專利名稱：植物生理活性物質(zhì)，它們的制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有新結構并用于農(nóng)產(chǎn)品等的生長調(diào)節(jié)的植物生理活性物質(zhì)，它們的制備方法，及其應用。
目前，由被成熟的水果釋放的乙烯催熟其它水果的現(xiàn)象所代表的“異株克生現(xiàn)象”是已知的，并在每種植物包括微生物上觀察到?，F(xiàn)在，這種現(xiàn)象被試圖實用于植物的生長調(diào)節(jié)(H.Molisch“DerEinflusseinerPflanzeautdieandereAllelopathie”，GustavFischerVerlag，Jena，1937)，并在一些情況下實施(E.L.Rice(1984)Allelopathiceffectsofcropplantsonotherplants.In“Allelopathy”2nded.pp.41-67，Academicpress，Inc.)。
作為“異株克生現(xiàn)象，人們發(fā)現(xiàn)，如果特殊種類的種籽或籽苗栽培于的十字花科植物種籽的Petri盤中，其后胚軸的生長被促進，而籽苗根的生長被抑制(ZassoKenkyu，37，68(1992);ZassoKenkyu，37，71(1992))。
然而，帶來如“異株克生現(xiàn)象”的物質(zhì)的實體還沒有被確定。
“溶液培養(yǎng)學”，即在溶有營養(yǎng)物的水溶液中生長植物的方法，在以前廣泛地以“水培養(yǎng)”進行，并由于近年來植物生物技術的發(fā)展而變成一種更常用的方法。
進行溶液培養(yǎng)最重要的一條是選擇用于培養(yǎng)液的合適組合物。
這類培養(yǎng)液典型的例子的Sach溶液，Knop溶液，Hoagland溶液等。
在這種環(huán)境下，由于建立更有效的溶液培養(yǎng)學的目的，使用新培養(yǎng)液的溶液培養(yǎng)學的發(fā)展一直是所期望的。
豆芽、麥芽、等，主要是在黑暗中生長的莢芽(以后稱作“moyashi”)，1周左右是其工業(yè)生產(chǎn)所需的時間。在近幾年，它已被用在moyashi的生產(chǎn)中抑制根的生長及機械除根以改進它們作為商品的價值。
因而，發(fā)展一種以更高產(chǎn)率生產(chǎn)作為商品的更有價值的moyashi的方法是人們所期望的。
為了解決上述問題，本發(fā)明人已從十字花科等的籽苗中分離和鑒定了引起“異株克生現(xiàn)象”的生理活性物質(zhì)，成功地合成了所述物質(zhì)及其衍生物，并確定了一種新的培養(yǎng)方法，包括新的人造土壤或培養(yǎng)液的使用，他們已發(fā)現(xiàn)所述物質(zhì)可在促進moyashi生長的同時抑制根部的生長，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明包括如下發(fā)現(xiàn)。
1.下式(Ⅰ)表示的化合物及其鹽
其中R1，R2，R3，R4和R5獨立地代表氫原子，或乙?；蚱S基，R6代表氫原子，羥基，乙酰氧基，或芐氧基，R7代表氫原子，或R6和R7一起代表另一直接鍵，而R8代表羧基，甲氧羰基，羥甲基，或乙酰氧甲基。
2.下式(Ⅰa)代表的化合物及其鹽
3.下式(Ⅰb)代表的化合物及其鹽
其中R1′，R2′，R3′，R4′和R5′獨立地代表氫原子，或乙?；蚱S基，R6′代表氫原子，羥基，乙酰氧基，或芐氧基，R7′代表氫原子，或R6′和R7′一起代表另一直接鍵，R8′代表羧基，甲氧羰基，羥甲基，或乙酰氧甲基，其中，如果R1′，R2′，R3′，R4′和R5′分別代表氫原子，而R8′代表羧基，則R6′代表氫原子，羥基，乙酰氧基，或芐氧基而R7′代表氫原子。
4.如權利要求1定義的化合物及其鹽，其中R1，R2，R3，R4和R5分別代表氫原子，R6代表羥基，R7代表氫原子，而R8代表羧基。
5.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，R6代表羥基，R7代表氫原子，而R8代表甲氧羰基。
6.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，R6代表羥基，R7代表氫原子，而R8代表羥甲基。
7.如權利要求1定義的化合物及其鹽，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，R6代表氫原子，R7代表氫原子而R8代表羧基。
8.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表芐基，R6代表芐氧基，R7代表氫原子，而R8代表乙酰氧甲基。
9.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表乙?；?，R6和R7一起代表另一直接鍵，而R8代甲氧羰基。
10.制備如權利要求2定義的化合物或其鹽的方法，包括水解如權利要求9定義的化合物。
11.制備植物生理活性物質(zhì)的方法，包括將植物種子浸于水中，然后從提取液中收集下式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽
12.如權利要求11的方法，其中植物種子選自如下組成的一類植物的綠莧、蘆筍、燕麥、稗草、水稻、綠狗尾草、豌豆、梯牧草、Persian婆婆納(鳥眼婆婆納)、秋葵、野燕麥、蟋蟀草、蕪菁、南瓜、花椰菜、甘藍、水芹、雞冠花、雞距草、稻田莎草、牛蒡、“Shikokubie”、白蘇、茼蒿、馬齒莧、芹菜、蕎麥、蘿卜、“ta-inubie”、小花傘植物、辣椒、玉米、番茄、茄子、韭蔥、胡蘿卜、大白菜、歐芹、向日葵、莧菜、花莖甘藍、菠菜、急尖藨草、母菊、三葉草、cabgrass和萵苣。
13.一種培養(yǎng)方法，其中人造土壤或培養(yǎng)液含有下式(Ⅰc)表示的化合物或其鹽
其中R1″、R2″、R3″、R4″和R5″獨立地代表氫原子或乙?；琑6″代表氫原子或羥基，R7″代表氫原子，或R6″和R7″一起代表另一直鍵，而R8″代表羧基、甲氧羰基或羥甲基。
14.一種培養(yǎng)方法，其中人造土壤或培養(yǎng)液含有下式(Ⅰa)表示的或其鹽
15.如權利要求14的方法，其中由式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽的含量為1至10000ppm。
16.一種抑制moyashi根部生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰc)表示的化合物或其鹽的溶液。
17.一種抑制moyashi根部生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽的溶液。
18.一種促進moyashi胚軸生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰc)表示的化合物或其鹽的溶液。
19.一種促進moyashi胚軸生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽的溶液。
根據(jù)本發(fā)明，提供了用于調(diào)節(jié)農(nóng)產(chǎn)品等生長，具有新結構的生理物質(zhì)，對植物生長有效的培養(yǎng)方法，以高產(chǎn)量工業(yè)生產(chǎn)提高了其商品價值的moyashi的方法。


附圖1顯示了化合物(Ⅰa)鈉鹽對胚軸(植物出土的部分)和根部生長的效果。附圖1也顯示了赤霉素(GA3)和吲哚乙酸(ⅠAA)的結果。
附圖2是其生長被提取向日葵種籽獲得的本發(fā)明化合物促進的植物的照片。
附圖3顯示了由提取向日葵種籽獲得的本發(fā)明化合物對20種植物種子的植物生長促進的結果。
附圖4是用本發(fā)明化合物溶液培養(yǎng)之后萵苣的照片。
附圖4顯示了只在水中(對照)和在含有數(shù)量為從50，100，150和200粒向日葵種籽衍生的本發(fā)明化合物的水中培養(yǎng)的萵苣(從左到右)。
附圖5是用本發(fā)明化合物溶液培養(yǎng)之后的豌豆的照片。附圖5顯示了只在水中(對照)和在含有數(shù)量為從50，100和150粒向日葵種籽中衍生的本發(fā)明化合物的水中培養(yǎng)的豌豆(從左到右)。
附圖6為用本發(fā)明化合物溶液培養(yǎng)之后的番茄照片。附圖6顯示了只在水中(對照)和在含有數(shù)量為從50，100和150粒向日葵種籽衍生的本發(fā)明化合物的水中培養(yǎng)的番茄(從左到右)。
附圖7是用本發(fā)明化合物溶液培養(yǎng)之后的黑豆(blackmatpes)。附圖7顯示了只在水中(對照)和在含有數(shù)量為從150，500，1500粒向日葵種籽衍生的本發(fā)明化合物的水中培養(yǎng)的黑豆(blackmatpes)(從左到右)。
附圖8是其生長被本發(fā)明化合物促進的綠豆胚軸的照片。附圖8在右邊顯示了未處理的綠豆(對照)，而在左邊是用本發(fā)明化合物處理過的綠豆。
附圖9，10和11分別顯示了化合物(7)的IR，1H-NMR譜，和13C-NMR。
附圖12顯示了化合物(8a)的1H-NMR譜。
附圖13顯示了化合物(9a)的1H-NMR譜。
附圖14，15和16分別顯示了化合物(10a)的IR譜，1H-NMR譜，和13C-NMR譜。
附圖17，18和19分別顯示了化合物(12)的IR譜，1H-NMR譜，和13C-NMR譜。
附圖20和21分別顯示了化合物(12′)的IR譜和1H-NMR譜。
附圖22顯示了化合物(14)的1H-NMR譜。
由前面式(Ⅰ)，(Ⅰa)，(Ⅰb)或(Ⅰc)表示的化合物的鹽包括例如，鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽。
由前面式(Ⅰ)，(Ⅰa)，(Ⅰb)或(Ⅰc)表示的化合物或其鹽可通過下面的化學合成得到。
如下面反應式中舉例說明的，α-L-鼠李糖首先在催化量硫酸存在下，在溶劑如苯等中與芐醇反應，給出芐基苷，然后使其與2，2-二甲氧基丙烷在丙酮之類的溶劑中，在對甲苯磺酸存在下反應，因而被轉化為異亞丙基(化合物(2))。然后，化合物(2)與溴化芐在氫化鈉存在下，在溶劑如N，N-二甲基甲酰胺等溶劑中反應，給出化合物(3)，接著用乙酸-水-1，4-二噁烷等處理以消去異亞丙基殘基，得到化合物(4)。
緊接著，化合物(4)在苯之類的溶劑中用氧化二丁基錫(Bu2SnO)處理，形成化合物(5)，然后在氟化銫(CsF)存在下用溴化芐處理，得到化合物(6)

其中Bn代表芐基，而Bu代表正丁基。
如下反應式舉例說明的，化合物(6)再在分子篩和甲基亞磺酰溴存在下與化合物(A)反應，得到化合物(7)。這一步驟中所用的化合物(A)是己知化合物，它可從D-葡萄糖以7步反應合成(ActaChemScand.43，471(1989);Carbohydr.Res.，202，225(1990))。
然后化合物(7)在溶劑如甲醇等中用堿如碳酸鉀等處理，得到化合物(8)?；衔?8)用鈀，pd/c，氫氧化鈀等催化還原，被轉化為化合物(8a)。
接著，化合物(8)用(1)三氧化硫(SO3)-吡啶在二甲亞砜(DMSO)和三甲胺中處理，然后(2)用亞氯酸鈉和磷酸二氫鈉在叔丁醇-水-2-甲基-2-丁烯中處理，可得到化合物(9)?；衔?9)用鈀、pd/c、氫氧化鈀等催化還原，被轉化成化合物(9a)。
隨后，化合物(9)用三甲基甲硅烷基重氮甲烷在溶劑如苯-甲醇等中處理，可得到化合物(10)?；衔?10)用鈀、pd/c、氫氧化鈀等催化還原，被轉化成化合物(10a)。
隨后，化合物(10a)用乙酐-吡啶等乙?；?，給出化合物(11)，接著用1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]-7-十一烯(DBU)在溶劑如吡啶中處理，形成化合物(12)和(12′)。
化合物(12)和(12′)然后用堿如氫氧化鈉，甲醇鈉，乙醇鈉，叔丁醇鈉等水解，可得到化合物(1)。
另外，化合物(12)和(12′)以鈀，pd/c，氫氧化鈀催化還原，被轉化為化合物(13)，然后用堿，如氫氧化鈉，甲醇鈉，叔丁醇鈉等水解，可得到化合物(14)。



其中Ac代表乙?；琍h代表苯基，而Bn與前面的定義具有相同的意義。
這樣得到的羧酸，如化合物(9)，(9a)等，可根據(jù)普通方法轉變成相應的鹽;而鈉鹽，如化合物(1)，(14)，等可根據(jù)普通方法被轉化成相應的游離羧酸或其它鹽。
除了由前面式(Ⅰ)表示的本發(fā)明化合物之外，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，而R6和R7一起代表另一直接鍵，R8代羧基的化合物，即前面式(Ⅰa)化合物或其鹽，也可通過從十字花科籽苗分離和純化而獲得。
在分離和純化化合物(Ⅰa)時，例如從商業(yè)來源或自然來源或其培養(yǎng)獲得的十字花科種籽可被用作原料。
化合物(Ⅰa)可以在溶液培養(yǎng)中發(fā)芽的十字花科種籽的培養(yǎng)液中分離和純化。
在溶液培養(yǎng)中的培養(yǎng)形式并不特別限于可發(fā)芽的十字花科植物種籽。
通常，十字花科植物種籽在暗中通風處發(fā)芽。培養(yǎng)溫度一般15至30℃，優(yōu)選地為20至25℃。培養(yǎng)時間一般為1至2天。用于溶液培養(yǎng)的培養(yǎng)組合物沒有特殊限制，但不含任何添加劑的水被優(yōu)先用于式(Ⅰa)化合物的有效分離和純化。培養(yǎng)之前，十字花科植物種籽被優(yōu)選地浸于水中，這樣所分泌的式(Ⅰa)化合物的量可以增加。
這樣得到的培養(yǎng)液以常用方式濃縮，然后如果需要應用凝膠過濾色譜，高效液相色譜，等，或它們聯(lián)合，由此純化化合物(Ⅰa)。
除上面十字花科植物外，化合物(Ⅰa)也可通過選自如下植物的種籽浸入水中而獲得，植物為綠莧、蘆筍、燕麥、稗草、水稻、綠狗尾草、豌豆、梯牧草、Persian婆婆納、秋葵、野燕麥、蟋蟀草、蕪菁、南瓜、花椰菜、甘藍、水芹、雞冠花、雞距草、稻田莎草、牛蒡、“Shikokubie”、白蘇、茼蒿、馬齒莧、芹菜、蕎麥、蘿卜、“ta-inubie”、小花傘植物、辣椒、玉米、番茄、茄子、韭蔥、胡蘿卜、大白菜、歐芹、向日葵、莧(amaranth)、花莖甘藍、菠菜、急尖藨草、母菊、三葉草、cabgrass和萵苣，接著從提取液收集式(Ⅰa)化合物或其鹽。這些種籽的來源沒有特別限制，并可用從商業(yè)來源或自然來源或它們的培養(yǎng)獲得的種籽。
一般地，十字花科植物種籽在暗中通風處發(fā)芽。不管種籽是否發(fā)芽，浸漬溫度一般為15至30℃，優(yōu)選20至25℃。浸漬時間一般為1至2天。
自來水和蒸餾水可被用作浸漬水，但優(yōu)先使用蒸餾水以不影響化合物(Ⅰa)的生理活性。
這樣得到的浸漬液以普通方法濃縮，如果需要然后應用凝膠過濾色譜，高效液相色譜，等，或它們的聯(lián)合，由此純化式(Ⅰa)化合物。
除了這樣得到的本發(fā)明化合物外，化合物(Ⅰc)或其鹽是具有“異株克生現(xiàn)象”的生理活性物質(zhì)，它促進多種植物胚軸的生長，并在低濃度時促進它們根部的生長，并在高濃度時抑制它們根部的生長。這些化合物用作處理溶液如噴霧液，浸漬液等中的成分。用于多種培養(yǎng)方法，尤其是用人造土壤(如蛭石)培養(yǎng)，溶液培養(yǎng)，及抑制moyashi根部生長的方法，及moyashi胚軸生長促進的方法。
式(Ⅰc)化合物或其鹽用作人造土壤或培養(yǎng)液的成分時，其含量一般為1至10000ppm，優(yōu)選地100ppm或更高。在人造土壤或培養(yǎng)液中的其它有效成分可根據(jù)所培養(yǎng)植物種類而適當選擇。也可采用常用于人造土壤，培養(yǎng)液等中的成分。
對其可施用本發(fā)明培養(yǎng)方法的植物并不限于它們可以用的在人造土壤或培養(yǎng)液中的培養(yǎng)。對其可用本發(fā)明方法的特定例子有番茄、萵苣和甘藍。然而，如前所述，本發(fā)明的方法并不限于這些植物。
所需植物可在含化合物(Ⅰc)或其鹽的人造土壤或培養(yǎng)液中培養(yǎng)。除了所說的人造土壤或培養(yǎng)液之外的培養(yǎng)條件可根據(jù)被培養(yǎng)植物的種類適當確定。
在從上面植物衍生的化合物(Ⅰa)(或其鹽)被使用的情況下，可以未分離/純化的提取液(浸漬液)的形式使用。
在化合物(Ⅰa)或其鹽被用于moyashi根部生長抑制或moyashi胚軸生長促進的情況下，含有1至10000ppm化合物(Ⅰc)或其鹽的溶液優(yōu)選地被噴霧或撒到發(fā)芽的moyashi上，或否則在培養(yǎng)的第二天將發(fā)芽的moyashi優(yōu)選地在含的1至10000ppm化合物(Ⅰc)或其鹽的溶液中只浸漬一次。此方法與普通溶液培養(yǎng)不同，其特征是噴霧或噴淋含化合物(Ⅰc)或其鹽的溶液，或在所述溶液中短時間浸漬一次。
本發(fā)明的方法用于moyashi根部生長抑制和moyashi胚軸生長促進時，從所述植物衍生的化合物(Ⅰa)或其鹽可以未分離/純化的植物提取液形式使用。
實施例本發(fā)明參考下面實施例進一步舉例說明，但這些實施例并不限制本發(fā)明的范圍。
實施例1從水芹種子分離和純化本發(fā)明化合物(1)植物材料的準備將3000粒水芹(Lepidium sativum L.)種籽在去離子水中浸漬1小時。然后，將水芹種籽放在一純凈的網(wǎng)中，將此網(wǎng)輕輕放入一裝有1.6L去離子水中的干凈盤(40×40×3cm3)中。水芹種籽在25℃，于暗中用一鼓風機通風，培養(yǎng)2天。
(2)本發(fā)明化合物的純化①首先，在上面(1)中得到的十字花科植物培養(yǎng)液用Toyo1號濾紙過濾，濾液在35℃減壓濃縮。然后，濃縮液被分配在丙酮溶解和不溶解相中。
AmaranthuscaudatusL.種籽被輕輕地放在在3cm直徑petri盤中用0.8ml樣品溶液(從所說的溶解或不溶解相)浸泡的濾紙上，然后使其在25℃于暗中放置5天，測定發(fā)芽的胚軸和根部的長度以評估丙酮溶解和/或不溶解相是否具有任何植物生長上的生物活性存在。
結果，表現(xiàn)在(AmaranthuscaudatusL.)胚軸生長促進和根部生長抑制的活性被確認存在于丙酮不溶部分中。
隨后，丙酮不溶部分被溶于10ml水中，然后通過分子篩析色譜(MolCut，MilliporeCorp)分成三部分，即Mr高于100000，5000-100000和低于5000，生物活性被發(fā)現(xiàn)存在于Mr低于5000的流分中。此流分在35℃減壓濃縮。
②在上面①中得到的濃縮物(約150mg)溶于水中，然后用高效液相色譜(HPLC)(Waters，μ Bondasphere 5μ C18-100

;柱19mm×15cm;洗脫劑100%H2O，流速5ml/min;214nm檢測器)。上述生物活性在保留時間為5-8分鐘的部分中被發(fā)現(xiàn)。
所說的HPLC流分合并，在35℃減壓濃縮，再進一步用HPLC(YMC填充柱AQ-324 S-5 120A ODS;YMC Co.Ltd.;洗脫劑100%H2O，流速1ml/min;214nm檢測器)純化。上述生物活性在保留時間為17.0-17.8分鐘的流份中被發(fā)現(xiàn)。合并這些流分在35℃減壓濃縮，由此得到6.5mg無定形粉末。
(3)本發(fā)明化合物的結構測定這樣得到的純化樣品被分析以測定結構。旋光度用JASCOA-202分光光度計測定。IR譜在甘油中用JASCO A-202分光光度計得到。UV譜在D2O中用JASCO UVIDEC-610A分光義度計得到。1H-NMR譜用JEOL JNM-GX400NMR分光計得到。FAB質(zhì)譜在甘油基體中被記錄。
①旋光度[α]D19＝+87.8(c0.032，D2O)②IR吸收峰被發(fā)現(xiàn)的位置為-COOH基(1590cm-1)和OH基(3300cm-1)。
③UVλmax225nm(ε approx.2，100)④質(zhì)譜一個M++Na峰在m/z367.0591被觀察到。
⑤1H-NMRδ5.72(1H，d，J＝3.2Hz，j)，5.17(1H，d，J＝1.6Hz，a)，5.07(1H，d，J＝2.3Hz，g)，4.26(1H，dd，J＝6.9，3.2Hz，i)，4.08(1H，dd，J＝3.4，1.6Hz，b)，3.79(1H，dq，J＝9.7，6.8Hz，e)，3.76(1H，dd，J＝9.7，3.4Hz，c)，3.72(1H，dd，J＝6.9，2.3Hz，h)3.31(1H，dd，J＝9.7Hz，d)and 1.80(3H，d，J＝6.8Hz，f)⑥在室溫用乙酐-吡啶-MeOH處理過夜后，上面純化的樣品被轉化為具有5個乙酰氧基的對應甲基酯。質(zhì)譜分析的結果指出該酯的分子式為C23H30O15[m/z546.1564(M+)]。
IR譜表明沒有羥基吸收。1H-NMR(CDCl3)譜出現(xiàn)五個乙酰氧基的甲基質(zhì)子信號[δ2.00(3H，s)，2.05(3H，s)，2.10(3H，s)，2.14(3H×2，s)]和甲氧基質(zhì)子的信號[δ3.88(3H，s)]。
下面的結果在甲基酯的核極化效應(NOE)實驗中得到。即，在δ5.17(1-位的H)照射，則2-位和H和1-位的H的強度分別增加7.3%和8.3%。
在δ5.07(1′-位的H)照射，則1-，2-和2′-位的H的強度分別增加8.3%，6.9%和13.6%。
⑥這些結果表明這一純化的樣品為前面式(Ⅰa)表示的2-O-吡喃鼠李糖基-4-脫氧-蘇式-己-4-烯吡喃艾杜糖醛酸鈉，即樣品被證實具有在前面式(Ⅰ)的結構。
(4)本發(fā)明化合物生物活性的測定本發(fā)明化合物(Ⅰ)對白化的Amaraantus caudatus L.籽苗生長的效果由與赤霉素(GA3)和吲哚乙酸(ⅠAA)相比而考查。測定根據(jù)前面(2)①所述的方法而進行。結果在附圖1示出。從結果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物要濃度高于3μM時促進胚軸生長，而在濃度高于100μM時抑制根部生長。本發(fā)明化合物對胚軸生長的促進是赤霉素的20至30倍，說明本發(fā)明化合物是有效的生長物質(zhì)。本發(fā)明化合物對根部生長和抑制與赤霉素基本相同。吲哚乙酸抑制胚軸和根部生長。
實施例2從非水芹植物種籽分離和純化本發(fā)明化合物(1)植物材料的準備19種植物各900粒種籽，即向葵、菠菜、玉米、秋葵、胡蘿卜、燕麥、歐芹、稗、辣椒、蕎麥、番茄、甘藍、萵苣、雞冠花、牛蒡、三葉草，豌豆、蘿卜和Persian婆婆納種籽在去離子水中浸泡1小時。隨后，這些種籽放在純凈的網(wǎng)中，并將此網(wǎng)輕輕放入裝有1.6升去離子水的純凈的盤(40×40×3cm3)中。這些種籽然后在25℃在暗中用鼓風機通風培養(yǎng)2天。
(2)本發(fā)明化合物的純化①在上面(1)中得到的每種種籽的浸漬液用Toyo1號濾紙過濾，每種濾液在35℃減壓濃縮。然后，所述濃縮物分配到丙酮溶解和不溶解相。
將AmaranthuscaudatusL.種籽輕輕放在在3cm直徑的petri盤中用0.8ml樣品溶液(從丙醇溶解或不溶解部分)浸漬的濾紙上，然后在25℃于暗中放置5天，測定發(fā)芽的胚軸和根部的長度以評估是否具有任何植物生長上的生物活性存在于丙酮溶解和不溶相。
結果，表現(xiàn)為(AmaranthuscaudatusL.)的胚軸生長促進和根部生長抑制的活性被確認存在于丙酮不溶部分中。
隨后，丙酮不溶部分溶于10ml水中，然后用分子篩析色譜(MolCut，MilliporeCorp)分成三個流分，即Mr高于100000，5000-100000和低于5000。生物活性被發(fā)現(xiàn)存在于Mr低于5000的流分中。此流分在35℃減壓濃縮。
②在上面①得到的每種濃縮物(約150mg)溶于水中，并用HPLC(Waters，μ Bondasphere 5μ C18-100

;柱19mm×15cm;洗脫劑100%H2O，流速5ml/min;214nm檢測器)。上述生物活性被發(fā)現(xiàn)在停留時間為5-8分鐘的流分中。保留時間與在實施例1中從水芹籽苗得到的化合物的保留時間(在HPLC中相同條件下)一致。
將所述的HPLC流分合并，在35℃減壓濃縮，并用HPLC(YMC填充柱AQ-324 S-5 120A ODS;YMC Co.Ltd.;洗脫劑100%H2O，流速1ml/min;214nm檢測器)進一步純化。在保留時間為17.0-17.8分鐘的流分中發(fā)現(xiàn)上述生物活性。在這些流分被合并，在35℃減壓濃縮，得到少量來源于每種植物的無定形粉末(幾個毫克)。
(3)本發(fā)明化合物生物活性的測定①來自上面純化的化合物，從向日葵種籽衍生的化合物與47g蛭石混合，并將此蛭石放入一9cm直徑的器皿中，AmaranthuscaudatusL.，萵苣，Persian婆婆納和梯牧草種籽被撒播于此器皿上，并在25℃生長3周，每天在陽光下16小時。
結果表明每種植物的胚軸生長以與(A)至(D)左邊每個對應和對照高達約2倍被促進，如從附圖2籽苗的照片上可以看到的那樣。另外，明顯地，在100ppm的低濃度，排除那些單葉植物，梯牧草，根部生長也以約2倍于對照的高度被促進。
②上面每種來源于水芹種籽和19種植物(向日葵等)種籽的化合物(其量為從10粒種籽衍生的)溶于1ml蒸餾水，然后將樣品溶液置于無濾紙的3.3cm直徑的容器中，將AmaranthuscaudatusL.種籽撒播于其上，并在25℃，暗處生長5天。
結果，與前面①類似，許多植物的胚軸生長在本實驗體系中也被促進，如附圖3所示。生長促進活性對于萵苣，AmaranthuscaudatusL.，番茄和Persian婆婆納相對較低，但是當濃度增加到初始濃度的10倍時也顯示同樣的生長促進活性，因此生長促進活性被認為在所說的19種植物中是一普遍現(xiàn)象。
實施例3在發(fā)芽種籽分泌溶液中AmaranthuscaudatusL.的胚軸伸長促進活性綠莧等44種植物各10粒種籽在1%次氯酸鈉水溶液中殺菌30分鐘，接著用自來水洗30分鐘，然后用蒸餾水洗。潮濕的種籽被放入裝有1ml水的器皿(3.3cm直徑)中并在25℃暗處培養(yǎng)。對于大種籽如玉米，豌豆和燕麥種籽，用6cm直徑的器皿并加3ml蒸餾水。培養(yǎng)2天后，分泌液被轉移到帶有濾紙(Toyo11號濾紙)的器皿中，并撒播10粒AmaranthuscaudatusL.種籽。在25℃暗處培養(yǎng)5天后，測定萌發(fā)的AmaranthuscaudatusL.胚軸的長度。當植物種籽在上述試驗中顯示很小或沒有胚軸生長促進活性時，幾種從更多種籽如50，100或150粒種籽制備的分泌溶液被用于AmaranthuscaudatusL.胚軸伸長試驗。作為對照，用蒸餾水代替分泌溶液。
結果示于表1中。
表1Amaranthus caudatus L.胚軸增長(mm±S.E.)植物10顆種子50顆種子100顆種子綠莧7.8±1.58.3±1.010.9±0.8蘆筍11.1±1.415.3±2.0稗草15.9±3.1水楊15.0±2.9green foxtail15.0±1.9豌豆19.5±2.8梯牧草7.9±1.611.8±1.4
婆婆納11.5±2.013.3±1.7秋葵21.8±5.4野燕麥20.7±3.0蟋蟀草7.9±1.711.6±1.1蕪菁8.2±1.612.9±2.7南瓜17.2±4.0花椰菜9.2±2.412.2±1.2甘藍5.6±1.010.8±1.6石龍芮19.4±1.5雞距草7.7±1.912.5±1.5碎米莎草8.7±1.510.7±1.4牛蒡28.5±4.8"shikokubie"15.6±2.4白蘇12.4±2.518.0±2.2茼蒿17.8±3.6馬齒莧9.7±2.010.5±1.3芹菜8.9±2.020.0±3.2蕎麥21.7±3.2蘿卜21.6±2.8"ta-inubie"17.2±2.1異型莎草9.2±2.310.2±1.0玉米19.0±2.5西紅柿11.0±2.916.9±3.0茄子16.2±2.8
韭蔥19.8±4.3胡蘿卜17.7±3.6大白菜8.1±2.712.4±2.0歐芹27.3±4.9向日葵20.9±4.9amaranth7.8±1.612.8±1.9硬花球在椰菜13.4±2.7菠菜34.8±5.4珍珠稗9.0±2.19.6±1.0*14.5±2.8母菊6.8±1.710.7±1.5天藍苜蓿19.7±4.3cabgrass12.7±2.1萵苣7.8±1.510.0±1.0Control8.3±1.57.8±1.07.6±1.2＊使用150顆種子。
菠菜、牛蒡(草)、歐芹的分泌液里顯示尤其強的胚軸延伸促進活性。蕎麥、蘿卜、向日葵、燕麥、韭蔥、天藍苜蓿、豌豆、石龍芮、玉米、秋葵、茼蒿、胡蘿卜、“ta-inubie”等13種植物分泌液顯示相對強的活性。而綠莧，蘆筍，梯牧草等20種植物則顯示弱的活性。
從上述結果看出，表1中的44種植物能分泌具有胚軸伸長促進活性的化合物(1)?？梢岳斫?，化合物(1)可以從它們的種子或其分泌液中提取獲得。
實施例4在本發(fā)明的化合物存在下的溶液培養(yǎng)法A.向日葵分泌液的制備以實施例2同樣的方式，用2L水從2000顆種子中得到分泌液。分泌液減壓下濃縮，根據(jù)向日葵種子數(shù)(50到200)由此制得4個預定濃度的濃縮提取液，每個水溶液的最后體積調(diào)整到20ml供水耕法試驗。
B.水耕法方法選擇西紅柿、萵苣、豌豆和甘藍作為試驗植物，它們的種子進行栽種，然后于25℃下培養(yǎng)2天(西紅柿為3天)，以12小時在黑暗中，再12小時于亮光中周期循環(huán)。然后，幼芽移到由玻璃制成的水耕室(直徑為28mm，40mm高，容積為20ml)內(nèi)，在25℃下進行水耕法7天，周期是12小時于光亮中，12小時于黑暗。然后測定籽苗胚軸的上部和下部的伸長度，根長度，葉子尺寸和重量。
(1)萵苣水耕法。
根據(jù)上述同一方法，根據(jù)向日葵種子數(shù)(即50，100，150和200)確定預定濃度的含化合物(1)(指lepidimoide，下同)的四種分泌液進行水耕法試驗，以不含lepidimoide作對照。其后7天，測定胚軸和根的重量和長度，評價其對植物生長的作用。
試驗結果見表2和表3及圖4。
表2胚軸和根長度的測量結果胚軸長度根長度植物地上胚軸增長率植物地下根增長率部分的長(對照作為部分長度(對照作為度(mm)100%)(mm)(100%)對照8.110027.410050顆種子10.012865.4239100顆種子10.613169.1252150顆種子9.311573.6269200顆種子11.914767.5248平均129%平均251%＊8枝幼芽的平均長度。
表3重量增加測量結果(8枝幼芽的平均重量)(單位mg)植物地上植物地下部分重量增長率部分重量增長率對照61.1100%15.8100%50顆種子142.9234%49.9315%100顆種子156.0255%51.7327%150顆種子140.4230%55.5351%200顆種子175.7288%72.8460%平均增加252%平均增加363%圖4表示幼芽在水中(對照)以及在水中含有以50，100，150和200顆向日葵種子(從左到右)得到的lepidimoide量3天水耕法的結果。從結果可以看出，在水耕法第三天后，可以觀察到對胚軸和根部具有明顯的生長促進作用。
通過表2可以證明，對萵苣進行水耕法后，lepidimoide平均促使增加29%，胚軸伸長最大增加47%，而根部平均伸長增加151%。用于提取的種子越多(即，lepidimoide的濃度越大)，可以觀察到更高的伸長率。從表3可以看出，lepidimoide促使平均胚軸增重252%(約2.5倍)，而其最大值可達288%(約2.9倍)。進而，可以看到，對根部重量平均增加363%(約3.6倍)最大值可達460%(約4.6倍)，所以證明lepidimoide具有明顯的增重促進作用。很明顯，在lepidimoide受試濃度范圍內(nèi)，lepidimoide的濃度越高，胚軸和根部重量增加作用越大。
(2)豌豆水耕法根據(jù)上述方法，用相同于萵苣的方法進行水耕法試驗，使用4種預定濃度的含lepidimoide分泌液，培養(yǎng)7天后測定其生長促進作用。
其結果見表4和5以及圖5。
表4胚軸和根重測量結果(4枝幼芽平均)(7天后)植物地上植物地上植物地下植物地下部分重部分增重部分重部分增重率率對照602.3100%679.7100%50顆種子724.9120%1067.4157%100顆種子802.7133%1175.9173%150顆種子863.7143%1078.6159%200顆種子1033.9172%1208.3178%平均增加142%平均增加167%
表5胚軸和根部測量結果(4枝幼芽的平均重量)(7天后)植物地上植物地下部分長度增長率部分長度增長率對照41.3100%51.5100%50顆種子47.3115%55.8108%100顆種子59.5144%65.8128%150顆種子60.0145%72.3140%200顆種子74.5180%85.3146%平均增長146%平均增長131%圖5為水耕法3天后幼芽的照片。可以理解，在以圖4同樣濃度的lepidimoide存在下培養(yǎng)的3個幼芽(從右邊)的生長與對照(左邊)相比得到了促進。
當用含lepidimoide(即向日葵分泌液)的水培養(yǎng)時，豌豆胚軸與對照相比平均伸長約1.5倍，最大高度為1.8倍，而其根部與對照相比，平均伸長為1.3倍，最大高度為1.5倍，這些可從表4中看出。此外，與對照相比，豌豆胚軸的重量平均增加1.4倍，最大增加量是1.7倍，而其根部的重量與對照相比平均增加1.7倍，最大為1.8倍。特別地，在lepidimoide的受試濃度范圍內(nèi)，lepidimoide所加的濃度越高，胚軸和根部的重量和伸長的增加作用越大。在此例的lepidimoide濃度范圍之內(nèi)，可觀察到明顯的生長促進作用。
(3)西紅柿水耕法根據(jù)上述方法，以3種預定濃度的含lepidimoide(即向日葵分泌液)的水進行試驗以測定生長促進作用(培養(yǎng)7天后)。
試驗結果見表6和7以及圖6。
表6胚軸和根部長度測量結果(8枝幼芽平均)植物地上部增長率植物地下部增長率分長度(mm)(%)分長度(mm)(%)對照7.9100%27.4100%50顆種子17.2218%37.9138%100顆種子15.4195%17.162%200顆種子12.7163%11.943%
表7胚軸和根測量結果植物地上部增長率植物地下部增長率分重(mg)(%)分長度(mg)(%)對照6.8100%26.4100%50顆種子207.3305%88333%100顆種子142.4209%26.6101%200顆種子65.997%28.4108%圖6表明，與對照相比(左邊)，在以圖4和5相同濃度的lepidimoide存在下培養(yǎng)的幼芽，即使在培養(yǎng)3天后，其生長也明顯地被促進。
圖6和7表明，lepidimoide的存在可大大增加西紅柿胚軸和根部的長度。相對于對照，其胚軸和根部長度的最大值分別為2.2倍和1.4倍。此外，lepidimoide被證明其具有顯著的增加胚軸的根部重量的作用。亦即，和對照相比，其胚軸和根的最大值分別為約1.3倍和3.1倍。
另一方面。較高濃度的lepidimoide可抑制根部伸長，但不影響其根部重量的增加。
(4)甘藍水耕法根據(jù)上述方法，使用3種預定濃度的含lepidimoide(即向日葵分泌液)的水進行水耕法試驗以測定生長促進作用(培養(yǎng)7天后)。
試驗結果列于表8和9。
表8胚軸和根部長度的測量結果(8枝幼芽平均)植物地上部增長率植物地下部增長率分長度(mm)(%)分長度(mm)(%)對照14.0100%15.1100%50顆種子30.8220%28.5189%100顆種子25.6183%16.3108%200顆種子24.1172%14.375%表9胚軸和根重量測量結果(8枝幼芽平均)植物地上部增長率植物地下部增長率分重(mg)(%)分長度(mg)(%)對照50.0100%367.6100%50顆種子102.7206%444.2122%100顆種子55.8112%288.979%200顆種子--232.763%從表8和9可以證實，作為lepidimoide的生長促進效果，甘藍的胚軸和根部伸長的最大值分別是對照的約2.2倍和1.9倍，其胚軸和根部的重量最大值分別約是對照的2和1.2倍。
總之，可以證明用lepidimoide(或從向日葵種子得到含lepidimoide分泌液)進行的水耕法對萵苣，豌豆，西紅柿和甘藍的胚軸和根的伸長和重量都有顯著的增加作用。
上述數(shù)據(jù)證明，用于溶液培養(yǎng)的Lepidimoide引起顯著的植物生長促進，導致培養(yǎng)所需時間周期的減少及生長率的改進。
因而，由于使用lepidimoide的溶液培養(yǎng)，植物生長可被大大地改進。
(實施例5)blackmatpe根的生長抑制作用使用向日葵種子制備含lepidimoide儲液。根據(jù)實施例2描述的方法，用2L水提取2000顆向日葵種子制得的儲液，它作為標準儲液。必要時濃縮或稀釋。
用以向日葵種子數(shù)確定其濃度的lepidimoide(O[對照]，150，500和1500顆種子)進行根生長抑制作用，以一種moyashi種子，黑種子(blackmatpe)作為試驗植物。
在40℃，用含lepidimoide的3L20ppm次氯酸鈉水溶液浸漬500mlblackmatpe種子4小時。然后將種子移到一特定體積的塑料容器中，在25℃于黑暗中生長3天，培養(yǎng)期間每隔8小時，噴灑15℃的水。
圖7顯示了生長抑制試驗的結果，其中使用的lepidimoide濃度為0(對比)，150，500和1500顆向日葵種子(從左到右)。從這些照片上可以證實，根部生長抑制作用從左到右是增強的。尤其是，在右邊使用1500顆種子的情況下，根的生長抑制是很明顯的，發(fā)現(xiàn)其根長度比對照短20%。
從上述結果可以證實lepidimoide對moyashi根的生長抑制作用。(實施例6)不同處理條件下lepidimoide對blackmatpe和綠豆根的生長抑制作用。
由于在實施例5中已證實了lepidimoide對根的生長抑制作用，在類似的實驗條件下可確定lepidimoide處理的最佳條件，用blackmatpe和綠豆的根來進行生長抑制作用。培養(yǎng)繼續(xù)5天，lepidimoide的濃度約是實施例5中的兩倍。整個實驗包括5種處理處理1包括每天用lepidimoide溶液浸漬;處理2僅在第一天浸漬;處理3為在第一天和第二天浸漬;處理4是在第一天和第三天浸漬;處理5在第一天和第四天浸漬。在第五天，隨意從每個試驗組中挑出30個moyashi，以確定和比較它們的胚軸和根的平均長度。其結果列于表10和11。
表10對blackmalpe根的生長抑制作用對照處理12345胚軸51.451.549.047.347.050.0根20.617.914.923.520.720.6
表11對綠豆根的生長抑制作用對照處理12345胚軸43.946.843.145.248.249.0根30.617.516.821.719.216.3從表10的試驗結果，再次證實lepidimoide處理對blackmatpe根的生長抑制是有效的。每天或第一天用lepidimoide處理有效，這從表10中可以看出。處理2是簡單和經(jīng)濟的方法，因為浸漬只要1次就足夠，對根的生長其最大值卻可達到28%的抑制作用。
從表11實驗結果知道，處理1到5對綠豆的根生長抑制是有效的，而且lepidimoide特別對綠豆的根生長抑制有效。此外，可觀察到抑制作用的最大值是47%，而在處理2中即使只進行1次浸漬，可觀察到45%的抑制作用，所以可以理解處理2是最適宜的經(jīng)濟的處理。
對綠豆，也可觀察到某些程度的胚軸伸長作用(即如前述的lepidimoide生理作用)。
從上述blackmatpe和綠豆試驗中可以看出，lepidimoide可用來抑制moyashi的根生長，而且用lepidimoide在moyashi生長的第一階段進行處理是有效和適宜的，在這種情況下，只浸漬1次的處理方法2證明在實際生產(chǎn)方法中是經(jīng)濟和適宜的方法。
(實施例7)lepidimoide對moyashi的生長促進作用如上述，證明lepidimoide對胚軸的伸長有作用，可見實施例6的數(shù)據(jù)，預料lepidimoide對綠豆的生長促進有作用。因而，lepidimoide對greengram的生長促進作用如實施例5同樣條件下進行評估。lepidimoide的濃度是1000顆向日葵種子/1，綠豆培養(yǎng)7天。
試驗結果列于圖8。左邊的幼芽以lepidimoide處理，而右邊的(對照)則未處理。這張照片可以證實，用lepidimoide處理的幼芽(左邊)約是未處理的幼芽(右邊)的兩倍大。此結果表明了lepidimoide的顯著的生長促進作用。
從以上試驗可以看出。以lepidimoide處理可以顯著地產(chǎn)生生長促進作用，可期望明顯地改善moyashi和生產(chǎn)速度和產(chǎn)率，減少生產(chǎn)成本，lepidimoide處理在大規(guī)模的moyashi生產(chǎn)上也是極有用的。
(合成實施例1)α-L-鼠李糖的芐基化作用

α-L-鼠李糖將100ml苯加到含4gα-L-鼠李糖-水合物的20ml芐醇中，所得的混合物在催化量的硫酸(20滴，從巴氏移液管中得)存在下，加熱回流2小時，以共沸法除去所得的水。減壓下(約40℃)濃縮反應溶液，以硅膠柱色譜(50g硅膠，氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，由此得到芐基糖苷3.7g(產(chǎn)率93%)。
(合成實施例2)化合物(2)的合成

向90ml丙酮中加入5.5g合成實施例1獲得的芐基糖苷和10ml2，2-二甲氧基丙烷，在2.0g對甲苯磺酸催化劑存在下，室溫攪拌1.5小時。反應溶液減壓下濃縮，然后加入100ml乙酸乙酯。樣品依次以飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)，水(50ml×2)，飽和氯化鈉水溶液(50ml)洗滌，產(chǎn)物然后以無水硫酸鈉干燥，濃縮，以硅膠柱色譜(50g硅膠，氯仿∶甲醇＝50∶1)純化，由此得到丙酮化合物(2)4.9g(產(chǎn)率89%)。
(合成實施例3)化合物(3)的合成

將含4g合成實施例2得到的醇衍生物(2)的15mlN，N-二甲基甲酰胺(DMF)加到含0.82g氫化鈉的10mlDMF懸浮液中，所得混合物0℃攪拌5分鐘，室溫攪拌45分鐘。反應溶液再冷至0℃，接著加入3.4ml溴化芐。所得混合物于0℃下攪拌40分鐘，室溫攪拌39小時。向反應溶液(0℃)中加入0.5ml甲醇，然后再加入50ml水，所得物以乙酸乙酯(200ml)提取。有機層以飽和氯化鈉水溶液(100ml×2)洗滌，然后以無水硫酸鈉干燥，濃縮。濃縮物以硅膠柱色譜(100g硅膠，己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)純化，由此得到芐基衍生物(3)3.4g(產(chǎn)率84.2%)。
(合成實施例4)化合物(4)的合成

向4g由合成實施例(3)制得的芐基衍生物(3)中加入1，4-二噁烷，乙酸和水各30ml，所得混合物在70-75℃反應3.5小時。將反應溶液傾入300ml乙酸乙酯中，有機層以水(150ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)，飽的氯化鈉水溶液(200ml×2)洗滌，然后以無水硫酸鈉干燥，濃縮。將產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(60g硅膠，己烷∶乙酸乙酯＝5∶1到1∶1)純化，由此得到化合物(4)2.8g(產(chǎn)率70%)。
(合成實施例5)化合物(5)和(6)的合成

將合成實施例4獲得的2.24g化合物(4)和1.82g二丁基氧化錫(Bu2SnO)于30ml絕對苯中的混合物加熱回流3小時，以共沸法除掉產(chǎn)生的水。反應溶液濃縮，然后用真空泵干燥1小時，而獲得化合物(5)。向化合物(5)(就地制備)中加入1.5g氟化銫(CsF)，樣品于真空泵下干燥另1小時，接著向其中加入30ml DMF，然后加入3ml溴化芐。使混合物反應1.5小時，然后將反應溶液傾入到100ml乙酸乙酯中。有機層以水(100ml×2)，然后用飽和氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，此溶液以無水硫酸鈉干燥，濃縮。所得物經(jīng)硅膠柱色譜(90g硅膠，己烷∶乙酸乙酯＝5∶1到2∶1)純化，由此得到化合物(6)2g(2-步反應產(chǎn)率88%)。
(實施例8)化合物(7)的合成

將6g分子篩4A加到600mg化合物(A)和1114mg在合成實施例5中獲得的化合物(6)的混合物中，所得混合物于真空泵減壓下干燥。3小時后，向其中加入20ml絕對二氯甲烷，然后攪拌1小時。接著在黑暗中，于0℃下向其中加入含2.5g甲基亞磺酰溴(methylsulphenylbromide)(MSB)的5ml1，2-二氯乙烷，其間攪拌1小時。反應溫度可升至0℃，接著加入4ml三乙胺，進而加入50ml乙酸乙酯。過濾反應溶液，無水硫酸鈉干燥，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(160g硅膠，己烷∶乙酸乙酯＝7∶1到7∶3)純化，由此得到化合物(7)1400mg(產(chǎn)率37.5%)。
IR譜見圖9。
1H-NMR譜(CDCl3)見圖10。
13C-NMR譜(CDCl3)見圖11。
(實施例9)化合物(8)的合成

將實施例8得到的化合物(7)300mg溶于6ml甲醇中，向其中加入100mg碳酸鉀，將此混合物室溫攪拌1小時又20分鐘。反應溶液傾入乙酸乙酯中，有機層以飽和氯化鈉水溶液(40ml×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮，將產(chǎn)物經(jīng)薄層色譜分離純化，由此得到化合物(8)285mg(定量)。
(實施例10)化合物(8a)的合成

將10mg由實施例9獲得的化合物(8)溶于3ml甲醇中。使反應容器脫氣并用氬氣置換，在0℃下向其中加入10%鈀-碳，然后在室溫下，以氫氣替代反應容器中的氬氣。反應混合物然后于常壓下攪拌15小時。反應容器中的氫氣再用氬氣替換。加入硅藻土后，過濾反應混合物。濾液濃縮，然后經(jīng)制備性硅膠色譜(氯仿∶甲醇＝2∶1)純化，由此得化合物(8a)9mg(產(chǎn)率90%)。
1H-NMR譜(CDCl3)見圖12。
(實施例11)化合物(9)的合成

將240mg實施例9獲得的化合物(8)溶于2ml DMSO和0.8ml三乙胺的混合溶劑中，慢慢地一點一點加入400mg SO3-吡啶。反應溶液于室溫下攪拌4小時，傾之于水中。以30ml乙酸乙酯提取后，有機層以飽和氯化鈉水溶液(15ml×2)洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮。
將230mg上述濃縮物，1ml2-甲基-2-丁烯，50mg磷酸二氫鈉溶于2ml水和3ml叔丁醇混合溶劑中。一點一點地加入170mg亞氯酸鈉(約85%NaClO2)，然后將混合物攪拌2小時。反應溶液冷卻至0℃，傾入到30ml乙酸乙酯中。接著反應溶液以1N鹽酸酸化，然后用飽和氯化鈉水溶液(20ml×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮。殘物經(jīng)薄層色譜純化，由此得到羧酸(9)190mg(兩步反應產(chǎn)率79%)。
(實施例12)化合物(9a)的合成

將20mg由實施例11獲得的化合物(9)溶于5ml甲醇中。使反應容器脫氣并將其中的空氣以氬氣置換，在0℃下向其中加入10%鈀-碳，然后在室溫下以氫氣置換反應容器中的氬氣。所得混合物然后于常壓下攪拌15小時。容器中的氫氣用氬氣置換。加入硅藻土后，過濾反應混合物。濾液濃縮，然后用制備性硅膠色譜(氯仿∶甲醇＝1∶1)純化，由此得到化合物(9a)18mg(產(chǎn)率(90%)。
1H-NMR譜(CD3OD)見圖13。
(實施例13)化合物(10)的合成

由實施例11得到的化合物(9)200mg溶于5ml苯和1ml甲醇混合物中，接著加入過量的三甲基甲硅烷重氮甲烷(于10%苯中)。其后5分鐘，蒸去溶劑，由此得到化合物(10)190mg(定量)。
(實施例14)化合物(10a)的合成

將174mg由實施例13得到的化合物(10)溶于10ml甲醇和10ml乙酸乙酯和混合溶劑中。反應容器中的空氣以氬氣置換，于0℃下向其中加入10%的鈀-碳。接著于室溫下以氫氣置換其中的氬氣。所得混合物然后于常壓下攪拌15小時，容器中的氫氣用氬氣置換掉。加入硅藻土后，過濾反應混合物，濾液濃縮，經(jīng)制備性硅膠色譜(氯仿∶甲醇＝2∶1)純化，由此得到醇衍生物(10a)170mg(產(chǎn)率98%)。
IR譜見圖14。
1H-NMR譜(CD3OD)見圖15。
13C-NMR譜(CD3OD)見圖16。
(實施例15)化合物(11)的合成

將65mg由實施例14得到的六醇衍生物(10a)溶于0.8ml吡啶中，向其中加入0.5ml乙酸酐。然后，混合物于室溫攪拌11小時。加入甲苯后，共沸去溶劑，殘物經(jīng)制備性硅膠色譜(氯仿∶丙酮＝5∶1)純化，由此得到化合物(11)62mg(定量)。
(實施例16)化合物(12)和(12′)的合成

將15mg1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]-7-十一碳烯(DBU)加到含1.3mg實施例(15)得到的化合物(11)的0.5ml吡啶中，此混合物冰冷下攪拌1小時，再于室溫下攪拌14小時。
將反應液傾入到30ml乙酸乙酯中，然后以5ml1N的鹽酸洗滌，再以飽和氯化鈉水溶液(15ml×3)洗滌。產(chǎn)品以無水硫酸鈉干燥，濃縮。所得殘物于薄層色譜上純化，由此得化合物(12)0.7mg，化合物(12′)0.6mg(產(chǎn)率(12)54%，(12′)43%)。
化合物(12)。
狀態(tài)無色油質(zhì)譜m/z546.1564(M+)IR譜(膜)1740cm-1(見圖17)1H-NMR譜δ(CDCl3)(見圖18)
6.14(1H，d，J＝3.3Hz)，6.04(1H，d，J＝2.0Hz)5.59(1H，dd，J＝7.5，3.3Hz)，5.31(1H，d，J＝2.4Hz)5.18(1H，dd，J＝7.5，2.4Hz)，5.16(1H，dd，J＝9.8，3.4Hz)，5.06(1H，dd，J＝9.8，9.3Hz)，4.27(1H，dd，J＝3.4，2.0Hz)，3.88(1H，dq，J＝9.3，6.0Hz)，3.80(3H，s)，2.14(6H，s)，2.10(3H，s)2.05(3H，s)，2.00(3H，s)，1.22(3H，d，J＝6.0Hz)13C-NMR譜δ(CDCl3)(見圖19)170.4(s)，170.1(s)，169.9(s)，169.5(s)，168.8(s)，161.6(s)，141.6(s)，108.6(d)，95.6(d)，90.2(d)，73.3(d)，70.4(d)，69.4(d)，69.0(d)，68.3(d)，66.2(d)，52.5(q)，20.94(q)，20.90(q)，20.7(q)，20.6(q)，20.5(q)，17.5(q)化合物(12′)狀態(tài)無色油質(zhì)譜m/z546.1609(M+)IR譜(膜)1740cm-1(見圖20)1H-NMR譜δ(CDCl3)(見圖21)6.15(1H，d，J＝2.9Hz)，5.72(1H，s)，5.71(1H，d，J＝2.9Hz)，5.64(1H，dd，J＝7.8，2.9Hz)，5.10(1H，dd，J＝7.8，2.9Hz)，5.02(1H，dd，J＝9.8，9.8Hz)，4.91(1H，dd，J＝9.8，3.2Hz)，
4.43(1H，d，J＝3.2Hz)，3.59(1H，dq，J＝9.8，6.1Hz)，3.80(3H，s)，2.13(3H，s)，2.12(3H，s)，2.10(3H，s)，2.04(3H，s)，1.95(3H，s)，1.25(3H，d，J＝6.1Hz)(實施例17)化合物(1)的合成

將實施例16得到的3.1mg化合物(12′)溶于1ml水和1ml甲醇的混合溶劑中，接著加入0.034ml含6N氫氧化鈉的50%甲醇(水溶液)中。所得混合物攪拌20分鐘，濃縮反應溶液，然后經(jīng)制備性硅膠色譜純化，由此得到lepidimoide(1)2.1mg(定量)。
FAB(H2O+G) HRFABMSC12H17O10Na2367.0591 M+Na[α]D21+65.2°(c 0.025，D2O)合成產(chǎn)物IR譜3，300，1590cm-11H-NMR譜δ(D2O)
5.72(1H，d，J＝3.2Hz)，5.17(1H，d，J＝1.6Hz)，5.07(1H，d，J＝2.3Hz)，4.26(1H，dd，J＝6.9，3.2Hz)，4.08(1H，dd，J＝3.4，1.6Hz)，3.79(1H，dq，J＝9.7，6.8Hz)，3.76(1H，dd，J＝9.7，3.4Hz)，3.72(1H，dd，J＝6.9，2.3Hz)，3.31(1H，dd，J＝9.7，9.7Hz)，1.80(3H，d，J＝6.8Hz)(實施例18)化合物(13)的合成

將實施例16獲得的總量為3.3mg的化合物(12)和(12′)溶于4ml甲醇中。使反應容器脫氣并將其的空氣以氬氣置換，在0℃加入10%鈀-碳，然后于室溫下，以氫氣置換容器中的氬氣。然后將混合物在常壓下攪拌15小時，用氬氣置換容器中的氫氣。加入硅藻土后，過濾反應混合物。濾液濃縮，然后經(jīng)制備性硅膠色譜(氯仿∶甲醇＝50∶1)，由此得到化合物(13)2.9mg(產(chǎn)率88%)。
(實施例19)化合物(14)的合成

將2.9mg由實施例18得到的化合物(13)溶于1ml水和1ml甲醇的混合溶劑中，向其中加入6倍當量的1N氫氧化鈉水溶液，所得混合物使其反應3小時。反應溶液濃縮，然后經(jīng)HP-20柱色譜純化，由此得到化合物(14)2.6mg(產(chǎn)率98%)。
1H-NMR譜(D2O)見圖22。
(試驗實施例1)合成的lepidimoide和lepidimoide衍生物的生理活性用按上述方法合成的化合物(1)，(8a)，(9a)，(10a)，(12)+(12′)和(14)在AmaranthuscaudatusL.以實施例1(2)①同樣的方法進行生長促進作用試驗。
在直徑為3cm的Petri盤中，放入由0.8ml試驗溶液(如上合成的每一化合物水溶液[10-5到3×10-4M])浸漬的濾紙，在濾紙上放上Amaranthus caudatus L.種子，將其在黑暗中于25℃下放置5天，測量發(fā)芽胚軸的長度。比較由胚軸長度表示的化合物活性。
其結果見表12。
表12合成的lepidimoide和lepidimoide衍生物的生理活性比較化合物18a9a10a12+12'14活性++++++++++++++++++與天然的lepidimoide相同+++天然lepidimoide活性的75%++天然lepidimoide活性的50%+天然lepidimoide活性的25%。
權利要求
1.下式(Ⅰ)表示的化合物及其鹽
其中R1，R2，R3，R4和R5獨立地代表氫原子，或乙?；蚱S基，R6代表氫原子，羥基，乙酰氧基，或芐氧基，R7代表氫原子，或R6和R7一起代表另一直接鍵，而R8代表羧基，甲氧羰基，羥甲基，或乙酰氧甲基。
2.下式(Ⅰa)代表的化合物及其鹽
3.下式(Ⅰb)代表的化合物及其鹽
其中R1′，R2′，R3′，R4′和R5′獨立地代表氫原子，或乙?；蚱S基，R6′代表氫原子，羥基，乙酰氧基，或芐氧基，R7′代表氫原子，或R6′和R7′一起代表另一直接鍵，R8′代表羧基，甲氧羰基，羥甲基，或乙酰氧甲基，其中，如果R1′，R2′，R3′，R4′和R5′分別代表氫原子，而R8′代表羧基，則R6′代表氫原子，羥基，乙酰氧基，或芐氧基而R7′代表氫原子。
4.如權利要求1定義的化合物及其鹽，其中R1，R2，R3，R4和R5分別代表氫原子，R6代表羥基，R7代表氫原子，而R8代表羧基。
5.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，R6代表羥基，R7代表氫原子，而R8代表甲氧羰基。
6.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，R6代表羥基，R7代表氫原子，而R8代表羥甲基。
7.如權利要求1定義的化合物及其鹽，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表氫原子，R6代表氫原子，R7代表氫原子，而R8代表羧基。
8.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表芐基，R6代表芐氧基，R7代表氫原子，而R8代表乙酰氧甲基。
9.如權利要求1定義的化合物，其中R1，R2，R3，R4和R5各自代表乙?；琑6和R7一起代表另一直接鍵，而R8代甲氧羰基。
10.制備如權利要求2定義的化合物或其鹽的方法，包括水解如權利要求9定義的化合物。
11.制備植物生理活性物質(zhì)的方法，包括將植物種子浸于水中，然后從提取液中收集下式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽
12.如權利要求11的方法，其中植物種子選自如下組成的一類植物的綠莧、蘆筍、燕麥、稗草、水稻、綠狗尾草、豌豆、梯牧草、Persian婆婆納(鳥眼婆婆納)、秋葵、野燕麥、蟋蟀草、蕪菁、南瓜、花椰菜、甘藍、水芹、雞冠花、雞距草、稻田莎草、牛蒡、“Shikokubie”、白蘇、茼蒿、馬齒莧、芹菜、蕎麥、蘿卜、“ta-inubie”、小花傘植物、辣椒、玉米、番茄、茄子、韭蔥、胡蘿卜、大白菜、歐芹、向日葵、莧菜、花莖甘藍、菠菜、急尖藨草、母菊、三葉草、cabgrass和萵苣。
13.一種培養(yǎng)方法，其中人造土壤或培養(yǎng)液含有下式(Ⅰc)表示的化合物或其鹽
其中R1″、R2″、R3″、R4″和R5″獨立地代表氫原子或乙?；?，R6″代表氫原子或羥基，R7″代表氫原子，或R6″和R7″一起代表另一直鍵，而R8″代表羧基、甲氧羰基或羥甲基。
14.一種培養(yǎng)方法，其中人造土壤或培養(yǎng)液含有下式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽
15.如權利要求14的方法，其中由式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽的含量為1至10000ppm。
16.一種抑制moyashi根部生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰc)表示的化合物或其鹽的溶液。
17.一種抑制moyashi根部生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽的溶液。
18.一種促進moyashi胚軸生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰc)表示的化合物或其鹽的溶液。
19.一種促進moyashi胚軸生長的方法，包括對moyashi種籽施用含有由式(Ⅰa)表示的化合物或其鹽的溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及由上式(I)代表的化合物或其鹽。(其中R
文檔編號A01N65/00GK1080924SQ93104400
公開日1994年1月19日 申請日期1993年3月15日 優(yōu)先權日1992年5月22日
發(fā)明者長谷川宏司, 角田英男, 水谷純也 申請人:新技術事業(yè)團