本發(fā)明涉及一種可同時(shí)構(gòu)建焦慮小鼠模型、記憶受損小鼠模型的方法，屬于醫(yī)療評(píng)價(jià)、檢測。

背景技術(shù)：

1、在小鼠建模中，不同疾病對(duì)應(yīng)有不同的小鼠模型，如抑郁癥小鼠模型、自閉癥小鼠模型、急性淋巴細(xì)胞白血病小鼠模型、原發(fā)性肝癌小鼠模型、焦慮小鼠模型等。藥物注射、對(duì)小鼠進(jìn)行打擊都是建立這些模型常用的方法。

2、現(xiàn)有的小鼠精神疾病模型的建立，主要是通過藥物注射建立。但是注射藥物之后，小鼠分子水平的表達(dá)也會(huì)受到影響，當(dāng)我們?cè)谘芯科渌蛩貙?duì)精神疾病的影響時(shí)，就會(huì)受到藥物的影響，導(dǎo)致一些分子水平的變化可能并不符合原來的變化趨勢。因此，有必要尋找一種不對(duì)小鼠進(jìn)行藥物注射的新的小鼠建模方法，以避免注射藥物帶來的影響，使其他因素對(duì)精神疾病影響的研究更加精確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種新的小鼠模型構(gòu)建方法，該方法對(duì)小鼠不注射藥物、不進(jìn)行外來打擊，且可同時(shí)構(gòu)建焦慮小鼠模型和記憶受損小鼠模型。

2、為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，該方法包括如下步驟，

3、(1)適應(yīng)性喂養(yǎng)：隨機(jī)分兩組小鼠進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)，兩組采用相同的喂養(yǎng)條件，喂養(yǎng)環(huán)境溫度22-26℃、濕度40-60％rh，光照和黑夜各12h交替進(jìn)行，喂養(yǎng)一周；

4、(2)經(jīng)步驟(1)適應(yīng)性喂養(yǎng)后的兩組小鼠分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組在溫度22-26℃、濕度40-60％rh的環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組在溫度33-36℃、濕度80-95％rh的環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)，光照和黑夜各12h交替進(jìn)行，連續(xù)飼養(yǎng)時(shí)間至少四周；

5、(3)小鼠的行為學(xué)檢測：經(jīng)步驟(2)喂養(yǎng)后的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠分別進(jìn)行高架十字迷宮、曠場實(shí)驗(yàn)、y迷宮和新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)檢測。

6、進(jìn)一步地，步驟(1)中的適應(yīng)性喂養(yǎng)以及步驟(2)的對(duì)照組的飼養(yǎng)環(huán)境均為spf級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房；步驟(2)的實(shí)驗(yàn)組飼養(yǎng)環(huán)境為人工氣候箱。spf(specific?pathogen?free)級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，即無特定病原體動(dòng)物，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。spf級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，即是能提供能夠滿足該級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在屏障系統(tǒng)或者隔離系統(tǒng)中的場所。spf級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房實(shí)行嚴(yán)格的微生物控制，并且實(shí)驗(yàn)環(huán)境嚴(yán)格控制人員、物品、和空氣的進(jìn)出。

7、進(jìn)一步地，步驟(1)中的適應(yīng)性喂養(yǎng)以及步驟(2)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組飼養(yǎng)時(shí)，小鼠自由進(jìn)食和飲水，兩組小鼠所用飼料和飲水保持一致。

8、進(jìn)一步地，步驟(3)中，所述高架十字迷宮的行為學(xué)檢測具體為，將小鼠頭朝開臂放置于十字迷宮正中心，從小鼠進(jìn)入迷宮后計(jì)時(shí)，監(jiān)測儀器自動(dòng)監(jiān)測5min內(nèi)小鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)和時(shí)間。

9、進(jìn)一步地，步驟(3)中，所述曠場實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)檢測具體為，將小鼠放置于曠場正中心，從小鼠進(jìn)入曠場后計(jì)時(shí)，監(jiān)測儀器自動(dòng)監(jiān)測5min-10min內(nèi)小鼠在曠場中心的時(shí)間及在曠場的運(yùn)動(dòng)距離。

10、進(jìn)一步地，步驟(3)中，所述y迷宮行為學(xué)檢測具體為，將小鼠頭朝y迷宮兩臂交界處放下，從小鼠進(jìn)入y迷宮開始計(jì)時(shí)，監(jiān)測5min-10min內(nèi)小鼠進(jìn)入各個(gè)臂的順序，若連續(xù)三次不重復(fù)進(jìn)入同一個(gè)臂記為正確，然則相反，然后記錄自發(fā)交替次數(shù)，根據(jù)記錄的自發(fā)交替次數(shù)計(jì)算自發(fā)交替率，自發(fā)交替率(％)＝[(自發(fā)交替次數(shù))/(總進(jìn)臂次數(shù)-2)]×100％。

11、進(jìn)一步地，步驟(3)中，所述新物體識(shí)別的行為學(xué)檢測具體為，第一天小鼠在沒有物體的測試室習(xí)慣5min-10min，再送回原飼養(yǎng)環(huán)境中；第二天將小鼠放回測試室，在兩個(gè)原始物體存在的情況下，采集視頻5min-10min，再將小鼠送回原飼養(yǎng)環(huán)境中；第三天，將小鼠放回測試室，在一個(gè)原始物體和一個(gè)新物體存在的情況下呆5min-10min，儀器自動(dòng)監(jiān)測該5min-10min內(nèi)小鼠探索新物體和原始物體的次數(shù)和時(shí)間，第一天測試室習(xí)慣所用時(shí)間、第二天采集視頻時(shí)間、第三天小鼠探索新物體和原始物體的被監(jiān)測時(shí)間的時(shí)長保持一致。根據(jù)監(jiān)測得到的新物體探索時(shí)間和原始物體探索時(shí)間計(jì)算新物體辨別指數(shù)，新物體辨別指數(shù)(％)＝新物體探索時(shí)間/(新物體探索時(shí)間+原始物體探索時(shí)間)×100％，辨別指數(shù)大于50％時(shí)表明動(dòng)物更多地關(guān)注新物體。

12、進(jìn)一步地，測試室至少為50×50×40cm3大小的方形空間，也可采用100×100×40m3的方形空間，原始物體和新物體形狀具有明顯差異。

13、進(jìn)一步地，所述小鼠為6-8周的處于青春期的小鼠。

14、進(jìn)一步地，步驟(1)中的光照時(shí)間為早上8:00-晚上8:00，黑夜時(shí)間為晚上8:00-早上8:00。

15、本發(fā)明通過調(diào)控小鼠生存溫度和濕度，經(jīng)一定周期，即連續(xù)高溫高濕刺激，觀測到小鼠的焦慮程度和記憶均發(fā)生了變化，成功建立了小鼠焦慮模型和小鼠記憶受損模型。我國約有超過55％的地區(qū)屬于高溫高濕環(huán)境并且每年濕熱天氣的天數(shù)有逐年增加的趨勢。人們的生產(chǎn)和生活受到熱的影響，體溫調(diào)節(jié)有關(guān)的生理機(jī)能緊張，心理狀態(tài)失衡，嚴(yán)重威脅職業(yè)健康和人身安全。因此，本發(fā)明通過高溫高濕刺激構(gòu)建小鼠模型具有現(xiàn)實(shí)意義，為后期調(diào)控高溫高濕給人們帶來不利影響提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

16、本發(fā)明提供的小鼠模型的構(gòu)建方法，采用的是外在環(huán)境刺激，對(duì)小鼠不進(jìn)行藥物注射，避免了在研究其他因素對(duì)精神疾病影響時(shí)受到所注射的藥物的影響，避免了一些分子水平的變化可能引起的并不符合精神疾病原來變化趨勢的發(fā)生。本發(fā)明對(duì)小鼠不造成傷害，小鼠進(jìn)行了人道主義保護(hù)，更加人性化。

技術(shù)特征：

1.一種同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟，

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(1)中的適應(yīng)性喂養(yǎng)以及步驟(2)的對(duì)照組的飼養(yǎng)環(huán)境均為spf級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房；步驟(2)的實(shí)驗(yàn)組的飼養(yǎng)環(huán)境為人工氣候箱。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(1)中的適應(yīng)性喂養(yǎng)以及步驟(2)中的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組飼養(yǎng)時(shí)，小鼠自由進(jìn)食和飲水，兩組小鼠所用飼料和飲水保持一致。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述高架十字迷宮的行為學(xué)檢測具體為，將小鼠頭朝開臂放置于十字迷宮正中心，從小鼠進(jìn)入迷宮后計(jì)時(shí)，監(jiān)測儀器自動(dòng)監(jiān)測5min內(nèi)小鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)和時(shí)間。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述曠場實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)檢測具體為，將小鼠放置于曠場正中心，從小鼠進(jìn)入曠場后計(jì)時(shí)，監(jiān)測儀器自動(dòng)監(jiān)測5min-10min內(nèi)小鼠在曠場中心的時(shí)間及在曠場的運(yùn)動(dòng)距離。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述y迷宮行為學(xué)檢測具體為，將小鼠頭朝y迷宮兩臂交界處放下，從小鼠進(jìn)入y迷宮開始計(jì)時(shí)，監(jiān)測5min-10min內(nèi)小鼠進(jìn)入各個(gè)臂的順序，若連續(xù)三次不重復(fù)進(jìn)入同一個(gè)臂記為正確，然則相反，然后記錄自然交替次數(shù)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述新物體識(shí)別的行為學(xué)檢測具體為，第一天小鼠在沒有物體的測試室習(xí)慣5min-10min，再送回原飼養(yǎng)環(huán)境中；第二天將小鼠放回測試室，再兩個(gè)原始物體存在的情況下，采集視頻5min-10min，然后將小鼠送回原飼養(yǎng)環(huán)境中；第三天，將小鼠放回測試室，在一個(gè)原始物體和一個(gè)新物體存在的情況下呆5min-10min，儀器自動(dòng)監(jiān)測該5min-10min內(nèi)小鼠探索新物體和原始物體的次數(shù)和時(shí)間。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：測試室至少為50×50×40cm3大小的方形空間，原始物體和新物體形狀具有明顯差異。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：所述小鼠為6-8周的處于青春期的小鼠。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，其特征在于：步驟(1)中的光照時(shí)間為早上8:00-晚上8:00，黑夜時(shí)間為晚上8:00-早上8:00。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種同時(shí)構(gòu)建焦慮和記憶受損小鼠模型的方法，(1)適應(yīng)性喂養(yǎng)：隨機(jī)分兩組小鼠進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)，兩組采用相同的喂養(yǎng)條件，喂養(yǎng)環(huán)境溫度22?26℃、濕度40?60％RH，光照和黑夜各12h交替進(jìn)行，喂養(yǎng)一周；(2)兩組小鼠分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組在溫度22?26℃、濕度40?60％RH的環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組在溫度33?36℃、濕度80?95％RH的環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)，光照和黑夜各12h交替進(jìn)行，連續(xù)飼養(yǎng)至少四周；(3)經(jīng)步驟(2)喂養(yǎng)后的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠分別進(jìn)行高架十字迷宮、曠場實(shí)驗(yàn)、Y迷宮和新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)檢測。本發(fā)明采用外在環(huán)境刺激，避免藥物影響，對(duì)小鼠不造成傷害，更加人性化。

技術(shù)研發(fā)人員：王保紅,鄧德芳,張立將
受保護(hù)的技術(shù)使用者：浙江大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6