一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)中種苗快速繁殖方法，具體地說，涉及一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法。
【背景技術】
[0002]波葉紅果樹波葉紅果樹(davidiana var.undulata )，是薔薇科紅果樹屬的常綠矮小灌木，野生分布于浙江、江西、湖北、湖南、廣西、四川、貴州、云南、陜西等地。是我國園林中常用的觀賞灌木樹種，其初夏花繁色白，秋季葉色朱紅，紅葉期持續(xù)達一個月之久，紅果累累，果實經(jīng)冬不凋，起到豐富園林、美化環(huán)境等作用。
[0003]目前波葉紅果樹主要采用種子方式進行繁殖，存在繁殖系數(shù)低、周期長、效率低等問題。而植物組織培養(yǎng)技術具有加速育種進程、縮短繁殖時間、改良植物品質(zhì)、節(jié)省空間、減少勞動、可終年生產(chǎn)、不受自然條件限制等特點，可有效解決波葉紅果樹自然繁殖能力差、種子繁殖耗時長的問題。因此建立波葉紅果樹組織離體培養(yǎng)技術體系，提高其繁殖系數(shù)，為今后開發(fā)利用波葉紅果樹奠定基礎，為實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)提供技術支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，本發(fā)明以波葉紅果樹葉片為外植體，經(jīng)過愈傷組織誘導、增殖、分化、煉苗移栽等過程建立了波葉紅果樹組織培養(yǎng)的技術體系，達到提高波葉紅果樹的增殖系數(shù)，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，包括以下的步驟:
(I)外植體消毒:選取健康波葉紅果樹植株的葉片，先用洗潔精水溶液漂洗I?5min,再于自來水沖洗5?lOmin，擦干表面水分后在超凈工作臺中以70%?80%乙醇浸泡5?1s, 0.1%升汞溶液消毒I?lOmin，再用無菌水清洗3?5次后無菌濾紙擦干后備用。
[0006](2)愈傷組織誘導:將步驟(I)處理后的葉片切成0.5cmX0.5cm的小塊接種誘導培養(yǎng)基上進行愈傷組織誘導。接種后置于每天光照12?15小時，光照強度為1000?15001x,培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至形成愈傷組織，接種25天后觀察愈傷組織誘導情況并統(tǒng)計愈傷組織誘導率。
[0007](3)增殖培養(yǎng):將步驟(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)。接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，20?25天轉(zhuǎn)接一次。
[0008](4)分化培養(yǎng):將步驟(I)或(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中進行不定芽誘導培養(yǎng)。接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至形成不定芽和不定根。
[0009](5)煉苗移栽:待幼苗長至健壯后置于自然光照下煉苗5?7天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由營養(yǎng)土:沙土 = 3:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田。
[0010]上述步驟(2)所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+0.5?2mg/L TDZ+1?3mg/L2，4-D+0.01 ?lmg/L La (N03)2+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH值為5.4?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+0.1?lmg/L ΚΤ+0.1?lmg/L2，4-D+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值為 5.4 ?5.8。
[0012]上述步驟(4)所述的分化培養(yǎng)基為:MS+1?5mg/L 6-BA+0.5?2mg/L2，4-D+0.1 ?lmg/L NAA+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH值為5.4?5.8。
[0013]與現(xiàn)有技術相比本發(fā)明的優(yōu)點是:本發(fā)明通過植物組織培養(yǎng)技術短時間內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)波葉紅果樹種苗的育種方法。以波葉紅果樹葉片為外植體，經(jīng)過愈傷組織誘導、增殖、分化、煉苗移栽等過程建立了波葉紅果樹組織培養(yǎng)的技術體系，達到提高波葉紅果樹的增殖系數(shù)，為今后開發(fā)利用波葉紅果樹奠定基礎，為實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)提供技術支持。
【具體實施方式】
[0014]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0015]實施例1:
(I)外植體消毒:選取健康波葉紅果樹植株的葉片，先用洗潔精水溶液漂洗lmin，再于自來水沖洗5min，擦干表面水分后在超凈工作臺中以75%乙醇浸泡5s，0.1%升汞溶液消毒lmin,再用無菌水清洗3次后無菌濾紙擦干后備用。
[0016](2)愈傷組織誘導:將步驟(I)處理后的葉片切成0.5cmX0.5cm的小塊接種誘導培養(yǎng)基上進行愈傷組織誘導。接種后置于每天光照12小時，光照強度為ΙΟΟΟΙχ，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)20天即可形成愈傷組織，愈傷組織誘導達67.4%。所述的誘導培養(yǎng)基為MS+0.7mg/L TDZ+lmg/L 2，4-D+0.5mg/L La(N03)2+2.0%蔗糖+0.35%瓊脂+0.05%活性炭，pH值為5.8。
[0017](3)增殖培養(yǎng):將步驟(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)。接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)5天，然后置于每天光照11小時，光照強度為20001χ，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)，20天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為5.1。所述增殖培養(yǎng)基為MS+0.4mg/L KT+0.8mg/L 2，4-D+2.0% 糖 +0.5% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0018](4)分化培養(yǎng):將步驟(I)或(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中進行不定芽誘導培養(yǎng)。接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)4天，然后置于每天光照10小時，光照強度為20001x，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)14天即可形成不定芽和不定根。所述分化培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.8mg/L 2，4-D+0.5mg/L NAA+2.0% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0019](5)煉苗移栽:待幼苗長至健壯后置于自然光照下煉苗5天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由營養(yǎng)土:沙土 = 3:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率達83.7%。
[0020]實施例2:
(I)外植體消毒:選取健康波葉紅果樹植株的葉片，先用洗潔精水溶液漂洗2min，再于自來水沖洗5min，擦干表面水分后在超凈工作臺中以76%乙醇浸泡7s，0.1%升汞溶液消毒3min,再用無菌水清洗3次后無菌濾紙擦干后備用。
[0021](2)愈傷組織誘導:將步驟(I)處理后的葉片切成0.5cmX0.5cm的小塊接種誘導培養(yǎng)基上進行愈傷組織誘導。接種后置于每天光照12小時，光照強度為15001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)20天即可形成愈傷組織，愈傷組織誘導達75.8%。所述的誘導培養(yǎng)基為 MS+0.9mg/L TDZ+1.5mg/L 2，4-D+lmg/L La (N03)2+2.0% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH值為5.8。
[0022](3)增殖培養(yǎng):將步驟(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)。接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)5天，然后置于每天光照12小時，光照強度為25001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)，23天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為4.8。所述增殖培養(yǎng)基為MS+0.8mg/L KT+lmg/L 2，4-D+2.0% 糖 +0.5% 瓊脂 +0.07% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0023](4)分化培養(yǎng):將步驟(I)或(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中進行不定芽誘導培養(yǎng)。接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)6天，然后置于每天光照12小時，光照強度為25001x，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)18天即可形成不定芽和不定根。所述分化培養(yǎng)基為MS+2.5mg/L 6-BA+lmg/L 2，4-D+lmg/L NAA+2.0% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH 值為
5.8。
[0024](5)煉苗移栽:待幼苗長至健壯后置于自然光照下煉苗7天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由營養(yǎng)土:沙土 = 3:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率達90.1%。
【主權(quán)項】
1.一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括以下步驟: (1)外植體消毒:選取健康波葉紅果樹植株的葉片，先用洗潔精水溶液漂洗I?5min,再于自來水沖洗5?lOmin，擦干表面水分后在超凈工作臺中以70%?80%乙醇浸泡5?1s, 0.1%升汞溶液消毒I?lOmin，再用無菌水清洗3?5次后無菌濾紙擦干后備用； (2)愈傷組織誘導:將步驟(I)處理后的葉片切成0.5cmX0.5cm的小塊接種誘導培養(yǎng)基上進行愈傷組織誘導，接種后置于每天光照12?15小時，光照強度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至形成愈傷組織，接種25天后觀察愈傷組織誘導情況并統(tǒng)計愈傷組織誘導率； (3)增殖培養(yǎng):將步驟(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，20?25天轉(zhuǎn)接一次； (4)分化培養(yǎng):將步驟(I)或(2)形成的愈傷組織轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中進行不定芽誘導培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至形成不定芽和不定根； (5)煉苗移栽:待幼苗長至健壯后置于自然光照下煉苗5?7天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由營養(yǎng)土:沙土 = 3:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度，待幼苗成活后再移栽大田。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(2)所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+0.5 ?2mg/L TDZ+1 ?3mg/L 2，4-D+0.01 ?lmg/L La (Ν03)2+2.0%?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+0.1 ?lmg/L ΚΤ+0.1 ?lmg/L 2，4-D+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(4)所述的分化培養(yǎng)基為:MS+1 ?5mg/L 6-BA+0.5 ?2mg/L 2，4-D+0.1 ?lmg/L NAA+2.0% ?.3.5%蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種波葉紅果樹組織培養(yǎng)快繁方法，涉及波葉紅果樹（Stranvaesia davidiana var.undulata ）通過植物組織培養(yǎng)技術短時間內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)波葉紅果樹種苗的育種方法。本發(fā)明以波葉紅果樹葉片為外植體，經(jīng)過愈傷組織誘導、增殖、分化、煉苗移栽等過程建立了波葉紅果樹組織培養(yǎng)的技術體系，達到提高波葉紅果樹的增殖系數(shù)，為今后開發(fā)利用波葉紅果樹奠定基礎，為實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)提供技術支持。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104686333
【申請?zhí)枴緾N201510085923
【發(fā)明人】劉木嬌
【申請人】劉木嬌
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月22日