一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物源農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于防治煙草青枯病菌的植物源 提取物。 技術(shù)背景
[0002] 養(yǎng)菜（Capsella bursa-pastoris)屬十字花科養(yǎng)菜屬草本植物，同時(shí)，養(yǎng)菜還可入 藥，也是藥食同源植物。薺菜主要分布于亞熱帶和溫帶地區(qū)，我國(guó)從南到北均可生長(zhǎng)，尤其 在溝邊、田埂、路邊等處十分常見。
[0003] 薺菜富含有機(jī)酸、延胡索酸、多肽、丹寧、類黃酮、生物堿、氨基酸、麥角克堿等多種 活性成分，具有鎮(zhèn)痛、解痙、明目、強(qiáng)筋健骨、降壓、消炎、抗菌、抗癌、抗心律失常、抗脂質(zhì)過 氧化、抗病毒、防衰老等預(yù)防疾病和治療疾病的功效。盡管薺菜醫(yī)用方面的研宄較多，但利 用薺菜在防治植物病原細(xì)菌病害方面的研宄報(bào)道鮮見。因此，本發(fā)明以薺菜對(duì)植物病原細(xì) 菌是否具有抑制作用這一科學(xué)問題，以煙草青枯病菌為指示菌，探索薺菜抑菌物的提取方 法，明確不同部位產(chǎn)抑菌物質(zhì)的量、提取效率以及MIC值，評(píng)估薺菜的開發(fā)潛力，旨在為今 后研制植物源農(nóng)藥提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對(duì)薺菜防治植物病害技術(shù)上的空白，提供了一 種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種用于防治煙草青枯病 菌的植物源提取物，其特點(diǎn)是，所述植物源提取物為薺菜提取物。
[0006] 上述薺菜提取物為薺菜的乙酸乙酯提取物或水提取物。
[0007] 上述薺菜提取物是取新鮮薺菜洗凈，曬干至含水量為0. 5-3. 5%，粉碎，用乙酸乙 酯或無菌水對(duì)薺菜粉進(jìn)行提取，所得濾液入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至膏狀得到。其中，用乙酸乙酯 或無菌水對(duì)薺菜粉進(jìn)行提取是指按Ig薺菜粉加20-25mL乙酸乙酯或無菌水的比例，于薺菜 粉中加入乙酸乙酯或無菌水，于25-26°C以80-120r/min震蕩24-48h，過濾，收集濾液，濾渣 重復(fù)提取1次，合并兩次濾液。所指的粉碎是以8000-12000r/min的轉(zhuǎn)速粉碎至100-120 目細(xì)粉。所述的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)條件：壓力為0.09-0.1 MPa，水浴溫度為60°C，冷凝溫度為6-8°C， 轉(zhuǎn)速為 80-110r/min。
[0008] 本發(fā)明的薺菜提取物（乙酸乙酯提取物或水提取物）對(duì)煙草青枯病菌具有抑制作 用，表明薺菜具有防治植物病害的新功能；同時(shí)本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)，為開發(fā)利用薺菜天然活性物 質(zhì)以及研宄與開發(fā)制備新生物農(nóng)藥提供了科學(xué)依據(jù)。
【附圖說明】
[0009] 圖1是薺菜的乙酸乙酯提取物對(duì)煙草青枯病菌的抑制作用。
[0010] 其中：A代表薺菜的乙酸乙酯提取物；B代表乙酸乙酯。
[0011] 圖2是薺菜的水提取物對(duì)煙草青枯病菌的抑制作用。
[0012] 其中：A代表薺菜的水提取物；B代表無菌水。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 供試植物和菌株
[0014] 新鮮薺菜來自湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)瀏陽(yáng)科研基地；煙草青枯病菌（Ralstonia solanacearum)，由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物安全檢測(cè)中心II提供。
[0015] 煙草青枯病菌菌種的活化：采用接種環(huán)刮取3環(huán)菌種接入牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng) 基（NA)，26-28°C下連續(xù)培養(yǎng)24-48h，待菌落長(zhǎng)出后，制成濃度I. lX108CFU/mL的菌懸液 (以下簡(jiǎn)稱菌懸液），備用。
[0016] 供試培養(yǎng)基
[0017] 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA):牛肉膏5g、蛋白胨8g、氯化鈉 5g、瓊脂20g、蒸餾水 1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；
[0018] 實(shí)施例1薺菜乙酸乙酯提取物和水提取物對(duì)煙草青枯病菌的抑制作用
[0019] 取新鮮薺菜（包括根、莖、葉、籽）洗凈，曬干至含水量為2. 5%，以8000-12000r/ min的轉(zhuǎn)速粉碎至100-120目細(xì)粉。稱取定量的薺菜干粉樣品，加入500mL乙酸乙酯，于 25-26°C以lOOr/min震蕩36h，過濾，收集濾液，濾渣重復(fù)提取1次，合并兩次濾液，將濾液置 于壓力為0. 09-0.1 Mpa，水浴溫度為60°C，冷凝溫度為6°C，轉(zhuǎn)速為80r/min的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中 濃縮至膏狀，得乙酸乙酯提取物。用乙酸乙酯定容乙酸乙酯提取物，4°C保存，備用。
[0020] 照上述方法，以無菌水為提取溶劑制備薺菜的水提取物，水提取物采用無菌水定 容。
[0021] 采用抑菌圈法測(cè)定薺菜提取物對(duì)煙草青枯病菌的抑菌效果，滅菌的NA培養(yǎng)基倒 入培養(yǎng)皿中待其冷卻，移液槍移取200 μ L菌懸液，涂布均勻，打孔器（7_)在培養(yǎng)基上打 孔，注入100 μ L乙酸乙酯或無菌水提取物，以乙酸乙酯或無菌水為對(duì)照，重復(fù)3次，將平皿 置于分別置于26-28?細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果，十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，計(jì)算 抑制率，結(jié)果見下表1。
[0022]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所述植物源提取物為薺 菜提取物。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述薺菜提取物為薺菜的乙酸乙酯提取物或水提取物。
3. 如權(quán)利要求2所述的一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述薺菜提取物是取新鮮薺菜洗凈，曬干至含水量為〇. 5-3. 5 %，粉碎，用乙酸乙酯或無菌水 對(duì)薺菜粉進(jìn)行提取，所得濾液入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至膏狀得到。
4. 如權(quán)利要求3所述的一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述用乙酸乙酯或無菌水對(duì)薺菜粉進(jìn)行提取是指按1克薺菜粉加20-25mL乙酸乙酯或無菌水 的比例，于薺菜粉中加入乙酸乙酯或無菌水，于25-26°C以80-120r/min震蕩24-48h，過濾， 收集濾液，濾渣重復(fù)提取1次，合并兩次濾液。
5. 如權(quán)利要求3所述的一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述粉碎是以8000-12000r/min的轉(zhuǎn)速粉碎至100-120目細(xì)粉。
6. 如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的植物源提取物在制備防治煙草青枯病生物農(nóng)藥中 的應(yīng)用。
【專利摘要】一種用于防治煙草青枯病菌的植物源提取物，該提取物為干薺菜的乙酸乙酯提取物或水提取物，該薺菜乙酸乙酯提取物和水提取物對(duì)煙草青枯病菌均具有抑制作用，其中乙酸乙酯提取物的抑制效果最好，其抑制率為56.9％，采用乙酸乙酯分別提取薺菜根、莖、籽、葉中的活性物，發(fā)現(xiàn)根和葉的抑菌效果最強(qiáng)，籽和莖提取物的抑菌效果較弱；同時(shí)，本發(fā)明的研究結(jié)果還顯示，干薺菜提取物的抑菌效果明顯高于新鮮薺菜提取物。本發(fā)明的薺菜提取物對(duì)煙草青枯病菌具有的抑制作用表明薺菜具有防治植物病害的新功能，為開發(fā)利用薺菜天然活性物質(zhì)以及研究與開發(fā)新的生物農(nóng)藥提供了科學(xué)依據(jù)。
【IPC分類】A01P1-00, A01N65-08
【公開號(hào)】CN104782669
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510210103
【發(fā)明人】張亞, 劉雙清, 廖曉蘭, 謝燕
【申請(qǐng)人】湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年4月29日