本申請涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種銀杏的組織培養(yǎng)方法及生根培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

銀杏為銀杏科、銀杏屬落葉喬木，是我國特有樹種，銀杏出現(xiàn)在幾億年前，是第四紀(jì)冰川運動后遺留下來的裸子植物中最古老的孑遺植物，現(xiàn)存活在世的銀杏稀少而分散，上百歲的老樹已不多見，和它同綱的所有其他植物皆已滅絕，所以銀杏又有“活化石”的美稱。銀杏樹枝生長較慢，壽命極長，自然條件下，從栽種到銀杏結(jié)果要二十多年，四十年后才能大量結(jié)果。銀杏具有綠化環(huán)境、凈化空氣、保持水土、防治蟲害、調(diào)節(jié)氣溫、調(diào)節(jié)心理等功能，是良好的造林、綠化和觀賞樹種，對中國大江南北農(nóng)林種植結(jié)構(gòu)調(diào)整、平原農(nóng)區(qū)林業(yè)的發(fā)展具有重要意義?，F(xiàn)代研究表明，銀杏葉提取物具有擴(kuò)張血管、改善腦循環(huán)、抑制血小板活化因子等作用，還可開發(fā)成保健品、飲料、化妝品等，經(jīng)濟(jì)效益頗為可觀。

隨著市場的需求增加，人們對銀杏栽培面積擴(kuò)大，對銀杏的繁殖需求也增大?，F(xiàn)有技術(shù)中，銀杏的繁殖方法主要有4種：播種、扦插、嫁接和植物組織培養(yǎng)。傳統(tǒng)的播種方法容易發(fā)生性狀分離導(dǎo)致銀杏品質(zhì)下降，扦插和嫁接受季節(jié)影響較大，并且繁殖速度相對較慢。

隨著銀杏藥用價值的挖掘，對銀杏的品質(zhì)要求也越來越高，現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展出現(xiàn)了植物組織培養(yǎng)的方法對植物進(jìn)行無性繁殖，銀杏組織培養(yǎng)既可以打破季節(jié)的影響也可以保持親本優(yōu)良性狀，還可以通過優(yōu)化條件加快繁殖速度以滿足不同季節(jié)不同品質(zhì)的需求。在銀杏組織培養(yǎng)過程中，大多選擇成熟胚誘導(dǎo)無菌苗，然后以無菌苗的胚軸或子葉為外植體，或者以銀杏的腋芽為外植體，研究銀杏芽的萌發(fā)、增殖和生根。在銀杏組織培養(yǎng)的過程中常常出現(xiàn)很多問題，比如：由于銀杏屬木本植物，組織培養(yǎng)苗褐化比較嚴(yán)重；愈傷誘導(dǎo)率低；種子較大，容易污染等。

因此，在通過組織培養(yǎng)來促進(jìn)銀杏的繁殖的方法中，如何避免上述問題，成為本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本申請?zhí)峁┮环N銀杏的組織培養(yǎng)方法及生根培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有的通過組織培養(yǎng)來促進(jìn)銀杏繁殖的技術(shù)中，組織培養(yǎng)苗褐化嚴(yán)重、容易污染的技術(shù)問題。

第一方面，本申請實施例提供一種銀杏的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

制備ms培養(yǎng)基母液；所述ms培養(yǎng)基母液由大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液以及有機(jī)物母液組成；

配制濃度為1g/l的6-芐氨基嘌呤溶液和濃度為1g/l萘乙酸溶液；

分別以銀杏樹枝和銀杏果殼為原料，制備得到銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭；

以瓊脂、蔗糖、所述ms培養(yǎng)基母液、所述6-芐氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述銀杏樹枝活性炭或所述銀杏果殼活性炭為原料，制備生根培養(yǎng)基；

取外植體，所述外植體為銀杏側(cè)芽帶葉莖尖；

對所述外植體進(jìn)行消毒處理；

將消毒處理后的所述外植體接種到所述生根培養(yǎng)基中；

將接種后的所述生根培養(yǎng)基置于500lux-1000lux光照、20℃-25℃環(huán)境下培養(yǎng)。

優(yōu)選地，所述對外植體進(jìn)行消毒處理的步驟包括：

將所述外植體置于洗衣粉水中浸泡1h-3.5h后，用流水沖洗5min-15min；

采用自來水，對流水沖洗后得到的外植體浸泡4-5次，每次5min；

將自來水浸泡后得到的外植體置于70％的乙醇溶液中浸泡0.75min-2min，并用無菌水沖洗3-4次，每次1min；

采用0.5％的新潔爾滅，對無菌水沖洗后得到的外植體處理8min-25min，并用無菌水沖洗3-4次，每次1min。

優(yōu)選地，所述以瓊脂、蔗糖、所述ms培養(yǎng)基母液、所述6-芐氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述銀杏樹枝活性炭或所述銀杏果殼活性炭為原料，制備生根培養(yǎng)基的步驟包括：

分別量取50ml所述大量元素母液、5ml所述微量元素母液、5ml鐵鹽母液和5ml有機(jī)物母液，混合得到ms培養(yǎng)基母液；

分別稱取7g-8g瓊脂、0-15g蔗糖，以及2g-10g所述銀杏樹枝活性炭或2g-10g所述銀杏果殼活性炭，加入到所述ms培養(yǎng)基母液中，采用蒸餾水定容至1l；

向定容后的所述ms培養(yǎng)基母液中加入0.5ml-1.5ml所述6-芐氨基嘌呤溶液以及0.1ml-0.3ml所述萘乙酸溶液，加熱攪拌至所述瓊脂完全溶解，得到混合體；

將所述混合體的ph調(diào)節(jié)至5.2-5.8，分裝到培養(yǎng)瓶中；

將所述培養(yǎng)瓶置于121℃下滅菌30min，得到生根培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述蔗糖的加入量為0g。

優(yōu)選地，所述銀杏樹枝活性炭加入量為6g，所述銀杏果殼活性炭的加入量為5g，所述6-芐氨基嘌呤溶液的加入量為1ml，所述萘乙酸溶液的加入量為0.15ml。

優(yōu)選地，所述大量元素母液的成分及濃度為：硝酸銨1650mg/l、硝酸鉀1900mg/l、磷酸二氫鉀170mg/l、七水合硫酸鎂370mg/l以及無水氯化鈣440mg/l。

優(yōu)選地，所述微量元素母液的成分及濃度為：碘化鉀0.83mg/l、硫酸錳22.3mg/l、硼酸6.2mg/l、硫酸鋅8.6mg/l、鉬酸鈉0.25mg/l、硫酸銅0.025mg/l以及氯化鈷0.025mg/l。

優(yōu)選地，所述鐵鹽母液的成分及濃度為：硫酸亞鐵27.8mg/l和乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/l。

優(yōu)選地，所述有機(jī)物母液的成分及濃度為：肌醇100mg/l、煙酸0.5mg/l、鹽酸硫胺素0.1mg/l、鹽酸多吡醇0.5mg/l以及甘氨酸2mg/l。

第二方面，本申請實施例提供一種用于銀杏組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基，包括瓊脂、ms培養(yǎng)基母液、6-芐氨基嘌呤溶液和萘乙酸溶液，以及銀杏樹枝活性炭或銀杏果殼活性炭；

所述ms培養(yǎng)基母液由大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液以及有機(jī)物母液組成；

所述銀杏樹枝活性炭由銀杏樹枝制備而成；

所述銀杏果殼活性炭由銀杏果殼制備而成。

由以上技術(shù)方案可知，本申請實施例提供一種銀杏的組織培養(yǎng)方法及生根培養(yǎng)基，所述方法包括：制備ms培養(yǎng)基母液；配制濃度為1g/l的6-芐氨基嘌呤溶液和濃度為1g/l萘乙酸溶液；分別以銀杏樹枝和銀杏果殼為原料，制備得到銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭；以瓊脂、蔗糖、所述ms培養(yǎng)基母液、所述6-芐氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述銀杏樹枝活性炭或所述銀杏果殼活性炭為原料，制備生根培養(yǎng)基；以銀杏側(cè)芽帶葉莖尖為外植體，將消毒處理后的所述外植體接種到所述生根培養(yǎng)基中，置于500lux-1000lux光照、20℃-25℃環(huán)境下培養(yǎng)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請技術(shù)方案采用銀杏側(cè)芽帶葉莖尖作為外植體，直接誘導(dǎo)生根，縮短了現(xiàn)有技術(shù)中利用胚或者腋芽為外植體時促使萌發(fā)的時間，縮短育苗周期；能夠最大限度的保持親本的優(yōu)良性狀；在制備生根培養(yǎng)基時加入自制的活性炭，即銀杏樹枝活性炭或銀杏果殼活性炭，將其加入培養(yǎng)基中，能夠改善組織培養(yǎng)苗的褐化現(xiàn)象；同時還有抑菌和促進(jìn)生長的作用。

附圖說明

為了更清楚地說明本申請的技術(shù)方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本申請根據(jù)一示例性示出的一種銀杏的組織培養(yǎng)方法流程圖；

圖2為本申請根據(jù)一示例性示出的另一種銀杏的組織培養(yǎng)方法流程圖；

圖3為本申請根據(jù)一示例性示出的又一種銀杏的組織培養(yǎng)方法流程圖。

具體實施方式

參見圖1，為本申請實施例提供的一種銀杏的組織培養(yǎng)方法流程圖，由圖1可知，所述方法包括如下步驟：

步驟s01、制備ms培養(yǎng)基母液；所述ms培養(yǎng)基母液由大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液以及有機(jī)物母液組成；

步驟s02、配制濃度為1g/l的6-芐氨基嘌呤溶液和濃度為1g/l萘乙酸溶液；

植物組織培養(yǎng)技術(shù)是以離體植物細(xì)胞或原生質(zhì)體為對象，以細(xì)胞量擴(kuò)增和目標(biāo)代謝產(chǎn)物累積為目的的培養(yǎng)工藝。對于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細(xì)胞培養(yǎng)而言，其主要工藝環(huán)節(jié)不僅在于細(xì)胞量的擴(kuò)增，同時，目標(biāo)代謝產(chǎn)物的誘導(dǎo)合成對培養(yǎng)效果尤為重要。在植物細(xì)胞的組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)條件和營養(yǎng)條件是影響培養(yǎng)效果的重要因素，其中，培養(yǎng)條件是指溫度、溶氧、光照、ph等環(huán)境條件的控制，而營養(yǎng)條件主要指植物細(xì)胞的培養(yǎng)基。由于在封閉培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)基是植物細(xì)胞的唯一營養(yǎng)來源，因此培養(yǎng)基的成分對植物細(xì)胞的生產(chǎn)水平，代謝產(chǎn)物類別具有極其重要的影響。

ms培養(yǎng)基是murashige和skoog于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計的，其特點是無機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基。

ms培養(yǎng)基的主要組成為大量元素、微量元素、鐵鹽以及有機(jī)物。

本申請中，ms培養(yǎng)基母液由大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液以及有機(jī)物母液組成，四種母液的主要成分及濃度分別見下表表1至表4。

表1

表2

表3

表4

本申請中，將植物激素6-芐氨基嘌呤(6-ba)和植物激素萘乙酸(naa)配制成溶液，并以此作為制備生根培養(yǎng)基的原料之一，或者說，是在ms培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加6-ba和naa植物激素，以其作為生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)子及前體物質(zhì)，促進(jìn)銀杏外植體細(xì)胞的代謝，優(yōu)化組織培養(yǎng)效果。

取相應(yīng)質(zhì)量的6-ba，將其加入至0.5n的naoh溶液中加熱溶解，冷卻，用蒸餾水定容，得到濃度為1g/l的6-芐氨基嘌呤溶液，并將6-芐氨基嘌呤溶液置于4℃下保存，備用。

取相應(yīng)質(zhì)量的naa，將其加入至少量的無水乙醇中溶解，用蒸餾水定容，得到濃度為1g/l的萘乙酸溶液，并將萘乙酸溶液置于4℃下保存，備用。

步驟s03、分別以銀杏樹枝和銀杏果殼為原料，制備得到銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭；

具體的，收集銀杏樹枝和銀杏果殼，放入80℃烘箱烘干，分別用粉碎機(jī)打成粉末，分裝，制成銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭。

本申請中，以銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭作為制備生根培養(yǎng)基的原料之一，或者說，將銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭加入到ms培養(yǎng)基中，對其進(jìn)行改良，能夠有效抑菌并減少組織培養(yǎng)苗褐變的發(fā)生，有利于保持親本優(yōu)良性狀。

步驟s04、以瓊脂、蔗糖、所述ms培養(yǎng)基母液、所述6-芐氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述銀杏樹枝活性炭或所述銀杏果殼活性炭為原料，制備生根培養(yǎng)基；

參閱圖2，具體地，在步驟s041中，分別量取50ml所述大量元素母液、5ml所述微量元素母液、5ml鐵鹽母液和5ml有機(jī)物母液，混合得到ms培養(yǎng)基母液；

在步驟s042中，分別稱取7g-8g瓊脂、0-15g蔗糖，以及2g-10g所述銀杏樹枝活性炭或2g-10g所述銀杏果殼活性炭，加入到所述ms培養(yǎng)基母液中，采用蒸餾水定容至1l；

在步驟s043中，向定容后的所述ms培養(yǎng)基母液中加入0.5ml-1.5ml所述6-芐氨基嘌呤溶液以及0.1ml-0.3ml所述萘乙酸溶液，加熱攪拌至所述瓊脂完全溶解，得到混合體；

在步驟s044中，將所述混合體的ph調(diào)節(jié)至5.2-5.8，分裝到培養(yǎng)瓶中；

在步驟s045中，將所述培養(yǎng)瓶置于121℃下滅菌30min，得到生根培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述蔗糖的加入量為0g。

優(yōu)選地，所述銀杏樹枝活性炭加入量為6g，所述銀杏果殼活性炭的加入量為5g，所述6-芐氨基嘌呤溶液的加入量為1ml，所述萘乙酸溶液的加入量為0.15ml。

在步驟s05中，取外植體，所述外植體為銀杏側(cè)芽帶葉莖尖；

銀杏的快速繁殖方式多為扦插和組織培養(yǎng)，組織培養(yǎng)選擇的外植體一般是胚、腋芽、莖段、子葉、胚軸、小孢子、配子體等。一般的外植體，如胚、莖段、子葉、胚軸等都要求幼嫩，多用種子萌發(fā)所得，不然褐化嚴(yán)重。組織培養(yǎng)苗因?qū)儆跓o性繁殖，都能保持親本的性狀，選擇性狀優(yōu)良的母樹自然能保持親本的優(yōu)良性狀。而通過種子播種會發(fā)生性狀分離，不一定能保持親本的優(yōu)良性狀。

本申請中，采用銀杏側(cè)芽帶葉莖尖作為外植體，直接誘導(dǎo)生根，縮短了利用胚或者腋芽為外植體時促使萌發(fā)的時間，縮短了育苗周期；對樹齡要求不高，只需要是當(dāng)年萌發(fā)的幼苗，例如，選擇廣安地區(qū)樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的側(cè)芽帶葉莖尖；以銀杏側(cè)芽帶葉莖尖作為外植體，能夠最大限度的保持親本的優(yōu)良性狀，通過這種方式繁殖銀杏具有較大的生產(chǎn)應(yīng)用價值。

在步驟s06中，對所述外植體進(jìn)行消毒處理；

具體實現(xiàn)中，參閱圖3，對所述外植體進(jìn)行消毒處理的步驟包括：

步驟s061、將所述外植體置于洗衣粉水中浸泡1h-3.5h后，用流水沖洗5min-15min；

步驟s062、采用自來水，對步驟s061得到的外植體浸泡4-5次，每次5min；

步驟s063、將步驟s062得到的外植體置于70％的乙醇溶液中浸泡0.75min-2min，并用無菌水沖洗3-4次，每次1min；

步驟s064、采用0.5％的新潔爾滅，對步驟s063得到的外植體處理8min-25min，并用無菌水沖洗3-4次，每次1min。

在步驟s07中，將消毒處理后的所述外植體接種到所述生根培養(yǎng)基中；

在步驟s08中，將接種后的所述生根培養(yǎng)基置于500lux-1000lux光照、20℃-25℃環(huán)境下培養(yǎng)。

本申請實施例還提供一種用于銀杏組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基，包括瓊脂、ms培養(yǎng)基母液、6-芐氨基嘌呤溶液和萘乙酸溶液，以及銀杏樹枝活性炭或銀杏果殼活性炭；

所述ms培養(yǎng)基母液由大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液以及有機(jī)物母液組成；

所述銀杏樹枝活性炭由銀杏樹枝制備而成；

所述銀杏果殼活性炭由銀杏果殼制備而成。

由以上技術(shù)方案可知，本申請實施例提供一種銀杏的組織培養(yǎng)方法及生根培養(yǎng)基，所述方法包括：制備ms培養(yǎng)基母液；配制濃度為1g/l的6-芐氨基嘌呤溶液和濃度為1g/l萘乙酸溶液；分別以銀杏樹枝和銀杏果殼為原料，制備得到銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭；以瓊脂、蔗糖、所述ms培養(yǎng)基母液、所述6-芐氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述銀杏樹枝活性炭或所述銀杏果殼活性炭為原料，制備生根培養(yǎng)基；以銀杏側(cè)芽帶葉莖尖為外植體，將消毒處理后的所述外植體接種到所述生根培養(yǎng)基中，置于500lux-1000lux光照、20℃-25℃環(huán)境下培養(yǎng)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請技術(shù)方案采用銀杏側(cè)芽帶葉莖尖作為外植體，直接誘導(dǎo)生根，縮短了現(xiàn)有技術(shù)中利用胚或者腋芽為外植體時促使萌發(fā)的時間，縮短育苗周期；能夠最大限度的保持親本的優(yōu)良性狀；在制備生根培養(yǎng)基時加入自制的活性炭，包括銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭，將其加入培養(yǎng)基中，能夠改善組織培養(yǎng)苗的褐化現(xiàn)象；同時還有抑菌和促進(jìn)生長的作用。

本申請技術(shù)方案的具體實施方式，還可參見以下幾個實施例。

實施例1

選擇廣安地區(qū)3月下旬到5月上旬樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的帶2-3片葉子的側(cè)芽莖尖作為外植體。將采集的外植體置于洗衣粉水中泡1h，用流水沖洗5min；然后用自來水泡4-5次；將得到的外植體放置在70％的乙醇溶液中處理1min，無菌水洗3次，采用0.5％的新潔爾滅處理15min，無菌水洗3-4次。將消毒處理后的外植體接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比為：ms培養(yǎng)基母液:蔗糖:銀杏樹枝活性炭:萘乙酸:6-芐氨基嘌呤:瓊脂＝1000000:15000:2000:0.15:1:8000。培養(yǎng)基ph值為5.2。將接種好的培養(yǎng)瓶放置在1000lux光照、光照10h/d、20℃條件下培養(yǎng)。

實施例2

選擇廣安地區(qū)3月下旬到5月上旬樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的帶2-3片葉子的側(cè)芽莖尖作為外植體。將采集的外植體置于洗衣粉水中泡2h，用流水沖洗10min；然后用自來水泡4-5次；將得到的外植體放置在70％的乙醇溶液中處理1min，無菌水洗3次，采用0.5％的新潔爾滅處理20min，無菌水洗3-4次。將消毒處理后的外植體接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比為：ms培養(yǎng)基母液:蔗糖:銀杏樹枝活性炭:萘乙酸:6-芐氨基嘌呤:瓊脂＝1000000:75000:4000:0.15:1:7500，培養(yǎng)基ph值為5.4。將接種好的培養(yǎng)瓶放置在1000lux光照、光照10h/d、20℃條件下培養(yǎng)。

實施例3

選擇廣安地區(qū)3月下旬到5月上旬樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的帶2-3片葉子的側(cè)芽莖尖作為外植體。將采集的外植體置于洗衣粉水中泡3h，用流水沖洗15min；然后用自來水泡4-5次；將得到的外植體放置在70％的乙醇溶液中處理2min，無菌水洗3次，采用0.5％的新潔爾滅處理25min，無菌水洗3-4次。將消毒處理后的外植體接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比為：ms培養(yǎng)基母液:蔗糖:銀杏樹枝活性炭:萘乙酸:6-芐氨基嘌呤:瓊脂＝1000000:0:6000:0.15:1:7000，培養(yǎng)基ph值為5.6。將接種好的培養(yǎng)瓶放置在1000lux光照、光照10h/d、20℃條件下培養(yǎng)。

實施例4

選擇廣安地區(qū)3月下旬到5月上旬樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的帶2-3片葉子的側(cè)芽莖尖作為外植體。將采集的外植體置于洗衣粉水中泡3h，用流水沖洗15min；然后用自來水泡4-5次；將得到的外植體放置在70％的乙醇溶液中處理50s，無菌水洗3次，采用0.5％的新潔爾滅處理8min，無菌水洗3-4次。將消毒處理后的外植體接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比為：ms培養(yǎng)基母液:蔗糖:銀杏果殼活性炭:萘乙酸:6-芐氨基嘌呤:瓊脂＝1000000:0:2000:0.15:1:7500，培養(yǎng)基ph值為5.2。將接種好的培養(yǎng)瓶放置在1000lux光照、光照10h/d、20℃條件下培養(yǎng)。

實施例5

選擇廣安地區(qū)3月下旬到5月上旬樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的帶2-3片葉子的側(cè)芽莖尖作為外植體。將采集的外植體置于洗衣粉水中泡3h，用流水沖洗15min；然后用自來水泡4-5次；將得到的外植體放置在70％的乙醇溶液中處理1min，無菌水洗3次，采用0.5％的新潔爾滅處理10min，無菌水洗3-4次。將消毒處理后的外植體接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比為：ms培養(yǎng)基母液:蔗糖:銀杏果殼活性炭:萘乙酸:6-芐氨基嘌呤:瓊脂＝1000000:0:4000:0.15:1:7500，培養(yǎng)基ph值為5.4。將接種好的培養(yǎng)瓶放置在1000lux光照、光照10h/d、20℃條件下培養(yǎng)。

實施例6

選擇廣安地區(qū)3月下旬到5月上旬樹齡約30年母樹當(dāng)年發(fā)出的帶2-3片葉子的側(cè)芽莖尖作為外植體。將采集的外植體置于洗衣粉水中泡3h，用流水沖洗15min；然后用自來水泡4-5次；將得到的外植體放置在70％的乙醇溶液中處理1.5min，無菌水洗3次，采用0.5％的新潔爾滅處理15min，無菌水洗3-4次。將消毒處理后的外植體接種到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比為：ms培養(yǎng)基母液:蔗糖:銀杏果殼活性炭:萘乙酸:6-芐氨基嘌呤:瓊脂＝1000000:0:5000:0.15:1:7500，培養(yǎng)基ph值為5.6。將接種好的培養(yǎng)瓶放置在1000lux光照、光照10h/d、20℃條件下培養(yǎng)。

需要說明的是，上述實施例1至實施例6中所述的生根培養(yǎng)基中各原料的質(zhì)量比中，萘乙酸和6-芐氨基嘌呤是指純物質(zhì)的質(zhì)量。因此，具體實現(xiàn)時，應(yīng)根據(jù)萘乙酸和6-芐氨基嘌呤純物質(zhì)與其他原料的質(zhì)量比，以及萘乙酸溶液和6-芐氨基嘌呤溶液的濃度，來確定萘乙酸溶液和6-芐氨基嘌呤溶液取量。

上述實施例1至實施例6對應(yīng)的實驗結(jié)果數(shù)據(jù)如下表：

表5

由表5可以看出，采用選用銀杏側(cè)芽帶葉莖尖為外植體，利用植物激素和自制活性炭改良ms培養(yǎng)基，能夠有效地改善現(xiàn)有技術(shù)中組織培養(yǎng)苗的褐化及污染的問題，還能保持親本性狀，促進(jìn)生長。其中，實施例3和實施例6沒有褐化和污染現(xiàn)象的出現(xiàn)，且培養(yǎng)10天后，組織培養(yǎng)苗的生長高度達(dá)到1.5cm左右，培養(yǎng)30天后，組織培養(yǎng)苗的生長高度達(dá)到1.8cm-1.9cm。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請技術(shù)方案采用銀杏側(cè)芽帶葉莖尖作為外植體，直接誘導(dǎo)生根，縮短了現(xiàn)有技術(shù)中利用胚或者腋芽為外植體時促使萌發(fā)的時間，縮短育苗周期；能夠最大限度的保持親本的優(yōu)良性狀；在制備生根培養(yǎng)基時加入自制的活性炭，包括銀杏樹枝活性炭和銀杏果殼活性炭，將其加入培養(yǎng)基中，能夠改善組織培養(yǎng)苗的褐化現(xiàn)象，同時還有抑菌和促進(jìn)生長的作用。

本說明書中各個實施例之間相同相似的部分互相參見即可。

以上所述的本發(fā)明實施方式并不構(gòu)成對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。