種塊，用無菌的接種勾，轉(zhuǎn)入無菌的PDA培養(yǎng)皿中心，每個種菇取兩塊，轉(zhuǎn)接到兩個無菌的培養(yǎng)皿之中；
[0011 ] E、封口裝袋:用封口膜把接完種的PDA培養(yǎng)皿邊緣封口并標(biāo)記，再裝入密封的無菌袋；
[0012]F、恒溫培養(yǎng):消毒培養(yǎng)箱，將裝袋后的TOA培養(yǎng)皿，放到恒溫培養(yǎng)箱里，溫度調(diào)到25± 0.5 °C，進(jìn)行黑暗、避光無風(fēng)或弱風(fēng)培養(yǎng)4-8天；
[0013]G、篩選提純用種:培養(yǎng)期間，每天觀察培養(yǎng)皿的生產(chǎn)參數(shù)，對于I個種菇轉(zhuǎn)接的兩個培養(yǎng)皿，都表現(xiàn)最佳的生長參數(shù)，則選為提純的原始母種；
[0014]杏鮑菇原始母種提純的具體步驟如下:
[0015]H、制作PDA培養(yǎng)皿，皿內(nèi)的培養(yǎng)基清晰、偏干、無雜質(zhì)、整個培養(yǎng)基厚度，均勻一致控制在3.0 ±0.5mm;
[0016]1、切杏鮑菇菌絲尖端:將把長滿培養(yǎng)皿1/2的杏鮑菇菌種、全部操作器具放到經(jīng)過紫外滅菌的超凈工作臺或生物安全柜里面，進(jìn)行紫外或紫外加臭氧機避光滅菌20-40min;關(guān)閉紫外燈和臭氧機，開正壓風(fēng)，用無菌刀片快速切杏鮑菇菌絲尖端I ±0.5mm，一個培養(yǎng)皿切10-12個這種長度的尖端，切完后蓋上培養(yǎng)皿蓋子；
[0017]J、分離出帶有菌絲尖端及培養(yǎng)基塊:把切分過的菌種培養(yǎng)皿，用很薄的無菌刀片，分離出切好的菌絲尖端，同時要切下菌絲尖端所依附的培養(yǎng)基塊并分離出來，二者合稱為囷種塊；
[0018]K、分皿:把經(jīng)過檢測無菌的培養(yǎng)皿、杏鮑菇菌種、全部操作器具在超凈工作臺或生物安全柜里面進(jìn)行第二次紫外或紫外加臭氧機滅菌30-40min，戴上無菌手套，用接種勾把分離出的菌種塊，勾取移動到空白培養(yǎng)皿的中央，一個菌種塊放一個空白培養(yǎng)皿；
[0019]L、封口并標(biāo)記:把轉(zhuǎn)接有菌種的培養(yǎng)皿封口并貼好標(biāo)簽，放到密封的無菌塑料袋中；
[0020]M、培養(yǎng):把培養(yǎng)皿放到26土 1°C的恒溫培養(yǎng)箱里面，進(jìn)行黑暗、避光、無風(fēng)或弱風(fēng)培養(yǎng)8-12天；
[0021]N、提純復(fù)壯:每天觀察記錄菌絲的各項生長指標(biāo)，當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)皿1/2-2/3的時候，選出優(yōu)勢的2個培養(yǎng)皿作為下次提純復(fù)壯的出發(fā)菌種，按照上面方法，對菌絲尖端切取，重復(fù)上述H至N步驟3-8次；
[0022]0、選種:對經(jīng)過提純，表現(xiàn)非常優(yōu)良的菌絲進(jìn)行鏡檢、病毒檢測、出菇試驗，對三個指標(biāo)都表現(xiàn)達(dá)標(biāo)、出菇試驗指標(biāo)最優(yōu)的菌種選作原始母種保藏。
[0023]優(yōu)選地，在“B、準(zhǔn)備用具”步驟中的全部操作用具包括滅過菌的手術(shù)刀、接種勾、無菌燒杯、酒精燈、酒精棉球、無菌手套、火機。
[0024]所述“G、篩選提純用種”步驟中，所述生長參數(shù)包括培養(yǎng)皿的污染情況、菌種塊萌發(fā)的快慢、長滿培養(yǎng)皿時間、菌絲濃密度、菌絲光澤度、菌絲粗壯度、菌絲生長速度、菌絲邊緣整齊程度、菌絲伸展度、菌絲生長勢、。
[0025]“1、切杏鮑菇菌絲尖端”步驟中全部操作器具包括酒精燈、體式顯微鏡、滅過菌的手術(shù)刀、無菌手套、火機、酒精棉球；“K、分皿”步驟中全部操作器具酒精燈、酒精棉球、無菌手套、接種勾。
[0026]“K、觀察并提純復(fù)壯”步驟中，各項生長指標(biāo)包括菌絲萌發(fā)的時間、菌絲長速、菌絲健壯度、菌絲光亮度、菌絲伸展度、菌絲粗細(xì)程度、菌絲邊緣整齊度，菌絲整體長勢。
[0027]所述“D、接種”、“E、封口裝袋”、“J、分離出帶有菌絲尖端菌種塊”、“K、分皿”、“L、封口并標(biāo)記”步驟中，應(yīng)在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)，距酒精燈火焰周圍5cm的范圍內(nèi)操作。
[0028]所述“D、接種”步驟中，在菌蓋和菌柄處用切取菌種塊為4mmX 4mm; “J、分離出帶有菌絲尖端及培養(yǎng)基塊”步驟中，所述培養(yǎng)基塊的塊徑為3-4_。
[0029]本發(fā)明的有益效果是；采用最優(yōu)部位定點取菌種塊，保證了原始母體的活力，SP“D、接種”步驟中在種菇的菌蓋和菌柄處切菌種塊，菌蓋和菌柄處的組織塊更嫩，含的營養(yǎng)物質(zhì)更多，更有利于菌絲萌發(fā)和培養(yǎng)健壯的菌絲體。
[0030]采用超短切取杏鮑菇菌絲尖端技術(shù)，現(xiàn)有技術(shù)中切取杏鮑菇菌絲尖端為2_3mm，而本發(fā)明開創(chuàng)性地采取切取Imm菌絲尖端，能使菌絲生產(chǎn)更快、生長勢更強、生長潛力充分發(fā)揮出來。
[0031]杏鮑菇原始母種提純過程中采用二次滅菌技術(shù)，即在“1、切杏鮑菇菌絲尖端;”和“K、分皿;”步驟中兩次對超凈工作臺內(nèi)的培養(yǎng)皿、操作器具進(jìn)行紫外結(jié)合臭氧消毒，徹底地滅菌，保證菌種塊不受雜菌感染，因為切杏鮑菇菌絲尖端的過程中主要是在超凈工作臺內(nèi)，在體式顯微鏡的載物鏡上進(jìn)行的，主要超凈工作臺的窗口在操作過程中開的正壓風(fēng)小，正壓風(fēng)如太大會影響要切割操作，在操作過程中容易有不潔凈的空氣進(jìn)入，同時這個動作要快，所以在做完這個程序的基礎(chǔ)上，移出體式顯微鏡，再對其超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行紫外結(jié)合臭氧消毒。
[0032]采用黑暗無風(fēng)培養(yǎng)技術(shù)，“F、恒溫培養(yǎng)”步驟中，恒溫培養(yǎng)箱里為黑暗、避光無風(fēng)或弱風(fēng)環(huán)境，因為菌絲體的營養(yǎng)生長階段不需要光照，光照會抑制菌絲的伸長生長，不利于菌絲體內(nèi)營養(yǎng)的積累，在菌絲培養(yǎng)階段在一定的氧氣情況下，空間內(nèi)的空氣越靜越有利于萌發(fā)和減少感染污染，培養(yǎng)溫度在25°C左右，這個偏高點的溫度，能加快菌絲的生長速度，更有利于提純過程中獲得更純的杏鮑菇母種?！癕、培養(yǎng)”步驟中，26 ± 1°C的恒溫培養(yǎng)箱能使菌絲的加速生長，使菌絲頂端的純度更高，更好的提純到高純度的杏鮑菇菌種?！?、切杏鮑菇菌絲尖端”步驟中，要在快速切取菌絲尖端，能減少菌絲在體視顯微鏡下暴露的時間，開正壓風(fēng)，能最大程度地減少雜菌感染。
[0033]“D、接種”、?、封口裝袋”、“J、分離出帶有菌絲尖端菌種塊”、“K、分皿”、“L、封口并標(biāo)記”等多個步驟操作，都在距酒精燈火焰周圍5cm的范圍內(nèi)，能減少雜菌感染。
[0034]通過試驗確定了原始母種的制作、提純工藝，通過完善和創(chuàng)新杏鮑菇原始母種的制作、純化工藝參數(shù)，使工廠化生產(chǎn)的杏鮑菇，產(chǎn)量高、質(zhì)量穩(wěn)定，抗污染能力強，始終保持種子最原始的種性，不退化、不變異、不老化，能夠縮短菌種菌齡。這種工藝能方便和規(guī)范大、中型杏鮑菇瓶栽和袋栽公司原始母種的生產(chǎn)和使用，為杏鮑菇菌種的純度和種性提供了有效保障。
[0035]經(jīng)過對比試驗，提純的菌種與對照的普通菌種相比有以下優(yōu)勢；
[0036](I)在母種培養(yǎng)階段，提純的菌種其菌絲的濃密度、整齊度、光澤度優(yōu)于對照，同時提純菌種的長滿試管的菌齡在17天，生產(chǎn)上常用菌種的菌齡在20天，提純異常試管母種的比率比對照異常管的比率低8%左右。
[0037](2)在原種培養(yǎng)階段，提純菌種的菌絲，其顏色比對照更潔白，更有光澤，其生長勢比對照更強，長滿菌種瓶的菌齡在15天左右，對照菌種一般在17天左右。
[0038](3)在栽培種階段，提純菌種長滿栽培瓶的時間是16天左右，對照長滿瓶的菌齡在18天左右。
[0039](4)在生產(chǎn)瓶培養(yǎng)階段，在相同培養(yǎng)條件下提純菌種長滿生產(chǎn)瓶的時間一般在22天，對照的長滿瓶的時間在24天;其感染率提純的一般在0.2%。，對照的一般在0.4%0。
[0040](5)在育菇和采菇階段，提純的比對照的一般情況下快I天左右的時間，生長的菇更健壯和緊密，品質(zhì)比對照好，在產(chǎn)量上面，提純的每瓶成品菇產(chǎn)量比對照每瓶成品菇產(chǎn)量平均高14克，提高每瓶產(chǎn)量在8%左右，現(xiàn)在生產(chǎn)8萬瓶的量，每天可以增收1120公斤，每公斤瓶栽成品菇的價格一般在9元左右，每天公司可以增收I萬