本發(fā)明屬于培養(yǎng)基制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
：牛大力，別名豬腳笠、金鐘根、山蓮藕、倒吊金鐘、大力薯，為豆科豆科崖豆藤屬植物，其主要成分為蛋白質(zhì)、淀粉質(zhì)及生物堿等。牛大力以根入藥，全年可采挖，為傳統(tǒng)的藥食同源植物。牛大力性平、味甘，有補(bǔ)腎潤肺、強(qiáng)筋活絡(luò)的功效，常用于治療腰肌勞損、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺結(jié)核、慢性支氣管炎、慢性肝炎等病癥。牛大力除了入藥煎劑外，亦常為廣東民間入湯做食療、藥膳之用。牛大力有效成分有高麗槐素、芒柄花素、查爾酮類化合物、異黃酮類、糠醛、牛大力多糖等，這些成分具有抗炎殺菌、免疫調(diào)節(jié)作用，并由一定抗氧化和清除自由基作用。牛大力經(jīng)采挖后，經(jīng)清洗、晾曬可直接入藥，也可用于食用，更可經(jīng)深加工，制成牛大力保健酒、牛大力花茶等深加工產(chǎn)品。牛大力是制藥企業(yè)加工中成藥、保健品的常用原料，近年來，隨著我國中醫(yī)藥事業(yè)蓬勃發(fā)展，人們生活水平逐漸提高，保健意識不斷增強(qiáng)，牛大力的市場需求也在不斷擴(kuò)大。目前，牛大力的繁殖方法主要有種子繁育、扦插繁育、組織培養(yǎng)繁育等幾種模式。種子繁育及扦插培養(yǎng)對牛大力種苗本身要求較高，且培育周期較長，不利于牛大力種植推廣；因此，選擇優(yōu)良的牛大力種苗，采用組織培養(yǎng)的模式進(jìn)行繁育，是一種高效繁育培養(yǎng)牛大力的方法，能大大縮短牛大力的培育時間，且提高牛大力幼苗的成活率，繁育所得植株健康，有利于提高牛大力的結(jié)薯能力及產(chǎn)量。在植物組織培養(yǎng)過程中，根據(jù)植物生長發(fā)育過程所需求的養(yǎng)分不同，可分為三種培養(yǎng)基，分別為誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基、壯苗組織培養(yǎng)基。組織培養(yǎng)基起到促進(jìn)組培苗生長發(fā)育的目的，在提供給組培苗養(yǎng)分的同時，還能提升組培苗對養(yǎng)分的吸收能力，間接地移栽成活率。針對不同的植物，組織培養(yǎng)基的成分也應(yīng)有所區(qū)別。由于組織培養(yǎng)基中含有大量無機(jī)物和有機(jī)物，容易造成細(xì)菌滋生，不利于組培苗的健康生長。羧甲基殼聚糖銀是一種生物相容性高的抗菌物質(zhì)，將其添加進(jìn)組織培養(yǎng)基，能夠有效抑制培養(yǎng)基中細(xì)菌的滋生。以上
背景技術(shù)：
內(nèi)容的公開僅用于輔助理解本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思及技術(shù)方案，其并不必然屬于本專利申請的現(xiàn)有技術(shù)，在沒有明確的證據(jù)表明上述內(nèi)容在本專利申請的申請日已經(jīng)公開的情況下，上述
背景技術(shù)：
不應(yīng)當(dāng)用于評價本申請的新穎性和創(chuàng)造性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基在提供養(yǎng)分的同時，能夠起到抗菌效果。為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂40～110g、葡萄糖15～45g、激素0.3～1.5g、無機(jī)鹽溶液3～15g、α-萘乙酸鈉0.2～1.2g、羧甲基殼聚糖銀0.1～0.6g、核黃素0.2～1.2g、玉米素0.2～1.5g、水解酪蛋白10～30g、有機(jī)物55～125g、三蒸水20～60g。優(yōu)選地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂50～100g、葡萄糖18～40g、激素0.4～1.2g、無機(jī)鹽溶液5～12g、α-萘乙酸鈉0.3～1g、羧甲基殼聚糖銀0.2～0.5g、核黃素0.3～0.9g、玉米素0.3～1.2g、水解酪蛋白12～26g、有機(jī)物65～110g、三蒸水25～50g。優(yōu)選地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂60～90g、葡萄糖20～35g、激素0.5～1g、無機(jī)鹽溶液6～10g、α-萘乙酸鈉0.4～0.8g、羧甲基殼聚糖銀0.3～0.4g、核黃素0.4～0.8g、玉米素0.4～1g、水解酪蛋白14～22g、有機(jī)物75～95g、三蒸水28～42g。優(yōu)選地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，所述有機(jī)物包括土豆泥、蘋果泥、香蕉泥中的一種。優(yōu)選地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，所述激素包括naa、6-ba、iba、aba中的一種。更優(yōu)選地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，所述的無機(jī)鹽溶液中的無機(jī)鹽包括硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣中的一種或幾種。更優(yōu)選地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：s1：激素先用少量95％酒精溶解后，加入去離子水配置成溶液；s2：葡萄糖使用去離子水配置成10％的溶液；s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的激素溶液、無機(jī)鹽溶液、α-萘乙酸鈉、羧甲基殼聚糖銀、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、有機(jī)物，充分?jǐn)嚢?；s4：向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液，充分?jǐn)嚢?，使?0％naoh和10％hcl溶液調(diào)節(jié)至體系ph值為5～6.6；s5：向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰后分裝于培養(yǎng)瓶中；s6：將步驟s5所制成的誘導(dǎo)組織培養(yǎng)瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌一段時間后，即制成抗菌組織培養(yǎng)基。進(jìn)一步地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，所使用的試劑級別均為分析純。進(jìn)一步地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，步驟s5中所述培養(yǎng)瓶為罐頭瓶。更進(jìn)一步地，所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，步驟s6中滅菌溫度為120～135℃，滅菌時間為5～15min。本發(fā)明具有以下有益效果：(1)本發(fā)明所述抗菌組織培養(yǎng)基，其原料組分來源廣泛，制備方法易于操作，且儲存期長；(2)本發(fā)明所述的抗菌組織培養(yǎng)基，含有能夠促進(jìn)牛大力組培苗生長發(fā)育的激素成分以及抗菌功能的羧甲基殼聚糖銀，在培育牛大力種苗的同時抑制培養(yǎng)基細(xì)菌滋生。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是，下述說明僅僅是示例性的，而不是為了限制本發(fā)明的范圍及其應(yīng)用。實(shí)施例1：一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂40g、葡萄糖15g、naa0.3g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機(jī)鹽溶液3g、α-萘乙酸鈉0.2～1.2g、羧甲基殼聚糖銀0.1g、核黃素0.2g、玉米素0.2g、水解酪蛋白10g、土豆泥55g、三蒸水20g。所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：s1：nna先用少量95％酒精溶解后，加入去離子水配置成溶液；s2：葡萄糖使用去離子水配置成10％的溶液；s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的nna溶液、無機(jī)鹽溶液、α-萘乙酸鈉、羧甲基殼聚糖銀、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、土豆泥，所使用的試劑級別均為分析純，充分?jǐn)嚢?；s4：向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液，充分?jǐn)嚢?，使?0％naoh和10％hcl溶液調(diào)節(jié)至體系ph值為5.8；s5：向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰后分裝于罐頭培養(yǎng)瓶中；s6：將步驟s5所制成的誘導(dǎo)組織培養(yǎng)瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在120℃下滅菌15min，即制成抗菌組織培養(yǎng)基。實(shí)施例2一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂110g、葡萄糖45g、6-ba1.5g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機(jī)鹽溶液15g、α-萘乙酸鈉1.2g、羧甲基殼聚糖銀0.6g、核黃素1.2g、玉米素1.5g、水解酪蛋白30g、蘋果泥125g、三蒸水60g。所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：s1：6-ba先用少量95％酒精溶解后，加入去離子水配置成溶液；s2：葡萄糖使用去離子水配置成10％的溶液；s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的6-ba溶液、無機(jī)鹽溶液、α-萘乙酸鈉、羧甲基殼聚糖銀、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、蘋果泥，所使用的試劑級別均為分析純，充分?jǐn)嚢?；s4：向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液，充分?jǐn)嚢?，使?0％naoh和10％hcl溶液調(diào)節(jié)至體系ph值為6.6；s5：向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰后分裝于罐頭培養(yǎng)瓶中；s6：將步驟s5所制成的誘導(dǎo)組織培養(yǎng)瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在135℃下滅菌5min，即制成抗菌組織培養(yǎng)基。實(shí)施例3一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂50g、葡萄糖18g、iba0.4g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機(jī)鹽溶液5g、α-萘乙酸鈉0.3g、羧甲基殼聚糖銀0.2g、核黃素0.3g、玉米素0.3g、水解酪蛋白12g、香蕉泥65g、三蒸水25g。所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：s1：iba先用少量95％酒精溶解后，加入去離子水配置成溶液；s2：葡萄糖使用去離子水配置成10％的溶液；s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的iba溶液、無機(jī)鹽溶液、α-萘乙酸鈉、羧甲基殼聚糖銀、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、香蕉泥，所使用的試劑級別均為分析純，充分?jǐn)嚢?；s4：向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液，充分?jǐn)嚢?，使?0％naoh和10％hcl溶液調(diào)節(jié)至體系ph值為5.5；s5：向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰后分裝于罐頭培養(yǎng)瓶中；s6：將步驟s5所制成的誘導(dǎo)組織培養(yǎng)瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在130℃下滅菌8min，即制成抗菌組織培養(yǎng)基。實(shí)施例4一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂100g、葡萄糖40g、aba1.2g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機(jī)鹽溶液12g、α-萘乙酸鈉1g、羧甲基殼聚糖銀0.5g、核黃素0.9g、玉米素1.2g、水解酪蛋白26g、土豆泥110g、三蒸水50g。所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：s1：aba先用少量95％酒精溶解后，加入去離子水配置成溶液；s2：葡萄糖使用去離子水配置成10％的溶液；s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的aba溶液、無機(jī)鹽溶液、α-萘乙酸鈉、羧甲基殼聚糖銀、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、土豆泥，所使用的試劑級別均為分析純，充分?jǐn)嚢?；s4：向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液，充分?jǐn)嚢?，使?0％naoh和10％hcl溶液調(diào)節(jié)至體系ph值為5.2；s5：向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰后分裝于罐頭培養(yǎng)瓶中；s6：將步驟s5所制成的誘導(dǎo)組織培養(yǎng)瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在125℃下滅菌12min，即制成抗菌組織培養(yǎng)基。實(shí)施例5一種牛大力抗菌組織培養(yǎng)基，包括以下原料：瓊脂70g、葡萄糖28g、nna0.7g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化錳、氯化鈣的無機(jī)鹽溶液8g、α-萘乙酸鈉0.5g、羧甲基殼聚糖銀0.3g、核黃素0.6g、玉米素0.6g、水解酪蛋白18g、蘋果泥82g、三蒸水36g。所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：s1：nna先用少量95％酒精溶解后，加入去離子水配置成溶液；s2：葡萄糖使用去離子水配置成10％的溶液；s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的nna溶液、無機(jī)鹽溶液、α-萘乙酸鈉、羧甲基殼聚糖銀、核黃素、玉米素、水解酪蛋白、蘋果泥，所使用的試劑級別均為分析純，充分?jǐn)嚢?；s4：向s3所制成的溶液中加入s2所得的葡萄糖溶液，充分?jǐn)嚢瑁褂?0％naoh和10％hcl溶液調(diào)節(jié)至體系ph值為5.8；s5：向步驟s4所制成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰后分裝于罐頭培養(yǎng)瓶中；s6：將步驟s5所制成的誘導(dǎo)組織培養(yǎng)瓶置于高壓蒸汽滅菌鍋中在130℃下滅菌7min，即制成抗菌組織培養(yǎng)基。為了更詳細(xì)說明本發(fā)明的有益效果，以下還提供了具體的試驗(yàn)結(jié)果。選取牛大力新鮮種子切片180份作為組織培養(yǎng)的外植體，隨機(jī)分為a、b、c、d、e、f六組，每組30份。每組經(jīng)升汞消毒后，a～e組種苗移入采用本發(fā)明實(shí)施例1～5所述配方及方法制備成的抗菌組織培養(yǎng)基中，f組接入市售普通培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10天后，比較各組培養(yǎng)基狀況，并記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下表所示。組別菌落污染率/％組培苗誘導(dǎo)分化率/％a8675b6733c11751d9697e9720f21543由此可見，本發(fā)明所述的牛大力抗菌組織培養(yǎng)基與市售普通培養(yǎng)基相比，培養(yǎng)基的菌落污染率較低，誘導(dǎo)分化率高，能夠起到促進(jìn)牛大力種苗的生長發(fā)育的效果。以上內(nèi)容不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明，對于本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明由所提交的權(quán)利要求書確定的專利保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁12