一種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基及制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖活體飼料的生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其涉及一種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基 及制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 豐年蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體一般用作水產(chǎn)養(yǎng)殖的活體飼料，尤其是作為海魚(yú)、海蝦幼蟲(chóng)階段 早期的活體飼料。市場(chǎng)上一般沒(méi)有豐年蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體這樣的活體飼料，只有豐年蟲(chóng)卵，無(wú)節(jié)幼 體由豐年蟲(chóng)卵孵化得到。豐年蟲(chóng)卵的孵化可以在孵化培養(yǎng)基中完成。豐年蟲(chóng)卵經(jīng)充分脫水 并在低溫?zé)o氧無(wú)光照的干燥環(huán)境下可以存活很長(zhǎng)時(shí)間甚至長(zhǎng)達(dá)幾年。超長(zhǎng)的存儲(chǔ)能力以及 較短的時(shí)間（24小時(shí)內(nèi)）即可產(chǎn)生自由游動(dòng)的無(wú)節(jié)幼體的特性，使其成為水產(chǎn)養(yǎng)殖的最便利 的活體飼料來(lái)源。豐年蟲(chóng)卵是從自然界如海邊鹽田和內(nèi)陸鹽湖中收集的。在這些收集到的 豐年蟲(chóng)卵中，存在不同比例的休眠卵和滯育卵。將豐年蟲(chóng)卵經(jīng)純化以去除碎渣、洗滌以去除 鹽分、最后進(jìn)行干燥處理和冷室保存，使其處于休眠狀態(tài)。豐年蟲(chóng)卵的質(zhì)量是通過(guò)評(píng)估參數(shù) 來(lái)判定的，其中豐年蟲(chóng)卵的可孵化能力最受人們的關(guān)注，因?yàn)樗苯颖砻髁嗽谌斯し跤龡l 件下，從一定數(shù)量的豐年蟲(chóng)卵中可以獲得的活體飼料(無(wú)節(jié)幼體）的數(shù)量。豐年蟲(chóng)卵的可孵 化能力通常用孵化百分?jǐn)?shù)(H%)來(lái)表示，即指從100個(gè)完整豐年蟲(chóng)卵中孵化出的自由游動(dòng)的 無(wú)節(jié)幼體的個(gè)數(shù)。處于滯育或休眠狀態(tài)下的豐年蟲(chóng)卵不能繼續(xù)孵化成自由游動(dòng)的無(wú)節(jié)幼 體，除非它們處于促進(jìn)孵化的條件下。因此豐年蟲(chóng)卵的孵化需要在孵化培養(yǎng)基中完成，孵化 培養(yǎng)基通常為經(jīng)過(guò)處理的清潔海水。在孵化過(guò)程中，控制孵化培養(yǎng)基的非生物參數(shù)包括:鹽 度、pH值、氧氣濃度和水溫。目前各生產(chǎn)單位通常采用的參數(shù)范圍為:鹽度5~35g/升;pH> 8;氧氣濃度>5g/L;水溫25~28°C。實(shí)際上豐年蟲(chóng)卵的孵化是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，通常包 括三個(gè)階段:前發(fā)期發(fā)育、傘形期和實(shí)際孵化期。但是影響豐年蟲(chóng)卵孵化過(guò)程的因素很多， 按照上述給定的孵化條件進(jìn)行的孵化過(guò)程往往不能達(dá)到預(yù)期的孵化效果，因此需要采取特 殊的滯育失活方法，例如延長(zhǎng)干燥豐年蟲(chóng)卵的冷凍存放時(shí)間、重復(fù)吸水-脫水循環(huán)、在特殊 化學(xué)物質(zhì)如過(guò)氧化氫溶液中短時(shí)間孵化等。目前大多使用過(guò)氧化氫溶液來(lái)增加鹵蟲(chóng)卵的孵 化百分?jǐn)?shù)，需要在不同條件下進(jìn)行大量的試驗(yàn)才能獲得最適宜的過(guò)氧化氫溶液濃度和處理 時(shí)間的參數(shù)。但是通過(guò)上述方法獲得的最適宜參數(shù)并不具有普遍意義，因?yàn)閷?duì)不同豐年蟲(chóng) 株系或同一株系不同批次的豐年蟲(chóng)卵而言，最適宜參數(shù)是變化的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 因此，針對(duì)以上內(nèi)容，本發(fā)明提供一種可適合不同株系、同一株系不同批次的豐年 蟲(chóng)孵化的豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基，同時(shí)提供一種所述豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基的制備方法及 應(yīng)用。
[0004] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng) 基，包括以下重量份的各原料： NaCl 2:0.~..3_、〇份 KC1 15~20份 MgS04 30 ~40 份 SrCl2 10 ~15 份 維生素 C鈉 2~3份
[0005] 葡萄糖 0.1~0. 2份 葡萄糖氧化酶 0. 05~0. 0:8份 茶多酚 0, 5~(X 8份 pH調(diào)節(jié)劑 0. 1~10份 Π 4)：, 22份 H20 100:0 份 ?
[0006] 其中，所述他(：1、1((：1、1%3〇4、3冗12為化學(xué)純固體，所述!1 2〇2的質(zhì)量濃度為30%。
[0007] 進(jìn)一步的改進(jìn)是:包括以下重量份的各原料： NaCI 23~30份 KC1 17 ~2.0份 MgS04 35 ~40 份 SrCl, 12~15份 維生素 C鈉 2~3份
[0008] 葡萄糖 0. 1~0. 2份 葡萄糖氧化酶 0 07~().08份 茶多酚 0. 6~0. 8份 pH調(diào)節(jié)劑 2~10份 H20, 25 ~27 份 He〇 1000 份。
[0009]進(jìn)一步的改進(jìn)是，包括以下重量份的各原料： NaCl 25份 KC1 18份 MgS04 38 份 SrCl2 14份 維生素C鈉 2. 5份
[0010] 葡萄糖 0,2份 葡萄糖氧化酶 0,08份 茶多酚 0.7份 pH調(diào)節(jié)劑 7份 IL0, 26 iff H20： 1000份。
[0011] 進(jìn)一步的改進(jìn)是，所述PH調(diào)節(jié)劑為檸檬酸、酒石酸、檸檬酸鈉、蘋果酸。
[0012] -種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基的制備方法，包括以下處理步驟：
[0013] (1)將20~30份的似(：1、15~20份1((：1、30~40份1%504、10~15份51(：12溶解在1000 份的H 20中，攪拌均勻，得到混合液；
[0014] (2)將步驟（1)制得的混合液在紫外線下進(jìn)行消毒20~30min;
[0015] (3)在經(jīng)過(guò)消毒的混合液中依次加入0.1~0.2份葡萄糖、0.05~0.08份葡萄糖氧 化酶，攪拌溶解；
[0016] ⑷再加入2~3份維生素 C鈉、0.5~0.8份茶多酚，在45~60°C下攪拌均勻；
[0017] (5)將步驟(4)制得的物料在轉(zhuǎn)速為300~2000r/min離心10~15min，去除沉淀物， 取清液；
[0018] (6)在步驟(5)中制得的清液中加入22~27份的H2〇2，得到培養(yǎng)基，接著將培養(yǎng)基迅 速轉(zhuǎn)移到密閉的透明容器中。
[0019] -種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基的應(yīng)用，將豐年蟲(chóng)卵接種到權(quán)利要求5制得的培養(yǎng)基 中，在培養(yǎng)基中加入二氧化錳，光照控制在2000~25001ux。
[0020] 進(jìn)一步的改進(jìn)是:所述二氧化錳的用量為2~12重量份。
[0021 ]進(jìn)一步的改進(jìn)是:所述豐年蟲(chóng)卵的接種量為培養(yǎng)基重的0.01~0.05倍。
[0022]通過(guò)采用前述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基， 包括以下重量份的各原料:NaCl 20~30份、KC1 15~20份、MgS〇4 30~40份、SrCl2 10~15 份、維生素 C鈉2~3份、葡萄糖0.1~0.2份、葡萄糖氧化酶0.05~0.08份、茶多酚0.5~0.8 份、pH調(diào)節(jié)劑0.1~10份、H2O222~27份、H201000份;其中，所述恥(：1、1((：1、]\%5〇4、3^：12為化學(xué) 純固體，所述H 2〇2的質(zhì)量濃度為30%，原料中含有豐年卵孵化過(guò)程中所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)，在培養(yǎng)基中加入葡萄糖氧化酶，能夠破壞豐年蟲(chóng)卵的滯育機(jī)制，促使滯育卵在孵化期間 產(chǎn)生自由游動(dòng)的鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，可明顯提高孵化效率，在培養(yǎng)基中添加維生素 C鈉可防止茶 多酚被減緩茶多酚被氧化的速度，pH調(diào)節(jié)劑可用于調(diào)節(jié)培養(yǎng)基整體的酸堿度，H2〇2在培養(yǎng)基 制備的最后加入，并且在加入后迅速轉(zhuǎn)入密閉的透明容器中，防止H 2〇2在敞開(kāi)的環(huán)境下緩慢 分解出氧氣，在所述培養(yǎng)基的應(yīng)用過(guò)程中添加二氧化錳，使其與H 2〇2反應(yīng)產(chǎn)生氧氣，使培養(yǎng) 基中具有一定的溶解氧，促進(jìn)豐年蟲(chóng)的孵化。
【具體實(shí)施方式】
[0023]以下將結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，借此對(duì)本發(fā)明如何應(yīng)用技 術(shù)手段來(lái)解決技術(shù)問(wèn)題，并達(dá)成技術(shù)效果的實(shí)現(xiàn)過(guò)程能充分理解并據(jù)以實(shí)施。
[0024]若未特別指明，實(shí)施例中所采用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手 段，所采用的試劑和產(chǎn)品也均為可商業(yè)獲得的。所用試劑的來(lái)源、商品名以及有必要列出其 組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明。
[0025] 實(shí)施例一
[0026 ] -種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基，包括以下重量份的各原料： NaC'i 20g KC1 15g M：gS〇4 30g SrCl, 10μ 維生素C鈉 2g
[0027] 葡萄糖 0· lg 葡萄糖氧化酶 a 05g 茶多酚 （).5g 檸檬酸 a.lg 質(zhì)量濃度為30%的H202 22g Π,Ο ΙΟΟΟμ；
[0028] 其制備方法，包括以下處理步驟：
[0029] (1)將20g的NaCl、15g KCl、30g MgS〇4、10g SrCl2溶解在 1000g的H20中，攪拌均勻， 得到混合液；
[0030] (2)將步驟(1)制得的混合液在紫外線下進(jìn)行消毒20min;
[0031 ] (3)在經(jīng)過(guò)消毒的混合液中依次加入0. lg葡萄糖、0.05g葡萄糖氧化酶，攪拌溶解； [0032] (4)再加入2g維生素 C鈉、0.5g茶多酚，在45°C下攪拌均勻；
[0033] (5)將步驟(4)制得的物料在轉(zhuǎn)速為300r/min離心15min，去除沉淀物，取清液；
[0034] (6)在步驟(5)中制得的清液中加入22g質(zhì)量濃度為30 %的H202，得到培養(yǎng)基，接著 將培養(yǎng)基迅速轉(zhuǎn)移到密閉的透明容器中。
[0035] 其應(yīng)用方法為，將豐年蟲(chóng)卵接種上述培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中加入二氧化錳，光照控 制在20001UX，所述豐年蟲(chóng)卵的接種量為培養(yǎng)基重的0.01倍。所述二氧化錳的加入量為10g。
[0036] 實(shí)施例二
[0037 ] -種豐年蟲(chóng)卵的孵化培養(yǎng)基，包括以下重量份的各原料： NaCl KC1 ：17g MgS04 35g SrCl2 12g
[0038] 維生素C鈉 2g 葡萄糖 〇. Ig 葡萄糖氧化酶 〇 〇7q 茶多酌 0.6g 酒石酸 2g 質(zhì)量濃度為30%H202 25g<